REPBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELA UNIVERSIDAD DEL ZULIA FACULTAD DE MEDICINA ESCUELA DE MEDICINA UNIDAD CURRICULAR: BACTERIOLOGA Y VIROLOGA

Tema 9:

Bacilos productores de Zoonosis

Lcda. Liliana Gmez Gamboa (M.Sc.)
MARACAIBO, JUNIO 2012.

Gnero

7 gneros

Brucella (10) B. melitensis (cabras) B. suis (cerdos) B. abortus (vacas) B. canis (perros)

Familia Brucellaceae

Parsitos obligados de animales y humanos.

Se localizan intracelularmente.
Son metablicamente inactivos. Cocos o bacilos Gram negativo (1,2m de dimetro) con predominio de formas cocobacilares. Con frecuencia se colorean irregularmente.

 Aerobios, no mtiles y no formadores de esporas.

Cultivo colonias pequeas, convexas, lisas. 2-5 das.

Estn adaptados a un hbitat intracelular y sus requerimientos nutricionales son complejos (aminocidos, vitaminas, sales y glucosa). Utilizan CHO sin produccin de gas.

Catalasa +, oxidasa +, H2S + y NO3 +. Moderadamente sensibles al calor y acidez. Son destruidos con la pasteurizacin.

El suero de animales susceptibles contiene una globulina y una lipoprotena que suprime el crecimiento de cepas avirulentas y favorece el crecimiento de tipos virulentos. Colonias lisas (virulentas) colonias rugosas (avirulentas)

de especies o Biovariedades: Sensibilidad Produccin de H2S

TODAS LAS ESPECIES PUEDEN INFECTAR UN AMPLIO RANGO DE ANIMALES, INCLUYENDO HUMANOS. Ingestin de leche o quesos de leche de cabra infectada.
RUTAS DE INFECCIN

Tracto intestinal Membranas mucosas Piel

Gotas

Contacto con tejidos de animales infectados.

Los organismos progresan de la puerta de entrada, va linftica a la circulacin sangunea. Se pueden desarrollar abscesos en tejido linftico, hgado, bazo, mdula sea y otras partes del sistema retculo endotelial. En tales lesiones Brucella es principalmente intracelular. Pueden ocurrir: osteomielitis, meningitis o colecistitis.
PRINCIPALES REACCIONES HISTOLGICAS EN BRUCELOSIS

1) Proliferacin de clulas mononucleares 2) Exudacin de fibrina 3) Coagulacin necrtica 4) Fibrosis

GRANULOMAS Clulas gigantes y epitelioides con necrosis central y fibrosis perifrica.

Incubacin 1-6 semanas. Inicio insidioso o gradual malestar, fiebre, debilidad, dolores, sudoracin.
La fiebre se eleva en la tarde y durante la noche con mucha sudoracin. Sntomas nerviosos y gastrointestinales. Agrandamiento de ndulos linfticos. El bazo se vuelve palpable. Hepatitis acompaada de ictericia. Osteomielitis.

Debilidad. Dolores. Fiebre de bajo grado. Manifestaciones no especficas compatibles con sntomas psiconeurticos.

Brucella no puede ser aislada del paciente en esta fase

Ttulos de aglutininas

Dx de brucelosis crnica es difcil de establecer con certeza a menos que se presenten lesiones locales.

DIAGNSTICO DE LABORATORIO
SANGRE cultivo BIOPSIA (ndulos linfticos, hueso) cultivo MUESTRAS SUERO ensayos serolgicos

CULTIVO

Agar Brucella altamente enriquecido Atmsfera 8-10% CO2 T 35-37% Tiempo de incubacin 3 semanas

En pocos das, se observan colonias < 1mm de dimetro, no hemolticas. La observacin de cocobacilos Gram negativo catalasa positivo y oxidasa positivo sugiere especies de Brucella.

DIAGNSTICO DE LABORATORIO
Los niveles de IgM se elevan la primera semana de la enfermedad aguda, con un pico a los 3 meses y persisten durante enfermedad crnica. An con el tto antibitico, los niveles de IgM pueden persistir hasta 2 aos en un % bajo de pacientes. Los niveles de IgG se elevan despus de 3 semanas de inicio de la enfermedad aguda, con un pico a las 6-8 semanas y permanecen elevados durante la enfermedad crnica. Los niveles de IgA se encuentran en niveles paralelos a los de IgG.

ENSAYOS DE AGLUTINACIN (Aglutininas febriles) ANTICUERPOS BLOQUEANTES

ELISA

Los ttulos de aglutininas IgG superiores a 1:80 indican infeccin activa. Las aglutininas de Brucelosis dan reaccin cruzada con aglutininas de tularemia.

SEROLOGA

DIAGNSTICO DE LABORATORIO
ENSAYOS DE AGLUTINACIN ANTICUERPOS BLOQUEANTES ELISA
Para detectar IgA, IgG e IgM.

Mas sensible y especfico que los ensayos de aglutinacin.

Son IgA que interfieren con la aglutinacin por IgG e IgM y ocasionan un resultado negativo en bajas diluciones de suero y positivo en diluciones ms altas. Estos anticuerpos aparecen durante la fase sub aguda de la infeccin, persistiendo por muchos aos independientemente de la actividad de la infeccin y son detectadas por el mtodo de Coombs.

Con la infeccin ocurre una respuesta de anticuerpos y es probable que se produzca resistencia a ataques subsecuentes.

Tetracicilina o Ampicilina S

Debido a su localizacin intracelular, los organismos no son erradicados rpidamente ni completamente del hospedador, por lo que se requiere un tratamiento prolongado.
Combinaciones Te + doxyciclina y streptomicina por 2-3 semanas o Ra por 6 semanas.

Brucella son patgenos animales transmitidos a humanos por contacto accidental con heces, orina, leche o tejidos animales infectados. FUENTE COMN DE INFECCIN leche, productos lcteos no pasteurizados y contacto ocupacional (granjeros, veterinarios, ganaderos) con animales infectados.
Transmisin a travs del aire (menos frecuente). Mas frecuente en hombres. La mayora de las infecciones permanecen asintomticas (latentes).

Las tasas de infeccin varan enormemente con diferentes animales y en diferentes pases. Inmunizacin activa de humanos contra la infeccin por Brucella Experimental.

CONTROL:
Limitacin de la diseminacin Erradicacin de infeccin animal Pasteurizacin de leche y sus productos Reduccin del riesgo ocupacional

Francisella

Gnero Francisella
6 especies 8 subespecies

Familia Francisellaceae

F. tularensis TULAREMIA (conocida tambin como fiebre glandular, fiebre de los conejos, fiebre de la garrapata o fiebre de la mosca del ciervo). Cocobacilo Gram negativo dbil muy pequeo (0,2x0,2 a 0,7 m). No mtil. Delgada cpsula lipdica. Exigente desde el punto de vista nutricional (cistina). Aerobio estricto.

Parsito intracelular puede sobrevivir durante perodos prolongados en los macrfagos del sistema reticuloendotelial como consecuencia de su capacidad de inhibicin de la fusin fagosoma-lisosoma.

CPSULA POLISACRIDA ANTIFAGOCTICA

LPS (ENDOTOXINA)

Distribucin universal en el hemisferio norte desde el crculo rtico hasta unos 20 de latitud norte. Incidencia . No se ha descrito la enfermedad en regiones meridionales (Centroamrica, Sudamrica y Australia).

F. tularensis
Se encuentra en numerosos animales salvajes, aves y artrpodos hematfagos. Focos endmicos frecuentes: conejos, garrapatas, liebres, ratones de campo, ratas almizcleras y castores.

TULAREMIA HUMANA

En la mayor parte de los casos se adquiere por la picadura de una garrapata de caparazn duro (Ixodes, Dermacentor, Ambylomma)

La enfermedad tambin se adquiere por contacto con un animal infectado o una mascota (gato) que haya cazado a un animal infectado (conejo).
Las garrapatas de caparazn duro se alimentan del anfitrin durante varias horas o das. La enfermedad tambin se adquiere por consumo de carne o agua contaminada o bien por inhalacin de una partcula aerosolizada infecciosa (generalmente en un laboratorio mientras se cura a un animal infectado).

Slo se necesitan 10 microorganismos cuando la exposicin tiene lugar por una picadura de artrpodo o contaminacin de piel intacta. Por inhalacin 50 microorganismos Por Ingestin 108 microorganismos

GASTROINTESTINAL

LCERO GLANDULAR (lcera cutnea y ganglios linfticos hipertrofiados)

BUCOFARNGEA

CULO GLANDULAR (afeccin ocular y ganglios linfticos cervicales hipertrofiados)

NEUMNICA (arma biolgica)

TIFOIDEA (septicemia)

MUESTRAS

RIESGOS PARA EL MDICO Y PERSONAL DE LABORATORIO. EL MICROORGANISMO PUEDE INOCULARSE A TRAVS DE LA PIEL INTACTA Y LAS MEMBRANAS MUCOSAS DURANTE LA RECOLECCIN DE LA MUESTRA O SER INHALADO. GUANTES, TAPABOCA EN CAMPANA DE BIOSEGURIDAD.

Aspirados de ganglios linfticos o lceras infectadas No aporta resultados satisfactorio (pequeo tamao y tincin dbil con Gram). > Sensibilidad y especificidad TINCIN DIRECTA DE LA MUESTRA CON MICROSCOPA ANTICUERPOS FLUORESCENTES O INMUNOFLUORESCENCIA.

DIAGNSTICO MOLECULAR

PCR

CULTIVO

No se puede aislar F. tularensis de los medios habituales de laboratorio, debido a que requiere compuestos que contiene grupos sulfidrilos.

Agar chocolate o agar tamponado con extracto de levadura de carbn + cistena MEDIOS DE
CULTIVO

Crecimiento lento (3 das)

 Morfologa colonial Morfologa celular IDENTIFICACIN Aglutinacin con anticuerpos especficos.

SEROLOGA

Ttulo de anticuerpos: incremento de los ttulos a lo largo de la enfermedad o un nico ttulo de 1:160 o superior. IgM, IgG e IgA persistencia durante aos

Estreptomicina (notable toxicidad).

Gentamicina, fluoroquinolonas, Doxiciclina.

Produccin de -lactamasas. Con tratamiento precoz tasa de mortalidad del 1%.

Evitar reservorios y vectores de infeccin (conejos, garrapatas, insectos que pican). Evitar manipular conejos que parezcan enfermos. Uso de ropa protectora y repelentes de insectos. Profilaxis con antibiticos en personal de riesgo.

Gnero

15 gneros

Pasteurella
21 especies 3 subespecies

Familia Pasteurellaceae

Formas cocoides pequeos a bacilos Gram negativo aislados, en pares o en cadenas cortas. No mtiles. Anaerobios facultativos. Coloracin bipolar frecuente. Requerimientos nutricionales sencillos excepto algunas especies que requieren NAD (Factor V). Las colonias son de 1-2 mm de dimetro despus de 24 horas de incubacin en SH, gris opacas, 37C.

 Ampliamente distribuidos en nasofaringe y encas de animales domsticos y salvajes saludables y enfermos.

P. multocida
INFECCIN DE HERIDAS TRAS MORDEDURA DE ANIMALES

CPSULA (serotipos del A al F). A, D y F. CITOTOXINAS. HEMAGLUTININA FILAMENTOSA. PROTENAS PARA ADQUISICIN DE HIERRO.

Infeccin de heridas o tejidos blandos despus de mordeduras, rasguos o lamidas de lesiones de piel por carnvoros.

Infecciones de tracto respiratorio (sinusitis, bronquitis, neumona, empiema)

Enfermedades sistmicas (meningitis, peritonitis, septicemia, artritis, endocarditis y osteomielitis).

CULTIVO
SIEMBRA DE MUESTRAS CLNICAS EN MEDIOS DE CULTIVO ENRIQUECIDOS

INCUBACIN EN AEROBIOSIS A 35-37C durante 24-horas

IDENTIFICACIN: Morfologa colonial Morfologa celular Pruebas bioqumicas Susceptibilidad a los antimicrobianos (CLSI 2011).

Rickettsia

Gnero

Orientia Rickettsia
Familia

Rickettsia
28 especies

Rickettsiaceae

Bacilos Gram negativo pequeos (0,3 a 0,5x 1 a 2 m) con una capa de peptidoglucano mnima (dbilmente coloreados con Gram) y LPS (endotoxina dbil). No mtiles. Rodeados de una biopelcula poco adherente.

Parsitos intracelulares estrictos de vida libre en el citoplasma de las clulas infectadas.

Epidemiologa de las infecciones frecuentes por

Rickettsia

 Lipopolisacrido.

Peptidoglucano.
Protena principal (OmpB).

Lipoprotena.
Protena de superficie (OmpA).

Las bacterias acceden al interior de las clulas eucariotas al estimular la fagocitosis. Luego degradan la membrana del fagolisosoma mediante la produccin de fosfolipasa y pasan al citoplasma para poder sobrevivir. La multiplicacin es lenta (9-12 h).El grupo de la fiebre maculosa se liberan de las clulas de manera continua a travs de largas proyecciones citoplasmticas, mientras que el grupo del tifus se acumula en el citoplasma celular hasta provocar lisis de las membranas celulares con destruccin de las clulas y liberacin de las bacterias (principal diferencia en la movilidad celular).

R. rickettsii
Patgeno del ser humano ms frecuente. Agente etiolgico de la FIEBRE MACULOSA DE LAS MONTAAS ROCOSAS. No existen indicios de que R. rickettsii produzca toxinas o de que la respuesta inmunitaria del anfitrin sea la responsable de las manifestaciones patolgicas de esta enfermedad. Replicacin de las bacterias en las clulas endoteliales Dao ulterior a stas clulas y extravasacin de los vasos sanguneos.

PRINCIPALES MANIFESTACIONES CLNICAS

R. rickettsii

Prdida de plasma hacia los tejidos Hipovolemia e Hipoproteinemia reduccin de perfusin de varios rganos e insuficiencia orgnica.

Respuesta Inmunitaria
Destruccin intracelular mediada por citocinas y eliminacin por linfocitos CD8 citotxicos. Respuesta humoral a las protenas de la membrana externa de las rickettsias.

R. rickettsii

El RESERVORIO PRINCIPAL Y EL VECTOR de R. rickettsii son las garrapatas duras infectadas: Garrapata de la madera (Dermacentor andersoni), en los estados de las Montaas Rocosas. Garrapata del perro (Dermacentor variabilis) en los estados del sudeste y en la costa oeste. Otros reservorios de garrapatas son Rhipicephalus sanguineus en Mxico, y Amblyomma cajennense en Centroamrica y en Sudamrica.
Las rickettsias se mantienen en la poblacin de garrapatas por transmisin trans-ovrica. Algunos mamferos, como los roedores salvajes, pueden actuar tambin como reservorios, pero este origen se considera infrecuente para las infecciones humanas transmitidas por garrapatas.

R. rickettsii

Las infecciones por rickettsias se transmiten al ser humano a travs de las garrapatas adultas cuando estas se alimentan. Ms del 90% de las infecciones ocurren entre los meses de abril y octubre, lo que se corresponde con el perodo de mxima actividad de las garrapatas. Para infectarse, el individuo debe estar expuesto a la garrapata durante un perodo de tiempo prolongado (p. ej., de 24 a 48 horas). Las rickettsias avirulentas latentes se activan cuando el insecto se alimenta con sangre caliente, y posteriormente se deben liberar de las glndulas salivales del vector para penetrar en la sangre del anfitrin humano.

R. rickettsii

SEROLOGA Y DIAGNSTICO MOLECULAR

MICROSCOPA

CULTIVO

Cultivos celulares o huevos embrionados

Se tien dbilmente con la tincin de Gram, mejor con Giemsa. Inmunofluorescencia diagnstico clnico de la fiebre de las Montaas Rocosas.

Prueba de WeFelix: sensibilidad y especificidad. Microinmunofluores cencia: detecta Ac frente a protenas de la membrana externa (especficos de especie) y antgeno LPS. Reacciones cruzadas con Legionella.

Las rickettsias son sensibles a las tetraciclinas (p. ej., doxiciclina) y las fluoroquinolonas. El diagnstico precoz y la instauracin de un tratamiento adecuado se asocian generalmente a un buen pronstico; no obstante, estas circunstancias pueden no ocurrir cuando los signos clnicos claves (como el exantema) se desarrollan al final de la enfermedad o no lo hacen en ningn momento de su evolucin. Adems, los hallazgos no estn disponibles generalmente antes de 2 o 3 semanas del inicio de la enfermedad, por lo que tambin se retrasa el comienzo del tratamiento.

La morbimortalidad es elevada cuando existe un retraso en el diagnstico y el tratamiento especfico. No existe ninguna vacuna para la fiebre de las Montaas Rocosas. Por lo tanto, las mejores medidas preventivas consisten en evitar las zonas con garrapatas infestadas, usar ropa protectora y repelentes para insectos y eliminar inmediatamente las garrapatas adheridas. Es prcticamente imposible eliminar el reservorio de garrapatas, ya que pueden sobrevivir hasta 4 aos sin alimentarse.

R. prowasekii
Agente etiolgico del TIFUS EPIDMICO O TIFUS TRANSMITIDO POR PIOJOS.
Principal vector piojo del cuerpo humano (Pediculus humanus). Ser humano principal reservorio del tifus. Hacinamiento y condiciones sanitarias deficientes: propagacin de los piojos corporales. Los piojos mueren como consecuencia de la infeccin en 2-3 semanas, lo que evita la transmisin trans-ovrica. La enfermedad se describe en Centro y Sudamrica, frica y con menor frecuencia en EEUU.

R. prowasekii

La enfermedad espordica en EEUU se restringe fundamentalmente a las zonas rurales de los estados orientales. Se registra en estas reas debido a que las ardillas voladoras, al igual que las pulgas y los piojos de las ardillas, estn infectados por R. prowazekii. Los piojos de las ardillas no se alimentan del ser humano, pero las pulgas no discriminan y pueden ser las responsables de la transmisin de las rickettsias de las ardillas al ser humano.

R. prowasekii

R. prowasekii

SEROLOGA

MTODO DIAGNSTICO DE ELECCIN Microinmunofluorescencia

R. prowasekii
Las tetraciclinas y cloranfenicol son muy eficaces en el tratamiento del tifus epidmico.
Combinar el tratamiento antibitico con medidas eficaces para el control de los piojos. Se dispone de una vacuna para el tifus inactivada con formaldehdo, y se recomienda su administracin en las poblaciones de alto riesgo.

Gnero Ehrlichia 9 especies

Familia Anaplasmataceae

Bacterias Gram negativa intracelulares obligadas que se propagan y residen en vacuolas intracitoplasmticas en clulas derivadas de la mdula sea (granulocitos, monocitos, eritrocitos y plaquetas). Son pequeas (0,2-0,4 m) y se tien dbilmente con la tincin de Gram. A diferencia de Rickettsia, Ehrlichia permanece en la vacuola fagoctica despus de entrar en la clula. Impiden la fusin de los lisosomas al inhibir la expresin de receptores adecuados en la superficie de dicha vacuola.

 Las bacterias en proceso de replicacin se organizan en masas rodeadas de membrana denominadas mrulas (diagnstico). ESTRUCTURA DE LA PARED CELULAR: Carecen de peptidoglucano y LPS.

 La localizacin intracelular de los microorganismos les confiere proteccin frente a la respuesta inmunitaria del anfitrin.

Sin embargo, se cree que la estimulacin bacteriana de la produccin de interfern- (IFN-) desempea una funcin clave en la activacin de los macrfagos, los cuales actan directamente sobre las clulas infectadas o bien sobre bacterias opsonizadas con anticuerpos durante su fase extracelular.

Ehrlichia chaffeensis

ERLIQUIOSIS MONOCTICA HUMANA

ERLIQUIOSIS GRANULOCTICA

Ehrlichia ewingii y Anaplasma phagocytophilum

ERLIQUIOSIS MONOCTICA HUMANA

La enfermedad se observa fundamentalmente en zonas del sudeste, Atlntico medio y central meridional. Esta rea se corresponde con la distribucin geogrfica de Amblyomma amercanum (garrapata Lone Star), el vector primario en la transmisin del microorganismo, y del ciervo de cola blanca, un importante reservorio de E. chaffeensis.

La transmisin transovrica de Ehrlichia en garrapatas es poco eficiente (a diferencia de Rickettsia y Orientia), por lo que deben mantenerse en anfitriones vertebrados. Otros animales que pueden actuar como anfitriones son los perros domsticos, los zorros, los coyotes, los lobos, los mapaches, las zarigeyas, las cabras y los ratones.

E. chaffeensis origina la erliquiosis monoctica humana tras

infectar monocitos sanguneos y fagocitos mononucleares en tejidos y rganos.
Entre 1 y 3 semanas despus de la picadura de la garrapata se observa una enfermedad seudogripal que cursa con fiebre, cefalea y mialgias. En una proporcin inferior al 50% de los sujetos infectados aparecen sntomas gastrointestinales, y un 30% a 40% de los pacientes desarrolla un exantema de inicio tardo (siendo ms frecuente en los nios que en los adultos). La mayora de los pacientes presenta leucopenia, trombocitopenia y elevacin de las transaminasas sricas, las cuales pueden oscilar de leves a severas.

Aunque la mortalidad es reducida (2% a 3%), ms de la mitad de los individuos infectados requiere hospitalizacin y precisa de una prolongada recuperacin. La patologa de esta infeccin es desproporcionada con relacin al nmero de clulas infectadas o la carga microbiana presente en los tejidos. Se estima que E. chaffeensis altera la funcin de los fagocitos mononucleares y la regulacin de la respuesta inflamatoria. En consecuencia, la respuesta inmunitaria destruye el patgeno y genera gran parte del dao hstico.

ERLIQUIOSIS GRANULOCTICA
Los reservorios son mamferos pequeos (como ratones de pies blancos, ardillas listadas y ratones de campo), y los vectores son las garrapatas Ixodes.

E. ewingii origina principalmente enfermedad en cnidos y

el ser humano constituye un anfitrin accidental. Presentacin clnica semejante a la de la enfermedad por E. chaffeensis de modo que el paciente presenta fiebre, cefalea y mialgias. Leucopenia, trombocitopenia y elevacin de transaminasas sricas.

La microscopa tiene un valor limitado en el diagnstico de la enfermedad humana. Se deben teir las preparaciones de sangre perifrica con Giemsa, dado que la deteccin de los microorganismos intracelulares (mrulas) es diagnstica.

No obstante, las mrulas se detectan en menos del 10% de los sujetos aquejados de erliquiosis monoctica y en un 20% a 80% de aquellos con erliquiosis granuloctica y anaplasmosis. Mtodos confirmatorios PCR y estudios serolgicos. Por lo general se observa un incremento del ttulo de anticuerpos entre 3 y 6 semanas despus del comienzo del cuadro, por lo que las pruebas se utilizan fundamentalmente para confirmar el diagnstico.

Los pacientes con sospecha de erliquiosis deben recibir doxiciclina.

El tratamiento nunca se debe retrasar a la espera de la confirmacin de laboratorio de la enfermedad. Se ha utilizado embarazadas). tambin: rifampicina (en mujeres

La infeccin se previene al evitar las zonas infestadas con garrapatas, el uso de ropa protectora y la aplicacin de repelentes de insectos. Las garrapatas adheridas a la piel se deben eliminar sin demora.
No se dispone de vacunas.

Gracias por su atencin!