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buap_Manual de Inmunologia

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BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS

LICENCIATURA EN QUÍMICO FARMACOBIÓLOGO

AREA MICROBIOLOGÍA

ASIGNATURA LABORATORIO DE INMUNOLOGÍA

CÓDIGO LQF 306L

M.C. ALMA LÓPEZ GARCÍA

VERANO 2010

1

M.C. Alma López García

BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS OBJETIVOS: a. Educacional:

Los

alumnos

egresados

de

la

carrera

de

Químico

Farmacobiólogo serán poseedores de conocimientos, habilidades y actitudes valorativas que le permitirán comprometerse con el desarrollo responsable de la nación y su cambiante realidad. Para lo cual contará con las herramientas como son aptitudes y un pensamiento reflexivo, crítico y científico que le permitirán ser un profesionista de alto desempeño laboral con un espíritu emprendedor, innovador y propositivo. Por lo que el egresado pondrá en uso las herramienta y el conocimiento obtenido a lo largo de su estancia en la universidad. b. General: Es una materia práctica que tiene como finalidad proporcionar un panorama general del laboratorio de inmunología. Revisar de manera general la importancia de las reacciones antígeno-anticuerpo en el diagnóstico de determinadas enfermedades infecciosas, y su aplicación como métodos inmunológicos cualitativos y cuantitativos con el fin de obtener información diagnóstica-clínica y pronostica de los pacientes. c. Específicos: • Definir la terminología empleada comúnmente en laboratorio de Inmunología. • • Aplicar las medidas de seguridad en el laboratorio clínico. Adquirir destreza manual para desarrollar las metodologías básicas aplicadas en Inmunología • Aplicar medidas de seguridad en el trabajo con muestras biológicas como sangre y suero humanos. • Comprender la importancia del laboratorio de Inmunología para su formación profesional. • Motivar en el alumno su interés por la búsqueda de información actualizada sobre el área de conocimiento y desarrollar en él su capacidad para la interpretación, discusión y síntesis • • Desarrollar en el alumno la capacidad de trabajo en equipo y liderazgo. Desarrollar la capacidad de auto-aprendizaje, a través de lectura, comprensión y discusión de artículos

2

M.C. Alma López García

consciente de la continua evolución de la ciencia. constructiva. • Desarrollar capacidad de observación y una actitud abierta a la búsqueda del conocimiento. • Contribuir a los cambios de hábitos de higiene en el alumno. 3 M.C. Alma López García .BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS • Desarrollar en el alumno valores éticos profesionales acerca del conocimiento y aplicación de los mismos en la manipulación de las formas farmacéuticas en los pacientes. propositiva y responsable. • Desarrollar en el alumno una actitud crítica.

La hora de entrada tiene 10 minutos de tolerancia. Antes de iniciar la práctica. Limpiar y desinfectar el área de trabajo antes y después de utilizarla. así como instrucciones escritas y verbales de aquellos que solo tienen una exposición limitada al ambiente del laboratorio son las medidas disponibles más importantes para prevenir las infecciones adquiridas en el laboratorio. también están expuestos a todos los riesgos asociados a cualquier ambiente de laboratorio como incendio. Se debe poseer un manual de seguridad que contenga información sobre la conducta a seguir en caso de una contingencia OBJETIVO: El alumno de habituara a las medidas de seguridad necesarias en el laboratorio. La educación del personal que manipula a diario las muestras. beber o fumar en el laboratorio. se enlistan a continuación los reglamentos y normas que habrán de seguirse en el Laboratorio del área de Microbiología. Además del riesgo por infección los laboratorios de Inmunología. los riesgos de un laboratorio de Inmunología pueden extenderse a laboratorios adyacentes. así como para mantener una organización adecuada para el desarrollo de las prácticas correspondientes. 4 M. Comunicarse con sus compañeros solo en la medida indispensable. no se permitirá el acceso al laboratorio. lavarse las manos con agua y jabón desinfectante. químicos. con la finalidad de asegurar la integridad física de los alumnos. potencialmente infecciosas y la educación por medio de avisos sobre riesgos biológicos. pasado este tiempo. mal funcionamiento de los equipos. Entrar al laboratorio con la bata puesta y abotonada. materiales radiactivos. son necesarias para no correr ningún riesgo de adquirir aún en forma accidental. permite definir las normas que en materia de seguridad. peligros dependientes de desastres naturales. Colocar todo los artículos personales en la zona lateral o en los cajones de las mesa de trabajo. Con base en lo anterior. Alma López García .BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 1 SEGURIDAD EN EL LABORATORIO INTRODUCCIÓN: Los laboratorios de Inmunología son ambientes especiales. es el momento para aclararlas.C. una infección por este tipo de partículas. sistemas de circulación de aire deficiente. riesgos eléctricos. así como introducir algún objeto en la boca. leer y recordar la metodología a seguir de acuerdo con las indicaciones del profesor. situaciones ambientales como pisos deslizantes. DESARROLLO: El conocimiento de las propiedades fisicoquímicas y de la infecto-contagiosidad de los microorganismos. Al iniciar y finalizar las prácticas. Permanecer en la zona de trabajo asignada para cada equipo. las muestras clínicas de pacientes recibidas para su estudio significan un riesgo para el personal debido a los agentes infecciosos que pueden contener. La puerta del laboratorio debe mantenerse cerrada. Queda estrictamente prohibido comer. Si se tienen dudas.

porta y cubreobjetos. con el fin de reducir el riesgo de transmisión de enfermedades.). En forma previa a su lavado. bisturíes. así como los generados en la producción de biológicos Los instrumentos y aparatos para transferir. siempre se deberá desinfectar el material que se le proporcione en el laboratorio. derramamiento de suspensiones virales. En adición. incluyendo navajas. cristalería entera o rota. por los distintos medios mecánicos. nombre del alumno. inocular y mezclar cultivos Las muestras biológicas para análisis químico. sección. pipetas Pasteur. las disposiciones anteriores tienden al cumplimiento de la Norma Oficial Mexicana NOM-087-ECOL-1995. se consideran residuos peligrosos biológico-infecciosos los siguientes: La sangre Los cultivos y cepas almacenadas de agentes infecciosos Los cultivos generados en los procedimientos de diagnóstico e investigación. tales como: Desinfección: Destrucción de microorganismos patógenos en todos los ambientes. equipo. Rotule todo el material que se va a incubar. tubos de ensayo y similares. cajas de Petri. Residuo peligroso biológico-infeccioso: El que contiene bacterias. en la cual se establecen los requisitos para la separación. físicos o químicos contrarios a su vida o desarrollo.C. el material de desecho no contaminado deberá depositarse en los contenedores correspondientes. transporte. virus u otros microorganismos con capacidad de causar infección o que contiene o puede contener toxinas producidas por microorganismos que causan efectos nocivos a seres vivos y al ambiente. En la NOM referida. deberá colocarse en el sitio indicado por el profesor. que se generan en hospitales y establecimientos de atención médica. citológico e histológico Los residuos anatómicos derivados de la atención a pacientes de los laboratorios Los equipos y dispositivos desechables utilizados para la exploración y toma de muestras Los objetos punzo cortantes usados o sin usar Los que han estado en contacto con pacientes o sus muestras clínicas durante el diagnóstico y tratamiento.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Informe al profesor de cualquier accidente que ocurra (rotura de material. agujas hipodérmicas. 5 M. de acupuntura y para tatuaje. microbiológico. materias o partes que pueden ser nocivos. recolección. Todo el material que se va a incubar o desechar. lancetas. En general. así como fecha de entrada y salida. envasado. Sea cuidadoso con el material y equipo que se le proporciona. jeringas. con los siguientes datos: grupo. etc. Alma López García . se establecen además definiciones de interés para los laboratorios y áreas de microbiología. tratamiento y disposición final de los Residuos Peligrosos biológico-infecciosos que se generan en establecimientos e instituciones relacionadas con el sector salud. almacenamiento.

los cuales: Deberán garantizar la eliminación de microorganismos patógenos Deberán volver irreconocibles a los residuos peligrosos biológico-infecciosos Deberán ser cremados. garantiza la seguridad que deberá observarse tanto para alcanzar los objetivos de las prácticas. 6 M.C. El cumplimiento de las consideraciones señaladas con anterioridad. los residuos peligrosos infecto-contagiosos.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Con base en lo anterior. deberán ser tratados por métodos físicos o químicos. como para su desarrollo en condiciones asépticas. si se trata de residuos patológicos. Alma López García .

1 ml de muestra en 0. una dilución 1/10 indica que se tiene un volumen de la solución original contenido o diluido en 10 volúmenes totales.5 ml de diluyente En la práctica el cálculo de las diluciones se puede efectuar de dos maneras diferentes que cumplen ciertas expectativas. Dilución directa.9 ml de diluyente 0.5 ml de muestra en 4. Sustituyendo los valores conocidos tenemos: 1/d=1/10 Vm=5 ml Vt= ? Así: 1/10=5 ml/Vt despejando Vt tenemos que Vt=10 x 5/1=50 ml volumen de diluyente = volumen total-volumen de muestra volumen de muestra = 50-5 = 45 ml Ejemplo N°2 Prepare exactamente 200 ml de una dilución 1/50.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 2 DILUCIONES INTRODUCCIÓN: Se les llama diluciones a las soluciones con concentración menor obtenidas al agregar volúmenes conocidos de diluyente a una solución de concentración conocida. Las diluciones se expresan en forma de una proporción. de los cuales 9 corresponden al diluyente. Alma López García . la dilución directa y la dilución en serie. una dilución 1/10 puede prepararse de diferentes maneras: Por ejemplo: 1 ml de muestra en 9 ml de diluyente 0. OBJETIVO: El alumno aprenderá a calcular diluciones en forma directa o en serie. Sustituyendo los valores conocidos tenemos: 1/d=1/50 7 M. por ejemplo 1/10 (1:10) donde la primera cifra o numerador (1) corresponde al volumen de lo que se está diluyendo y la segunda cifra o denominador (10) al volumen total en que se encuentra.C. Para realizar una dilución directa se puede hacer uso de la siguiente expresión: 1/d=Vm/Vt donde 1/d= dilución Vm= volumen de muestra Vt= volumen total (volumen de diluyente + volumen muestra) de Ejemplo N°1 Lleve 5 ml de muestra a una dilución 1/10. DESARROLLO: Así. Dado que en una dilución lo que se indica es la relación entre el volumen de la solución original y el volumen total en que se encuentra.

Dilución seriada Este tipo de dilución soluciona los inconvenientes que presenta el calculo directo de las diluciones altas. multiplicando sus denominadores tenemos: 1/ 100 x 1/ 100= 1/ 10 000 En este caso el factor de dilución es de 100. una dilución 1/ 10 000 se prepararía con 1 ml de muestra y 9 999 ml de diluyente o bien 9.9 de diluyente. Además. los demás tubos toman la alícuota ya diluida del tubo previo. 4 y 10 los más usados. de la cual se toma una alícuota que se diluye en varios tubos y se siembra por vertido en placa. El número de tubos y las diluciones intermedias se plantean considerando el volumen de los tubos así como el volumen mínimo que se puede medir fácil y exactamente con las pipetas disponibles. las diluciones directas tienen el inconveniente de que cuando es necesario hacer una dilución alta por ejemplo 1/ 10 000. en microbiología permite el calculo de la población microbiana en la muestra de estudio.C.1 ml + Vt= 10 ml) en un primer tubo y colocar 0. 8 M.001 ml de muestra. siendo 2. El segundo tubo tendrá una dilución 1/ 100. En el ejemplo de la dilución 1/ 10 000. sin embargo como la muestra ya se encuentra diluida previamente 1/ 100. la muestra se puede diluir 1/ 100 (Vm= 0.1 ml de esta dilución en un segundo tubo con 9.999 ml de diluyente y 0. Debe insistirse en que solo el primer tubo lleva la alícuota de la muestra sin diluir. La diferencia entre la dilución de dos tubos consecutivo se conoce como factor de dilución.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Vm=? Vt= 200 ml Así: 1/50=Vm/200 Despejando Vm tenemos que Vm=200 x 1/50=4 ml Volumen de diluyente = volumen total-volumen de muestra Volumen de diluyente = 200-4=196 ml Sin embargo. se desperdicia mucho reactivo o se incurre en un error de medición. Alma López García . Así.

el VDRL. Previamente se realiza la limpieza del área elegida con torunda y alcohol.4%. Se usan en relación de una parte de anticoagulante por cada nueve partes de sangre. se comprueban con propósitos de diagnóstico (inmunodiagnóstico). oxalato de sodio y EDTA. No debe olvidar soltarlo tan pronto empiece a obtenerse la muestra. Para efectuar análisis serológicos. Se puede obtener de la yema del dedo. la detección de antígenos asociados a tumores y la demostración de la hormona gonadotropina coriónica. parásitos. DESARROLLO: Obtención de Muestra de Sangre.5ml de volumen total con la muestra de sangre. Aún más. una prueba diagnóstica del embarazo. la determinación de la proteína C-reactiva. 20x32 o el sistema para la extracción de sangre intravenosa al vacío Vacuntainer  .C. OBJETIVO: Aprender el procedimiento apropiado para la obtención de sangre venosa de las venas del dobles del codo. Alma López García . Los anticoagulantes más usados son el citrato de sodio. En el plasma o suero se determina principalmente la presencia de anticuerpos. La cantidad máxima de sangre a extraer será estrictamente la necesaria para las pruebas. hoy en día la sensibilidad y especificidad de los inmunoensayos permiten no solo la detección de anticuerpos contra una amplia variedad de organismos infecciosos incluyendo bacterias.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 3 TOMA DE MUESTRA INTRODUCCIÓN: En el laboratorio de inmunología la muestra a estudiar es principalmente sangre y sus derivados suero o plasma. El EDTA (ácido etilen-diamino-tetra-acético) se utiliza al 10% y es uno de los anticoagulantes de elección para el trabajo de rutina.8% y el oxalato de sodio al 1. habitualmente se usan 0.25ml de la solución para completar a 2. Anticoagulantes. 9 M. Inicialmente los investigadores se dedicaron a la detección de anticuerpos en el suero del paciente como un signo de infección y así a la identificación serológica del microorganismo. Esta muestra se obtiene por punción de una de las tres venas del pliegue del codo: la basílica. Sangre venosa. una prueba que señala un proceso inflamatorio agudo. la cefálica o la mediana cubital. Sangre capilar o periférica. las muestras de sangre pueden ser de sangre capilar o periférica y de sangre venosa. El citrato de sodio se emplea al 3. hongos y virus sino a la identificación del propio microorganismo. los cuales desde el descubrimiento de la alta especificidad de las reacciones antígeno-anticuerpo (Ag-Ac). Se emplean jeringas desechables con agujas de tipo 21x32. Algunas pruebas pueden realizarse con sangre capilar o periférica y se aconseja cuando no es posible obtener una muestra de sangre venosa o no se desea puncionar la vena. proporcionan un medio para la detección y cuantificación de antígenos no infecciosos y anticuerpos de importancia clínica tales como la determinación del grupo sanguíneo. La sangre capilar o periférica es la que fluye después de aplicar una punción superficial cutánea. Antes de puncionar se coloca el torniquete aproximadamente a 8 cm de distancia arriba del pliegue del codo. Sin embargo.

BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS Manejo y conservación de la muestra.C. 10 M. Alma López García . La muestra debe rotularse correctamente y separase según el caso en plasma o suero. y dependiendo del tipo de análisis debe analizarse inmediatamente o puede conservarse adecuadamente refrigerada entre 4 y 8ºC para el análisis posterior.

Dejar el colorante 1 minuto y añadir el mismo número de gotas de solución reguladora pH 6. A partir de la muestra de sangre preparar 2 extendidos (frotis) siguiendo las indicaciones del instructor. 3. basófilos (0.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 4 OBSERVACION DE LEUCOCITOS (CUENTA DIFERENCIAL) INTRODUCCIÓN: Los cinco principales tipos de leucocitos son los neutrófilos (5070%). los eosinófilos (1-5%). el cual tiñe el núcleo de los leucocitos de un color púrpura que facilita la diferenciación. colocar en un puente de tinción y cubrirlos (contar el número de gotas) con colorante de Wright. 4. Por cuenta diferencial se entiende la determinación del porcentaje relativo de cada tipo de leucocito en una muestra de sangre.C.0%). Alma López García . 2.4 Microscopio DESARROLLO: 1. 11 M. linfocitos (20-30%). Cuando la preparación esté completamente seca. Lavar suavemente la preparación por 30 segundos y secar el exceso de agua. colocar una gota de aceite de inmersión y observar al microscopio. OBJETIVO: Identificar los diferentes tipos de leucocitos en un frote teñido MATERIAL Y EQUIPO Portaobjetos Lancetas desechables Algodón Colorante de Wright Solución reguladora pH 6. Se realiza en extendidos (frotis) preparados cuidadosamente y teñidos con colorantes tales como Wright.5-1.4 durante 8 minutos. 5. y monocitos (2 – 6%). Dejar secar completamente los frotis. Para facilitar la identificación consultar las láminas a color que ilustran los diferentes leucocitos.

para separar el plasma del paquete celular. Estos cuatro grupos se conocen actualmente como tipos A.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 5 DETERMINACIÓN DEL GRUPO SANGUÍNEO INTRODUCCIÓN: Alrededor de 1900 Karl Landsteiner descubrió que en el humano existen cuatro tipos de sangres con respecto a la presencia o ausencia de dos antígenos específicos denominados A y B. La tipificación de eritrocitos en el laboratorio se realiza con antisueros específicos contra los antígenos A. D. Se centrífuga por 2 min. 12 M. 9. Muestras de sangre con anticoagulante Pipetas graduadas de 1 y 5 ml Tubos de ensayo de 10 X 75 mm Solución salina isotónica Lancetas desechable Aplicadores de madera o palillos Sueros tipificadores anti-A anti-B anti-D (Rh) 8.C. 8. 4. Este antígeno se designó inicialmente como factor Rh. 4. anti-B y anti-D.1 ml del paquete celular y se resuspenden en 1. B y D.9 ml de solución salina para una suspensión aproximada del 5%. 6. 5. La aglutinación se reconoce por la formación de grumos. e. 6. c. d. 7. y puede realizarse por métodos en tubo o en portaobjetos. En 1940 Landsteiner y Wiener reportaron que el suero de conejo producido contra eritrocitos de mono Rhesus podía aglutinar los eritrocitos del 85% de una población caucásica. B. 3. Se obtiene aproximadamente 5 ml de sangre venosa y se colocan en un tubo con EDTA (0. 2.m. Uno de estos antígenos.p. Los tubos se centrifugan 1 min a 2000 r. 5. MATERIALES Y EQUIPO 1. a 2000 r. 7. Se toman 0. Placa oscilatoria DESARROLLO: Método en tubo 1. B y D. Se incuba a 37°C por 30 minutos. se centrífuga y se busca la aglutinación. 3.m. Si persiste la negatividad se lavan los eritrocitos 3 veces con 0. Se busca la presencia de aglutinación agitando suavemente los tubos. Se marcan tres tubos de la siguiente manera: anti-A. y se agrega una gota del suero tipificador según corresponda.5 ml de solución salina y se elimina perfectamente el sobrenadante. posteriormente se encontró que existe como seis antígenos a los cuales Fisher y Race designaron con letras C. el D es responsable de la condición Rh positivo.p. Si la prueba en el tubo anti-D es negativa se realiza el siguiente procedimiento. Este último se caracteriza por la ausencia de los antígenos A y B. Se agregan 4 gotas de la suspensión de eritrocitos a cada tubo y se agitan suavemente. AB y O. Alma López García . 2. OBJETIVO: Demostrar por medio de una reacción de aglutinación la presencia de los Ag eritrocitarios A. E.1 ml de EDTA al 1% por cada ml de sangre).

C. Alma López García . 5. Agitar suavemente en la placa oscilatoria.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS 10. Método en portaobjetos 1. 4. Buscar la presencia de aglutinación. Depositar 2 gotas de sangre en tres diferentes divisiones de un portaobjetos. 2. se centrífuga y se busca la aglutinación Interpretación: Si aglutina en el paso 6 es Rh positivo Si aglutina en el paso 10 es Du Si persiste la negatividad es Rh negativo. Mezclar los reactivos con un aplicador de madera diferente para cada gota. 3. Agregar de izquierda a derecha una gota del antisuero anti-A. 13 M. una gota de anti-B y una gota de anti-D respectivamente. Se agrega una gota del suero de Coombs y se agita suavemente.

Colocar en una gradilla una serie de 6 tubos rotulados del 1 al 6 y se agregar 0. Estos anticuerpos pertenecen a la clase IgM y son producidos en respuesta a una inmunización. El título del anticuerpos A o B del suero se reporta como el recíproco de la máxima dilución en la cual es posible observar eritrocitos aglutinados.p.1 ml del suero problema al tubo n° 1. durante 1 minuto. mezclar bien y transferir 0. Se determina realizando a partir del suero problema diluciones seriadas. Agregar 0. El título de anticuerpos en el suero problema se determina como el recíproco de la dilución máxima en la que se observa aglutinación.m. OBJETIVO: Establecer a través de diluciones seriadas el concepto de título aplicado en las reacciones serológicas MATERIAL Suspensión de eritrocitos de grupo A o B al 5 % en SSI Suero (plasma) de grupo O Pipetas graduadas de 1 y 5 ml Tubos de ensayo de 10 X 75 mm Solución salina isotónica Lancetas desechable Aplicadores de madera o palillos Sueros tipificadores anti-A anti-B DESARROLLO: 1. 2. Se dice que estos anticuerpos se producen de manera “natural” en base a que los inmunógenos son probablemente de origen bacteriano. Desprender el botón suavemente y buscar la presencia de aglutinación. Además de la aglutinación se puede observar hemólisis. 5. la presencia de anticuerpos fuertemente reactivos en el suero de los que carecen de los antígenos correspondientes. El “título” es una medida relativa de anticuerpos o antígenos en una reacción serológica.1 ml de solución salina cada uno de ellos.C. mezclan suavemente y centrifugar a 1000 r. 3. INTERPRETACIÓN 1. 4. dado que algunas bacterias presentan sustancias similares a los antígenos A o B.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 6 DETERMINACIÓN DEL TITULO DE ANTICUERPOS ABO DEL SUERO.1 ml al tubo n° 2 y así sucesivamente hasta el tubo n° 6 del cual se desechan 0. Agregar 4 gotas de la suspensión de eritrocitos a cada tubo y mezclar. Incubar a 37°C por 15 minutos. por lo que se debe comprobar la presencia de hemoglobina libre 14 M. Alma López García .1 ml. 2. INTRODUCCIÓN: El sistema de grupo sanguíneo ABO posee una característica única.

denominada prueba de compatibilidad. Se obtiene una muestra de sangre del donador y receptor y se procede igual a lo descrito en los incisos 1 y 2 de la práctica anterior. Baño serológico Centrífuga Solución de albúmina bovina al 10% DESARROLLO: 1. esta sangre no puede darse al receptor porque tiene anticuerpos capaces de reaccionar y destruir la sangre administrada. En la prueba cruzada menor. Se disponen 4 tubos etiquetados como sigue: PM/S =Prueba Mayor en solución salina pm/s =Prueba Menor en solución salina PM/A =Prueba Mayor en albúmina pm/a =Prueba Menor en albúmina 3. Si se produce hemaglutinación. Alma López García . Después del periodo de incubación los eritrocitos se lavan para eliminar los anticuerpos que no se han fijado a los eritrocitos. deben determinarse con exactitud los anfígenos de los grupos sanguíneos principales: el grupo ABO y el Rh del paciente. los eritrocitos del receptor son incubados con suero del donador y se observa si hay aglutinación.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 7 PRUEBAS CRUZADAS INTRODUCCIÓN: El objetivo de una transfusión es el proporcionar al paciente (receptor) el tipo preciso de sangre. Si se produce hemaglutinación. 2. Por supuesto este objetivo es difícil de lograr. La prueba cruzada mayor. En ambas pruebas una suspensión de los eritrocitos respectivos se mezclan con el suero y la mezcla se incuba a 37°C durante unos 30-60 minutos. se realiza mezclando el suero del receptor con los eritrocitos del donador. la sangre del donador no debe administrase. pero es posible aproximarse mucho si se realizan las pruebas correctas de hemaglutinación.C. Se agregan a cada tubo los siguientes reactivos en el orden indicado: PM/S. OBJETIVO: Realizar las pruebas de compatibilidad sanguínea denominadas “Pruebas Cruzadas” MATERIAL Y EQUIPO Muestras de sangre con y sin anticoagulante Pipetas graduadas de 1 ml y 5 ml 8 tubos de ensaye de 10 X 75 mm Solución salina isotónica. y se añade el reactivo de Coombs (anti-globulina). receptor 2 gotas del suero del receptor + 4 gotas de eritrocitos (al 5%) del 2 gotas del suero del donador + 4 gotas de eritrocitos (al 5%) del 15 M. En primer lugar. sobre la base de estos grupos se selecciona la unidad de sangre de grupo ABO y Rh compatible y se procede a efectuar las denominadas pruebas cruzadas mayor y menor. donador pm/s.

p. Si no la hay. Interpretación: Si hay aglutinación en cualquiera de los tubos. los tubos se centrifugan nuevamente y se descarta el sobrenadante. Alma López García . 16 M. Se mezclan bien y se incuban a 37°C por 30 minutos. Se lava el paquete celular de cada tubo con 1 ml de solución salina y se centrifuga nuevamente descartando el sobrenadante. Se centrifugan 1 minuto a 2000 r. Al paquete celular se le agrega un agota del suero de Coombs y se busca la presencia de hemaglutinación. será indicativo de que hay incompatibilidad entre el posible donador y el receptor (paciente). En caso de que no se presente la aglutinación. 5. 7.m. 2 gotas del suero del receptor + 4 gotas de albúmina + 1 gota de eritrocitos (al 5%) del donador pm/a. Repetir el lavado 2 veces. las sangres son compatibles. 6.C. 2 gotas del suero del donador + 4 gotas de albúmina + 1 gota de eritrocitos (al 5%) del receptor 4.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PM/A. y se busca la presencia de aglutinación.

6.2 mL Pipeta Pasteur Placa oscilatoria Equipo con antígenos: “O” de Salmonella typhi “H” de Salmonella typhi “H” de Salmonella enteritidis paratyphi A “H” de Salmonella enteritidis paratyphi B Brucella abortus Proteus OX-19 DESARROLLO: 1.02. En la aglutinación de los antígenos bacterianos con sus anticuerpos portaobjetos produce un agregado macroscópico. INTERPRETACIÓN: 17 M. 6.C. En una placa de vidrio perfectamente limpia se depositan 0. Alma López García . La identificación bacteriológica completa del agente patógeno es un proceso que lleva tiempo (3 o más días). Se toma otra placa y se depositan 0. mientras se intenta el reconocimiento del agente es posible la identificación serológica. MATERIAL Y EQUIPO 1.08.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 8 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE INFECCIÓNES BACTERIANAS (REACCIONES FEBRILES) INTRODUCCIÓN: La aglutinación de células bacterianas con antisueros es una de las pruebas serológicas mas antiguas de la inmunología práctica. 0. 3. y 0. respetando el orden establecido. las células bacterianas desconocidas pueden identificarse por medio de anticuerpos conocidos. Se mezclan las gotas con palillos diferentes y se agita suavemente en la placa de rotación durante dos minutos. Se agrega una gota del antígeno seleccionado. 0. Si aparece aglutinación con alguno de los antígenos. 2. OBJETIVO: Demostrar en el suero problema anticuerpos contra los antígenos bacterianos. La pruebas de aglutinación bacteriana tienen dos aplicaciones principales en el diagnóstico. se mezclan con un palillo y se revisa la presencia de aglutinación.04. Se agrega una gota de cada antígeno comenzando por la izquierda arriba. 2.08 ml del suero problema en cada una de las seis divisiones. o bien utilizando bacterias conocidas pueden identificarse los anticuerpos en el suero del paciente. Se inició como un método para el diagnóstico de las infecciones bacterianas y fue propuesta por Widal en 1896. Muestras de sueros problema Placa de vidrio marcada en 6 cuadros Pipetas graduadas de 1 y 0. 4. 0.005 ml del suero problema.01. 5. 3. 5. 4. continuar con el siguiente paso. 7. La lectura se hace observando la aglutinación macroscópica.

Alma López García . Los volúmenes de suero empleados corresponden respectivamente a diluciones 1/20.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS 1. 1/40.C. 3. 18 M. El titulo de anticuerpos del suero problema se reporta como el recíproco de la máxima dilución que muestra aglutinación. La mejor indicación de una infección activa es un aumento en el título de dos determinaciones sucesivas con una diferencia de 5-7 días concomitantes a la infección. 1/80. La mayoría de los títulos mayores de 160 son presuntivos de infección. 1/160 y 1/320. 2. 4.

Control Positivo RPR.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 9 DIAGNÓSTICO SEROLÓGICO DE INFECCIÓNES BACTERIANAS (Prueba Rápida de Reagina. 2. la cual aparece como un cúmulo negro. Lámpara DESARROLLO: Procedimiento cualitativo 1. Equipo con antígeno: Suspensión de Antígeno RPR conteniendo micropartículas de carbón activado. extienda la muestra para cubrir el total de la superficie del círculo. El antígeno utilizado en el equipo es una modificación del antígeno VDRL que contiene micropartículas de carbón para realzar la diferencia entre un resultado positivo y negativo. Repita el mismo procedimiento para cada muestra. un anticuerpo antilipídico encontrado en el suero o plasma de personas con sífilis y ocasionalmente en personas con infecciones agudas o crónicas en otras condiciones aparte de la sífilis. NO EXTIENDA! 19 M. Deseche la pipeta/agitador. Las muestras no reactivas se observan con un ligero color gris. Lleve a temperatura ambiente la suspensión del antígeno de RPR. 5. Sosténgalo en posición vertical y dispense varias gotas en la tapa del frasco para asegurarse de que el paso por la aguja es correcto.C. Al tiempo que oprime y mantiene presionado dicho extremo. MATERIAL Y EQUIPO 1. Tome la pipeta/agitador del extremo sellado. Sostenga en posición vertical la pipeta/agitador directamente sobre un círculo de la tarjeta de prueba y coloque una gota de muestra sobre esta área. los controles y las muestras. Utilizando el extremo plano de la pipeta/agitador. RPR) INTRODUCCIÓN: La prueba de RPR es una prueba de floculación no treponémica macroscópica que es utilizada para detectar y cuantificar reaginas. Alma López García . Agite el frasco de la suspensión del antígeno antes de utilizarlo. OBJETIVO: Demostrar en el suero problema anticuerpos anti-lipídicos de personas con sífilis. 3. Si una muestra contiene reaginas. Suelte para permitir que la pipeta aspire un poco de muestra. Control Negativo RPR. 4. Muestras de sueros problema 2. Tarjetas de Prueba (círculos de aproximadamente de 18 mm) 3. coloque la pipeta dentro de la muestra. No limpie la aguja. Rotador mecánico 6. 5. Coloque una gota de la suspensión del antígeno sobre cada muestra. ocurre la floculación con las partículas de carbón contenidas en la suspensión del antígeno.2 mL 4. Pipetas graduadas de 1 y 0.

Débil reactivo: Presencia de flóculos pequeños pero definidos. 5. INTERPRETACIÓN: Reactivo: Presencia de flóculos grandes o pequeños en el centro o la periferia del círculo de prueba. Alma López García . 3. Lea macroscópicamente bajo una lámpara de luz intensa. Leer el resultado macroscópicamente. 8. 2. Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agítela breve y suavemente. Colocar en una gradilla cuatro tubos 12 x 75 mm y numerarlos. Pasar 0. 18 sin bisel. El título del suero problema será: 1:8. INTERPRETACIÓN: La última dilución que contenga agregados macroscópicos indica el título de la muestra.5 mL de suero problema en el tubo No. Continuar esta operación hasta el tubo No. 4. Agite por 8 minutos a 100 rpm en un rotador mecánico. Agregar a cada uno de ellos 0. 11. 1 al tubo No. Añadir una gota de la suspensión del antígeno previamente resuspendido. El diagnóstico final debe estar en base a la correlación de los resultados de prueba junto con otros hallazgos clínicos. 7. Seleccione los sueros positivos obtenidos en la prueba cualitativa. uniforme pero sin flóculos visibles. Depositar 0. Se recomiendan pruebas serológicas confirmativas como el ensayo de microhemaglutinación para anticuerpos treponémicos (MHA-TP). Transcurrido este tiempo retire la tarjeta del rotador y agítela breve y suavemente. Agite por 8 minutos a 100 rpm en un rotador mecánico. 6.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS 6. Extienda sobre el total de la superficie de cada círculo donde se colocaron las diluciones. Los resultados positivos deben ser confirmados mediante pruebas de las muestras utilizando procedimientos cuantitativos. No reactivo: Apariencia lisa. 4. Depositar 0.5 mL de solución salina. 20 M. 2 y mezclar.05 mL de cada una de las diluciones sobre anillos diferentes de la placa de reacción. 10. exactamente sobre cada una de las gotas de las diluciones anteriores utilizando el frasco gotero al cual se le ha insertado la aguja No. Procedimiento cuantitativo 1.5 mL del tubo No. 1 y mezclar.C. 8. 9. 7. Ejemplo: Número de tubo 1 2 3 4 Dilución del suero 1:2 1:4 1:8 1:16 Resultado Positivo Positivo Positivo Negativo .

Las muestras que son noreactivas pero dudosas. 21 M.C. Las muestras de suero que son reactivas en pruebas cualitativas deben ser cuantificadas para establecer un tratamiento en el cual los cambios de título puedan ser determinados como un indicador de la respuesta al mismo. Alma López García . sin el soporte de una historia positiva o evidencia clínica. se deben de repetir y cuantificar ya que se pueden detectar reacciones poco frecuentes de prozona. Las muestras de plasma no deben ser utilizadas para pruebas cuantitativas.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS LIMITACIONES DE LA PRUEBA El diagnóstico de la sífilis no debe ser hecho basado en un resultado positivo único de una prueba no treponémica.

Placa rotatoria DESARROLLO: Factor Reumatoide (FR). 1/40. La prueba semicuantitativa utiliza diluciones del suero 1/20. OBJETIVO: Realizar la determinación del Factor Reumatoide y la Proteina C Reactiva por aglutinación en placa. Ya inactivado se diluye 1:20 con amortiguador de glicinacloruro de sodio colocando 0. No es específica de una enfermedad sino que es un indicador del proceso inflamatorio. Pipeta Pasteur 6. Alma López García .BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 10 FACTOR REUMATOIDE Y PROTEINA C REACTIVA INTRODUCCIÓN: Los factores reumatoides son anticuerpos dirigidos contra los determinantes antigénicos de la región Fc de las IgG. 2. Se busca la aglutinación macroscópica. sin embargo se encuentra aumentado en la mayoría de los pacientes con artritis reumatoide. Solución amortiguadora de glicina-cloruro de sodio pH 8. 1/320 y 1/640. Placa de vidrio oscuro marcada 3.2 9. Reactivo de latex-FR 7. Por el método de aglutinación en latex en placa. 22 M. 1/160. un conjunto de proteínas del suero cuya concentración aumenta de manera drástica durante el daño tisular. 1.Proteína C Reactiva. 1/40 con solución salina isotónica y se coloca una gota de la dilución en una placa de vidrio oscuro. Aplicadores de madera o palillos 5. utiliza una suspensión estabilizada de partículas de latex sensibilizadas con IgG humana. 1/80. El suero problema se diluye 1/5. El suero se inactiva previamente calentando en baño serológico a 56°C por 15 min o 60°C por 1 min. 3. La determinación del factor reumatoide se lleva a cabo con partículas de latex cubiertas de IgG.5 ml del amortiguador para una dilución 1/40 y así consecutivamente. 5.Proteína C Reactiva 8. Proteína C Reactiva (PCR). Se coloca una gota de la dilución en la placa de vidrio oscura y se añade una gota del reactivo latex-FR. En personas sanas. Se mezcla y se agita suavemente en la placa rotatoria durante dos minutos. 4.9 ml del amortiguador. Muestras de sueros 2. estos anticuerpos pueden hallarse en baja concentración. la infección o el estrés. Reactivo de latex. 1. las cuales se preparan con 0.5 ml de la dilución 1/20 en 0.C. La Proteína C Reactiva forma parte de las proteínas de fase aguda.1 ml de suero y 1.2 ml 4. Solución salina isotónica 10. Pipetas graduadas de 1 y 0. Utiliza una suspensión acuosa de partículas de latex recubiertas de anticuerpos específicos anti. MATERIAL Y EQUIPO 1. Por el método de aglutinación en latex en placa.

Se añade una gota del reactivo latex-PCR se mezcla bien y se agita suavemente en la placa rotatoria por 3 min. 3. 4. Se busca la aglutinación macroscópica. La prueba semicuantitativa utiliza diluciones del suero a partir de 1/80.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS 2. Alma López García . 23 M.C.

1 2 0.3 12 0.3 ml de la dilución 1:10 + 2.3 0.4 (+) (-) 0.5 0.3 7 0.5) Estreptolisina O Baño serológico Centrífuga Pipetas graduadas de 1 ml y 5 ml 15 tubos de ensaye de 10 X 75 mm DESARROLLO: 1. Alma López García . 0. 0.C. EXCEPTO al tubo control (-).2 ml del suero problema + 1. 0. Mezclar suavemente y añadir a cada tubo 0. en la cual si el suero del paciente contiene anticuerpos contra la enzima (antiestreptolisinas) neutralizarán su capacidad hemolítica y ocurrirá inhibición de la hemólisis. En particular.1 0. Este producto bacteriano es una de las muchas toxinas extracelulares y enzimas producidas por los estreptococos. Rotular los tubos de ensaye con números del 1 al 12 y dos más como control (+) y control (-).2 0.7 ml de solución amortiguadora c) 1:500 con 0.3 0.5 0. la estreptolisina O recibe este nombre debido a que sensible al oxígeno.8 ml de solución amortiguadora b) 1:100 con 0.2 4 1 5 12 50 10 12 16 25 333 50 62 83 125 0 5 6 0 0 5 3 0 0.6 ml de la dilución 1:100 + 2.4 0.25 ml de estreptolisina. 24 M.1 0.4 ml de solución amortiguadora 2. Preparar a partir del suero problema las siguientes diluciones iniciales: a) 1:10 con 0. En el laboratorio las ASO pueden determinarse por una reacción serológica de neutralización. destruyen la membrana de los eritrocitos ocasionando la hemólisis.3 5 8 --9 10 0. 4 3 --4 5 6 0. razón por la cual se le incorpora un reductor (el hidrosulfito de sodio) inmediatamente antes de usarla.1 0.2 11 0. Preparar diluciones secundarias añadiendo primero el volumen de solución amortiguadora y posteriormente el volumen del suero diluido según se indica a continuación: Tubos N° ml amortiguado r Dilución ml suero diluido Unidades Todd 1 0. solo posee actividad en estado reducido.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 11 DETERMINACIÓN DE ANTIESTREPTOLISINAS INTRODUCCIÓN: Las estreptolisinas son enzimas hemolíticas producidas por la mayoría de los estreptococos del grupo A.2 0.7 5 5 1:10 1:100 1:500 0.4 0. OBJETIVO: Determinar el titulo de anticuerpos contra la estreptolisina “O” en el suero problema MATERIAL Y EQUIPO Muestras de suero Suspensión de eritrocitos al 5% Amortiguador para ASO (fosfatos pH 6.1 250 0 --- --- 4. 3.

Alma López García . 8. Añadir a cada tubo 0. mezclar e incubar a 37°C por 30 min. Centrifugar los tubos a 2500 rpm por 2 min.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS 5.. 25 M. 6. Mezclar por agitación e incubar a 37°C por 15 min.C. Comprobar la presencia de hemólisis completa en el tubo control (+) y la ausencia de hemólisis en el tubo control (-) 9.25 ml de una suspensión de eritrocitos al 5%. Determinar el título de antiestreptolisinas (unidades Todd) como el de la máxima dilución que no presenta hemólisis. 7.

Se diluye un volumen de orina en dos volúmenes de solución salina. MATERIAL Orina del Paciente (10 ml) Solución salina isotónica (SSI) Equipo de diagnostico de hGC Pipetas serológicas de 1 ml DESARROLLO: 1. Si la muestra no contiene hGC. tales como los inmunoensayos enzimáticos (ELISA) y el radioinmunoanálisis (RIA). La presencia de hGC en el suero u orina se demuestra por un sistema indicador. se agregan 0. el anticuerpo es inactivado y los eritrocitos o partículas de látex no aglutinan. las pruebas ulteriores ratas hembra o ranas. 3.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 12 DETERMINACIÓN DE LA HORMONA GONADOTROPINA CORIONICA HUMANA INTRODUCCIÓN: Las pruebas de laboratorio para el diagnóstico del embarazo se basan en la determinación de la gonadotropina coriónica humana (hGC).0 ml de solución salina. Hasta los años 60. Se usa el filtrado o el liquido sobrenadante 2. Se colocan en el tubo apropiado 0. 4. Los ensayo de aglutinación denominados de “inhibición de la aglutinación” consisten de eritrocitos de conejo o partículas de látex recubiertas con hGC. 6. el anticuerpo permanece activo y se produce la aglutinación.C. Esta técnicas varían en su sensibilidad. OBJETIVO: Determinar la presencia de la hormona Gonadotropina Coriónica Humana en una muestra de orina. las pruebas de embarazo eran bioensayos en los cuales la presencia de la hGC en el suero o en la orina se demostraba por su efecto en animales.m. 5 minutos para precipitar el material insoluble. esto es las pruebas inmunológicas son. hormona producida por la placenta y que puede detectarse tanto en el suero como en la orina. Cuando se realiza la prueba. por ejemplo las pruebas con eritrocitos tienden a ser más sensibles que la que emplean partículas de látex. Las pruebas inmunológicas dependen del anticuerpo anti-hGC. Se coloca en una superficie libre de vibraciones o del calor. La excreción de hGC alcanza su máximo durante la duodécima a decimocuarta semana de gestación y a partir de entonces desciende de nivel. el suero u orina de la paciente se incuban con el anticuerpo. De preferencia en una gradilla con el espejo adecuado. Efectuar la lectura 2 horas después. más sensibles al detectar concentraciones menores de hGC. Las primeras pruebas utilizaban ratones y conejos. por ejemplo 0.5 ml de orina y 1. Además de la aglutinación. existen otras técnicas inmunológicas para la determinación de la hGC. Si existe hGC en la muestra.p.25 ml de antisuero anti-hGC. el cual requiere de equipo especial para su realización. 26 M.25 ml de la orina diluida y se agita suavemente. 5. Se agrega una gota de la suspensión de eritrocitos sensibilizados y se agita suavemente hasta lograr una suspensión homogénea. Se filtran unos 5 ml de orina o se centrifuga a 3000 r. Alma López García . Actualmente estas pruebas han sido sustituidas por pruebas inmunológicas.

4. INTERPRETACION Para la lectura se interpretan los esquemas celulares en el fondo del tubo de ensayo Prueba positiva = un botón claramente definido Prueba negativa = un tapiz difuso de células PRUEBA NEGATIVA PRUEBA POSITIVA 27 M. Los reactivos deben agregarse en el orden establecido.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS RECOMENDACIONES 1. No deben mezclarse los goteros o tocar con ellos los tubos de ensayo. Los residuos de orinas anteriores falsearan la prueba. Alma López García . Tubos diferentes a los apropiados distorsionan la lectura 3. 2.C.

Colocar en una gradilla una serie de 6 tubos rotulados del 1 al 6 y se agregar 0. MATERIAL Suero problema Suspensión de glóbulos rojos Rh + al 5% Pipetas graduadas de 1 y 5 ml Tubos de ensayo de 10 X 75 mm Solución salina isotónica Suero de Coombs 1. Alma López García . y la indirecta que demuestra la presencia de Ac en el suero.m. Incubar a 37°C por 30 minutos. Existen dos Pruebas de Coombs: la directa que demuestra Ac adheridos a eritrocitos. Desprender el botón suavemente y buscar la presencia de aglutinación.1 ml.1 ml de solución salina cada uno de ellos. Agregar 1 gota del Suero de Coombs. durante 1 minuto. En esta practica se empleará para poner de manifiesto los Ac anti-Rh en el suero de la madre en la incompatibilidad materno-fetal. 3.1 ml del suero problema al tubo n° 1. 28 M.1 ml al tubo n° 2 y así sucesivamente hasta el tubo n° 6 del cual se desechan 0. 2. mezclar bien y transferir 0. Éste funciona como anti-Ig que se enlaza con los Ac que hayan reaccionado con los determinantes antigénicos de los eritrocitos. Agregar 0. Añadir 2 gotas de la suspensión de eritrocitos a cada tubo y mezclar. Para ello se utiliza el llamado suero de Coombs obtenido en conejos inmunizados con Ig humana. 6.C. 5.p.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS PRACTICA 13 PRUEBA DE COOMBS La prueba de Coombs se emplea para poner de manifiesto los anticuerpos que no provocan una aglutinación visible. 4. mezclan suavemente y centrifugar a 1000 r.

INMUNOLOGIA 5ª EDICIÓN. ROITT. 2. BLACKWELL SCIENTIFIC PUBLICATIONS. INTERAMERICANA. INMUNOLOGÍA CELULAR Y MOLECULAR. 1999. Y TRAVERS PAUL. IVAN. LICHTMAN A. ROITT. Y LOPEZ LARREA CARLOS. Y POBER J.2000. BROSTOFF JONATHAN Y MALE DAVID. 5. IMMUNOLOGY 4ª EDICIÓN. 29 M. 8ª EDICIÓN. S. 4.BENÉMERITA UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE PUEBLA VICERRECTORÍA DE DOCENCIA DIRECCIÓN GENERAL DE EDUCACIÓN SUPERIOR FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS BIBLIOGRAFÍA 1. Alma López García . ESPAÑA 7. EDITORIAL MÉDICA PANAMERICANA. 2ª EDICIÓN. IVAN. CHARLES A. H. IVAN. 2ª EDICIÓN. 1996. ROITT. 1998. JANEWAY.C. EDICIONES HARCOURT. CURRENT BIOLOGY-GARLAND. ESSENTIAL IMMUNOLOGY. 1996. ROITT. IMMUNOBIOLOGY THE IMMUNE SYSTEM IN HEALTH AND DISEASE. 1998. PANAMERICANA.McGRAW-HILL. INMUNOLOGIA BIOLOGÍA Y PATOLOGÍA DEL SISTEMA INMUNE. A. 3. 1994. 9ª EDICIÓN. IVAN. IMUNOLOGIA FUNDAMENTOS. 3ª EDICIÓN. 6. MOSBY. ABBAS. K. BROSTOFF JONATHAN Y MALE DAVID. REGUEIRO JOSE R.

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