Practicas Parasitol PlanUnico2012

PRCTICAS DE LABORATORIO
PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA
1. MUESTRAS Y EXMENES TILES PARA LA BSQUEDA DE PARSITOS INTESTINALES

I. OBJETIVOS 1. Explicar los procedimientos de obtencin y manejo de materia fecal para realizar estudios microscpicos. 2. Describir los procedimientos de laboratorio frecuentemente usados en el diagnstico de parasitosis intestinales. 3. Describir el procedimiento para conservar materia fecal con solucin de formaldehido. 4. Describir el examen coproparasitoscpico directo en fresco. 5. Describir el examen coproparasitoscpico de sedimentacin simple. II. INTRODUCCIN El diagnstico de las parasitosis intestinales depende del hallazgo de huevos, larvas o adultos de helmintos y quistes o trofozotos de protozoos en heces, por lo tanto, la recoleccin y el manejo adecuado de las muestras fecales son indispensables para la identificacin correcta de los parsitos en el laboratorio. Son factores que interfieren con el examen de las heces, la ingestin de medicamentos previa a su recoleccin y las muestras viejas o conservadas de manera inadecuada. La cantidad de materia fecal suficiente para un examen rutinario, es una muestra del tamao de una nuez o de dos o tres cucharadas soperas. La materia fecal se deposita en un recipiente de boca ancha con tapa hermtica y limpia; no debe contaminarse con agua, orina o cualquier otro material extrao; no debe obtenerse de la taza del bao ni del suelo. En lactantes, la muestra se obtiene mediante la cucharilla rectal, si el examen requerido es el microscpico en fresco. Las muestras, deben ser etiquetadas con el nombre del paciente, nmero de muestra, fecha y hora de coleccin. Generalmente, se recomienda examinar tres muestras, en das sucesivos, durante un periodo de siete a diez das. Dependiendo de la consistencia de la materia fecal, se elige el procedimiento para la bsqueda de trofozotos, quistes, ooquistes, huevos o larvas (ver esquema). Si las heces son blandas, diarreicas y lquidas, deben examinarse dentro de las dos primeras horas de haber sido recolectadas; si esto no es posible, se adiciona una solucin conservadora, por ejemplo: alcohol de polivinilo (PVA), merthiolate-iodo-formol (MIF) o Schaudin. Las heces formadas pueden ser examinadas durante el mismo da de su coleccin; si no es posible, pueden ser refrigeradas durante 24-48 h o conservadas en solucin de formaldehido 10%.
IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012
La proporcin en que se usan las soluciones conservadoras, es de una parte de materia fecal y tres de la solucin; las heces pueden mantenerse as durante semanas o meses. Otras muestras tiles en la bsqueda de parsitos intestinales son el contenido duodenal, raspado perianal, aspirado rectal o material obtenido por rectosigmoidoscopia. Existe una diversidad de exmenes tiles en el diagnstico de parasitosis intestinales, la seleccin del examen adecuado, depender de la consistencia de la materia fecal o de los sntomas del paciente. Los exmenes frecuentemente utilizados son el directo en fresco y los de concentracin, que se basan en los principios fsicos de flotacin o sedimentacin. El examen en fresco es el ms sencillo y se recomienda para la bsqueda de trofozotos de protozoos, en muestras pastosas, diarreicas o lquidas. Los exmenes de concentracin se recomiendan para la demostracin de quistes, ooquistes, huevos o larvas. III. MATERIAL 1. Para conservar materia fecal en solucin de formaldehido 10%: a) Un frasco con 200 ml de solucin de formaldehido al 10%. b) Una probeta graduada de 100 ml. c) Un frasco conteniendo aproximada-mente 50 g de materia fecal con huevos y quistes de parsitos. d) Un frasco (Gerber) con etiqueta. e) Abatelenguas de madera. 2. Para realizar el examen coproparasitoscpico en fresco: a) Frascos gotero con lugol. b) Frascos gotero con solucin de NaCl a 0.85%. c) Aplicadores de madera. d) Portaobjetos de 26 x 76 mm. e) Cubreobjetos de 22 x 22 mm. f) Microscopio. g) Diapositivas 3. Para realizar el examen de sedimentacin simple: a) Tubos cnicos de 15 ml. b) Frasco (Gerber). c) Pipetas Pasteur de tallo largo con bulbo de caucho.
d) Cuadros de gasa de 12 x 12 cm. e) Embudos de plstico de 12 cm de dimetro y tallo corto. f) Abatelenguas de madera. g) Portaobjetos de 26x76 mm. h) Cubreobjetos de 22x22 mm. i) Diapositivas. IV. MTODO 1. Conservacin de materia fecal en solucin de formaldehido: Demostracin con diapositivas a) Con un abatelenguas, colocar aproximadamente 5 g de materia fecal en el frasco de vidrio. b) Aadir 15 ml de solucin de formaldehido caliente y mezclar con el abatelenguas hasta obtener una suspensin homognea. c) Etiquetar el frasco, con el nombre del paciente, nmero de muestra y fecha. 2. Coproparasitoscpico microscpico en fresco: Demostracin con diapositivas a) Colocar una gota de solucin NaCl al 0.85%, en un portaobjetos. b) Con un aplicador obtener aproximadamente 2 mg de la materia fecal y mezclarla en la gota de solucin salina. c) Hacer una suspensin uniforme y retirar los detritos macroscpicos. d) Colocar un cubreobjetos y hacer la observacin microscpica inmediatamente con los objetivos 10X y 40X. e) En otro portaobjetos colocar una gota de lugol y continuar como con la gota de solucin salina. 3. Coproparasitoscpico por sedimentacin simple: Demostracin con diapositivas a) Con un abatelenguas colocar aproximadamente 10 g de heces, en el frasco de vidrio. b) Aadir 50 ml de agua de la llave. Hacer una suspensin homognea. c) Filtrar a travs de la gasa y recoger el filtrado en el tubo cnico. d) Dejar sedimentar durante 30 min. e) Decantar el sobrenadante. f) Con la pipeta Pasteur colocar una gota del sedimento en un portaobjetos. g) Si el sedimento es grueso aadir una gotita de solucin salina.
h) Cubrir con una laminilla y observar en el microscopio con los objetivos 10X y 40X. i) Colocar una gota del sedimento en otro portaobjetos y teirla con lugol. j) Cubrirla con una laminilla y observar en el microscopio con los objetivos 10X y 40X. CUESTIONARIO PARA DURANTE LA PRCTICA RESPONDER
____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 6. Qu entiende por examen coproparasitoscpico cualitativo?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________
Con el apoyo de la informacin recibida en el laboratorio conteste las siguientes preguntas: 1. Cul es el examen de laboratorio de eleccin para la bsqueda de huevos, quistes o larvas en heces?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 2. Cul es el examen de laboratorio de eleccin para la bsqueda de trofozotos en heces?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 3. Cules son las indicaciones para el uso de la cucharilla rectal?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 4. Por qu se recomienda qu en los exmenes coproparasitoscpicos por concentracin se estudien tres muestras seriadas de materia fecal?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 5. Cul es la funcin de las sustancias conservadoras como el alcohol polivinlico o el merthiolate-iodo-formol en los estudios coproparasitoscpicos?: ____________________________________
2. MUESTRAS Y EXMENES TILES PARA LA BSQUEDA DE PARSITOS EXTRAINTESTINALES

I. OBJETIVOS 1. Enlistar cinco ejemplos de muestras tiles para la bsqueda de parsitos extraintestinales. 2. Describir como se realiza un frote sanguneo y su tincin con colorante de Giemsa. 3. Enlistar cinco parasitosis en las que la biopsia es un recurso til para su diagnstico. 4. Describir la biopsia de msculo de rata infectada con Trichinella spiralis. II. INTRODUCCIN III. MATERIAL La identificacin de parsitos de localizacin extraintestinal, depende de su demostracin en sangre, tejidos, exudados, esputo, aspirados, orina o LCR. La deteccin de parsitos sanguneos (protozoos y helmintos) se logra mediante un examen directo en fresco, frote o gota gruesa. Mediante el examen directo en fresco se pueden detectar hemoflagelados o microfilarias, debido a su motilidad o a su gran tamao. Sin embargo, es necesario realizar preparaciones teidas, para visualizar las caractersticas morfolgicas especficas, ya sea en extendido delgado o gota gruesa. En los exudados vaginal, uretral u orina, la bsqueda e identificacin de Trichomonas vaginalis, se logra mediante el examen directo en fresco en base a su motilidad. En algunas parasitosis, la biopsia puede resultar de gran utilidad en la bsqueda del agente etiolgico, p.e. trichinellosis, 1. Frote sanguneo del ratn: Demostracin con diapositivas a) Torundas con etanol a 70 %. b) Un frasco gotero con metanol. c) Frascos con colorante de Giemsa. d) Frascos gotero con aceite de inmersin e) Soportes para portaobjetos. f) Pipetas Pasteur, con bulbo de caucho. g) Papel limpia lentes. 2. Examen directo en fresco, de sangre del ratn: Demostracin con diapositivas Por laboratorio: a) Un ratn infectado con T. cruzi. b) Un par de guantes para cirujano. c) Unas tijeras rectas. d) Un frasco gotero con solucin de NaCl a 0.85%. e) Portaobjetos 26x76 mm. f) Cubreobjetos 22x22 mm. 3. Describir como se realiza una biopsia de tejido muscular: Demostracin con diapositivas a) Fragmentos de tejido muscular, de rata infectada con Trichinella spiralis, comprimidos entre dos portaobjetos. onchocercosis, leishmaniasis y ocasionalmente en cisticercosis. toxoplasmosis;
El material de biopsia, puede ser til para hacer examen directo, comprimiendo la muestra entre dos portaobjetos o para hacer improntas (leishmaniasis). Si la biopsia es obtenida durante un proceso quirrgico, puede fijarse y hacer cortes histolgicos. Otros recursos tiles para el aislamiento de algunos protozoos sanguneos, son el hemocultivo (medio NNN), el xenodiagnstico y la inoculacin en ratones.
IV. MTODO 1. Frote sanguneo. Demostracin con diapositivas a) Con unas tijeras cortar el extremo distal de la cola del ratn. b) Colocar una gota pequea de sangre en el extremo de un portaobjetos. c) Colocar sobre la gota el extremo de otro porta-objetos y dejar que se extienda a lo largo del borde. Procurar que entre ambos portaobjetos se forme un ngulo de aproximadamente 45 . d) Con movimiento firme hacer el extendido. Este debe cubrir aproximadamente, tres cuartas partes del portaobjetos y no presentar escalones o alguna otra irregularidad. e) Dejar secar el extendido a temperatura ambiente. f) Inclinar la preparacin y escurrirle metanol para fijarlo. g) Colocar el frote, ya fijado, sobre el soporte para portaobjetos, cubrirlo con el colorante de Giemsa y dejarlo actuar durante 30 min. h) Lavar al chorro de agua de la llave, en forma suave y breve. i) Observar en el microscopio con el objetivo 100X. 2. Examen directo en fresco de sangre. Demostracin con diapositivas. a) Cortar con las tijeras un pequeo fragmento de la porcin distal de la cola del ratn infectado con T. cruzi. b) Observar en el microscopio con los objetivos de 40X y 100X. 3. Biopsia de msculo de rata: Demostracin con diapositivas a) Observar en el microscopio con el objetivo 10X y luego con el de 40X. CUESTIONARIO PARA DURANTE LA PRCTICA RESPONDER
_________________________________________ _________________________________________ _________________________________________ _________________________________________ _________________________________________ 2. Mencione dos protozoosis extraintestinales en las que el frote de sangre sea de utilidad diagnstica: _________________________________________ _________________________________________ _________________________________________ _________________________________________ _________________________________________ 3. Qu parsitos extraintestinales se pueden demostrar mediante un examen directo en fresco?: _________________________________________ _________________________________________ _________________________________________ _________________________________________ _________________________________________ 4. En el hombre en qu productos biolgicos se puede realizar la bsqueda de Trichomonas vaginalis?: _________________________________________ _________________________________________ _________________________________________ _________________________________________ _________________________________________ 5. Correlaciona las siguientes columnas:
( ) Impronta ( ) Frote y gota gruesa intestinal ( ) Cultivo de heces ( ) Examen directo de secrecin vaginal ( ) Xenodiagnstico americana A) Leishmaniasis cutnea B) Amibiasis C) Tricomoniasis urogenital D) Malaria E) Tripanosomiasis
Con el apoyo de la informacin recibida en el laboratorio, conteste las siguientes preguntas: 1. Escriba cinco parasitosis extraintestinales en las que sea de utilidad diagnstica la biopsia:
3 y 4. DIAGNSTICO DE GIARDIASIS Y CRIPTOSPORIDIOSIS

I. OBJETIVOS 1. Enlistar los exmenes de laboratorio utilizados para el diagnstico de la giardiasis y criptosporidiosis. 2. Mencionar los productos en que debe buscarse Giardia lamblia y Cryptosporidium sp. 3. Reconocer microscpicamente trofozotos y quistes de G. lamblia. 4. Reconocer microscpicamente los ooquistes de Cryptosporidium sp. II. INTRODUCCIN Giardia lamblia es un enteropatgeno flagelado que se localiza usualmente en las criptas de la mucosa del duodeno y la porcin inicial del yeyuno. Clnicamente hay datos que permiten sospechar el diagnstico de giardiasis, sin embargo es recomendable confirmarlo mediante exmenes de laboratorio. El producto idneo para buscar G. lamblia, es la materia fecal y el tipo de examen que se realice, depender de su consistencia; as, en el caso de evacuaciones lquidas o pastosas el examen indicado ser microscpico directo en fresco, para realizar la bsqueda de trofozotos, con su caracterstica forma piriforme y su disco suctor en el tercio anterior, as como un par de ncleos y cuatro pares de flagelos que le confieren su movilidad caracterstica (fig. 4.1, pg.68). Si las heces son formadas se emplearn mtodos de concentracin por flotacin o sedimentacin para realizar la bsqueda de quistes. stos presentan una forma ovoidal con dos a cuatro ncleos en su interior. A los lados de los ncleos pueden verse los flagelos retrados, as como sus axonemas ubicados longitudinalmente al dimetro mayor del quiste (fig. 4.2, pg. 68). Tanto en heces diarreicas como en formadas es posible realizar la bsqueda de antgeno mediante las tcnicas de ELISA y CIEF. Cuando no se logre encontrar G. lamblia despus de practicar varios exmenes de materia fecal, deber recurrirse al estudio microscpico de contenido duodenal obtenido por sondeo o si se cuenta con otros instrumentos como la cpsula de Beal, Crosby-Kugler-Watson; sta ltima tambin sirve para obtener biopsia. Actualmente se puede recurrir a tcnicas inmunolgicas tales como: hemaglutinacin indirecta, ELISA, CIEF e immunoblot. La cryptosporidiosis es una entidad en la que el agente etiolgico se reconoci como patgeno para el hombre hasta 1976, en esa poca se asoci en pacientes con sndrome de inmunodeficiencia adquirida o inmunocomprometidos y actualmente tambin en individuos inmunocompetentes. El agente causal, Cryptosporidium, se localiza en el intestino delgado, por lo tanto el producto donde debe buscarse es la materia fecal y el mtodo ms eficiente es el de concentracin por flotacin con sacarosa (Sheather), donde se estudia el sobrenadante microscpicamente en contraste de fase. Para reconocer los ooquistes con menos dificultad se puede recurrir a diferentes tinciones, entre otras: Giemsa, Ziehl-Neelsen modificado o Kinyoun.
Con sta ltima tincin los ooquistes se observan como estructuras redondeadas de aproximadamente 5 m de dimetro con una pared oqustica no refringente, que se tien de un color rojo brillante. Ocasionalmente es posible ver delineados en su interior cuatro esporozotos (fig. 5.3, pg. 183). Tambin se puede recurrir a la tcnica de inmunofluorescencia directa (heces) con anticuerpos monoclonales; determinacin de anticuerpos IgG e IgM por inmunofluorescencia y ELISA. III. MATERIAL 1. Un frasco con materia fecal que con-tenga quistes de G. lamblia. 2. Serie de transparencias con el procedimiento de la cpsula de Beal. 3. Preparaciones fijas con trofozotos y quistes de G. lamblia. 4. Papel limpia lentes. 5. Frasco con aceite para inmersin. 6. Preparaciones fijas con ooquistes de Cryptosporidium sp. 7. Una preparacin de heces de ratn con Cryptosporidium sp. fijada con metanol. 8. Microscopios. 9. Portaobjetos de 26x76 mm. 10. Cubreobjetos 22x22 mm. 11. Diapositivas. 12. Material para la tincin de Kinyoun IV. MTODO
f) Examinar la preparacin en el microscopio, con los objetivos 10X, 40X y 100X. Los ooquistes de Cryptosporidium se tien de color cereza.
4.1 Trofozotos de Giardia lamblia, mostrando su tpica forma piriforme, as como sus flagelos. Microscopia de contraste de fases. Coleccin: M. Ponce-Martnez, 1000X.
1. Observar las preparaciones fijas en el microscopio, con los objetivos 40X y 100X e identificar quistes y trofozotos de G. lamblia y ooquistes de Cryptosporidum sp. 4.2 Quistes de Giardia lamblia con su caracterstica forma ovoidal.
1000X.
2. Tincin de Kinyoun: a) Preparar un extendido de heces frescas o conservadas en formol; dejar secar al aire. b) Fijar la preparacin con metanol durante 1 min, dejar secar. c) Cubrir la preparacin con carbol-fuscina y teir durante 5 min. d) Lavar con alcohol-cido y enjuagar con agua de la llave. e) Teir con azul de metileno de Leffler durante 1 min; lavar con agua de la llave y dejar secar al aire.
4.3 Ooquiste de Cryptosporidium sp. (O) teido en tincin de Kinyoun. Obsrvense las levaduras circundantes (L). Coleccin: O. Vzquez, inmersin
CUESTIONARIO PARA DURANTE LA PRCTICA
RESOLVER
6. Con el apoyo de los siguientes esquemas escriba: 6A. Nombre del parsito y fase en la que se encuentra. ____________________________________ ____________________________________
En base a la informacin recibida en el laboratorio conteste las siguientes preguntas. 1. Mencione dos productos biolgicos tiles para realizar el diagnstico de la giardiasis: ____________________________________ ____________________________________ 2. Cul es el examen de laboratorio de eleccin para el diagnstico de la giardiasis aguda?: ____________________________________ ____________________________________ 3. Cul es la fase del parsito que se observa en este examen?: ____________________________________ ____________________________________ 4. Cul es el examen de laboratorio de eleccin para el diagnstico de la giardiasis crnica?: ____________________________________ ____________________________________ 5. Cual es la indicacin para solicitar exmenes especiales como el sondeo duodenal o la cpsula de Crosby-KuglerWatson?: ____________________________________ ____________________________________
Nombre de las estructuras sealadas con flechas:
a.___________________________________ b.___________________________________ c.___________________________________
6B. Nombre del parsito y fase en la que se encuentra: ____________________________________ ____________________________________ Nombre de las estructuras sealadas con flechas: a.___________________________________ b.___________________________________ c.___________________________________ d.___________________________________ e.___________________________________
6C.1 Nombre del parsito y fase en la que se encuentra. 6C 2. Exmenes de laboratorio tiles para su diagnstico. 6C 3. Nombre de las estructuras sealadas con flechas. 6C.1.__________________________________ ______________________________________ 6C.2. _________________________________ ______________________________________ ______________________________________ ______________________________________ 6C.3. a. _______________________________
5. DIAGNSTICO DE AMIBIASIS
I. OBJETIVOS 1. Analizar y discutir las ventajas y desventajas de los recursos de laboratorio, disponibles actualmente para el diagnstico de los diferentes cuadros clnicos de entamoebosis. 2. Mencionar las indicaciones de cada uno de los exmenes de laboratorio utilizados en el diagnstico de amibiasis. 3. Citar los productos tiles que deben tomarse para la bsqueda de Entamoeba histolytica. 4. Reconocer microscpicamente trofozotos y quistes de E. histolytica. II. INTRODUCCIN Una de las protozoosis intestinales con las que se enfrenta el mdico con cierta frecuencia es la amibiasis. Desde el punto de vista clnico esta parasitosis es similar a otras entidades por lo que es muy importante recurrir a diferentes exmenes de laboratorio, que permitan poner en evidencia al agente etiolgico que es E. histolytica. Ahora bien, es relativamente fcil la bsqueda de trofozotos y quistes de este protozoo, en la materia fecal. Los trofozotos miden de 10 a 65 micrmetros de dimetro. En su citoplasma se puede diferenciar el ectoplasma hialino hacia la periferia, as como un endoplasma granuloso con aspecto de vidrio molido. Su ncleo, localizado hacia el centro muestra un endosoma central, con grnulos de cromatina pequeos adosados a la membrana nuclear. Los trofozotos poseen movimiento activo, resultante de la formacin de seudpodos (prolongaciones digitiformes de endoplasma) fig. 5.1 pg. 71). Los quistes de E. histolytica miden de 5 a 20 micrmetros con una forma ovoide o esfrica dada por su pared qustica. En los quistes maduros se pueden observar cuatro ncleos con cariosoma central y cromatina fina perifrica (fig. 5.2 pg. 71). El diagnstico tambin se puede realizar durante la bsqueda de antgeno en heces con la tcnica de ELISA. Pero cuando se aloja fuera del intestino por ejemplo en hgado, pulmn u otros tejidos, no es fcil su hallazgo por los mtodos de laboratorio rutinarios, sino que se tiene que recurrir a la biopsia o la deteccin de anticuerpos especficos mediante tcnicas como: contrainmunoelectroforesis, inmunodifusin, ELISA, inmunoelectroforesis hemagluti-nacin indirecta, inmunofluorescencia o fijacin del complemento. En el intestino es posible encontrar protozoos u otros elementos que en un examen microscpico de heces, pueden llegar a confundirse con E. histolytica tales como: E. coli, E. hartmanni, Endolimax nana o macrfagos, entonces es necesario conocer sus caractersticas morfolgicas para evitar errores de diagnstico, que en ltima instancia perjudican al enfermo. Por lo comentado, es importante para el estudiante de medicina que en un futuro atender pacientes, se familiarice con los distintos mtodos de laboratorio con los que se cuenta actualmente para realizar correctamente el diagnstico de los diferentes tipos clnicos de amibiasis, sus ventajas y desventajas, los productos que deben tomarse para buscar E. histolytica y por ltimo, interpretar los resultados que le proporciona el laboratorio, efectuando una correlacin razonable con los datos clnicos que presente el paciente.
III. MATERIAL 1. Un frasco con heces que contengan quistes de E. histolytica, E. coli y Endolimax nana. 2. Pipetas Pasteur y bulbos de caucho. 3. Portaobjetos de 26x76 mm. 4. Cubreobjetos de 22x22 mm. 5. Aplicadores de madera. 6. Medio de cultivo con trofozotos de E. histolytica. 7. Aceite para inmersin 8. Frasco gotero con solucin salina isotnica. 9. Frasco gotero con lugol parasitolgico. 10. Microscopios pticos. 11. Preparaciones fijas de heces con trofozotos y/o quistes de E. histolytica, E. coli y E. nana. 12. Preparaciones con cortes histolgicos de tejidos con trofozotos de E. histolytica. 13. Diapositivas. IV. MTODO 1. Realizar un examen directo en fresco, a partir del medio de cultivo y observar la morfologa y movilidad de los trofozotos de E. histolytica con los objetivos 10X, 40X. 2. Realizar un examen coproparasitoscpico en fresco: a) Colocar una gota de solucin de cloruro de sodio a 0.85% sobre un portaobjetos. b) Tomar con un aplicador aproximadamente 2 mg de la materia fecal y mezclarla con la gota de solucin salina. c) Hacer una suspensin uniforme y retirar los detritos macroscpicos. d) Cubrir con una laminilla y efectuar la observacin microscpica, con los objetivos 10X y 40X. e) En otro portaobjetos depositar una gota de lugol. f) Continuar con los incisos b) al d). 3. Hacer una preparacin teida con lugol de las heces formadas para identificar y diferenciar quistes de E. histolytica, E. coli y E. nana. Hacer la observacin microscpica con los objetivos de 10X y 40X.
5.1 Examen microscpico en fresco de materia fecal. Obsrvese un trofozoto de Entamoeba histolytica con varios eritrocitos fagocitados. Coleccin: R. lvarez, 40X.
4. Observar microscpicamente las preparaciones con cortes de tejido, con los objetivos de 10X, 40X y 100X. Describir la morfologa de los trofozotos de E. histolytica. 5. Observar microscpicamente las preparaciones fijas de materia fecal, con objetivos 10X y 100X, para identificar trofozotos de E. histolytica y quistes de E. histolytica, E. coli y E. nana.
5.2 Quiste de Entamoeba histolytica en el que se aprecian cuatro ncleos con su cariosoma central. Coleccin: J. Tay, 100X.
CUESTIONARIO PARA RESOLVER DURANTE LA PRCTICA 1. Correlaciona las correspondiente: siguientes columnas anotando la letra correcta en el parntesis
A) Examen de eleccin en el diagnstico de la entamoebosis intestinal aguda. B) El mtodo de laboratorio ms adecuado para confirmar el diagnstico del absceso heptico entamoebiano es. C) Es de utilidad para buscar trofozotos en Entamoeba histolytica en lceras cutneas. D) Para la confirmacin diagnstica de una entamoebosis intestinal crnica es de utilidad realizar.
( ) Hemaglutinacin indirecta. ( ) Examen directo en fresco. ( ) Impronta. ( ) Coproparasitoscpico de concentracin flotacin de tipo cualitativo.
2. En el siguiente esquema, escriba lo que a continuacin se indica.
2A.Nombre del parsito y fase en la que se encuentra: ___________________________________ 2B. Nombre de las estructuras sealadas con letras: a.___________________________________ b.___________________________________ c.___________________________________ g.___________________________________ d.___________________________________ e.___________________________________ f.___________________________________
3 Con base a la informacin recibida en el laboratorio, escriba los nombres de las estructuras parasitarias que se muestran en las siguientes fotografas:
6. DIAGNSTICO DE BALANTIDIASIS Y BLASTOCISTOSIS

I. OBJETIVOS 1. Enlistar los exmenes de laboratorio utilizados para el diagnstico de balantidiasis y blastocistosis. 2. Mencionar los productos en los cuales deben buscarse Balantidium coli y Blastocystis hominis. 3. Reconcer trofozotos de B. coli en cortes histolgicos. II. INTRODUCCIN La balantidiasis es una protozoosis cuyas manifestaciones clnicas son muy similares a las que se presentan en la amibiasis, shigelosis y otras, por lo que debe recurrirse a exmenes de laboratorio para demostrar el agente etiolgico: Balantidium coli. Esta protozoosis es quiz la ms fcil de diagnosticar con exmenes de laboratorio que son sencillos, rpidos y baratos. Ahora bien, el tipo de examen depender de la consistencia de la materia fecal que es el producto que debe estudiarse; si es lquida o pastosa debe recurrirse al examen microscpico directo en fresco. En el que se debern buscar trofozotos grandes (58-120 m) de forma ovoidal, rodeados de cilios. En su citoplasma es posible observar vacuolas alimenticias y contrctiles, as como un macroncleo en forma de rin (fig. 6.1, pg. 75). Si la materia fecal es formada, deber estudiarse por mtodos de concentracin para buscar quistes. stos presentan forma esfrica o ligeramente ovoidal y miden de 40 a 65 m y se encuentran rodeados por una pared qustica gruesa transparente en el interior de la cual se observa al macroncleo y una hilera de cilios (fig. 6.2, pg. 76). Blastocystis hominis por mucho tiempo fue confundido con levaduras intestinales del hombre debido a su frecuente presencia en las heces. Actualmente, con los avances en ultramicroscopia y medios de cultivo, se ha logrado establecer claramente taxonmicamente su posicin de protozoo. La clasificacin taxonmica lo incluye como un rizopoda del orden Amoebidae, y se propone su ubicacin en el suborden Blastocystina. Morfolgicamente son clulas esfricas, de tamao variable, multinucleadas, con membrana limitante, sin forma qustica y gran cantidad de organelos y con mitocondria. Se multiplican principalmente por fisin binaria, pero tambin mediante endodiogenia y esquizogonia. Su hbitat es el intestino del hombre y de otros primates.
6.1 Trofozotos de Balantidium coli en un examen directo en fresco de materia fecal. Coleccin: R. lvarez, 40X.
III. MATERIAL 1. Pipeta Pasteur con bulbo de caucho. 2. Cultivo de ciliados. 3. Aceite para inmersin. 4. Corte histolgico de colon, con trofozotos de B. coli. 5. Portaobjetos 26x76 mm. 6. Cubreobjetos 22x22 mm. 7. Diapositivas. 8. Preparaciones fijas de B. hominis IV. MTODO 1. Examen en fresco del cultivo de ciliados. a) Observar las preparaciones fijas de corte de intestino con B.coli en el microscopio, con los objetivos 10X y 40X. b) Identificar protozoos ciliados.
1.________________________________ _________________________________ 2. ________________________________ __________________________________ __________________________________ __________________________________ 3. a. ______________________________ b. ________________________________ c. ________________________________ d. ________________________________
6.2 Trofozoto de Balantidium coli en el que se aprecia el macroncleo de forma arrionada. Coleccin: I. de Haro, 40X.
RESOLVER
Con base en la informacin recibida durante su prctica de laboratorio, escriba lo que a continuacin se le indica: 1. Nombre del parsito y fase en la que se encuentra. 2. Exmenes de laboratorio tiles para su diagnstico. 3. Nombre de las estructuras sealadas con flechas.
7. DIAGNSTICO DE TENIASIS E HIMENOLEPIASIS

I. OBJETIVOS 1. Mencionar los exmenes de laboratorio empleados para el diagnstico de teniosis, sus ventajas y limitaciones. 2. Elaborar un cuadro sinptico, sea-lando las diferencias morfolgicas que existen entre Taenia solium y Taenia saginata. 3. Reconocer en preparaciones fijas, esclices y progltidos grvidos de T. solium y T. saginata. 4. Enlistar los exmenes coproparasitoscpicos tiles para el diagnstico de la himenolepiasis. 5. Identificar microscpicamente las estructuras que elimina en heces un paciente con himenolepiasis. II. INTRODUCCIN Los agentes etiolgicos de la teniosis: Taenia solium y T. saginata, se localizan en el intestino delgado del hombre, que es el nico husped definitivo de estos cstodos. Un dato importante que orienta al diagnstico de teaniosis, es el antecedente de la expulsin de progltidos en las heces en forma espontnea, lo cual es frecuente en el caso de T. saginata, aunque a veces tambin sucede en el caso de infeccin por T. solium. El individuo que aloja una tenia puede eliminar progltidos junto con las heces, los cuales miden de 10 a 20 mm de longitud por 5 a 7 mm de ancho y son blanquecinos. Ocasionalmente se pueden encontrar huevos en la materia fecal y deben reportarse como Taenia sp., ya que es imposible distinguir
7.1 Huevo de Taenia sp. mostrando su caracterstica cubierta radiada y el embrin hexacanto en su interior. Microscopia de contraste interferencial diferencial de Nomarski. Coleccin: O. Vzquez, 1650X.
microscpicamente a qu especie de Taenia corresponden (fig. 7.1, pg. 77).
Independientemente de que solamente los huevos de T. solium son infectantes para el hombre; es recomendable que todos los progltidos de Taenia solium que se manipulen en el laboratorio, se manejen con cuidado. Los procedimientos para la bsqueda de huevos de Taenia sp. en heces, como el examen coproparasitoscpico, tienen una sensibilidad de alrededor de 50 %. Otro recurso es el mtodo de Graham. Para identificar especficamente a los progltidos grvidos, se requiere aclararlos con solucin alcohol-formol-cido actico (AFA) o teirlos con carmn de Semichn para poder realizar el conteo de las ramas uterinas. T. saginata posee entre 14 y 20 a cada lado del tero, mientras que T. solium solamente presenta de 7 a 13 (fig. 7.2, pg. 78 y fig. 7.3, pg. 78).
En pacientes con el antecedente de eliminacin de progltidos se recomienda que, despus del tratamiento, se colecte la materia fecal eliminada a las 24, 48 y 72 horas y que se enve al laboratorio cada da, en donde mediante el tamizado de las mismas se buscarn los progltidos y el esclex para identificacin de especie y comprobacin de eliminacin del parsito (figs. 7.4 y 7.5, pg. 78).
Posiblemente el mtodo de eleccin a futuro, ser el de hibridacin directa utilizando sondas de DNA marcadas con radioactividad, que detecta hasta un huevo y adems distingue las dos especies de Taenia. Otra tcnica prometedora es la deteccin de antgenos en heces mediante la tcnica de ELISA.
10.2 Progltido de Taenia solium donde se aprecian las ramas uterinas. Contraste con tinta negra. Coleccin: J. Zayman.
10.3 Progltido grvido de Taenia saginata mostrando sus ramas uterinas. Tcnica de contraste con tinta negra. Coleccin: J. Zayman.
10.4 Esclex de Taenia solium mostrando su rostelo con una doble corona de ganchos y cuatro ventosas. Coleccin: J. Tay.
10.5 Esclex de Taenia saginata mostrando sus cuatro ventosas. Coleccin: J. Tay.
La himenolepiasis es una parasitosis causada por cstodos del gnero Hymenolepis; principalmente por la especie nana, que afecta frecuentemente a nios. Ocasionalmente el hombre se infecta con H. diminuta, que tiene como huspedes definitivos a ratas y ratones. Hymenolepis nana es el cstodo ms pequeo que parasita al intestino delgado (leon) de los humanos, donde se encuentra en gran cantidad, a veces varios miles. Mide de 3 a 4 cm de longitud por 1 a 2 mm de ancho; presenta un esclex con cuatro ventosas y un rostelo retrctil armado con una corona de ganchos; la cadena estrobilar la constituyen progltidos trapezoidales. Los huevos salen en las heces al desintegrarse los progltidos grvidos que se caracterizan por tener una corteza gruesa y transparente, provista de engrosamientos polares, de los que sale un par de filamentos y dentro se encuentra el embrin hexacanto (fig. 7.6). Los huevos de H. diminuta son similares a los de H. nana, pero son ms grandes y sin filamentos polares. El diagnstico de la himenolepiasis en el laboratorio, se logra fcilmente por la observacin de huevos en las heces de los individuos infectados, mediante exmenes coproparasitoscpicos de concentracin por flotacin (Faust, Willis), por sedimentacin simple o mtodo de Ritchie. Tambin es til el examen microscpico en fresco (fig. 7.7). Los adultos de H. nana, rara vez se encuentran en las heces, debido al tamao tan pequeo y a la destruccin que sufren en el intestino.
7.6 Huevo de Hymenolepis nana. Obsrvese los engrosamientos polares y su embrin hexacanto. Microscopia de campo claro 1000X.
7.7 Huevo de Hymenolepis diminuta en el que se aprecia el embrin hexacanto. Microscopia de campo claro 1000X.
III. MATERIAL 1. Un frasco con progltidos de T.saginata, conservados en AFA. 2. Estereomicroscopio. 3. Preparaciones fijas con progltido inmaduro, maduro y grvido de T. solium, progltido inmaduro, maduro y grvido de T. saginata y huevos de Taenia sp. 4. Microscopios. 5. Diapositivas. 6. Un frasco conteniendo materia fecal con huevos de H. nana. 7. Aplicadores de madera. 8. Frascos gotero con lugol. 9. Frascos gotero con solucin salina. 10. Portaobjetos de 26x76 mm. 11. Cubreobjetos de 22x22 mm. 12. Preparaciones permanentes con adultos, huevos y cisticercoides de H. nana. IV. MTODO 1. Observacin macroscpica de los progltidos contenidos en el frasco. 2. Observar con el microscopio estereoscpico las preparaciones fijas con los objetivos 10X y 40X. 3. Hacer un examen coproparasitoscpico en fresco (ver Prctica 1). 4. Observar al microscopio las preparaciones fijas con los objetivos 10X y 40X. CUESTIONARIO PARA DURANTE LA PRCTICA RESOLVER A) __________________________________ ____________________________________ ____________________________________ B) __________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 3. Cul es el mtodo de laboratorio de eleccin para el diagnstico de la teniasis? ____________________________________
____________________________________ 2. De acuerdo a los progltidos esquematizados abajo escriba a que especie de Taenia corresponde cada uno y en que fase se encuentran: A) B)
1. En base a las estructuras sealadas en los esclex abajo esquematizados haga la identificacin de la especie de Taenia a la que corresponde cada uno:
Con base en la informacin recibida en el laboratorio, escriba los nombres de las estructuras parasitarias esquematizadas a continuacin:
____________________________________
____________________________________ A continuacin conteste las siguientes preguntas de manera breve y concisa. 1. Cul es el examen de laboratorio de eleccin para la himenolepiasis?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 2. Cules son las caractersticas morfolgicas de un adulto de Hymenolepis nana?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________
8 y 9. DIAGNSTICO DE GEOHELMINTIASIS
I. OBJETIVOS 1. Enlistar los exmenes de laboratorio tiles en el diagnstico de las geohelmintiasis. 2. Discutir la utilidad de los exmenes cuantitativos en la valoracin de la intensidad de las infecciones por geohelmintos. 3. Diferenciar macroscpicamente adultos de Ascaris lumbricoides, Trichuris trichiura y uncinarias. 4. Identificar microscpicamente huevos de A. lumbricoides, T. trichiura y uncinarias, as como larvas rabditoides de Strongyloides stercoralis. II. INTRODUCCIN Los agentes etiolgicos de las geohelmintiasis son: T. trichiura, A. lumbricoides, S. stercoralis, Necator americanus y Ancylostoma duodenale. Todos excepto T. trichiura tienen ciclo migratorio por hgado, corazn, pulmones para finalmente establecerse en intestino delgado. T. trichiura se localiza en el ciego. Una vez establecidos los adultos en el intestino delgado o grueso y cuando alcanzan su madurez sexual, se eliminan las formas diagnsticas en la materia fecal; as por medio de mtodos de concentracin por flotacin o sedimentacin se llega al diagnstico. En la tricocefalosis el diagnstico se establece por el hallazgo de huevos en las heces (fig. 8.1, pg. 82). El diagnstico se puede establecer por medio de la observacin directa de los adultos, al efectuar la rectosigmoidoscopia o en la mucosa rectal prolapsada (fig. 8.2, pg. 82). El diagnstico de la ascariasis se fundamenta en el hallazgo de huevos en las heces. Tambin resultan tiles en el diagnstico de las ascariasis, las pruebas inmunolgicas, sobre todo en etapas tempranas de la infeccin: hemaglutinacin indirecta, contrainmunoelectroforesis (CIEF) e inmunodifusin (fig. 8.3, pg. 84). En la ascariasis masiva los pacientes pueden eliminar adultos por la boca, narinas y otros orificios; tambin pueden observarse en estudios radiolgicos cuando se utiliza medio de contraste. En el empiema por ruptura de un absceso heptico ocasionado por A. lumbricoides, puede buscarse huevos en el aspirado pleural. En la necatoriasis, mediante exmenes CPS cualitativos, no es posible definir la especie de uncinaria de que se trate, debido a que en la fase de huevo, comparten caractersticas morfolgicas. La diferenciacin entre N. americanus y A. duodenale, se logra con las caractersticas morfolgicas de las larvas filariformes obtenidas en el cultivo de heces (Harada-Mori) (fig. 8.4, pg. 84). El diagnstico de la estrongiloidosis, se logra en el laboratorio con la demostracin de larvas o huevos en muestras de heces, esputo o contenido duodenal obtenido por aspiracin o cpsula de Beal. En las heces recientes, se pueden identificar larvas rabditoides y en heces que han permanecido a temperatura ambiente durante 24 h, si se encuentran larvas deben diferenciarse de las de uncinarias. Los exmenes CPS utilizados frecuentemente para la identificacin de larvas de S. stercoralis son los de concentracin (Faust, Willis). El de Baermann es un procedimiento sencillo y sensible en estrongiloidosis asintomtica, cuya importancia se ha incrementado en pacientes inmunocomprometidos y que se encuentran en riesgo de desarrollar autoinfeccin interna que lleva a una complicacin fulminante y fatal.
En las geohelmintiasis es importante valorar la intensidad de la infeccin (leve moderada o grave) o la eficacia del tratamiento, mediante exmenes CPS cuantitativos como: Stoll, KatoMiura o Kato-Katz.
2. Frasco conteniendo materia fecal con larvas de S. stercoralis y huevos de A. lumbricoides, T. trichiura y uncinarias. 3. Cajas de Petri. 4. Pipetas Pasteur con bulbo de caucho. 5. Cuadros de celofn de 22x30 mm, en solucin de verde de malaquita-glicerol. 6. Toallas de papel absorbente. 7. Pinzas. 8. Frasco gotero con lugol. 9. Aplicadores de madera. 10. Portaobjetos de 26x76 mm. 11. Cubreobjetos de 22x22 mm. 12. Microscopios pticos. 13. Estereomicroscopios. 14. Cultivos de Harada-Mori (demostrativos). 15. Dispositivos de Baermann. 16. Frasco con adultos de T. trichiura. 17. Preparaciones fijas de geohelmintos. 18. Diapositivas. IV. MTODO 1. Colocar en una caja de Petri, un adulto de A. lumbricoides. a) Identificar las caractersticas morfolgicas macroscpicas con el estereomicroscopio. 2. Mtodo de Kato-Miura. a) Colocar aproximadamente 50 mg de heces en un portaobjetos y cubrirlo con un cuadro de celofn. b) Invertir la preparacin, colocarla sobre una toalla de papel absorbente y presionar para distribuir uniformemente la materia fecal. c) Dejar la preparacin en la estufa a 40 C durante 30 min o una hora a temperatura ambiente. As se aclaran las heces pero no los huevos de las helmintias.
8.1 Huevos de Trichuris trichiura mostrando su caracterstica forma de barril y sus tapones polares mucilaginosos, as como la masa embrionaria interior. Microscopia de campo claro. Coleccin: J. Tay, 400X.
8.2 Prolapso rectal por Trichuris trichiura, obsrvense los parsitos adheridos a la mucosa rectal prolapsada. Coleccin: F. Beltrn.
3. Observar las preparaciones fijas de los geohelmintos.
Ocasionalmente en los exmenes de las heces no se detectan huevos, aun hacindolos en forma correcta y esto puede deberse a que los helmintos sean machos o a que no hayan alcanzado la madurez sexual. III. MATERIAL 1. Frasco con adultos de A. lumbricoides.
8.3 Huevos frtiles de Ascaris lumbricoides corticados y decorticados mostrando en su interior la masa embrionaria (ME) en desarrollo. Coleccin: R. lvarez.
8.4 Huevo de uncinaria mostrando su pared delgada y masa embrionaria interna en proceso de blastognesis. 400X.
DIFERENCIAS ENTRE LARVAS FILARIFORMES (F3)

Caracterstica diferencial Tamao sin vaina Tamao con vaina Extremo bucal Espculas bucales Extremo anterior Extremo caudal Extremo caudal (vaina) Necator americanus 590 m 650 m Redondeado Oscuras, gruesas, quitinosas Igual de ancho que el esfago Agudo, muy afilado Estriaciones netas Menos ancho que el esfago Cnico Estriaciones conspicuas Igual de ancho que el esfago Aplanado, bfido Ancylostoma duodenale 660 m 720 m Aplanado (chato) Menos visibles Strongyloides stercoralis 500 m Generalmente sin vaina Redondeado Ausentes
Elabor: Dra. Irene de Haro Arteaga, 2002.
CUESTIONARIO PARA RESOLVER DURANTE LA PRCTICA Relacione los enunciados con las imgenes presentadas y anote la letra correspondiente en cada parntesis:
A. Huevo infrtil de Ascaris lumbricoides (vulo). B. Huevo frtil lumbricoides. decorticado de A.
C. Huevo larvado de segundo estadio de A. lumbricoides. D. Huevo frtil corticado de A. lumbricoides. E. A. lumbricoides hembra. F. A. lumbricoides macho.
Conteste las siguientes preguntas: 1. Cul es el examen de laboratorio ms adecuado para realizar el diagnstico de la ascariosis?: ____________________________________ ____________________________________ 2. Cul es el criterio para realizar un diagnstico de tricocefalosis masiva mediante exmenes de laboratorio?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 3. Cul es la forma diagnstica ms frecuentemente encontrada en heces en la estrongiloidosis?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 4. Mediante qu examen de laboratorio se puede establecer el diagnstico de necatoriasis masiva?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 5. Qu resultado espera encontrar en un coproparasitoscpico cuantitativo para considerar a una ascariasis como masiva?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 6. En qu situaciones es posible encontrar todos los exmenes coproparasitoscpicos negativos a pesar de estar cursando el paciente con ascariasis intestinal?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________
10. DIAGNSTICO DE ENTEROBIASIS

I. OBJETIVOS 1. Enlistar los exmenes de laboratorio, tiles en la bsqueda de Enterobius vermicularis. 2. Describir el mtodo de Graham. 3. Discutir las condiciones en que se debe practicar el Graham a un paciente. II. INTRODUCCIN La enterobiasis es una parasitosis que afecta frecuentemente a grupos de personas que viven en hacinamiento; se adquiere por la ingestin de huevos de E. vermicularis, a travs de la contaminacin de las manos al rascarse la regin perianal y posteriormente llevrselas a la boca; otro mecanismo es por contagio por la convivencia con individuos portadores del parsito o por diseminacin de huevos por el polvo. Los gusanos adultos se localizan en la regin leocecal del intestino, donde permanecen adosados por medio de sus expansiones cuticulares ceflicas (alulas). Para establecer el diagnstico de certeza, es necesario demostrar los adultos en heces o huevos del parsito en la regin perianal del husped, mediante el mtodo de Graham. Por este mtodo, los huevos quedan adheridos a un trozo de cinta adhesiva transparente. Los huevos de E. vermicularis miden aproximadamente 60 m de largo por 20 a 30 de ancho. Son de forma ovalada, aplanados por uno de sus lados, con uno de sus extremos ms ancho que el otro. Se encuentran rodeados por una capa transparente refringente con dos cubiertas (fig. 10.1, pg. 88). El estudio debe realizarse por la maana, antes de que el sujeto haya defecado o se haya baado, es recomendable hacerlo en tres das sucesivos. Tambin es conveniente recomendar a la madre que no le aplique talcos ni aceites al nio en la regin perianal ya que esto puede interferir con la lectura de las muestras. El diagnstico especfico, tambin puede establecerse mediante la identificacin de adultos (hembras) que abandonan el intestino durante la noche. Estos gusanos son pequeos, blanquecinos y de aspecto filiforme (fig. 10.2, pg. 88). III. MATERIAL 1. Preparaciones fijas con huevos de E. vermicularis. 2. Preparaciones fijas con adultos de E. vermicularis. 3. Preparaciones fijas con corte histolgico de apndice. 4. Microscopios. 5. Diapositivas. IV. MTODO DE GRAHAM 1. Sobre el extremo de un abatelenguas, colocar 8 cm de cinta adhesiva transparente con la parte engomada hacia afuera y sostenerla contra el abatelenguas con los dedos ndice y pulgar: a) Colocar al paciente de manera que quede expuesta la regin perianal; presionar la cinta
adhesiva contra dicha regin hacia la izquierda y la derecha, teniendo cuidado de cubrir toda el rea entre la mucosa y la piel. b) Pegar la cinta sobre un portaobjetos y rotular con los datos del paciente. c) Examinar la preparacin en el microscopio con los objetivos de 10X y 40X. 2. Observar las preparaciones fijas con los objetivos 10X y 40X.
RESOLVER
Con base a la informacin recibida en el laboratorio y apoyndose en los esquemas inferiores escriba: A. Nombre del parsito y fase en que se encuentra. B. Tipo de examen de laboratorio ms adecuado para su identificacin. C. El nombre de la estructura sealada con la flecha.
A.________________________________ B.________________________________ C.________________________________
10.1 Huevos de Enterobius vermicularis mostrando en su interior una larva en desarrollo, enrollada sobre si misma. Microscopia de campo claro 1000X. Coleccin: R. lvarez.
A.__________________________________ B.__________________________________ C.__________________________________
10.2 Ejemplares adultos de Enterobius vermicularis macho y hembra. Coleccin: R. lvarez.
11. DIAGNSTICO DE TOXOPLASMOSIS

I. OBJETIVOS 1. Mencionar los exmenes de laboratorio directos indirectos que se usan para el diagnstico de toxoplasmosis. 2. Interpretar los resultados de los mtodos indirectos y correlacionarlos con los diferentes tipos clnicos de toxoplasmosis. 3. Reconocer microscpicamente trofozotos y quistes de Toxoplasma gondii. II. INTRODUCCIN El diagnstico clnico de esta protozoosis no es fcil debido entre otras causas a que el agente etiolgico, Toxoplasma gondii, es el parsito ms diseminado en el mundo. Esto trae como consecuencia que la toxoplasmosis pueda coexistir con cualquier otra enfermedad, sin una relacin causaefecto entre esta parasitosis y la sintomatologa del paciente. Resulta muy difcil y con frecuencia imposible, establecer el diagnstico sin la ayuda del laboratorio y an as en muchas ocasiones, tampoco se logra. Los mtodos de laboratorio pueden ser directos e indirectos. Los primeros ayudan a demostrar la presencia del parsito y los segundos a detectar anticuerpos especficos. Mtodos directos Toxoplasma gondii se puede encontrar por medio del examen microscpico en fresco, con tincin y en presenta grandes dificultades y rara vez es concluyente. En este sentido, la tcnica de la inmunoperoxidasa es muy til ya que es altamente sensible y especfica, sin embargo, tiene la desventaja de que es
11.1 Trofozotos de Toxoplasma gondii provenientes de exudado peritoneal, ntese su caracterstica forma de arco. Tincin de Giemsa. Coleccin: R. lvarez. Microscopia de campo claro 1000X.
muy laboriosa, costosa y no se prctica en cualquier laboratorio de anlisis clnicos (fig. 11.1). El aislamiento del parsito en animales de experimentacin a partir de productos tales como: lesiones papulosas de piel, ganglios, aspirado de mdula sea, placenta, tero, lquido cefalorraqudeo, humor acuoso, lgrimas, saliva, orina, leche, materia fecal, a pesar de ser un mtodo de diagnstico directo muy til, tiene la desventaja de que es muy laborioso, requiere de mucho tiempo para obtener el resultado y su rendimiento es muy bajo. Tambin se recomienda la demostracin del parsito en cultivo de tejidos, el cual tiene entre otras desventajas, el de que solamente se practica en laboratorios especializados.
Mtodos indirectos En la prctica mdica el diagnstico de la toxoplasmosis se basa fundamentalmente,
en la deteccin de anticuerpos especficos mediante reacciones serolgicas como la de Sabin-Feldman, tambin conocida como prueba del colorante o dyetest, es altamente especfica y sensible, sin embargo, las dificultades tcnicas en su realizacin limitan su empleo, por lo que en la actualidad prcticamente est en desuso. Otras reacciones utilizadas son: inmunofluorescencia indirecta, hemaglutinacin indirecta, fijacin del complemento y ELISA. La variedad de antgenos que posee T. gondii explica el empleo de diferentes tcnicas serolgicas. Cada una de ellas tiene su valor y limitantes, por eso es indispensable asociar por lo menos dos, para establecer de manera confiable el diagnstico. En los casos con sospecha de toxoplasmosis evolutiva, es recomendable repetir los exmenes con dos a tres semanas de intervalo para seguir la cintica de los anticuerpos. III. MATERIAL 1. Frasco gotero con colorante de Giemsa. 2. Papel limpialentes. 3. Aceite para inmersin. 4. Frote de exudado peritoneal de ratn infectado con T. gondii. 5. Preparacin permanente con trofozotos de T. gondii. Teidos. 6. Microscopios. 7. Diapositivas 8. Preparacin permanente con quistes de T. gondii (teidos). IV. MTODO 1. Tincin del frote de exudado peritoneal: a) Cubrir el frote con colorante de Giemsa y dejar actuar durante 30 min. b) Lavar al chorro de agua suavemente por tiempo breve. c) Dejar secar al aire. 2. Observar en el microscopio, con el objetivo 100X.
a) Observar en el microscopio la preparacin fija con el objetivo 100X. CUESTIONARIO PARA RESOLVER DURANTE LA PRCTICA 1. Qu exmenes de laboratorio son de utilidad para el diagnstico serolgico de la toxoplasmosis?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 2. Qu examen de laboratorio de tipo serolgico requiere de toxoplasmas vivos para su realizacin?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 3. Qu resultados espera encontrar en una serologa para la deteccin de anticuerpos en un paciente inmunodeprimido con toxoplasmosis?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 4. Qu tipo de inmunoglobulinas debe de solicitar para realizar el diagnstico confirmatorio de una toxoplasmosis congnita y por qu?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 5. Qu utilidad tienen los exmenes parasitoscpicos en el diagnstico de latoxoplasmosis?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________
12. DIAGNSTICO DE MALARIA

I. OBJETIVOS 1. Mencionar los exmenes parasitoscpicos y serolgicos utilizados en el diagnstico de la malaria. 2. Analizar las ventajas y desventajas de cada uno de ellos. 3. Citar los productos en los que se puede demostrar en forma directa o indirecta a Plasmodium sp. 4. Describir y ejecutar en forma correcta un frote y gota gruesa de sangre. 5. Reconocer microscpicamente las diferentes fases de Plasmodium sp. en frotes teidos. II. INTRODUCCIN El diagnstico de la malaria, debe sospecharse en un paciente con sndrome febril de etiologa no determinada y que viva o haya permanecido en zonas donde la malaria sea endmica o que haya sido transfundido. El diagnstico de certeza se establece mediante la demostracin de plasmodios en la sangre, esto se logra, realizando un frote y gota gruesa de sangre obtenida momentos antes del acceso febril. Es conveniente tomar varias muestras en cada caso, para tener una mayor seguridad de encontrarlos. Este mtodo permite la identificacin morfolgica de las fases evolutivas del ciclo eritroctico y la diferenciacin entre las especies de Plasmodium. Tanto en pacientes en los que la parasitemia es baja resulta difcil encontrar a los parsitos por los mtodos rutinarios, as como algunos casos en que los datos epidemiolgicos y clnicos sean muy sugestivos, se puede recurrir a la concentracin de una muestra de sangre y a partir de esta realizar el frote y gota gruesa (mtodo de Knott) o bien, tambin se puede realizar la tcnica de QBC (Cuantitative Buffy Coat). En forma indirecta se puede investigar la presencia de Plasmodium sp. en un paciente, mediante reacciones serolgicas tales como: inmunofluorescencia indirecta, hemaglutinacin indirecta, ELISA y radioinmunoensayo. III. MATERIAL 1. Un ratn infectado con Plasmodium yoellii. 2. Portaobjetos 26x76 mm desengrasados. 3. Soporte para portaobjetos. 4. Papel limpialentes. 5. Frasco gotero con metanol. 6. Frasco gotero con colorante de Giemsa. 7. Aceite para inmersin. 8. Microscopios. 9. Preparaciones fijas de Plasmodium vivax, P.malariae, P. falciparum. 10. Diapositivas IV. MTODO 1. Frote y gota gruesa de sangre de ratn: a) Hacer un frote con sangre de la cola de ratn que cubra aproximadamente 3/4 partes del portaobjetos. b) En el extremo libre colocar una gotita de sangre y usando la esquina de un portaobjetos, extenderla con movimiento rotatorio, a manera de formar una pequea rea de aproximadamente un centmetro de dimetro (gota gruesa). c) Colocar el frote ligeramente inclinado y dejar escurrir metanol y lavar la gota gruesa con agua. d) Dejar secar al aire ambos portaobjetos.
e) Colocar ambas preparaciones, sobre el soporte y cubrirlas con colorante de Giemsa. f) Dejar actuar el colorante durante 30 minutos, agitando dos veces la gota gruesa para remover la hemoglobina. g) Lavar con el chorro de agua suavemente, por tiempo breve. h) Dejar secar al aire. i) Observar al microscopio, con el objetivo 100X. 2. Observar al microscopio las preparaciones fijas con el objetivo 100X e identificar los estadios de trofozotos, esquizontes y gametocitos. CUESTIONARIO PARA RESOLVER DURANTE LA PRCTICA 1. Identifique a que fase corresponde cada una de las estructuras parasitarias sealadas en los siguientes esquemas:
A continuacin conteste las preguntas o complete los enunciados: 2. Cul es el examen de laboratorio de eleccin, para realizar el diagnstico de la malaria?: ____________________________________ 3. Para llevar a cabo el diagnstico de especie en la malaria. En qu momento es conveniente tomar la muestra?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 4. Describa brevemente como se realiza un frotis de sangre perifrica. Con qu colorantes se puede teir y cul es su utilidad diagnstica?: _________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________
ERITROCITOS PARASITADOS
13. DIAGNSTICO DE LEISHMANIASIS

I. OBJETIVOS 1. Esquematizar la fase de amastigote y promastigote de Leishmania sp. 2. Analizar los recursos de laboratorio tiles para identificar Leishmania mexicana y L. chagasi. 3. Reconocer amastigotes de L. mexicana en cortes histolgicos de lesiones cutneas. 4. Identificar microscpicamente amastigotes de L. chagasi en impronta de bazo. II. INTRODUCCIN La leishmaniasis es una histoparasitosis producida por protozoos del gnero Leishmania, de localizacin intracelular; caracterizada por lesiones cutneas, mococutneas o viscerales y cuyo agente causal es transmitido por la picadura de mosquitos del gnero Lutzomyia. En su ciclo biolgico, las especies del gnero Leishmania, presentan una fase de amastigote y otra de promastigote. Las diferentes especies de Leishmania son indistinguibles con esta morfologa. En las lesiones causadas por L. mexicana, los amastigotes pueden identificarse en improntas o cortes histolgicos. Otros recursos tiles para el aislamiento de este protozoo, son el cultivo en NNN, las pruebas inmunolgicas, siendo la de fijacin del complemento la ms usada (fig. 13.1). En la leishmaniasis visceral, causada por L. chagasi, para la identificacin de amastigotes, se ha utilizado la biopsia de mdula sea y de ganglios linfticos. Tambin se ha recurrido al cultivo de tales muestras, en el medio de NNN.
13.1 Impronta obtenida del borde de una lcera del pabelln auricular de un paciente con leishmaniasis cutnea. Obsrvese el acmulo de amastigotes de Leishmania. Tincin de Wright. Microscopia de campo claro 1000X. Coleccin: J. Tay.
Las pruebas inmunolgicas tiles en el diagnstico de la leishmaniasis visceral, incluyen la intradermorreaccin de Montenegro, la reaccin de fijacin del complemento, inmunofluorescencia indirecta y ELISA. III. MATERIAL 1. Un tubo de medio de cultivo de NNN. 2. Frascos gotero con colorante de Giemsa. 3. Pipetas Pasteur estriles, con bulbo de caucho. 4. Frascos gotero con aceite para inmersin. 5. Frascos gotero con metanol. 6. Papel limpialentes. 7. Portaobjetos 26x76 mm. 8. Cubreobjetos 22x22 mm. 9. Microscopios. 10. Preparaciones fijas de L. mexicana y L. chagasi. 11. Diapositivas.
IV. MTODO 1. Con una pipeta Pasteur, aspirar un poco de lquido del medio de NNN, colocar una gota sobre un portaobjetos y cubrirla con un cubreobjetos. a) Observar al microscopio con los objetivos 10X y 40X. 2. En otro portaobjetos colocar una gota del medio de cultivo, extenderla y dejarla secar. a) Fijar la preparacin con metanol y dejarla secar al aire. b) Cubrirla con colorante de Giemsa y dejarlo actuar durante 30 min. c) Lavar con agua de la llave a chorro suave y dejar secar al aire. d) Observar en el microscopio con los objetivos 10X y 40X. 3. Observar en el microscopio las preparaciones fijas, con el objetivo 100X. CUESTIONARIO PARA DURANTE LA PRCTICA RESOLVER
4. Cul es el medio de cultivo para el aislamiento de leishmaniasis?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 5. Qu fase del parsito se desarrolla en este medio?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 6. Describa clara y brevemente la forma de realizar una impronta cutnea: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________
1. Qu exmenes de laboratorio son tiles para el diagnstico de la leishmaniasis cutnea?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 2. Qu estructuras espera encontrar para confirmar el diagnstico?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 3. En el caso de leishmaniasis visceral cul es el material biolgico ms adecuado para la bsqueda del agente etiolgico?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________
14. DIAGNSTICO DE TRYPANOSOMIASIS

I. OBJETIVOS 1. Esquematizar las fases de amastigote, epimastigote y tripomastigote de Trypanosoma cruzi. 2. Identificar microscpicamente las fases de vida de T. cruzi, en cortes histolgicos, sangre fresca y frote sanguneo de ratn y en medio de cultivo NNN. 3. Analizar la utilidad de los recursos de diagnstico, en las tres fases clnicas de la trypanosomiasis americana. II. INTRODUCCIN La trypanosomiasis americana o enfermedad de Chagas es causada por el flagelado T. cruzi, que generalmente es transmitido al humano por las heces de un artrpodo. El parsito en el humano, afecta clulas del sistema reticulo endotelial, particularmente las de miocardio, esfago y colon. Si bien en un paciente, los datos clnicos y epidemiolgicos pueden hacer sospechar de la trypanosomiasis, los exmenes parasicolgicos pertinentes confirman la presencia del agente causal. Examen de sangre. Las pruebas clsicas para la deteccin de tripomastigotes, son el examen directo y los extendidos (delgados o gruesos) teidos con Giemsa; sin embargo, es recomendable hacer tcnicas de concentracin de sangre mediante los mtodos de Stront o Woo (hematcrito) (fig. 14.1). Aislamiento. El cultivo de sangre en medios de NNN y la inoculacin en ratones de laboratorio, permiten el aislamiento del parsito pero el tiempo que requiere (tres a cuatro semanas) limitan su uso para el diagnstico. En los tejidos de dichos animales es posible observar nidos de amastigotes (fig. 14.2, pg. 96). Xenodiagnstico. Es un mtodo til para detectar al parsito durante la fase crnica de la enfermedad. Se basa en la multiplicacin de T. cruzi en el tubo digestivo de triatminos y el examen posterior de sus heces durante uno a tres meses. Existen adems, pruebas inmunolgicas que de manera indirecta apoyan al diagnstico durante la fase crnica y son tiles en estudios epidemiolgicos. Las ms usadas son inmunofluorescencia indirecta, hemaglutinacin indirecta, contrainmunoelectroforesis, doble difusin y ELISA. La reaccin de fijacin del complemento, fue la primera prueba serolgica de uso general, sin embargo, por dificultades tcnicas ha cado en desuso. En los casos de trypanosomiasis americana congnita, la deteccin de IgM especfica, puede contribuir a confirmar un diagnstico.
14.1 Tripomastigote sanguneo de Trypanosoma cruzi en frote de sangre perifrica en el que se puede observar el flagelo, membrana ondulantes y el cinetoplasto. Tincin de Giemsa. Microscopia de campo claro 1000X. Coleccin: J. Tay.
3. Observar en el microscopio las preparaciones fijas con los objetivos 40X y 100X.
14.2 Nidos de amastigotes obtenidos de tejidos de un ratn inoculado con T. cruzi. Coleccin: J. Tay, 1000X.
III. MATERIAL 1. Tubo con medio de cultivo de NNN. 2. Ejemplares de Triatoma sp. 3. Ratn infectado con T. cruzi. 4. Frasco gotero con solucin salina. 5. Guantes. 6. Pipetas Pasteur estriles. 7. Aceite para inmersin. 8. Portaobjetos de 26x76 mm. 9. Cubreobjetos de 22x22 mm. 10. Papel limpia lentes. 11. Preparaciones fijas de T. cruzi. Teidos 12. Microscopios. 13. Diapositivas. IV. MTODO 1. Junto a la flama del mechero, destapar el tubo con medio de cultivo y aspirar el lquido con una pipeta Pasteur. a) Depositar una gota sobre un portaobjetos y cubrirla con una laminilla. b) Observar al microscopio con los objetivos 10X y 40X. 2. El profesor cortar con tijeras, un pequeo fragmento de la porcin distal de la cola del ratn. a) Colocar una gota de sangre en un portaobjetos y aadir una gotita de solucin salina. b) Mezclar con la esquina del cubreobjetos y cubrir la preparacin. c) Observar al microscopio con los objetivos 10X y 40X.
CUESTIONARIO PARA RESOLVER DURANTE LA PRCTICA Anote el nombre y las caractersticas morfolgicas de las siguientes fases parasitarias: A.
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ B.
_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________
D.
15. DIAGNSTICO DE CISTICERCOSIS E HIDATIDOSIS

I. OBJETIVOS 1. Reconocer al metacstodo de T. solium en carne de cerdo. 2. Describir las caractersticas morfolgicas del metacstodo de T. solium, en un corte histopatolgico de cerebro. 3. Mencionar las ventajas y limitaciones de las tcnicas empleadas en el diagnstico inmunolgico de la cisticercosis. 4. Enlistar los estudios inmunolgicos y su utilidad en el diagnstico de la hidatidosis. 5. Discutir la utilidad de la intradermorreaccin de Casoni. 6. Observar cortes histolgicos de quiste hidatdico. 7. Observar macroscpicamente un quiste hidatdico. II. INTRODUCCIN La forma larvaria de T. solium (cisticerco), que causa en el humano y en algunos animales la cisticercosis, se ha encontrado alojada en diferentes rganos y tejidos causando una sintomatologa muy variada, lo cual hace muy difcil efectuar el diagnstico desde el punto de vista clnico. La imagenologa y el laboratorio, ofrecen una ayuda muy valiosa en el diagnstico de esta enfermedad. En el primer caso se pueden utilizar la radiografa simple de crneo, tomografa axial computarizada (TAC) y resonancia magntica nuclear (RMN). En el laboratorio se puede realizar el estudio citoqumico de lquido cefalorraqudeo, en el que se encuentran: aumento de la albmina, pleocitosis a base de linfocitos, disminucin de la glucosa y a veces eosinofilia. Mtodos inmunolgicos Para el diagnstico inmunolgico de esta parasitosis, existen mtodos que ayudan a detectar anticuerpos producidos por el husped, en respuesta a la presencia de la forma larvaria de T. solium en su organismo. La utilidad de cada prueba es variable debido a factores tales como: antgeno usado, sensibilidad de la prueba, concentracin de anticuerpos en la muestra analizada (LCR o suero), intensidad de la respuesta inmune del husped que a su vez depende del nmero de parsitos, localizacin y estado evolutivo del mismo; adems depende tambin del tiempo de evolucin del padecimiento. En la mayora de la pruebas inmunolgicas que se usan, se emplea un extracto crudo de forma larvaria de T. solium, obtenido de carne de cerdo infectada, pero produce reacciones cruzadas con otros parsitos. Existe una fraccin para antgeno B que disminuye la posibilidad de reacciones cruzadas, no permite el diagnstico diferencial entre cisticercosis e hidatidosis y probablemente de otras enfermedades por cstodos. Entre las pruebas inmunolgicas frecuentemente utilizadas se encuentran: la hemaglutinacin indirecta (HAI), la inmunoelectroforesis (IE), la inmunofluorecencia indirecta (IFI), la de ELISA y el immunoblot. La presencia de la etapa larvaria de cstodos del gnero Echinococcus, en el humano y herbvoros, se conoce como hidatidosis. La especie ms frecuente es E. granulosus, cuya fase adulta se localiza en el intestino de perros. El hombre acta como husped intermediario al ingerir alimentos contaminados con huevos de E. granulosus.
El quiste hidatdico en el humano, generalmente se localiza en hgado. Es una vescula unilocular cuya pared est constituida por: a) Cutcula. Membrana ms externa, lisa, de color blanco, laminada y acelular. b) Membrana germinativa. Es una capa sincicial a partir de la que se forman vesculas hijas, vesculas prolgeras y protoesclices (fig.15.1 y 15.2, pg. 100). El quiste se encuentra cubierto por una capa de tejido conectivo, producida por el husped. En el diagnstico integral de la hidatidosis, deben considerarse datos epidemiolgicos, clnicos, pruebas de inmunodiagnstico y datos de estudios por imagen. Las pruebas inmunolgicas tiles para confirmar el diagnstico de hidatidosis incluyen: doble difusin, contrainmunoelectroforesis, inmunoelectroforesis, hemaglutinacin indirecta, inmunofluorescencia indirecta, ELISA, electrosinresis e immunoblot. De estas pruebas, las tres primeras, con la deteccin del arco 5 de Capron, tienen alta especificidad y buena sensibilidad en la hidatidosis heptica, pero sensibilidad baja en la pulmonar. La prueba de ELISA tiene alta sensibilidad, especialmente en la hidatidosis heptica. En la interpretacin de las pruebas de inmunodiagnstico, debe tenerse en consideracin que existen reacciones cruzadas con otras especies de Echinococcus y con el cisticerco de Taenia solium. En el diagnstico integral de la hidatidosis, son de gran utilidad tanto estudios inmunolgicos como estudios por imagen. Otro mtodo til, es el examen microscpico de cualquiera de los elementos figurados del quiste hidatdico, cuando ste se haya roto y comunicado con el exterior. Ante la sospecha de hidatidosis, est contraindicado hacer puncin del quiste, porque puede desencadenarse choque anafilctico y la
muerte del secundaria.
paciente
una
hidatidosis
III. MATERIAL 1. Un frasco con un quiste hidatdico. 2. Portaobjetos 26x76 mm. 3. Cubreobjetos 22x22 mm. 4. Preparaciones con corte histolgico de quiste hidatdico. 5. Microscopios. 6. Diapositivas. 7. Un fragmento de carne de cerdo con cisticercos. 8. Una caja de Petri. 9. Solucin salina al 0.85 %, 100 ml. 10. Estereomicroscopio. 11. Portaobjetos de 26x76 mm. 12. Una preparacin con corte histolgico de cerebro, con formas larvarias de T. solium. IV. MTODO 1. Disecar formas larvarias de T. solium, de la carne de cerdo y colocarlas en la caja de Petri con solucin salina. 2. Comprimir una vescula entre dos portaobjetos y presionar hasta aplastarla. 3. Observar al microscopio con los objetivos 10X y 40X. Identificar la corona de ganchos y ventosas los cuerpos calcreos, que son pequeas masas redondas de carbonato de calcio, que se encuentran en el parnquima del cstodo y que semejan granos de arena muy refrctiles. 4. Observar al microscopio ptico la preparacin con corte histolgico de cerebro, con los objetivos 10X y 40X. Identificar la reaccin inflamatoria, alrededor de la forma larvaria de T. solium. 5. Observacin macroscpica del quiste hidatdico. 6. Observar al microscopio la preparacin fija con los objetivos 10X y 40X.
15.1 Quiste hidatdico en cerebro ntese su gran tamao. Coleccin: Dr. Zyeman.
Tomografa de crneo mostrando un cisticerco en fosa posterior. Foto cortesa: J. Tay.
A. Qu estudio es necesario para hacer el diagnstico definitivo?: ___________________________________ ___________________________________ B. Con base a la informacin anterior y la recibida en su prctica de laboratorio, escriba tres exmenes de laboratorio inmunolgicos que le sirvan para avalar el diagnstico: ___________________________________ ___________________________________ ___________________________________ *Conteste las siguientes preguntas de manera breve y concisa: 1. De las pruebas inmunolgicas utilizadas en el diagnstico de la hidatidosis, cuales tienen alta sensibilidad y especificidad en la hidatidosis heptica?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________
15.2 Arenillas hidatdicas de un quiste hidatdico en las que se observa el esclex y los ganchos. Coleccin: Departamento de Microbiologa y Parasitologa.
RESOLVER
1. Se trata de paciente masculino de 45 aos de edad con historia de cefalea crnica, actualmente con datos de crneo hipertensivo. En los estudios de rayos X y tomografa axial computada* se encontraron imgenes sugestivas de cisticercos. Su lquido cefalorraqudeo present aumento de protenas sin otros datos.
2. Desde el punto de vista microscpico, qu estructuras se deben encontrar en el contenido de un quiste hidatdico para realizar la identificacin?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 3. Cul es la razn por la que la reaccin de Casoni da frecuentemente falsas positivas?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 4. En el esquema inferior escriba el nombre de las estructuras sealadas con letras:
A. __________________________________ B. __________________________________ C. __________________________________ D. __________________________________ E. __________________________________
16. DIAGNSTICO DE FASCIOLOSIS Y PARAGONIMIASIS

I. OBJETIVOS 1. Enlistar los exmenes inmunolgicos tiles en el diagnstico de fasciolosis y paragonimiasis. 2. Discutir la utilidad de los exmenes parasitoscpicos usados, para el diagnstico de fasciolosis y paragonimiasis. 3. Identificar microscpicamente la fase parasitaria diagnstica de Fasciola hepatica y Paragonimus mexicanus. 4. Observar macroscpicamente y microscpicamente adultos de F. hepatica. II. INTRODUCCIN La fasciolosis es una zoonosis causada por el tremtodo Fasciola hepatica que tiene como hospederos definitivos a animales herbvoros y humanos, en los que se localiza en los conductos biliares intrahepticos. La sospecha clnica de fasciolosis se establece mediante la sintomatologa del paciente y tomando en consideracin los antecedentes epidemiolgicos y hbitos de alimentacin. El diagnstico se debe confirmar mediante mtodos directos durante la fase de estado o indirectos durante la fase migratoria o de invasin. Los mtodos directos consisten en la bsqueda de huevos en heces mediante exmenes coproparasitoscpicos de sedimentacin simple, Ritchie o en el contenido biliar obtenido mediante sondeo o cpsula de Beal. Otro mtodo directo es el macroscpico, ante el hallazgo de adultos, durante el acto quirrgico de vas biliares (fig. 16.1 y 16.2, pg. 103). En la etapa migratoria de F. hepatica (periodo prepatente), el paciente no elimina huevos en las heces, por lo que el diagnstico debe basarse en pruebas inmunolgicas que incluyen: ELISA, inmunoelectroforesis, contrainmunoelectroforesis, doble difusin, hemaglutinacin indirecta e immunoblot. Las tres primeras tcnicas, tienen un alto grado de sensibilidad y especificidad, lo cual las hace recomendables para su empleo rutinario en el laboratorio. Otras pruebas de laboratorio que coadyuvan en el diagnstico de la fasciolosis son: las pruebas de funcionamiento heptico, cuya normalizacin constituye un ndice de curacin de la parasitosis. La paragonimiasis es una zoonosis causada por otro tremtodo: Paragonimus sp. y en nuestro pas por la especie P. mexicanus. Se adquiere por ingestin de cangrejos, langostinos y camarones de agua dulce infectados o mal cocidos (cebiche). El adulto se localiza en pulmn, sin embargo, las formas juveniles pueden tener migraciones errticas a diversos rganos. El diagnstico parasitoscpico se hace por identificacin de huevos en esputo, lquido pleural e incluso en materia fecal (por deglucin). Tambin se han desarrollado pruebas serolgicas (RFC) y especialmente una intradermoreaccin. III. MATERIAL 1. Un fragmento de hgado con F. hepatica. 2. Caja de Petri. 3. Pipetas Pasteur con bulbo de caucho. 4. Agujas de diseccin. 5. Solucin salina.
6. Tubos con caracoles del gnero Stagnicola. 7. Portaobjetos 26x76 mm. 8. Cubreobjetos 22x22 mm. 9. Microscopios pticos. 10. Estereomicroscopios. 11. Preparaciones fijas de F. hepatica: adultos, huevos y adulto en conducto biliar. P mexicanus: adulto. 12. Diapositivas.
IV. MTODO 1. Disecar los conductos biliares, analizar las alteraciones patolgicas y obtener los adultos de F. hepatica. 2. Depositar unos adultos en cajas de Petri, lavarlos con solucin salina y observarlos en el estereomicroscopio. 3. Colocar unos adultos en otra caja de Petri con solucin salina y con una aguja de diseccin, hacer cortes en la regin donde se localiza el tero, haciendo una suspensin de huevos. 4. Colocar una gota de la suspensin en un portaobjetos y cubrirla con una laminilla. a) Observar al microscopio con los objetivos 10X y 40X. 5. Observar en el estereomicroscopio las preparaciones permanentes con adulto de F. hepatica y P. mexicanus.
16.1 Huevo operculado de Fasciola hepatica teido con lugol. Microscopia de campo claro. Coleccin: J. Tay, 400X.
6. Observar al microscopio las preparaciones de huevos y corte histolgico de conducto biliar con los objetivos 10X y 40X. 7. Observar en el estereomicroscopio los caracoles del gnero Stagnicola. CUESTIONARIO PARA DURANTE LA PRCTICA RESOLVER
Con base a la informacin recibida en el laboratorio y con el apoyo en los esquemas inferiores, escriba: A. Nombre del parsito y fase en la que se encuentra. B. Tipo de examen de laboratorio ms adecuado para su identificacin.
16.2 Adulto de Fasciola hepatica mostrando su forma foliacea, cono ceflico,tero, testculos y ventosas ventral y ceflica. Coleccin: I. de Haro.
C. El nombre de las estructuras sealadas con flechas.
A.__________________________________ B.__________________________________ C.__________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________
A.__________________________________ B.__________________________________ C.__________________________________
17. DIAGNSTICO DE TRIQUINOSIS

I. OBJETIVOS 1. Enlistar los procedimientos parasitoscpicos e inmunolgicos, tiles para el diagnstico de triquinosis. 2. Identificar larvas de Trichinella spiralis en corte histolgico de msculo. 3. Realizar triquinoscopia e identificar larvas de T. spiralis en msculo de rata. II. INTRODUCCIN La trichinellosis es una helmintosis causada por T. spiralis, que se caracteriza por sndrome febril, signos culopalpebrales, mialgias y eosinofilia. Esta parasitosis usualmente se sospecha por la sintomatologa y los antecedentes de ingestin de carne de cerdo infectada cruda o poco cocida. En el laboratorio, el diagnstico de triquinosis, rara vez se logra mediante la identificacin de adultos y larvas. Durante la fase intestinal de la infeccin, se puede realizar el diagnstico mediante la identificacin de adultos en heces en un examen coproparasitoscpico. Durante la fase de estado, el diagnstico de certeza se logra mediante la demostracin de larvas en biopsia de msculo deltoides, bceps, gemelos o pectorales. La presencia de larvas se evidencia comprimiendo un fragmento de msculo entre dos portaobjetos (fig. 17.1). El fragmento de biopsia debe ser de aproximadamente un gramo (1.5x1x0.5 cm). Este procedimiento por lo general se procura evitar en nios cuando se cuenta con otros recursos diagnsticos (serologa) debido a lo cruento del procedimiento. La toma de la biopsia se recomienda despus del da 25 de iniciada la infeccin ya que antes de este tiempo, las larvas pueden no estar enrolladas, lo que dificulta y disminuye la sensibilidad del estudio. En estas circunstancias, es recomendable realizar digestin con jugo gstrico artificial y lectura del sedimiento al microscopio. Otro examen de laboratorio, aunque poco utilizado, es el xenodiagnstico; para practicarlo, se alimenta a una rata con biopsia de tejidos de un paciente en estudio y en una semana o menos, pueden detectarse adultos en intestino y larvas en los tejidos. En aproximadamente un mes las larvas pueden ser identificadas en fragmentos de msculo comprimido entre dos portaobjetos o digerido en jugo gstrico artificial.
17.1 Biopsia de msculo estriado mostrando larvas de Trichinella spiralis (T.s), obsrvese su disposicin en "espiral". Tincin tricrmico de Masson.
Otras pruebas tiles para confirmar el diagnstico de triquinosis, son las pruebas inmunolgicas como la de floculacin con bentonita y aglutinacin con ltex, que tienen la ventaja de no permanecer positivas ms de un ao, por lo tanto una prueba fuertemente positiva indica una infeccin reciente. La prueba de ELISA ha demostrado tener 100 % de sensibilidad y especificidad en pacientes con una semana de haber adquirido la infeccin. Otra prueba inmunolgica hemaglutinacin indirecta. til es la
III. MATERIAL 1. Microscopios. 2. Fragmentos de msculo de rata infectada con T. spiralis entre dos lminas. 3. Preparaciones con corte histolgico de msculo con larvas de T. spiralis. 4. Diapositivas. IV. MTODO 1. Observar los fragmentos de msculo de rata en el microscopio con los objetivos 10X y 40X. 2. Observar las preparaciones fijas en el microscopio con los objetivos 10X y 40X. CUESTIONARIO PARA RESOLVER DURANTE LA PRCTICA Con base en la informacin recibida en el laboratorio y con el apoyo en el esquema inferior escriba: A. Nombre del parsito y fase en la que se encuentra. B. Tipo de examen de laboratorio ms adecuado para su identificacin. C. El nombre de las estructuras sealadas con flechas.
A.__________________________________ B.__________________________________ C.__________________________________ ____________________________________
18. DIAGNSTICO DE ONCOCERCOSIS

I. OBJETIVOS 1. Enlistar los mtodos de laboratorio y de gabinete para confirmar el diagnstico de oncocercosis. 2. Precisar la indicacin y utilidad de cada mtodo. II. INTRODUCCIN La oncocercosis es una filariosis ocasionada por el nemtodo Onchocerca volvulus, el cual en su estadio de adulto es de color blanco, filiforme y conestriaciones transversales en su cutcula; la infeccin se adquiere por la picadura de moscos de gnero Simulium que albergan las formas infectantes. Los adultos de O. volvulus que se encuentran en ndulos subcutneos se localizan en las regiones del arco plvico, temporal y occipital del crneo. Las microfilarias generalmente se encuentran en ganglios linfticos y piel, en la proximidad de los ndulos subcutneos y en la conjuntiva corneal. Excepcionalmente se localizan en sangre perifrica, orina y esputo; despus de la administracin de dietilcarbamazina, los pacientes pueden eliminar microfilarias en la orina. Se confirma la presencia del parsito en su estadio de larva o adulto mediante los siguientes estudios: a) Extirpacin y diseccin de subcutneos (oncocercomas). ndulos Otra manera de realizar el diagnstico es mediante la tcnica de ELISA que se est utilizando con resultados prometedores. III. MATERIAL 1. Frasco con ndulos subcutneos que contienen O. volvulus. 2. Microscopios pticos. 3. Microscopios estereoscpicos. 4. Una preparacin fija con corte histolgico de oncocercoma. 5. Diapositivas. IV. MTODO 1. Observar los oncocercomas microscopio estereoscpico. con el
2. Observar la preparacin fija al microscopio con los objetivos 10X y 40X.
b) Biopsia de piel de la regin escapular. c) Examen de sedimento urinario. d) Observacin de la cmara anterior del ojo con lmpara de hendidura.
CUESTIONARIO PARA RESOLVER DURANTE LA PRCTICA Se trata de un paciente masculino de 40 aos de edad, que ha habitado toda su vida en la regin del Soconusco, Chiapas. Iniciando su padecimiento actual hace aproximadamente ao y medio, con la aparicin de ndulos subcutneos de consistencia fibrosa en el cuero cabelludo, no dolorosos, no fijos a planos profundos y que han aumentado de tamao lentamente. 1. En este paciente cul es el diagnstico clnico ms probable?: ____________________________________ ____________________________________ 2. Mencione dos exmenes parasitoscpicos de laboratorio que sirvan para confirmar su diagnstico clnico: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 3. Qu estructuras esperara encontrar en estos exmenes?: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 4. Describa brevemente qu estructuras parasitarias esperara encontrar en el interior de los ndulos: ____________________________________ ____________________________________ ____________________________________ 5. Mencione un mtodo inmunolgico auxiliar en el diagnstico de esta enfermedad: ____________________________________ ____________________________________
Foto cortesa: J. Tay.
19. ARTROPDOS DE IMPORTANCIA MDICA I. INSECTOS

I. OBJETIVOS IV. MTODO 1. Mencionar las caractersticas generales de los artrpodos. 2. Clasificar mediante una clave pictrica algunos de ellos. 3. Identificar las principales caractersticas morfolgicas de algunos artrpodos. II. INTRODUCCIN Los artrpodos son metazoos que se caracterizan por tener sus patas articuladas, simetra bilateral, cuerpo cubierto por quitina y dimorfismo sexual. Su morfologa es muy variada y dependiendo de ella se puede establecer el grupo taxonmico al que pertenecen. Muchos artrpodos tienen importancia mdica ya que pueden ser transmisores de protozoos, helmintos, virus, bacterias y pueden causar lesiones o reacciones alrgicas. III. MATERIAL 1. Serie de diapositivas mostrando la morfologa de algunos artrpodos. 2. Caja entomolgica con ejemplares de Triatoma spp., Rhodnius spp., Dipetalogaster sp., Blatella sp., Periplaneta sp., Vespa sp. 3. Microscopio esteroscpico. 4. Laminillas permanentes artrpodos. de diversos 1. Siguiendo las instrucciones del profesor y en base a la clave pictrica referente a artrpodos, clasificar los artrpodos proporcionados. 2. Observacin macro y microscpica de los especmenes y laminillas.
5. Microscopio ptico.
20. ARTROPDOS DE IMPORTANCIA MDICA II. ARCNIDOS Y CAROS

I. OBJETIVOS 1. Identificar las principales caractersticas morfolgicas de algunos artrpodos de la clase Acrida (caros y garrapatas):
Orden Ixodida Familia Ixodidae Argasidae Prostigmata Astigmata Demodicidae Trombiculidae Epidermoptidae Sarcoptidae Gnero Rhipicephalus Amblyoma Ornithodoros Demodex Eutrombicula Dermatophagoides Sarcoptes
invalidez y muerte. Los ms importantes, por la patologa que ocasionan al hombre son: Latrodectus mactans, Loxosceles sp. Y Centruroides sp. III. MATERIAL 1. Microscopio ptico. 2. Frascos con ejemplares de Centruroides spp.; incluidos en acrlico. 3. Preparaciones con ejemplares de ixdidos y argsidos. 4. Serie de diapositivas. 5. Microscopios esteroscpicos. 6. Pinzas de diseccin sin dientes. IV. MTODO 1. Observar macroscpicamente y microscpicamente las preparaciones y el material proporcionado. 2. Describir sus caractersticas morfolgicas principales.
2. Identificar las principales caractersticas morfolgicas de algunos artrpodos de la clase Arachnida (araas y alacranes):
Orden Aranea Scorpionida Familia Theriididae Loxoscelidae Buthidae Gnero Latrodectus Loxosceles Centruroides
II. INTRODUCCIN La clase Acrida comprende varios rdenes, entre los que se encuentran Ixodida con dos familias: Ixodidae (garrapatas duras) y Argasidae (garrapatas blandas), que tienen importancia mdica porque son transmisoras de diversos agentes patgenos, as como por el dao directo que producen. Los rdenes Prostigmata y Astigmata incluyen familias de acros que son importantes como transmisores de agentes patgenos o causantes de alergias. En la clase Arachnida existen artrpodos que ocupan un lugar importante ya que causan lesiones traumticas, intoxicaciones,
CUESTIONARIO PARA RESOLVER DURANTE LA PRCTICA Con base a la informacin recibida en el laboratorio y con ayuda de su libro de texto, complete el siguiente cuadro: Morfologa macroscpica Gnero y especie Agente que transmite o enfermedad que produce
Morfologa macroscpica
Gnero y especie
Agente que transmite o enfermedad que produce

Practicas Parasitol PlanUnico2012

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PRCTICAS DE LABORATORIO

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

1. MUESTRAS Y EXMENES TILES PARA LA BSQUEDA DE PARSITOS INTESTINALES

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

2. MUESTRAS Y EXMENES TILES PARA LA BSQUEDA DE PARSITOS EXTRAINTESTINALES

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

3 y 4. DIAGNSTICO DE GIARDIASIS Y CRIPTOSPORIDIOSIS

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

CUESTIONARIO PARA DURANTE LA PRCTICA

Nombre de las estructuras sealadas con flechas:

a.___________________________________ b.___________________________________ c.___________________________________

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

2. En el siguiente esquema, escriba lo que a continuacin se indica.

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

6. DIAGNSTICO DE BALANTIDIASIS Y BLASTOCISTOSIS

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

CUESTIONARIO PARA DURANTE LA PRCTICA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

7. DIAGNSTICO DE TENIASIS E HIMENOLEPIASIS

microscpicamente a qu especie de Taenia corresponden (fig. 7.1, pg. 77).

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

3. Observar las preparaciones fijas de los geohelmintos.

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

DIFERENCIAS ENTRE LARVAS FILARIFORMES (F3)

Elabor: Dra. Irene de Haro Arteaga, 2002.

A. Huevo infrtil de Ascaris lumbricoides (vulo). B. Huevo frtil lumbricoides. decorticado de A.

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

10. DIAGNSTICO DE ENTEROBIASIS

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

CUESTIONARIO PARA DURANTE LA PRCTICA

A.________________________________ B.________________________________ C.________________________________

A.__________________________________ B.__________________________________ C.__________________________________

10.2 Ejemplares adultos de Enterobius vermicularis macho y hembra. Coleccin: R. lvarez.

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

11. DIAGNSTICO DE TOXOPLASMOSIS

Mtodos indirectos En la prctica mdica el diagnstico de la toxoplasmosis se basa fundamentalmente,

PROGRAMA ACADMICO DE LA ASIGNATURA DE MICROBIOLOGA Y PARASITOLOGA

IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

12. DIAGNSTICO DE MALARIA

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IV. PARASITOLOGIA SEGUNDO AO, 2011-2012

13. DIAGNSTICO DE LEISHMANIASIS

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14. DIAGNSTICO DE TRYPANOSOMIASIS

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_______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ B.

a._________________ b._ c.___________________

A. B. C.

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A. B. C. D. E. __

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