REPORTE

DE

PRACTICA DE

TCNICA ELISA

INMUNOENZIMTICA

Gasdheli Gumi Castillo Agresin y Defensa Medicina Veterinaria y Zootecnia Universidad del Valle de Mxico

Prueba ELISA Introduccin Es un examen de laboratorio Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay comnmente

usado para detectar anticuerpos en la sangre. Se usa en muchos laboratorios para determinar si un anticuerpo particular est presente en la muestra de sangre de un paciente. Aunque el procedimiento es rutinario y sencillo, involucra a un gran nmero de variables, tales como seleccin de reactivo, temperatura, medicin de volumen y tiempo, que si no se ajustan correctamente puede afectar a los pasos sucesivos y al resultado de la prueba. Se basa en la reaccin antgeno-anticuerpo, uno de los cuales debe ser de reactividad conocida, Si debe medirse el anticuerpo, se coloca el antgeno en la fase slida, como una capa de captura. Despus de la reaccin del antgeno con el suero del paciente, la capa de deteccin puede ser un reactivo anti inmunoglobulina clase especfica (IgM o IgG) para detectar respuesta de anticuerpos clase especficos. Procedimiento Pasos generales de un ELISA 1. Se tiene el Ag 2. La placa de poliuretano, tienen el fondo tratado con poliestireno para que se pegue el Ag a esto se le conoce como fase de sensibilizacin que es unir el Ag a la placa esto tarda de 8 horas 3. Sigue la fase de bloque que es ocupar los lugares que hayan quedado libres para esto se puede agregar 2% de lecho en polvo, albumina srica bovina (BSA) 4. agrega el Ac primario que es el sospechoso el Ag ya lo conosco Ac contra Prrs diluido 1/200 Ag es la solucio de bloqueo se agregan 100 toda la placa son 9.100 l 5. se deja incubar por 5 minutos 6. se hace el primer lavado con agua de una sola intencion se voltea y se lava 3 veces seguidas 7. se agregan 50 l de Ac secundario conjugado 8. se agrega el sustrato de azul de metileno que este se une a la enzima es la solucin reveladora mayor peroxidasa se agrega este Ac para que reaccione esta es la reaccion que es un Anti IgG de cerdo este tiene l a cada pozo por

Conclusin

Los pocillos de la microplaca se recubren con los antgenos, al aadir las muestras, el anticuerpo se une a los pocillos recubiertos, En estos se incuba IgG conjugada con la enzima peroxidasa. Esta prueba es bsica para el diagnostico y deteccin de enfermedades infecciosas.