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Cultivo in Vitro

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Universidad Tecnológica de la Costa

División en ciencias Agropecuarias
Agrobiotecnologia

Biotecnología Básica

Cultivo in vitro

Cultivo in vitro de plantas superiores
El cultivo en medio nutritivo, bajo condiciones estériles, de plantas, semillas, embriones, órganos, tejidos, células y protoplastos de plantas superiores
• El término cultivo in vitro es un término muy genérico que se refiere más bien a la metodología usada que al propio objetivo de ese método. En sentido estricto, in vitro quiere decir "dentro de vidrio", es decir, el cultivo de plantas o de alguna de sus partes (pero también de células y tejidos animales) dentro de recipientes de vidrio en condiciones de ambiente controlado. • Existen otros términos cuyo significado se solapa parcialmente con el significado de cultivo in vitro: • Cultivo de tejidos vegetales: se refiere al cultivo in vitro de partes de la planta (tejidos o frecuentemente órganos) • Micropropagación: se usa para referirse a la utilización de las técnicas de cultivo in vitro aplicadas a la propagación vegetativa de plantas.

Cámara de flujo
• La esterilidad de la zona de trabajo se consigue porque se hace circular a través del interior de la cámara una corriente de aire que previamente ha sido microfiltrada para eliminar toda partícula extraña. • Según el grado de sofisticación de la cámara, puede disponer de elementos accesorios como son: fuente de luz, lámpara de esterilización por U.V., pilotos indicadores de funcionamiento diversos, contador de horas de funcionamiento, indicador de presión interior. • Existen dos tipos de cámaras de flujo laminar según sea la forma en la que se hace circular el aire: cámaras de flujo horizontal y cámaras de flujo vertical. En las primeras el flujo se produce desde el fondo de la cámara hasta el frente, de forma que las partículas se mueven horizontalmente a la superficie de trabajo. En las segundas, el flujo se produce desde el techo hacia la superficie de trabajo de forma que las partículas se mueven perpendicularmente a ella.

Una cámara de cultivo es un receptáculo diseñado para permitir el control de algunas variables del ambiente físico. Habitualmente se pueden controlar la temperatura, la iluminación y el fotoperíodo y en algunos casos, menos frecuentes, la humedad del aire y su composición. Existen muchos modelos de cámaras de cultivo, en unos casos se trata de espacios reducidos, frecuentemente móviles, mientras que en otros casos son verdaderos recintos acondicionados para permitir el control del ambiente interior.

Cámaras de Cultivo

Control de la temperatura
La temperatura de la cámara de cultivo viene afectada por: la temperatura ambiente de la sala donde se sitúe y el calor generado por las fuentes de luz de que dispone. El control de la temperatura a la que se desarrolla el cultivo in vitro se efectúa mediante un sistema de refrigeración-calefacción controlado a través de un termostato.
Para poder caracterizar adecuadamente el funcionamiento respecto de la temperatura de una cámara de cultivo conviene conocer: La homogeneidad de temperatura: es decir la variación de la temperatura en diferentes zonas de la cámara. Se puede aumentar la homogeneidad haciendo circular el aire dentro de la cámara mediante un sistema de ventilación La estabilidad de la temperatura: es decir, una medida de la variación de la temperatura de la cámara de cultivo a lo largo del tiempo Todas las cámaras disponen de un programador que permite regular la temperatura a la que está la cámara en cada momento

Control lumínico
• • La luz es uno de los factores principales que determinan el desarrollo de los organismos autótrofos, en ello radica la importancia de controlar el factor luz en los cultivos in vitro. Los aspectos relacionados con la luz que son importantes en los cultivos in vitro son: La cantidad de luz: LA IRRADIACIÓN . La irradiancia puede ser expresada en función de la energía por unidad de superficie W/m2 La calidad de la luz: EL ESPECTRO Los tubos fluorescentes son las fuente de luz más usada en las cámaras de cultivo. La alternancia de los ciclos de luz con los de oscuridad: EL FOTOPERÍODO. Algunos fenómenos propios del desarrollo de las plantas (germinación, floración, tuberización,...) pueden ser activados por el número de horas diarias de luz que recibe la planta. De forma análoga, el número de horas de luz que recibe el explanto cultivado in vitro puede afectar a su desarrollo. En general, el mejor fotoperiodo in vivo será también el mejor fotoperiodo in vitro.

• •

Biotecnología Vegetal
• Cultivo in vitro de células, tejidos y órganos  micropropagación  mejoramiento de plantas  producción de compuestos de interés comercial producción de metabolitos secundarios producción de proteínas producción de polímeros biodegradables  establecimiento de plantas transgénicas plantas resistentes a virus plantas con rutas metabólicas modificadas plantas mejoradas en cuanto a composición de proteínas, aceites, etc.  fitorremediación remoción de xenobióticos remoción de metales pesados

Principales conceptos fisiológicos aplicables a los cultivos in vitro

• Existen tres conceptos básicos que fundamentan el cultivo in vitro de células y tejidos vegetales:

- Totipotencialidad celular

- Desdiferenciación / Rediferenciación

- Balance de reguladores del crecimiento vegetal: hormonas vegetales

Fundamentos teóricos y prácticos del cultivo de tejidos vegetales

• La teoría de la totipotencialidad celular, enunciada por Haberlandt a principios del siglo veinte, postula que toda célula vegetal individual es capaz de regenerar una planta entera a partir de un cultivo in vitro sin importar el grado de diferenciación alcanzado. Para ello se requieren condiciones específicas referidas al medio del cultivo, relaciones hormonales, temperatura, fotoperíodo, etc. • La desdiferenciación consiste en la transformación y pérdida de las características de especialización de un tipo celular para dar lugar a células de tipo meristemático. El siguiente paso involucrado en la regeneración de una planta es la redifereciación de las células previamente desdiferenciadas. • Todo proceso de diferenciación está regulado por el balance entre diferentes tipos de reguladores del crecimiento, fundamentalmente de auxinas y citocininas.

El material vegetal con el que se inicia un cultivo in vitro puede ser cualquier célula, tejido u órgano de la planta (explanto).

Tejidos somáticos: de tallo, raíz, hoja, meristemos Tejidos reproductores: anteras, polen, microesporas, óvulos, semillas Las condiciones de cultivo pueden pretender la proliferación desorganizada de las células del explanto hasta dar lugar a un callo o incluso a un cultivo de células cuando se separan éstas del callo. Si se elimina la pared celular de las celulas se obtiene un cultivo de protoplastos.

Morfogénesis: puede llevar a la regeneración de la planta completa. La morfogénesis se produce a partir del explanto inicial mediante la formación de raíces y tallos en posición normal o en posición no normal (adventicias/os). Si la morfogénesis se produce después de la formación de un callo, entonces se habla de morfogénesis indirecta, mientras que si se produce directamente del explanto sin que este pase por una fase de callo, entonces se habla de morfogénesis directa. Una situación particular surge cuando en el explanto se producen unas estructuras bipolares que presentan las propiedades morfológicas de los embriones zigóticos. Estas estructuras se denominan embriones somáticos. Según que estos embriones somáticos surjan directamente del explanto o bien de un callo se habla de embriogénesis directa o indirecta, respectivamente.

Técnicas del cultivo de células y tejidos vegetales

• Micropropagación vegetal • Regeneración de plantas (embriogénesis y organogénesis) • Cultivo de meristemas • Cultivo de suspensiones de células vegetales • Cultivo de protoplastos • Cultivo de anteras • Cultivo de óvulos y embriones

Medios de cultivo: composición general

Compuestos inorgánicos Macronutrientes: NO4- , PO43- , K+, Ca2+, Mg2+, SO42Micronutrientes: Fe2+, Cu2+, Zn+, Mn2+, Mo2+, Co2+, ICarbohidratos Sacarosa, glucosa, mio-inositol Vitaminas Tiamina (B1) Piridoxina Acido nicotínico (C) Biotina Aminoácidos Glicina

Reguladores del crecimiento Auxinas Citocininas Giberelinas Soporte inerte (medios semisólidos) Agar (0,7 a 1%) Gelrite® pH 5,6 – 5,8 Esterilización 1 atmósfera, 15 a 20 minutos en autoclave

Reguladores del crecimiento

• Grupos básicos de reguladores del crecimiento: - Auxinas - Citoquininas - Giberelinas - Acido abscísico - Etileno • Generalidades: - Actúan a bajas concentraciones - Interactúan unos con otros (los resultados están determinados por las concentraciones relativas entre las diferentes fitohormonas). - Los reguladores endógenos del crecimiento están presentes en la planta durante todo su ciclo de vida pero su concentración fluctúa. Su concentración relativa varía en función del estado fisiológico de la planta y en cada uno de los órganos de ésta. - Están involucrados en numerosos procesos fisiológicos.

Auxinas: estos compuestos se emplean básicamente como promotores de la proliferación celular y la inducción de la morfogénesis

O

OH N

Acido indol acético (AIA) (auxina endógena)

• Las auxinas fueron descubiertas entre 1933 y 1935 a partir de bioensayos realizados para caracterizar el mensajero responsable de la elongación y de la respuesta fototrópica del coleoptile de gramíneas. - Alargamiento y división celular - Crecimiento de secciones de hojas, tallos y frutos - Formación de raíces adventícias Se sintetizan en las yemas, hojas jóvenes, frutos y en el embrión. La concentración endógena en la planta varía entre 0,001 y 0,1 mg/Kg. • Su transporte es polar • Auxinas sintéticas: - Acido indol butírico (IBA) - Acido naftalen acético (ANA) - 2,4-diclorofenoxiacético (2,4-D)

Citoquininas: en combinación con las auxinas, determinan diferentes respuestas morfogenéticas

• Fueron descubiertas en 1955 estudiando sustancias promotoras de la división celular in vitro. • Están involucradas en variadas respuestas fisiológicas: - Promoción de la división celular - Promoción de la organogénesis (relación auxinas/citoquininas) - Retardo de la senescencia - Síntesis de clorofila y desarrollo de cloroplastos • Citoquininas endógenas: - Zeatina (Zea) - Isopenteniladenina (2iP) • Citoquininas sintéticas: - Kinetina (Kin) - Benziladenina (BAP) • Se sintetizan en el embrión y las raíces; se encuentran en todos los tejidos. La concentración endógena en plantas varía entre 0,1 y 500 g/Kg. • Su transporte es no polar.

Estructura química de las principales citoquininas
CH3 H N CH2 CH C CH2OH

Zeatina

CH3 H N CH2 CH C CH3
Isopenteniladenina (IP)

N

H H N N C H N

N

6-bencilaminopurina

N

N

Las giberelinas se utilizan para favorecer el crecimiento y el alargamiento de los entrenudos de los brotes de novo

O Acido giberélico (GA3) HO H CH3 C O H H COOH CH3 OH

•El ácido giberélico (GA3) fue la primera giberelina identificada. En la actualidad se conocen alrededor de 50 diferentes giberelinas. • Algunos efectos mediados por las giberelinas son:
- Promoción del crecimiento en plantas de genotipos enanos o plantas bianuales - Crecimiento de yemas latentes - Germinación de semillas en dormición - Floración - Movilización de reservas en la semilla.

• Se sintetizan en hojas jóvenes, yemas y en el embrión. • Su transporte no es polar.

Micropropagación vegetal

• Iniciación
Elección y fitoacondicionamiento de la planta madre Elección del explanto inicial y de la formulación del medio de cultivo Desinfección superficial de los explantos Establecimiento del cultivo in vitro

Técnica alternativa para la multiplicación clonal de especies, consiste en cultivar, in vitro, cualquier parte de una planta en un medio de cultivo artificial, previamente esterilizado, y bajo condiciones ambientales controladas. Básicamente se trata de una multiplicación masiva de individuos que a través de su fragmentación y posterior desarrollo, permitirán la formación de plantas completas. Las plantas madres de las cuales se toman los primeros explantos (parte de la planta que se usa para la multiplicación), deben ser sanas y poseer características varietales conformes con la variedad elegida. En poco tiempo se obtendrá un elevado número de plantas sanas genéticamente iguales a la planta madre.

• Multiplicación
Multiplicación del material stock

• Enraizamiento
Enraizamiento de los brotes obtenidos in vitro

• Rusticación
Pasaje de las plantas crecidas in vitro a las condiciones de maceta o a campo

FASE 0: PREPARACIÓN DE LA PLANTA MADRE
• Para poder establecer el cultivo en condiciones de asepsia, se deben obtener explantos con un nivel nutricional y un grado de desarrollo adecuado. • Para obtener estos explantos es recomendable mantener a las plantas madre un período de tiempo que puede oscilar entre unas semanas o varios meses, en un invernadero, en que se va a intentar cultivar la planta en condiciones sanitarias óptimas y con un control de la nutrición, del fotoperíodo y de la irradiancia recibida

FASE I: ESTABLECIMIENTO DEL CULTIVO EN CONDICIONES DE ASEPSIA

• • •

Una vez escogida la planta madre, se extraerán los fragmentos a partir de los cuales se obtendrán los explantos. Antes de extraer los explantos se hará una desinfección de los fragmentos de planta madre para eliminar los contaminantes externos. Una vez desinfectado el material vegetal, se debe mantener en condiciones de asepsia. Ya en condiciones de asepsia (se trabajará en cabinas de flujo laminar) se extraerán los explantos del material vegetal y se pondrán en cultivo en un medio de iniciación dentro de un tubo de cultivo.

FASE II: MULTIPLICACIÓN DE LOS BROTES
• Los nuevos brotes se deben subcultivar en un nuevo medio mediante divisiones y resiembras en tubos de cultivo u otros recipientes adecuados. Estas operaciones se realizan en la cámara de flujo laminar

FASE III: ELECCIÓN DE UN MEDIO DE ENRAIZAMIENTO DE LOS EXPLANTOS
• • Para enraizar los explantos se utilizan principalmente dos métodos: ENRAIZAMIENTO IN VITRO Se transfieren los brotes obtenidos durante la fase de multiplicación a un medio libre de reguladores de crecimiento o que solo contenga auxinas. Esta operación se realiza en la cámara de flujo laminar y como la fuente de energía para enraizar está en el medio de cultivo no es necesario que tengan las hojas muy bien desarrolladas para realizar la fotosíntesis.

• •

ENRAIZAMIENTO EX VITRO Los explantos se deben transferir a un sustrato limpio, aunque no necesariamente estéril, que puede ser una mezcla de turba con perlita o vermiculita. Con este método es necesario que el medio de enraizamiento esté libre de organismos patógenos y que los brotes tengan las hojas bien desarrolladas, ya que deben realizar fotosíntesis para que la planta tenga una fuente de energía para enraizar y desarrollarse. Los explantos deben de plantarse en contenedores cubiertos por un plástico, para mantener la humedad relativa elevada, y hacerlos enraizar en el laboratorio, o ponerlos en 'multipots' dentro de un invernadero en un área sombreada.

FASE IV: ACLIMATACIÓN DE LOS EXPLANTOS ENRAIZADOS
• Tanto si los explantos fueron enraizados in vitro como ex vitro, están poco adaptados a crecer en un invernadero, ya que estos explantos han enraizado y crecido en ambientes con una humedad relativa muy elevada y generalmente tienen estomas perezosos para responder al descenso de la humedad relativa, demasiado lentos para para evitar la desecación del explanto. Por otra parte crecer en ambientes tan húmedos también suele implicar la falta de una cutícula cérea bien desarrollada. • Los explantos deben ser aclimatados a las condiciones de humedad del invernadero disminuyendo progresivamente la humedad relativa e incrementando progresivamente la intensidad de luz.

Embriogénesis somática
• La embriogénesis somática, también denominada embriogénesis asexual o adventicia, consiste en el desarrollo de embriones a partir de células que no son el producto de una fusión de gametos durante la fecundación o, en otras palabras, es un proceso por el cual se produce una estructura bipolar (el embrión) a partir de una célula somática. Este proceso se produce con cierta asiduidad en la naturaleza, ocurriendo de modo espontáneo en más de 60 familias de plantas, algunas tan importantes como las compuestas,crucíferas, cucurbitáceas, gramíneas, rosáceas, leguminosas y palm áceas. Es pues un proceso tan natural como la embriogénesis cigótica, con casos tan conocidos como el de los cítricos, en los que ambos tipos de embriogénesis, la somática y la cigótica, ocurren casi simultáneamente en el interior de la semilla.

Mediante cultivo in vitro, los primeros en obtener y desarrollar embriones somáticos fueron Steward y Reinert en 1958 a partir de tejidos de zanahoria.1 A esta especie modelo para el estudio de la embriogénesis somática se han añadido hasta la fecha más de 30 especies, algunas tan importantes como la alfalfa y varias leñosas forestales, las cuales en la actualidadse propagan comercialmente mediante este método. Se pueden obtener embriones somáticos de muy diversas partes de la planta, así se pueden utilizar como explantos: ápices radiculares y caulinares, hipocótilos, pecíolos,pedúnculos, hojas jóvenes y, en general, tejidos y órganos con características embrionarias, meristemáticas o reproductivas (embriones e inflorescencias inmaduras, trozos deescutelo, nucela y endosperma, óvulos, entre otros).

Yema
Para la parte del huevo, véase yema de huevo. Yema terminal de una ramilla de arce (Acer pseudoplatanus). En botánica, la yema es un órgano complejo de las plantas que se forma habitualmente en la axila de las hojas formado por unmeristemo apical, (células con capacidad de división), a modo de botón escamoso (catáfilos) que darán lugar a hojas (foliíferas) y flores (floríferas). El color de las yemas sirve para identificar las especies: en Europa hay sólo algunas especies de árboles con yemas de color verde.

Tipos de yemas
• • Las yemas pueden pueden ser clasificadas de la siguiente forma: por posición:
– – – terminal, cuando está ubicada en la punta de una ramilla; axilar, cuando está ubicada en la axila de una hoja (también denominadas laterales); adventicia, cuando ocurre en los demás lugares, por ejemplo en el tronco o en las raíces.

• •

Clasificación de yemas. por condición:
– – – accesorio, cuando una yema secundaria se forma aparte de la yema principal (axilar o terminal); inactiva o aletargada, cuando el crecimiento de la yema ha sido nulo durante un largo tiempo. Es posible que la yemas pasen de poco tiempo a años inactivas; pseudoterminal, cuando una yema axilar reemplaza a una terminal (como sucede en la ramificación simpodial). escamosa o recubierta, cuando escamas cubren y protegen las partes embrionarias; desnuda, cuando no está cubierta por escamas; vellosa, cuando está protegida por vellos. vegetativa, cuando sólo contiene elementos vegetativos; reproductora, cuando contiene flor(es) embrionaria(s); mixta, si contiene hojas embrionarias y flores.

por morfología:
– – –

por función:
– – –

Propagación vegetativa a partir de yemas preexistentes

• Proliferación de yemas apicales o axilares
- Consiste en la multiplicación de plantas a partir de las yemas axilares preexistentes. Representa la aceleración in vitro del crecimiento natural de dichos meristemas. - La tasa de multiplicación (t.m.) se calcula en base al número de brotes o vástagos obtenidos a partir de un explanto inicial, entre un repique y el sucesivo. Esta tasa puede variar entre 2 y 20 brotes por mes, dependiendo de la especie en cuestión, entre otras variables. - Por ejemplo, con una t.m. de 5/mes podrían obtenerse 10.000.000 plantas en un solo año, a partir de una única yema inicial. - El cultivo de meristemas es un caso especial del uso de esta técnica.

Existen dos posibles vías morfogenéticas implicadas en la diferenciación de novo de brotes y/o plantas completas

• Posibles vías morfogenéticas: - Organogénesis - Embriogénesis • Diferencias entre las dos posibles vías:
- La organogénesis es de origen pluricelular. Un grupo o cluster de células del explanto inicial se desdiferencia inicialmente para luego rediferenciarse dando lugar a un órgano vegetal. No se obtienen por esta vía plantas completas. - La embriogénesis se presupone de origen unicelular. Una célula del explanto se aísla y constituye el punto de partida para la obtención de un embrión somático. Se diferencian embriones o estructuras bipolares que completan cada una de las etapas implicadas en la ontogenia de un embrión cigótico. El resultado es una planta completa.

Semillas artificiales
• Se puede considerar como semilla artificial tanto a la semilla botánica cuyo embrión es obtenido in vitro, a partir del cultivo de tejidos; como también a los brotes originados por cultivo de meristemas, y que son utilizados en la propagación comercial de plantas. El objetivo del desarrollo de semillas artificiales es producir plantas genética y morfológicamente tan similares como sea posible (clones) a la especie de la cual derivan.

La embriogénesis de los embriones somáticos comienza con una organizada división celular (histodiferenciación), y pasan a través de los mismos estados morfológicos de desarrollo que el embrión cigótico: proembrión globular, trapezoidal, embrión cordiforme y torpedo. Una diferencia importante es que, mientras el embrión cigótico se nutre del tejido materno; el somático recibe sus nutrientes directamente de un medio de cultivo. Por lo tanto, el embrión somático al carecer de endosperma, presenta diferencias bioquímicas en relación con las sustancias de reserva que acumula durante la etapa de maduración (expansión celular). Por ejemplo, se acumulan menor cantidad de proteínas de reserva, pero mayor cantidad de almidón. Además, las estructuras que rodean al embrión cigótico le proveen de protección y controlan el intercambio gaseoso; mientras que el somático debe ser encapsulado para facilitar su manipulación y almacenamiento. Al mismo tiempo deben ser incorporados nutrientes, reguladores de crecimiento y fungicidas.

• Se han obtenido embriones somáticos en especies como: la alfalfa (Medicago sativa), soja (Glycine max), apio (Apium graveolens), pasto ovillo (Dactylis glomerata) y en las gimnospermas en especies de Picea. En el caso de cultivo de meristemas, cuyo inóculo cultivado in vitro sufre cambios morfogenéticos que evolucionan hacia una organogénesis, se diferencia un brote con raíces adventicias, como en el caso del ajo (Allium sativum), la papa (Solanum tuberosum) y frutilla (Fragaria chiloensis).

Embriogénesis: Obtención de semillas artificiales
Semillas sintéticas de orquídea obtenidas por encapsulación en alginato

Sistemas de micropropagación vegetal Proliferación de tejidos desdiferenciados

Resulta posible regenerar brotes o yemas a partir de tejidos vegetales desdiferenciados in vitro

• Consideraciones generales:
- Callo: masa de células desdiferenciadas obtenidas a partir de un explanto cultivado in vitro (disco de hoja, meristema, células en suspensión, etc.) - Es posible regenerar brotes o vástagos a partir de estos callos. - Las plantas diferenciadas pueden no ser uniformes, debido al posible desarrollo de variantes somaclonales. Esto debe tenerse en cuenta, especialmente cuando se trabaja en propagación clonal a gran escala.

Sistemas de propagación vegetativa in vitro

Propagación vegetativa in vitro Regeneración directa e indirecta

Sistemas de micropropagación vegetal Cultivo de meristemas

Los meristemas son grupos de células indiferenciadas que retienen la capacidad de dividirse durante todo el ciclo de vida de una planta

Los meristemas determinan el crecimiento de la planta y dan origen a sus diferentes órganos

• Posibilitan la micropropagación de diferentes especies
vegetales. • Constituyen el explanto ideal para liberar de patógenos in vitro a plantas infectadas por virus, hongos y/o bacterias. • Son ampliamente utilizados como explantos para la criopreservación y conservación de germoplasma.

El cultivo de meristemas facilita la eliminación de patógenos

- El domo meristemático no está vascularizado (muchos patógenos se translocan por los tejidos de conducción).

- El número de partículas virales es menor en los meristemas que en otros tejidos (White, 1934).

- La velocidad de división celular a nivel del meristema es mayor que la velocidad de replicación de un virus.

- Las primeras plantas saneadas a partir del cultivo de meristemas fueron obtenidas por Morel y Martin entre 1952 y 1957 a partir de cultivos de papa y Dahlia.

Alcances de la micropropagación vegetal

• Propagación vegetativa rápida y a gran escala • Uniformidad seleccionada del material clonado • Multiplicación de plantas recalcitrantes a las técnicas convencionales • Reducción en el tiempo de multiplicación y en el espacio requerido para tal fin • Mayor control sobre la sanidad del material propagado • Introducción rápida de nuevos cultivares • Conservación de germoplasma • Facilidades para el intercambio internacional de material vegetal

Sistemas de transferencia genética en plantas

Sistemas de transformación genética en plantas

• Sistemas de transferencia de ADN basados en vectores biológicos
- Sistemas basados en Agrobacterium tumefaciens
y Agrobacterium rhizogenes. - Sistemas basados en virus vegetales.

• Sistemas de transferencia directa de ADN
- Transferencia por biobalística. - Transferencia mediada por cationes divalentes y/o electroporación - Transferencia por microinyección.

Potencial económico de los metabolitos secundarios

Cultivo de tejidos y metabolismo secundario

Concepto general

El metabolismo secundario regula muchas de las relaciones de la planta con el medio circundante

• La producción de metabolitos secundarios está estrechamente relacionada con el proceso de desarrollo de la planta.
- Generalmente no está asociada al crecimiento. - Depende de condiciones determinadas de control hormonal. - Es paralela al desarrollo de tejidos especializados y órganos (raíces, tallos, hojas y glándulas). - La biosíntesis y acumulación suele estar fuertemente compartimentalizada a nivel intracelular, celular, de tejidos y de órganos.

• Los metabolitos secundarios se producen ante situaciones de estrés o enfermedad.
- Factores bióticos - Factores abióticos

Las plantas como fuente de metabolitos secundarios de interés comercial

- Insecticidas - Saborizantes - Colorantes

- Fragancias - Antimicrobianos - Enzimas

- Medicinas - Herbicidas - Proteasas

• Potencial
- 75 % de las nuevas estructuras químicas descubiertas provienen de las plantas. - Sólo se tiene buen conocimiento de 5.000 de las 250.000-300.000 especies vegetales que se creen existentes en el planeta. - 25 % de los medicamentos de las industrias farmacéuticas son de origen vegetal. - 75 % de la población mundial utiliza la medicina tradicional que consiste principalmente en el uso de extractos provenientes de plantas.

Algunas de las medicinas más importantes o sus precursores derivados de plantas y sus ventas en el 2002
Nombre Tipo Origen Uso terapéutico Alcaloides: ventas proyectadas para el 2002: 4045 millones US$ Hiosciamina, Alcaloides del tropano Solanaceas Anticolinérgicos escopolamina Camptotecina Alcaloide indólico Camptotheca Antineoplásico acuminata Capsaicina Alcaloide fenilalquilamino Capsicum spp. Analgésico local Codeína, morfina Alcaloide opiáceo Papaver somniferum Analgésico Colchicina Alcaloide isoquinolinico Colchicum autumnale Antigota Galantamina Alcaloide isoquinolinico Leucojum aestivum Inhibidor coliesterasa Pilocarpina Alcaloide imidazólico Pilocarpus jaborandi Colinérgico Nicotina Alcaloide pirrolidínico Nicotiana spp. Terapia antitabaco Quinina Alcaloide quinolínico Cinchona spp. Antimalárico Quinidina Alcaloide quinolínico Cinchona spp. Cardiotónico Reserpina Alcaloide indólico Rauwfolia serpentina Antihipertensivo, psicotrópico Vinblastina, Alcaloide indólico Catharanthus roseus Antineoplásico vincristina Yohimbina Alcaloide indólico Apocynaceae, Afrodisíaco Rubiaceae Terpenos y esteroides: ventas proyectadas para el 2002: 12400 millones US$ Artemisinina Lactona sesquiterpénica Artemisia annua Antimalárico Diosgenina, Esteroides Dioscorea spp. Hormonas esteroidales Taxol Diterpenos Taxus brevifolia Glicósidos: ventas proyectadas para el 2002: 9230 millones US$ Digoxina, digitoxina Glicósidos esteroidales Digitalis spp. Cardiotónico Sennósidos A y B Antracenos Cassia angustifolia Laxante Otros: ventas proyectadas para el 2002: 5014 millones US$ Ipecac Mezcla de alcaloides de Cephaelis Emético ipecacuana ipecacuanha Podophyllotoxina Lignanos Podophyllum peltatum Antineoplásico

Producción de metabolitos secundarios por cultivo in vitro de células y órganos vegetales: ¿por qué?

- Independizarse de factores externos tales como: cambios de temperatura, sequías, plagas, variabilidad de la producción, factores políticos y sociales, etc. - Evitar la extinción de especies vegetales. - Disponer de condiciones controladas en el proceso de producción y extracción. - Posibilitar el mejoramiento vegetal en tiempos mas cortos. - Hacer viable la producción de compuestos complejos con uno o más C quirales en forma más económica respecto de la síntesis química - Posibilitar la obtención de nuevos compuestos no presentes en la planta madre. - Establecer procesos de biotransformación sólo realizables por enzimas provenientes de plantas.

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