Está en la página 1de 26

SINTESIS Y EXPOSICION DE MOTIVOS DEL PROYECTO DE PRODUCCION BIOCONTROLADORES PARA DESARROLLO AGROECOLOGICO

PROPIETARIO: CONSEJO COMUNAL CAO CARBON BAJO LOCALIZACION: CAO CARBON MUN. OBISPO RAMOS DE LORA - ESTADO MERIDA. ASESORIA TECNICA: ING. JUAN QUIONES.

CAO CARBON - MERIDA ENERO 2012

PROPUESTA DEL PROYECTO DE LABORATORIO DE PRODUCCION DE BIOCONTROLADORES ARTESANALES


ANTECEDENTES:

A) Biofertilizantes microbianos en Venezuela: investigaciones en los 90


Laboratorio de Estudios Ambientales, Instituto de Zoologa Tropical, Facultad de Ciencias, Universidad Central de Venezuela,: En Venezuela, cerca del 70% de las tierras cultivables poseen limitaciones por acidez y baja fertilidad natural (Lpez-Hernndez 1997). En 1992, Casanova estim que aproximadamente 60 millones de hectreas del pas poseen problemas de acidez; en stas, el fsforo es el principal elemento limitante. La caracterizacin de estos suelos cidos ha puesto de manifiesto las variaciones en propiedades como la textura, grado de acidez y contenidos de magnesio (Mg), calcio (Ca) y aluminio (Al) en el complejo de intercambio, todo lo cual limita la generacin de prcticas agronmicas que tiendan a mejorar la potencialidad de estos suelos para uso agrcola y pecuario. Estos sistemas, a pesar de que sustentan una poblacin bovina cercana al 60% del rebao nacional (Torres 1996) muestran baja productividad, encontrndose que en algunos de ellos los valores de productividad oscilan entre 20-40 Kg/Ha/ao. Estos bajos ndices se asocian adems a los bajos contenidos de materia orgnica, Ca, fsforo (P), azufre (S) y potasio (K), junto con deficiencias de micronutrientes tales como cobre (Cu) y zinc (Zn) y toxicidad por hierro (Fe), Al y manganeso (Mn) de estos suelos. Todo lo anterior induce a una vegetacin natural de escaso potencial para la produccin animal, con baja productividad y bajo valor nutritivo, deficiente en protena, energa y minerales. La baja capacidad de sustentacin de estos sistemas ha contribuido a la expansin acelerada de reas destinadas a la produccin agrcola (Mireles y col. 1998), en las que se aplican fuertes dosis de fertili-zantes y manejos tradicionales como la alta mecanizacin de los cultivos, la preparacin del suelo en seco y el uso de varios pases de rastra y arado en suelos desprotegidos (sobrepastoreo). Todo ello ha contribuido al deterioro fsico, qumico y biolgico de los suelos, incrementando la predominancia de suelos de gran susceptibilidad para ser erosionados debido al alto contenido de arcillas (>30%), lo que junto con los factores climticos, tales como lluvias de gran intensidad y erraticidad, han ocasionado problemas severos de prdidas de suelo erosin. Adicionalmente, en la actualidad se siembran cultivares con altos requerimientos nutricionales, lo que ha generado un uso indiscriminado de insumos (fertilizantes, enmiendas y plaguicidas en general) para poder llevar el suelo a las exigencias de estos cultivos de poca adaptacin a suelos cidos. Esto ha ocasionado bajas considerables en los beneficios econmicos del agricultor debido a los altos costos de produccin, as como altos costos ambientales a causa del deterioro del recurso suelo, contaminacin de los cuerpos de agua, etc. Todos estos factores y los efectos negativos de un manejo inadecuado de los recursos hacen necesario establecer nuevas alternativas de manejo en suelos cidos a fin de frenar el deterioro acelerado del ambiente, enmendar las reas afectadas y evitar el deterioro de las zonas no afectadas. Ello permitir lograr a mediano plazo la formacin de un perfil cultural donde sea posible hacer agricultura y ganadera sostenible. La implementacin de biotecnologas amigables que mejoren la productividad de los cultivos sin perjudicar el ambiente es necesaria para la sostenibilidad de stos sistemas. Muchas de estas tecnologia involucran el uso de abonos verdes para incrementar la materia orgnica y enriquecer de elementos el suelo, la rotacin de cultivos, aplicacin de fertilizantes de lenta solubilidad como la roca fosfrica y la labranza mnima cero labranza, manejos que hoy en da se aplican buscando minimizar el impacto de la prctica agrcola sobre el suelo. Tambin puede considerarse como adecuado el uso de microorganismos del suelo, que tienen la capacidad de mejorar la nutricin de las plantas. Las micorrizas arbusculares (MA), Rhizobium y/o Bradyrhizobium y otros microorganismos rizosfricos de vida libre favorecen el desarrollo y crecimiento de las plantas y facilitan su establecimiento en el campo. Caracterizar estos microorganismos e implementar su uso como biofertilizantes constituye el principal inters de sta lnea de investigacin, que se desarrolla en el Laboratorio de Estudios Ambientales, de la Universidad Central de Venezuela. Estudiar el rol de las MA y su relacin con la nutricin fosforada, en ecosistemas naturales (nfasis en sabanas) y agroecosistemas y estudiar su apel en la conservacin del suelo y ciclaje del P en sistemas agrcolas sujetos a manejos conservacionistas y en sistemas naturales, es otro de nuestros objetivos fundamentales de investigacin. En paralelo, investigar la efectividad de los microorganismos con capacidad biofertilizante, autctonos de los suelos tropicales y la formulacin de biofertilizantes con dichos organismos nativos a ser utilizados en sistemas naturales, agroecosistemas y/o en recuperacin de suelos degradados, es otro de nuestros objetivos

primordiales. Contribuir al incremento de la productividad de los cultivos y las condiciones biolgicas del suelo mediante la inoculacin microbiana con organismos nativos, permitir minimizar el impacto que podra causar la introduccin de microorganismos con capacidades eficaces pero forneos al ambiente. En el Laboratorio de Estudios Ambientales, hemos ubicado sistemas agrcolas de la regin central del pas, manejados desde el punto de vista conservacionista para estudiar el impacto que dichos manejos tienen sobre la MA, su efecto sobre sus principales propgulos infectivos: nmero de esporas y especies de hongo MA, micelio de hongos glomales y en la estructura y biologa del suelo. Los esfuerzas han estado enfocados en: La identificacin de las especies nativas de hongos de MA. El aislamiento y caracterizacin de microorganismos rizosfricos como el Rhizobium y/o Bradyrhizobium especficos de leguminosas comestibles como Cajanum cajan y Phaseolus vulgaris, as como de plantas utilizadas como abonos verdes como la Centrosema macrocarpum. Su caracterizacin ha incluido la medicin de su capacidad de solubilizar fosfatos y las pruebas de re-inoculacin para probar su capacidad de nodulacin y efectividad en la fijacin de Nitrgeno. Ello con la finalidad de caracterizar estos simbiontes nativos, adaptados a suelos cidos para la ulterior preparacin de inoculantes. La caracterizado las bacterias solubilizadoras de fosfato autctonas de la rizsfera de plantas de suelos cidos, identificadas hasta nivel especie a travs de pruebas bioqumicas. Actualmente, nuestro laboratorio trabaja en ensayos de invernadero con las pruebas de efectividad de estos microorganismos inoculados en las plantas y su efecto sobre su desarrollo y nutricin, en la promocin de la germinacin de semillas y la morfologa radical. Hemos realizado pruebas piloto de inoculacin de hongos nativos de MA en ensayos de campo, contrastando su efectividad con tratamientos de fertilizacin qumica. En paralelo hemos aislamos y caracterizado los microorganismos que podran reintroducirse como biofertilizantes en los sistemas agrcolas de suelos cidos tropicales y utilizarse para prcticas de recuperacin de suelos erosionados y/o afectados por contaminacin ambiental. La caracterizacin de los microorganismos autctonos de esto sistemas perturbados por contaminacin devastacin tambin se abordar a fin de tener la informacin de los microorganismos idneos para ambientes con condiciones particulares. B) SITUACIN DE VENEZUELA LOS BIOFERTILIZANTES EN BASE A MICORRIZAS EN

Las micorrizas arbusculares (MA) son el tipo de micorrizas dominantes en Venezuela. El inventario preliminar realizado en los principales ecosistemas venezolanos indica que la mayora de las plantas estn colonizadas por hongos MA (Glomeromycota). Hasta el presente se ha estudiado la presencia de MA en el bosque de Tierra firme en Amazonas (Cceres 1989), el bosque inundable del ro Mapire (de la Rosa 1988), las sabanas de los Altos llanos centrales en Calabozo (Barreto 1996), el bosque nublado en la Cordillera de la Costa (Vieitez 1990), las sabanas de La Gran Sabana (Lovera y Cuenca 1996), las dunas arenosas en el Estado Falcn (Alarcn y Cuenca 2005) y los pramos de la Cordillera de los Andes (Montilla y col.. 2002) y en todos ellos la vegetacin dominante no slo est colonizada por hongos MA, sino que los niveles de colonizacin radical son en la mayora de los casos bastante altos (> 50%). Las ectomicorrizas tambin han sido reportadas en el pas, pero estn muy circunscritas a ciertas familias botnicas como las Nictaginaceae, Polygonaceae y Cesalpinaceae (Moyersoen 1993) y han sido estudiadas cuidadosamente solo en la Caatinga amaznica.. Los beneficios potenciales de las MA en Venezuela son enormes debido a la caracterstica de los suelos venezolanos de ser en su mayora cidos y con elevados tenores de aluminio intercambiable. El pH cido de los suelos es caracterstico de regiones con precipitaciones elevadas, las cuales causan la lixiviacin de los nutrientes del suelo. Como consecuencia de ello, a pH menores de 4,5 se produce la solubilizacin del Aluminio (principalmente como Al3+) el cual pasa a desplazar del complejo de intercambio del suelo a los cationes alcalinos. La presencia del aluminio soluble en el complejo de intercambio del suelo produce a su vez la inmovilizacin del P que precipita como fosfato de aluminio, hacindose por lo tanto inaccesible para las plantas. De all que muchos de los

suelos tropicales sean caractersticamente cidos y pobres en P. En tales suelos por lo tanto, las MA tienen un gran potencial de aplicacin, al promover la captacin de P gracias a la mayor exploracin del suelo que hacen las hifas del micelio externo de las MA. De hecho, utilizando suelos venezolanos en condiciones de invernadero, se han podido encontrar incrementos en la respuesta de crecimiento de las plantas equivalentes a 100 kg/ha de superfosfato triple, y en general un incremento en el crecimiento de las plantas muy elevado. Tmese por ejemplo el efecto sobre el crecimiento de Clusia multiflora (una planta silvestre) inoculada con MA en comparacin con el control no inoculado cuando la planta se cultiva en el suelo del bosque nublado donde crece naturalmente. Dicho suelo es muy pobre en P disponible y rico en Al cambiable

El efecto de la inoculacin con hongos MA promueve el crecimiento de la planta en ms de un 3000% en comparacin con el control. De hecho la planta no micorrizada prcticamente no crece (Cuenca y col. 2001) ( 1). Por otra parte, se ha comprobado que las plantas micorrizadas pueden hacer un uso ms eficiente de los fertilizantes orgnicos como por ejemplo el estircol vacuno, una alternativa que permite el uso de sustancias orgnicas como suplementos de nutrientes, los cuales son menos contaminantes y en general menos agresivos para el medio ambiente ( 2). A pesar de este gran potencial para el uso de MA que tiene Venezuela debido a que gran parte de su territorio posee suelos cidos, existe un gran atraso en cuanto al manejo agrcola de los microorganismos del suelo. Gran parte de la agricultura sigue en el pasado anclada en la filosofa de la dcada de los aos 70 de la revolucin verde, donde la mentalidad que impera es de que todo puede solucionarse con fertilizantes qumicos y con agroqumicos en general. Desgraciadamente los entes del Estado prcticamente no se ocupan de hacer extensin y tal servicio lo hacen de forma gratuita las compaas que venden agroqumicos y que no siempre cuentan con la tica necesaria para aconsejar prcticas conservacionistas que se desven notoriamente de sus propios intereses comerciales. As pues, hasta donde sabemos, la agricultura en Venezuela actualmente slo est empezando a considerar y de manera muy tmida dos prcticas agronmicas que tienden a ser menos perjudiciales para la vida del suelo como son la utilizacin de la labranza mnima y el uso de compost como fertilizante alternativo. Sin embargo, el uso excesivo de fertilizantes qumicos y suplementos qumicos de todo tipo para la agricultura estn causando problemas graves que estn llegando a afectar incluso a las poblaciones de algunas aldeas andinas que tienen entre sus habitantes sntomas de toxicidad por agroqumicos utilizados en forma indiscriminada, eutroficacin de cuerpos de agua clave para el pas como los que presentan de manera alarmante los lagos de Valencia y Maracaibo, y la cada en la productividad por ejemplo de los suelos del Valle de Qubor donde la incidencia de patgenos ha convertido gran parte de las tierras originalmente dedicadas al cultivo de la cebolla, en verdaderos desiertos. Algunos pequeos agricultores sin embargo, han empezado a sentir curiosidad acerca de las MA debido a que los mercados internacionales estn empezando a premiar los productos que tienen la certificacin de ser orgnicos. Ha habido cierto inters por eso, pero el inters es inconstante y no tiene ningn apoyo del Estado quien debera ser su principal propulsor. En el Instituto de Sanidad Vegetal (SASA) hay una completa ignorancia del trmino micorriza y lo que ello implica, y de ninguna manera estn preparados para recibir los inoculantes de MA provenientes de otros pases que muy pronto van a empezar a invadir nuestras fronteras.

Hasta donde sabemos, en Venezuela hubo un intento de producir inoculantes comerciales de MA por parte de un convenio que estableci la Universidad de Los Andes con el Instituto de Ecologa y Sistemtica de La Habana, Cuba, en los aos 94-95. Segn reportan los autores de tal experiencia, la aplicacin del MicoFert, como se llama el producto que se pretenda introducir, produce un incremento general del 63% en los pesos secos de biomasa o rendimiento de cultivos agrcolas. A pesar de tan alentadores resultados (Tabla 2), el proyecto fue abandonado por desinters de la parte venezolana, al menos segn lo seala la parte cubana. Sabemos que biofertilizantes de MA provenientes de Colombia se usan en algunas regiones del occidente del pas pero no existen reportes de su calidad, ni de los resultados que se han obtenido de su uso. La realidad es que para la gran mayora de los productores las micorrizas son un tema totalmente desconocido.

Produccin de Biofertilizantes La produccin de inoculantes comerciales de hongos de MA (HMA) en Venezuela se encuentra en sus etapas iniciales . El Instituto Venezolano de Investigaciones Cientficas ha iniciado con el apoyo del Banco Interamericano de Desarrollo y el Estado venezolano a travs del Fondo Nacional para la Ciencia y la Tecnologa (Fonacit), un proyecto que contempla la produccin de inoculantes comerciales de MA para utilizarlo especialmente en la agricultura de suelos cidos. En dicho proyecto se ha desarrollado una tecnologa que permite sustituir el suelo por un sustrato ms ligero de origen local, donde se cultivan las plantas hospederas para las MA y se reproducen las esporas, raicillas colonizadas y micelio externo de los HMA que al cabo de 4 meses pueden ser utilizados como inoculantes. Hasta el momento en el IVIC se esta en capacidad de producir inoculantes de 7 especies de HMA a saber: Glomus manihotis, Scutellospora fulgida, Scutellospora heterogama,Acaulospora lacunosa, Glomus mosseae, Gigaspora ramisporophora y Entrophospora colombiana. Las evaluaciones preliminares realizadas en el campo arrojan incrementos en la produccin que son alentadores ( 3). Incluso en suelos muy ricos de Venezuela, como los del sur del Lago de Maracaibo, donde no se esperara una respuesta a la biofertilizacin con MA se han encontrado resultados positivos. Resultados an preliminares sealan sin lugar a dudas un incremento de la produccin de la lechuga cultivada en los Altos Mirandinos. Utilizando las prcticas agronmicas aplicadas normalmente por los agricultores de la zona quienes aplican fertilizantes y adems cortan las races y las hojas de las plntulas en el momento de transplantarlas del semillero al campo. Es decir, en competencia con las MA nativas, la MA introducida toler perfectamente la adicin del fertilizante pues se trata de suelos pobres en nutrientes y cidos y fue capaz de incrementar la produccin en ms de un 200%. Algunos resultados de la utilizacin en el campo de los biofertilizantes producidos en el IVIC se muestran en la Tabla 2. Se observa que en cuanto a la yuca sembrada en Amazonas, la respuesta fue tambin notable, y en este caso los resultados s se tienen en relacin a la produccin de tubrculos. Dicho resultado indica claramente que en suelos tan oligotrficos como los del Amazonas venezolano, la inoculacin de la yuca es una prctica que se justifica plenamente. En suelos un

poco mejores pero tambin cidos y pobres en P, como los de la mesa de Guanipa en el Estado Anzotegui, la biofertilizacin con HMA permite disminuir la dosis de fertilizantes a la mitad, lo cual significa una ganancia no solo para el productor sino para el ambiente, que en este caso recibira la mitad de la dosis de los fertilizantes qumicos, potenciales contaminantes de las aguas. Y finalmente, los resultados en pltano indican un efecto de la biofertilizacin con Scutellospora heterogama en la produccin de hojas, la cual segn los productores est directamente asociada con el llenado del fruto. As pues, an en los suelos ms ricos en nutrientes de Venezuela, como son los del Sur del lago de Maracaibo, las MA tienen un elevado potencial para ser aplicadas en la consecucin de una agricultura sustentable. En fin, la utilizacin de inoculantes de micorrizas en las condiciones reales del campo agrcola venezolano, es una posibilidad cierta, pero se requiere el apoyo de los ministerios competentes en esa materia y una fuerte campaa educativa a todos los niveles, la cual lamentablemente est muy lejos de ser implementada en los actuales momentos, donde los enormes ingresos por parte del petrleo, estn favoreciendo an ms la aplicacin indiscriminada de insumos qumicos. En suma, la biotecnologa la tenemos, pero se necesita la voluntad poltica para efectuar el cambio hacia una agricultura verdaderamente agroecolgica, moderna y cientfica.

PROCEDIMIENTOS: Caractersticas macroculturales y microculturales de algunos hongos ampliamente usados como agentes de biocontrol En general estos hongos estos hongos no forman cuerpos fructferos, tienen alta produccin de esporas, son relativamente fciles de cultivar fuera del hospedante. Beauveria bassiana (Balsamo) Vuillemin: colonias en PDA o MEA con aspecto aterciopelado a polvoriento, raras veces formando sinemas; blancas en los bordes que se vuelven amarillo-plidas, algunas veces rojizas, incoloras al reverso, amarillas o rojizas. Conidioforos abundantes, que se levantan a partir de las hifas vegetativas sosteniendo grupos de clulas conidigenas que se pueden ramificar para originar ms clulas conidigenas, globosas a forma de botella, con un raquis bien desarrollado Conidios hialinos, lisos, globosos a ligeramente elipsoidales, Clamidosporas ausentes. Difiere de B. brongniartii en que tiene las clulas conidigenas ms agrupadas y los conidios globosos ( 1). Beauveria brongniartii (Saccardo) Petch: colonias en PDA o MEA blancas, aspecto aterciopelado a polvoriento, con el tiempo se vuelven amarillo-plido o rosado plido, raramente rojo o prpura. Al reverso incoloras, amarillas o rosadas. Clulas conidiognicas solitarias o en pequeos grupos, con filides subglobosas, y un raquis largo; Conidios hialinos, lisos, elipsoidales. Clamidosporas ausentes ( 2). Estas dos especies causan las muscardinas blancas. Metarhizium anisopliae (Metschnikoff) Sorokin. Colonias en PDA con un margen micelial blanco. Conidioforos con aspecto de "terrones" que se colorean con el desarrollo de las esporas. El color vara desde olivceo hasta amarillo-verde o verde yerba oscuro. Pero en raros casos rosados o vinceos. Esporas formadas sobre hifas columnares, a veces discretos esporodoquios, como costras. Al reverso incoloras o color miel. Conidiforos abundantes, usualmente con 2-3 ramificaciones por nodo. Filides cilndricas o clavadas que se adelgazan abruptamente hacia el pice. Conidios en cadena formados en los pices de las filides, estrechos, cilndricos, delgados y truncados en ambos extremos, hialinos a olivceos o verdes, lisos, aseptados. Las tcnicas de biologa molecular ha logrado una separacin ms all de la clsicas variedades Metarhizium anisopliae var. anisopliae y Metarhizium anisopliae var. major. Es el agente causal de las muscardinas verdes ( 3). Metarhizium flavoviride (Gams) Rozsypal. Difiere de M. anisopliae fundamentalmente por el color de la colonia (ms tonalidades verde plidas) y forma de los conidios (ms ampliamente elipsoidales) ( 4). Verticillium lecanii (Zimmermann) Viegas. Colonias blancas o cremas, algodonosas delicadas, incoloras al reverso, amarillo plido o amarillo oscuro. Clulas conidigenas en parejas o grupos de 3 4, en conidiforos con pobre desarrollo. Son delicadas, de tallas muy variables dependiendo de la cepa y la edad del cultivo. Conidios no en cadenas, agregados formando cabezuelas en las puntas de las filides. Conidios elipsoidales a cilndricos con extremos redondeados. Clamidosporas ausentes. Parasita todos los estadios de desarrollo de insectos y arcnidos. Hiperparasita hongos del tipo de las royas y hongos superiores. Se puede encontrar en restos de cosecha, suelo, etc. No crece a 33 grados C. En el 2001 los Drs. Walter Gams (Holanda) y Rasoul Zare (Irn) conjuntamente y basados en estudios moleculares forman 3 especies a partir de Verticillium lecanii. Estas son: Lecanicillium lecanii (Zimmerm.) Zare & Gams , L. muscarium (Petch) Zare & Gams y L. longisporum ((Petch) Zare & Gams). Las diferencias fundamentales entre las especies estn dadas por rango de hospedantes y la talla de los conidios y su uniformidad. En Lecanicillium lecanii los conidios son ligeramente elipsoidales, muy homogneos en forma y talla y parasitan insectos tropicales solamente, en L. muscarium

son ms largos y delgados y en L. longisporum son elipsoidales a ovales, raramente con un septo. Nomuraea rileyi (Farlow) Samson. Colonias de lento crecimiento en PDA o Agar malta, afieltradas, con conidioforos muy complejos que se ramifican a intervalos regulares que se levantan erectos y muy densamente agrupados que dan lugar a conidios verde muy plido que forman a veces costras, que con la edad cambian a tonalidades hasta verde malaquita. Hifas vegetativas lisas, hialinas. Los conidioforos son cortos y anchos, casi de la misma longitud el ancho y el largo. Filides cortas y redondas, cilndricas a globosas con una base muy ancha. Conidios aseptados, catenulados, elpticos a cilndricos. Parasitan larvas y pupas de lepidpteros y colepteros ( 5). Paecilomyces fumosoroseus (Wize) Brown & Smith- Colonias en MEA o PDA crecen moderadamente rpido, muchas veces la colonia basalmente tiene aspecto de fieltro o puede tener un aspecto polvoriento, granular. Producen coremios definidos que son polvorientos cuando el hongo es aislado por primera vez. Al principio blancas, que pueden permanecer as o cambiar con el tiempo a tonalidades rosadas y grisceas. Algunas veces se produce un micelio areo anaranjado-amarillo, velloso. Al reverso son incoloras o amarillo plido o anaranjado plido. No tiene olor ni exuda. Sobre insectos produce conidiforos simples mononematosos y sinemas poco "apretados". Hifas vegetativas hialinas, de paredes lisas, Las estructuras conidiales tienden a ser complejas con conidioforos erectos que se originan de hifas areas. Los conidioforos se producen solo o en grupos, de paredes lisas, hialinas, con verticilos ramificados con grupos de 3-6 filides. Algunas veces el patrn verticilado se rompe y sobre el conidioforo se producen ramas sencillas. Filides con una base ancha que se adelgaza a un cuello delgado y largo. Conidios cilndricos a fusiformes, con extremos redondeados, lisos, hialinos, en cadenas ( 6). Paecilomyces lilacinus Samson. Colonias en MEA o PDA con tonalidades violceas; al reverso incoloro o vinceo. Conidioforos erectos, mayormente solitarios del micelio horizontal, raramente sinematoso, amarillo a prpura, paredes rugosas con filides agrupadas densamente. Conidios fusiformes a elipsoidales, paredes lisas a suavemente. Puede producir conidioforos mononematosos o sinemas en insectos. Es un hongo tpico de suelo. Tiene alguna actividad antagonista contra bacterias y hongos. Producen el antibitico peptdico leucinostatina, efectivo contra un amplio rango de hongos y bacterias Gram positivas y tambin el lilacinin. Pochonia chlamidosporia (Goddard) Zare & Gams var. catenulata (=Verticillium chlamidosporium). Colonias blancas al inicio, color blanco que con el tiempo pasan a crema, polvorientas por la aparicin de las dictioclamidosporas que se engruesan con la edad (estructura de sobrevivencia pedunculada generalmente, hialinas, pared gruesa, multicelulares). Reverso crema, amarillo plido o naranja. Filides que se levantan de hifas postradas, hasta 5 por nodo. Conidios producidos en cadenas, en cabezuelas, globosos a subglobosos, base ligeramente apiculado. No crece a 33 grados C. Trichoderma harzianum Rifai. Colonias de rpido crecimiento en PDA, 7-9 cm dimetro despus de 3 das, micelio areo flucoso, blanco a ligeramente gris o raramente amarillo, conidiacin que cubre con frecuencia toda la superficie de la placa que produce pstulas aplanadas hasta de 8 mm en dimetro, concntricas o cerca de las mrgenes de la placa, polvorienta o granular y de varios tonos verdes incluso en el mismo cultivo, con frecuencia rodeado por micelio blanco estril. Al reverso colonias incoloras o amarillas, pardas, ocrceas o en algunos aislados ferruginosas. Pocos aislados producen abundantes cristales amarillos. Exudados incoloros a mbar o amarillo verdoso. Hifas hialinas. Clamidosporas abundantes, solitarias, subhialinas a amarillo plido o carmelitoso con la edad, subglobosas a elipsoidales o piriformes. Conidioforos hialinos, paredes lisas, rectos o doblados, muy ramificados, primeras ramas nacen formando ngulos rectos o dobladas un poco hacia el pice, en grupos de 2 o 3 que se vuelven ms largos hacia la base, complejos con ramas secundarias en grupos de 2-4, la estructura completa es ms o menos piramidal con un pice estril cuando est creciendo an el hongo. La conidiacin comienza por la base de este patrn de conidioforo y las ramas jvenes son estriles. Filides ampuliformes a subglobosas; muy

constreidas en la base, muy hinchadas en el medio y abruptamente estrechas en el pice en nmero hasta de 6. Conidios subglobosos a ovoides o ligeramente elipsoidales con pice ampliamente redondeado, pared lisa o ligeramente rugosa, subhialinos a verde plido ( 7). Modo de accin Los hongos entomopatgenos actan principalmente por contacto, cuando el hongo es capaz de penetrar el insecto e invadirlo, provocndole la muerte por micosis. La mayora de los autores aborda ampliamente el ciclo infectivo de estos hongos dividindolo en dos fases: una parastica y otra saproftica. La primera incluye la adhesin del conidio a la cutcula del insecto, la germinacin (estimulada por los lpidos cuticulares del hospedante en calidad y proporcin), penetracin (complejos multienzimticos con enzimas secretadas como lipasas, quitinasas y proteasas activadas secuencialmente) y multiplicacin del hongo (por blastosporas fundamentalmente) con la consiguiente produccin o no de toxinas, en dependencia de la cepa presente, que finaliza con la muerte del insecto. La segunda fase se caracteriza por una colonizacin total con melanizacin y momificacin del individuo, emergencia del hongo y su esporulacin, cuando la humedad relativa microambiental sea alta. Estos conidios pueden diseminarse mediante el viento, el agua, otros organismos y el hombre, para as iniciar un nuevo ciclo infectivo. En el caso de los hongos antagonistas para el control de plagas (patgenos de plantas) se encuentran, dentro de los ms empleados, especies del gnero Trichoderma. Este hongo tiene la capacidad de parasitar a otros hongos lo que se conoce como hiperparasitismo o micoparasitismo, hacia diferentes patgenos de plantas. Su modo de accin es complejo donde estn incluidos el quimiotaxismo, la antibiosis y el parasitismo. La interaccin inicial entre el parsito y el hospedero parece ser del tipo quimiotrfico. La hifa del micoparsito crece directamente hacia el hospedero en respuesta a las lectinas secretadas por este, las que se unen a los residuos de galactosa en la pared celular de Trichoderma siendo la seal que permite dirigir el crecimiento hacia esa zona. Trichoderma secreta enzimas que actan como un complejo con accin sinrgica sobre el patgeno debilitando la pared y permitiendo la difusin de los antibiticos hacia este. Despus del contacto fsico microscpicamente se observa la presencia de haustorios, enrollamiento de la hifa del biocontrol sobre la del patgeno, vacuolizacin, formacin de grnulos, desintegracin del citoplasma y lisis celular. Este gnero actualmente se estudia a profundidad por la respuesta sistmica inducida al ataque de otros patgenos y por ser fuente de genes que codifican para protenas (enzimas como glucanasas, proteasas)) y metabolitos (fitohormonas) con accin estimuladora y defensiva en la planta, los que se estn usando en protocolos de transgnesis en especies de plantas de importancia econmica con resultados muy alentadores. Caracterizacin de aislados fngicos para el biocontrol El mero hecho de identificar al microorganismo taxonmicamente hasta especie implica datos que tienen importancia en la caracterizacin del aislado. Sus caractersticas morfomtricas y culturales son importantes y bsicos para estudios posteriores y ms reproducibles. Estos deben incluir estudios bioqumicos (actividad exoenzimtica, perfiles isoenzimticos especficos como patrn de esterasas, lipasas, fosfatasa alcalina. etc.). Los anlisis isoenzimticos pueden tener como desventaja que los perfiles estudiados no sean suficientemente diferentes y/o las isoenzimas expresadas no aparezcan en un aislado determinado por cuestiones fisiolgicas. Los estudios ms altamente reproducibles son los que se realizan a nivel de ADN (moleculares). Actualmente para que un aislado sea reconocido como apropiadamente caracterizado requiere de al menos un mtodo molecular que lo identifique como tal y en la fase de registro de un producto internacionalmente esta condicin es exigida en pases lderes en biocontrol. Los estudios moleculares ms usados en hongos para la caracterizacin son los RFLP (Restriction Fragment Lenght Polymorphism) en los cuales se generan cortes por enzimas de restriccin en el

ADN dando lugar a fragmentos de diversas tallas, los que son puestos en contacto con sondas especficas marcadas con un cromgeno o con un istopo radiactivo, que pueden o no acoplarse al o los fragmentos producidos por complementariedad de bases (hibridizacin) y luego de una electroforesis en gel de agarosa se genera un patrn de bandas en dependencia de la sonda de hibridizacin, el aislado y la enzima empleada en el corte del ADN, lo cual logra discriminar aislados aparentemente iguales como diferentes cepas. Otro anlisis molecular mucho ms barato pero menos reproducible entre laboratorio son los anlisis genticos del tipo PCR-RAPD (Polymerase Chain Reaction- Random Amplified Polymorphic DNA) los que consisten en un PCR clsico donde los "primers" (por ejemplo cebadores universales) suministrados para la amplificacin son conocidos como buenos para detectar variabilidad entre poblaciones (razas, cepas, etc.). En el mtodo se necesita ADN aislado del hongo mediante un proceso de purificacin clsico (el mtodo de extraccin debe ser suave para no desnaturalizar el ADN). Este ADN se lleva junto al "primer" a varios ciclos de amplificacin donde se tiene una ADN polimerasa resistente al calor y los nucletidos para la polimerizacin adems de cofactores y soluciones buffer. Se realiza una electroforesis y los fragmentos de ADN amplificados se visualizan en el gel. Los patrones de bandas para cada "primer" probado pueden ser iguales o diferentes. Se pueden probar tantos "primers" como se dispongan. La mayor desventaja del PCR-RAPD es que no tiene muy buena reproducibilidad entre laboratorios aunque s tiene el mismo poder de resolucin entre laboratorios cuando se trabaja con las mismas poblaciones, o sea, los patrones de bandas son los que pueden cambiar. Mtodos de aislamiento Los mtodos para aislamiento que se usan ms ampliamente son mtodos clsicos. Para hongos antagonistas se usan races jvenes, por ejemplo, de plantas libre de sntomas tomadas de una zona donde pueda existir algn sntoma de una enfermedad fngica. Las races se lavan abundantemente y se desinfectan muy ligeramente, se trituran y se siembra en medios generales para hongos con antibacterianos aadidos. Se trata de obtener colonias nicas y por observacin al estereoscopio y microscopio ptico se seleccionan las posibles especies controladoras. Tambin se procesa suelo de estas zonas donde se encuentran sorpresivamente plantas sanas o de zonas donde no se observan sntomas de enfermedades producidas por hongos lo cual resulte aparentemente inexplicable. Se realizan diluciones decimales en placa (siembra para obtener unidades formadoras de colonia). Se incuban entre 23-28 grados C y se evalan a partir de las 48 horas). Estos mtodos precisan de experiencia ( 8). Para el caso de los entomopatgenos se traen del campo insectos micosados o sospechosos de micosis (insectos melanizados y/o momificados). Se realizan siembras en medios para hongos (PDA, SDA) con antibiticos y se incuban a 23-27 grados C revisando el material luego de 72 horas y hasta 14 das posterior a las siembras. Igualmente se procesan ootecas o quistes de nemtodos. En todos los casos se desinfectan suavemente en etanol 70% o hipoclorito sdico por 1 minuto al 0.5% y/o alcohol 70%. Las muestras de suelo tambin son interesantes para aislar entomo-patgenos con insectos trampeadores , o sea, especies altamente susceptibles a los hongos entomopatgenos como es el caso de larvas de lepidpteros. Ejemplo de ello tenemos en Cuba el aislamiento de hongos entomopatgenos con larvas de Galleria mellonella o Corcyra cephalonica procedentes de cras certificadas de laboratorio, los que rutinariamente se usan para enriquecer las colecciones de cultivos...( 9). Es importante destacar que los estudios no deben realizarse en zonas donde se hayan aplicado o se apliquen microorganismos de las especies que estamos tratando de aislar y siempre debe obtenerse un aislado monosprico para lograr mayor homogeneidad gentica.

Mtodos de conservacin El objetivo de la conservacin es mantener el aislado con las caractersticas genticas y fenotpicas originales. Siempre debe conservarse por 2 mtodos diferentes y uno de ellos a largo plazo. Los protocolos de conservacin son muy regulares y se pueden obtener fcilmente desde libros clsicos de Microbiologa. A largo plazo tenemos la liofilizacin que se basa en la desecacin extrema al vaco del cultivo del hongo por congelacin profunda de forma que el agua pase rpidamente de slido al estado gaseoso. Tambin se cuenta con conservacin en Nitrgeno lquido pero este mtodo es engorroso pues precisa de tanques metlicos para el N que alcanzar 196 grados C bajo cero. Siempre en los mtodos de congelacin se usan agentes crioprotectores (DMSO, leche descremada, glicerol, etc). Mtodos como conservacin en suelo previamente esterilizado y luego inoculado y desecado son tiles as como la conservacin en slica gel no indicadora (sin cobre) inoculada previamente con una suspensin del cultivo en leche descremada 5% y luego desecada. Ambos son baratos y de fcil ejecucin. Tambin el aceite mineral sobre cultivos previamente esporulados es un mtodo muy efectivo a mediano plazo. El mtodo ms usado a corto plazo es el de cultivos sobre cuas de medio agarizado nutritivo. En Cuba se han optimizado medios para producir masivamente las esporas (conidios, clamidosporas, etc) en alta concentracin en el cultivo segn los requerimientos de cada aislado, el que luego ser llevado a uno de los mtodos explicados anteriormente para su conservacin. 1.- DESCRIPCIN -(baja tecnologa)-

DEL

PROCESO

PRODUCTIVO

ARTESANAL

CULTIVO INICIAL EN VIALES CON MEDIO AGARIZADO-INOCULACION E INCUBACION DE MEDIOSOLIDO O LIQUIDO(PREINOCULO)............................... .........INOCULACION E INCUBACION DE SUSTRATO.............. SECADO ...... ... ....... COSECHA.............. FORMULACION................. ENVASADO Figura 1. Diagrama de general del proceso de produccin de hongos por va artesanal. En los sistemas artesanales para la produccin de hongos se establecen de manera general los pasos enunciados anteriormente. En toda produccin de bioplaguicidas microbianos se parte de un aislado con caractersticas deseadas como agente de biocontrol, el cual es conservado previamente y subcultivado durante el escalado. Los preinculos, pueden desarrollarse sobre sustratos slidos (grano arroz, grano trigo, cscara de trigo, cscara de arroz, harina de maz, etc ) incluyendo los medios agarizados de cultivo o por cultivos lquido esttico o agitado (compuestos por combinaciones de materias primas carbonadas y nitrogenadas como melaza de caa de azcar, licor de maz, almidn de maz, sacarosa, extracto de levadura torula, extracto de levadura cervecera, etc.) siendo el objetivo fundamental la obtencin de una biomasa homognea. La relacin carbono (C): Nitrgeno (N); es esencial y de este balance en lo fundamental depender el que se logre la formacin de los propgulos deseados. En los hongos, se necesita que la fuente C est en exceso en el medio y el contenido de N sea el factor limitante del crecimiento, lo que desencadena el proceso esporulativo. Los inculos se preparan a partir de subcultivos de preinculos a una concentracin final en el sustrato inoculado de 10(5) - 10(7) propgulos/gr. La eleccin de los sustratos sobre los que se realizar la inoculacin, previa esterilizacin, depender de la disponibilidad local y costo de estos as como de las caractersticas del aislado a reproducir. Se han usado cereales como agentes nutritivos (arroz, trigo, cscara de trigo, cscara de arroz, maz

etc.) y como agentes inertes de soporte la vermiculita, grnulos de minerales arcillosos, tela, etc. Con el uso de sustratos inertes las soluciones nutritivas en los que estos se embeben pueden ser balanceados cuidadosamente para asegurar una casi completa utilizacin de los nutrientes y ac despliegan un papel clave tambin el balance C:N. El sustrato puede ser humedecido previa esterilizacin o previa inoculacin dependiendo del tipo de materia prima o combinacin de estas y ajustes realizados. Un exceso de humedad provocara baja disponibilidad de oxgeno y por ende pobre desarrollo del microorganismo. Adems compactara el substrato impidiendo una colonizacin total de su superficie. Por otro lado, una baja humedad podra inhibir el desarrollo del microorganismo al no poner la suficiente cantidad de nutrientes en solucin para ser usado por este adems de la poca resistencia a la desecacin que tienen los hongos en el periodo activo de crecimiento micelial. Durante la incubacin se debe regular el rgimen luz-oscuridad. La luz es estimulante en determinadas especies y aislados por lo que este parmetro es ajustable solamente a travs de la experimentacin. Cuando se obtiene la biomasa conidial ptima sobre toda la superficie del sustrato se pasa al proceso de secado para que los conidios permanezcan viables en almacenamiento por mayor tiempo. Este proceso se optimiza con deshumidificadores o aires acondicionados o acelerando la ventilacin con ventiladores lo que depende de las condiciones locales. Posterior al secado y previo al paso final de envasado en el flujo de produccin se realiza la cosecha. Es en este momento que comienza la etapa de formulacin donde se prepara una combinacin de ingredientes de forma que el principio activo (esporas) se mantenga estable, efectivo y fcil de aplicar. Durante todo el proceso la regulacin de la temperatura ambiental es esencial la que debe ser lo ms prxima posible a la temperatura ptima de desarrollo del microorganismo. 2.- Control de calidad en la produccin de microorganismos fngicos para el control biolgico. Principales ensayos. 2.1. Panormica general Un requisito esencial para la produccin de cualquier agente de control microbiano es un sistema de control de la calidad efectivo. La calidad se define como el conjunto de propiedades y caractersticas de un producto o servicio que lo hacen apto para satisfacer las necesidades a las cuales va dirigida. Las normas y procedimientos para el control de calidad de los productos y procesos conjuntamente con los registros, constituyen la garanta para la validacin de las producciones de bioplaguicidas. Un producto con especificaciones bien definidas y con los consiguientes procedimientos de control de calidad asegura su buen funcionamiento y su seguridad, promueve la estandarizacin de los costos de produccin y garantiza su estabilidad en el mercado lo que conlleva a la ganancia de confianza en el consumidor. En el caso de los productos a base de hongos su funcionamiento no confiable por falta de calidad ha limitado su xito en pases en desarrollo donde estos requerimientos son mnimos o no existen. Una produccin con un sistema de calidad establecido tiene un control estricto sobre la salida de su producto al poder analizar la calidad en cada punto crtico implicado en la elaboracin de este. En 1992, en la Reunin del Grupo Activo de Control de Calidad de la Organizacin Internacional de Control Biolgico, se estableci llevar un control de las producciones que implique el seguimiento de la ejecucin de todas las operaciones, procedimientos, equipos y condiciones ambientales de estas con el objetivo de mantener el rendimiento. Tambin se plante controlar el proceso de forma que se le d seguimiento a la calidad del producto no terminado, incluido la deteccin de contaminantes, adems de un sistema que controle la calidad

del producto final. Esto es muy significativo para el caso de los agentes microbianos fngicos de control ya que para que sean efectivos precisan de que culminen exitosamente un complejo proceso de infeccin. Comparados con los agroqumicos, los sistemas de calidad para la produccin de bioplaguicidas microbianos deben ser ms exhaustivos y especializados. An no existen protocolos estandarizados internacionalmente lo que ha trado como consecuencia que los productores o pases desarrollen sus propios procedimientos de control de calidad. 2.2. Puntos crticos de controles de calidad El primer punto donde se controla la calidad en cualquier sistema de produccin es en el subcultivo de la cepa del hongo del cual se parte. Esto incluye los subcultivos de trabajo y los de conservacin. En ambos casos se tienen que establecer mtodos de conservacin y mantenimiento que garanticen la estabilidad gentica y fenotpica del aislado los que deben ser verificables a travs de pruebas bioqumicas y moleculares. Las transferencias sucesivas en medios agarizados deben evitarse. Se debe verificar la pureza del cultivo y la actividad biolgica con la frecuencia necesaria. En el control del proceso de produccin se requiere una descripcin completa de este con los correspondientes controles de calidad y monitoreo de cada paso. El registro de todos los parmetros como temperatura, contenido de humedad del sustrato, pH y monitoreo de la contaminacin debe tenerse por lote de produccin para facilitar el examen de todos los pasos crticos de la produccin desde el producto final hasta el inicio del proceso (trazabilidad). En la preparacin de inculos se debe tener en cuenta su concentracin y pureza. Todos los medios de cultivo deben ser verificados para su esterilidad segura antes y despus de la inoculacin. En el caso de los sustratos desafortunadamente no siempre se tienen materias primas certificadas por lo que cada nuevo lote de materia prima debe ser sometido a un anlisis fsico-qumico y a un chequeo del nivel de esterilidad pre y post inoculacin. Para que la esporulacin sea mxima se necesita una buena rea superficial en relacin al volumen. Las partculas del sustrato individuales deben estar separadas despus de la hidratacin y esterilizacin porque las que quedan pegadas reducen el rea superficial con respecto al volumen cuando se adiciona el agua, limitando el espacio efectivo en que ocurrir la esporulacin. El contenido de humedad del sustrato debe ser ajustado para el crecimiento micelial y la conidiognesis teniendo en cuenta cada combinacin sustrato-aislado y su optimizacin puede ser compleja. El rango de humedad 35-60% v/p es usualmente usado. Incrementos en el contenido de humedad del sustrato tienden a disminuir la disponibilidad de oxgeno lo que se puede agravar en el escalado debido a la compactacin de grandes masas de este. La aeracin en la produccin es otro parmetro que determina la calidad de las producciones partiendo de que todos los hongos mitospricos (hifomicetos) son aerobios y requieren oxgeno para el crecimiento y la conidiacin. En los sistemas de produccin artesanales es difcil determinar el requerimiento de oxgeno de un determinado hongo y la evaluacin se hace muy cualitativamente. La mayora de los sistemas de produccin de Amrica Latina, China y del programa internacional LUBILOSA, estn basados en el intercambio del aire entre la cmara de crecimiento y el ambiente externo. Otro factor crtico es la temperatura de incubacin, la que vara segn el tipo de crecimiento requerido no solo entre especies sino tambin para el aislado en cuestin. Este parmetro debe ser monitoreado cuidadosamente en el escalado, debido a que el calor que se produce durante el metabolismo puede provocar reas con temperaturas por encima de la ptima en el cultivo. Tambin se debe tener en cuenta el rgimen luz-oscuridad cuando se selecciona el sistema de produccin. En la etapa de post-cosecha, previo envasado, se precisan mtodos para extraer y/o formular los propgalos (conidios generalmente). Por ejemplo, si se necesitan conidios para aplicacin a

volmenes ultrabajos se requiere de un fino polvo con partculas uniformes por lo que la extraccin debe ser eficiente y selectiva para los conidios garantizando su viabilidad. Con respecto al monitoreo de la contaminacin del proceso se sabe que todas las producciones microbianas tienen el riesgo de contaminarse y en las artesanales esto puede ocurrir con ms frecuencia si no se cumplen las buenas prcticas de produccin debido al gran nmero de operaciones manuales. Las contaminaciones pueden conducir a una prdida de eficacia del ingrediente activo por la dilucin con los microorganismos que han competido, adems del posible efecto inhibitorio de los metabolitos secundarios producidos por los contaminantes donde el reconocimiento y la cuantificacin del grado de contaminacin son importantes para determinar cualquier posible riesgo a la salud humana y demostrar que no haya entrada de patgenos humanos. Por ello se deben registrar todos los pasos crticos del sistema de produccin y el resultado de los anlisis de contaminantes para identificar la fuente y tomar medidas preventivas. Esto incluye el subcultivo del que se parta para preparar los pre-inculos, los inculos, el sustrato antes y despus de esterilizado y el producto final. Las especificaciones para el nivel permisible de contaminantes en el producto final dependern de los mtodos de produccin y el procesamiento del producto en la cosecha, post-cosecha y la formulacin, etapas ltimas que se realizan en ambientes no estriles. Por tanto se debe establecer un nivel base de entrada de contaminantes a travs de un estudio bien controlado, chequeando los controles en las primeras etapas del proceso para demostrar que el nivel de contaminantes del producto final es debido inevitablemente a las ltimas fases. 2.3. Principales ensayos En general, el control de calidad del producto final es el punto ms importante que garantiza el funcionamiento de ste y su aceptacin a largo plazo. Si el producto tiene una viabilidad alta al igual que una adecuada virulencia, se maximiza la probabilidad de que acte bien en el campo. De ah que las pruebas de ms amplia aceptacin para los productos bioplaguicidas a base de hongos sean: 1. la prueba de viabilidad, donde se evala si la clula est o no viva. Esto puede hacerse a travs de una prueba de germinacin conidial a un tiempo y temperatura determinados en medios nutritivos agarizados o lquidos o por conteo de viables en placa (ufc/g o ml de producto). 2. los bioensayos donde se comprueba la estabilidad de la patogenicidad y la virulencia del aislado producido masivamente. Se usan individuos de la especie plaga hacia la cual va dirigido el producto. En nuestro caso, el insecto para los entomopatgenos o el hongo fitopatgeno para el caso de los hongos antagonistas como Trichoderma. 3. la determinacin del nivel de contaminantes (pureza) que se realiza tomando determinada cantidad del producto y realizndose conteo de viables posteriores a la siembra en medios nutritivos generales para hongos y bacterias 4. la concentracin de unidades infectivas que se determina por conteo directo en cmara de Neubauer o por conteo de viables en medios agarizados 5. la determinacin de la estabilidad del producto en almacenaje lo que constituye un factor crtico considerando la no necesidad de refrigeracin o algn tratamiento especial. Los mtodos de secado y cosecha, la formulacin y el embalaje deben tenerse en cuenta para preservar la calidad del conidio. 3.- Proceso de recobrado en las producciones slidas de hongos para biocontrol en la agricultura. Almacenaje. Registro. Elementos de bioseguridad. 3.1. Recobrado de producciones slidas de hongos

Cuando se obtiene la biomasa conidial ptima sobre toda la superficie del sustrato se pasa al proceso de secado para que los conidios permanezcan viables en almacenamiento por mayor tiempo. Este proceso se optimiza con deshumidificadores o aires acondicionados o acelerando la ventilacin con ventiladores lo que depende de las condiciones locales. Posterior al secado y previo al paso final de envasado en el flujo de produccin se realiza la cosecha. Es en este momento que comienza la etapa de formulacin donde se prepara una combinacin de ingredientes de forma que el principio activo se mantenga estable, efectivo y fcil de aplicar. Aqu entran los mtodos de separacin de propgulos para realizar las formulaciones que varan considerablemente de producto a producto donde los procedimientos que se llevan a cabo dependern del uso al que vayan dirigidos estos. As los propgalos separados pueden mezclarse con aceites vegetales, minerales, kerosene, agua, con aditivos como protectores UV, materiales como arcillas que den volumen y sirvan para hacer un producto ms manipulable. En el caso de los conidios, si el uso aconsejado es para plagas del suelo, estos se pueden dejar sobre el sustrato que se obtuvieron y la aplicacin hacerse directamente. En muchos casos, posterior a la cosecha y antes de ser formulados los propgulos, se realiza un proceso de extraccin y concentracin. En este paso es decisivo lograr una humedad del biopreparado menor de 15% y poca particulacin del sustrato. Si se necesitan conidios para aplicacin a volmenes ultrabajos se requiere de un fino polvo con partculas uniformes por lo que la extraccin debe ser eficiente y selectiva para los conidios. Esto clsicamente se ha logrado con tamices que permitan seleccionar a travs de un tamao de poro crtico la mayor parte de los conidios y separarlos del resto del sustrato, lo cual es engorroso, consume mucho tiempo, genera gran cantidad de aerosoles y no garantiza uniformidad en las partculas obtenidas aunque es factible en sistemas de produccin de muy bajo costo para almacenar esporas y/o formularlas. Sin embargo, en la ultima dcada se encuentran en el mercado equipos que se recomiendan para la separacin de esporas de hongos entomopatgenos y antagonistas a partir de sustratos como arroz, trigo, etc u otros que con determiandas modificaciones ingenieriles se pueden adaptar para estos fines. Estos cosechadores de esporas permiten la eliminacin de partculas grandes menores que 100 m las que pueden bloquear los orificios de los aspersores y filtros en los equipos de aplicacin, una alta calidad de la separacin de esporas, lo cual mejora la estabilidad fsica de las formulaciones y una operacin segura ya que la generacin de aerosoles es mnima. Por ejemplo, CABIBioScience de Reino Unido comercializa un cosechador de esporas bajo el nombre de Mycoharvester (MH). Con el modelo industrial MH-3 se logra un procesamiento de media tonelada diaria de sustrato lo que optimiza tambin espacio para el almacenamiento por el nivel alto de concentracin de esporas que se logra. Entre las desventajas de equipos muy especializados en el mercado figuran el alto precio y la poca eficiencia en la separacin de las esporas para algunos aislados y especies fngicos. Habitualmente los conidios concentrados son secados con slica gel hasta valores menores de un 5% humedad relativa. Para Metarhizium se ha logrado una sobrevivencia mayor del 90% al ao sin refrigeracin y hasta 3 aos en fro a 5 grados C. 3.2. Almacenamiento de los bioproductos Actualmente no se han logrado productos para biocontrol formulados de forma estable por ms de dos aos sobre una base econmica racional. Sin embargo, la opcin tecnolgica de concentrar y separar esporas desarrolladas sobre sustratos slidos est siendo cada vez usada. El empacado es esencial, de forma que se garantice una humedad relativa baja del producto y una temperatura menor de 20 grados C para por al menos tener un preparado viable por 3 -6 meses. Estos dos parmetros son los que ms influyen en la viabilidad de los propgalos durante el almacenaje. La refrigeracin de las esporas a 5 grados C y humedades relativas menores del 1% en el producto, tecnolgicamente son posibles pero econmicamente no, de ah que se ajusten estros parmetros segn el coste real para cada productor, de acuerdo a la sobreviviencia lograda, a niveles superiores.

La biodegradabilidad del producto tambin est muy influenciada por la humedad y la temperatura de forma que se debe ajustar un rango permisible de contaminantes que sea tolerable. Adems, hay formulaciones que son dainas en almacenaje a mediano plazo como es el caso de los aceites vegetales que daan la pared de la espora y la vuelven no viable en pocas semanas. Muchos productores reconocidos almacenan esporas y formulan de acuerdo a la demanda del mercado pero en las pequeas granjas (fincas) el mtodo ms aconsejable es extraer con aceites vegetales las esporas y vender este formulado al productor agrcola o comercializar el preparado seco y empacado sin ningn otro proceso posterior listo para aplicar en solucin acuosa con algn agente tensoactivo no agresivo ( tween, agral, triton, detergente botnico, etc.). 3.3. Registro de bioplaguicidas microbianos Los productos a base de microorganismos o metabolitos obtenidos para el biocontrol deben ser seguros, virulentos a las especies diana, libres de patgenos humanos y de calidad consistente y reproducible. Los hongos usados en el biocontrol de plagas agrcolas afortunadamente pueden ser propagados masivamente sin la intervencin directa de un hospedante vivo, lo que evita contaminaciones bacterianas adicionales, el mantener cras de insectos u otro hospedante sanitariamente adecuadas, laboratorio. Estos aspectos facilitan su registro. No obstante, en el mundo existe una marcada diferencia entre pases desarrollados y en desarrollo en cuanto a los requisitos para registrar un producto. De esta forma en muchos pases en desarrollo la industria de productos biocontroladores de plagas no est regulada o muy pocas exigencias existen al respecto lo que hace que salgan al mercado productos de pobre calidad. Esto se debe a que las pruebas de calidad incluyen mayores gastos de capital y de mano de obra calificada y al desconocimiento y/o ausencia parcial o completa de protocolos de calidad con amplia aceptacin internacional. De hecho,, no se cuenta con normas internacionales de calidad aprobadas. Todo esto puede desacreditar el prestigio de los bioproductos por parte de los productores y endentece la adopcin de los nuevos mtodos de trabajo con bioplaguicidas. En pases donde se exige una rigurosa informacin del producto que se quiere registrar las autoridades reguladoras (en pases desarrollados y en desarrollo que son muy exigentes a la hora de registrar un producto) demandan pruebas poco realistas por desconocimiento sobre estos productos, a los que muchas veces tratan de aplicarle los mismos requerimientos que a las molculas sintticas qumicas. Otras veces exigen pruebas econmicamente inaceptables. En los ltimos aos han surgido grupos de trabajo fuertes donde se han asociado importante productores de biolgicos, instituciones de investigacin prestigiosas y organismos reguladores para lograr una mejor armonizacin y resolucin ms efectiva de estos problemas. Hoy da se cuentan con instituciones lderes que tienen establecidos protocolos para control de calidad y toxicidad e impacto ambiental de estos bioproductos. Se trabaja arduamente para lograr establecer estas pruebas en los laboratorios que se dedican a estas producciones. Una vez que se logre un acuerdo general el siguiente paso ser la implementacin de sistemas de acreditacin externos (tales como ISO 9000, Buenas prcticas de produccin [BPP GMP] ), los que corroborarn la calidad de los productos y su inocuidad en los pases desarrollados. En los subdesarrollados, los protocolos y entrenamientos se pueden ofertar a travs de organismos de cooperacin internacional especializados como el IBCD (International Biopesticide Consortium for Development) o el IBMA (International Biocontrol Manufacturers Association). Sin embargo, en los ltimos 5 aos la industria de bioplaguicidas se ha fortalecido con productos de ms calidad conjuntamente con la prohibicin en muchos pases, especialmente desarrollados, de molculas qumicas plaguicidas y la certificacin de sistemas orgnicos donde se contempla el uso de productos bioplaguicidas.

Por ejemplo, la EPA (Environmental Protection Agency of USA) obtiene la informacin de una Oficina adjunta (Office of Prevention, Pesticides and Toxic Substances, United States Environmental Protection Agency) que se dedica a la evaluacin de pruebas de plaguicidas y sustancias txicas, las que se envan a la EPA para su revisin bajo las regulaciones federales. En general se exigen estudios que identifiquen a nivel molecular el aislado, estudios toxicolgicos (teratognicos, toxicidad crnica, subcrnica y aguda) incluyendo genotoxicolgicos o carcinognicos en dependencia del producto. A continuacin se listan requerimientos exigidos en los pases lderes en biocontrol desarrollados y en algunos en desarrollo como Cuba. Para el registro del producto se necesitan conocer los siguientes datos: Nombre genrico (cientfico), tipo de plaguicida (insecticida, fungicida biolgico, etc.), datos completos del grupo que lo produce, usos y formulaciones (plaga que controlar, tipos de cultivo, tipos de formulaciones (polvos humedecibles, concentrados lquidos), mtodos de aplicacin (preparado disuelto en agua con adyuvantes, equipos de aplicacin, cantidad que se aplica, etc.), literatura cientfica que apoye seguridad de uso, estudios de patogenicidad en especies no diana, bateras de ensayos con animales de laboratorio que incluyan mamferos por diferentes vas: oral, inhalacin, tpica, intravenoso, etc). Algunos estudios se pueden evadir por el anlisis de vas de exposicin ms probables a que se expone el productor del biocontrol o el usuario final producto adems de un estudio mdico riguroso de voluntarios expuestos a este. Determinar los pasos crticos del proceso productivo para evaluar posible contaminacin microbiana y cuando esta ocurra asegurar que en ningn lote hay patgenos humanos ni a animales. Estudios ecotoxicolgicos (seguros a peces, aves, reptiles, abejas, otras especies de plantas, etc.), algunos de los cuales no se aplican segn el uso al que va dirigido el producto. Destino del producto en el ambiente (por ejemplo si contamina estuarios, ros, etc). Caractersticas fsicas y qumicas (pH, densidad, color, olor). Adems de las pruebas de calidad biolgicas, 3.4. Elementos de bioseguridad en la produccin de bioplaguicidas. Buenas Prcticas de produccin y diseo de instalaciones 3.4.1. Conceptos La bioseguridad es un conjunto de medidas cientfico-organizativas y tcnico-ingenieriles destinadas a proteger al trabajador directamente, a la comunidad y al ambiente, de los riesgos que entraa el trabajo con estos agentes. El desarrollo de la biotecnologa a nivel mundial ha incrementado el nmero de personas que manipulan o estn en contacto con agentes biolgicos, de ah que haya aumentado la preocupacin por el riesgo al que pueden estar expuestos. Al trabajo con microorganismos se asocian riesgos biolgicos, fsicos, qumicos y psicofisiolgicos. El riesgo biolgico es la probabilidad de que ocurra un dao sobre el personal del laboratorio, los animales o el ambiente asociado a la produccin, uso y manipulacin general de los agentes biolgicos. 3.4.2. Grupos de riesgos y particularidades La exposicin al riesgo biolgico puede ser directa o indirecta. No todos los trabajos con microorganismos tienen igual nivel de riesgo, ya que ste depende de la peligrosidad del agente para las personas y el ambiente. La clasificacin de agentes biolgicos en grupos de riesgo se realiza considerando varios criterios: 1. Capacidad del microorganismo para producir dao. 2. Modo de transmisin o diseminacin. 3. Gama de hospedantes del microorganismo. 4. Disponibilidad de tratamiento eficaz.

5. Disponibilidad de medidas eficaces para eliminar riesgo en la comunidad y el ambiente. 6. Concentracin y volumen que se trabaja. Atendiendo a lo anterior se establecen cuatro grupos de riesgo para microorganismos potencialmente patgenos al hombre, a los animales y al ambiente. Los de biocontrol estn agrupados en los grupos de riesgo ms bajos que son el Grupo 1 y el grupo 2 de 4 grupos que existen en total. Grupo 1.- Escaso riesgo, pocas probabilidades de ser patgenos al hombre y animales. Por ejemplo: microorganismos de la industria lctea, de vinos, para produccin de antibiticos, as como los que se emplean en el control biolgico de forma general. Grupo 2.- Riesgo individual moderado y bajo para la comunidad. Pueden provocar enfermedades en el hombre y animales. Pocas probabilidades de afectar al personal del laboratorio y al medio ambiente. Cuando ocurre la exposicin el laboratorio puede provocar infeccin grave, pero existen medidas para eliminarlo y la propagacin a la comunidad es limitada. En el trabajo con microorganismos deben realizarse anlisis de riesgo. Los anlisis de riesgo tienen dos etapas: 1.- Estimacin del riesgo 2.- Manejo del riesgo. 1.- La estimacin del riesgo interpreta y evala la informacin, e identifica el posible peligro y las consecuencias asociadas. 2.- El manejo del riesgo determina la poltica de mercado para decidir cmo eliminar el riesgo estimado. Por otra parte, la percepcin pblica del riesgo y los beneficios de una tecnologa influyen en la regulacin, por lo que los alcances del riesgo y sus regulaciones se deciden frecuentemente considerando la percepcin pblica en relacin con las bases cientficas correspondientes. El anlisis de riesgo, teniendo en cuenta solo los aspectos cientficos, probablemente no son del todo acertados, de ah que los criterios de la opinin pblica pueden ser muy importantes. Los riesgos principales de los bioplaguicidas son: 1. Patogenicidad sobre organismos no diana (blanco). 2. Toxicidad. 3. Competitividad por espacio con otros microorganismos. 4. Alergia. Las pruebas de seguridad deben estar dirigidas a: - Seguridad sobre vertebrados mediante pruebas toxicolgicas de laboratorio. - Efecto sobre invertebrados mediante bioensayos. Para evitar el escape de los microorganismos se han desarrollado una serie de procedimientos, mecanismos y adecuaciones fsicas que se conocen con el trmino de contencin. 3.4.3. Contencin Todo lo que implique un control sobre la diseminacin del agente biolgico est relacionado con la contencin. En general, hay dos tipos de contenciones: Biolgica: conjunto de procedimientos que alteran genticamente al ciclo de vida de los organismos y slo pueden producirse artificialmente en condiciones controladas.

Fsica: tcnicas, procedimientos de laboratorio, operaciones, equipos de seguridad, diseo de instalaciones. 3.4.4. Buenas Prcticas de Produccin Las Buenas Prcticas de Produccin (BPP) son una herramienta bsica para la obtencin de productos seguros que se centralizan en la higiene y forma de manipulacin. Los elementos ms importantes son el cumplimiento de las tcnicas y prcticas adecuadas en instalaciones adecuadas. 1. Son tiles para el diseo y funcionamiento de las biofbricas que incluyen proceso productivo y productos finales. 2. Contribuyen al aseguramiento de una produccin de bioproductos segura. 3. Son indispensables para la aplicacin del Sistema HACCP (Anlisis de Peligros y Puntos Crticos de Control) de un programa de Gestin de Calidad Total (TQM) o de un Sistema de Calidad como ISO 9000. 4. Se asocian con el Control a travs de inspecciones del establecimiento. Para aplicar las BPP se necesita tener en cuenta: 1. Materias Primas La calidad de las Materias Primas no debe comprometer el desarrollo de las Buenas Prcticas. Hay que tener en cuenta medidas para evitar contaminaciones qumica, fsica y/o microbiolgica. 2. Establecimientos Hay que tener en cuenta dos ejes: a. Estructura b. Higiene La biofbrica tiene que estar ubicada en zonas seguras, no inundaciones, humo, polvo, gases, luz y radiacin que pueden afectar la calidad del producto que se elabora. A. En las instalaciones, las estructuras deben ser slidas y sanitariamente adecuadas. Las aberturas deben impedir la entrada de animales domsticos, insectos, roedores, moscas y contaminantes del medio ambiente como humo, polvo, vapor. Asimismo, deben existir separaciones (barreras de contencin) para impedir la contaminacin cruzada. Existirn habitaciones para la inoculacin, incubacin, secado, empacado, almacenaje y esterilizacin y descontaminacin. El espacio debe ser amplio y los empleados deben tener presente qu operacin se realiza en cada habitacin, para impedir la contaminacin cruzada. Adems, debe tener un diseo que permita realizar eficazmente las operaciones de limpieza y desinfeccin. El agua utilizada debe ser potable, ser provista a presin adecuada y a la temperatura necesaria. Asimismo, tiene que existir un desage adecuado. Los equipos y los utensilios para la manipulacin de alimentos deben ser de un material que no transmita sustancias txicas, olores ni sabores. Las superficies de trabajo no deben tener hoyos, ni grietas. Se recomienda evitar el uso de maderas y de productos que puedan corroerse. La pauta principal consiste en garantizar que las operaciones se realicen higinicamente desde la llegada de la materia prima hasta obtener el producto terminado. B. Higiene fuera y dentro de la produccin Todos los utensilios, los equipos y la instalacin debe mantenerse en buen estado higinico, de conservacin y de funcionamiento.

Durante la produccin de un biopreparado hay que tener en cuenta varios aspectos para garantizar su calidad: Debe prevenirse la contaminacin cruzada que consiste en evitar el contacto entre productos elaborados y en proceso de produccin con materias primas o productos contaminados. Si se sospecha una contaminacin debe aislarse el producto en cuestin y ejecutar procedimientos contemplados para tales casos en cada laboratorio. El agua utilizada debe ser potable y debe haber un sistema independiente de distribucin de agua recirculada. La produccin debe ser llevada a cabo por empleados capacitados y supervisados por personal tcnico. En cada zona deben respetarse los requisitos de BPP establecidos. Por ejemplo, en la cosecha se deben usar caretas protectoras con filtros contra partculas 0.2 micrmetros. Deben mantenerse documentos y registros de los procesos de elaboracin, produccin y distribucin y conservarlo durante un perodo superior a la duracin mnima del producto. Para la limpieza y la desinfeccin es necesario utilizar productos reconocidos por su poder biocida o desinfectante. Para organizar estas tareas, es recomendable aplicar los Procedimientos Operativos Estandarizados de desinfeccin y limpieza que describen qu, cmo, cundo y dnde limpiar y desinfectar, as como los registros y advertencias que deben llevarse a cabo. Las sustancias txicas (solventes u otras sustancias que pueden representar un riesgo para la salud y una posible fuente de contaminacin deben estar rotuladas con un etiquetado bien visible y ser almacenadas en reas exclusivas. Estas sustancias deben ser manipuladas slo por personas autorizadas. 3. Personal Aunque todas las normas que se refieran al personal sean conocidas es importante remarcarlas debido a que son indispensables para lograr las BPM. Se aconseja que todas las personas que produzcan biopreparados reciban capacitacin. Esta es responsabilidad de la empresa y debe ser adecuada y continua. Debe controlarse el estado de salud y la aparicin de posibles enfermedades contagiosas entre los trabajadores. Por otra parte, ninguna persona que sufra una herida puede manipular agentes biolgicos hasta su alta mdica. Es indispensable el lavado de manos de manera frecuente y minuciosa con un agente de limpieza autorizado, con agua potable y con cepillo. Debe realizarse antes de iniciar el trabajo, inmediatamente despus de haber hecho uso de los retretes, despus de haber manipulado material contaminado y todas las veces que las manos se vuelvan un factor contaminante. Debe haber indicadores que obliguen a lavarse las manos y un control que garantice el cumplimiento. Todo el personal que est de servicio en la zona de manipulacin debe mantener la higiene persona, debe llevar ropa protectora, calzado adecuado y gorros. Todos deben ser lavables o desechables. No debe trabajarse con anillos, aretes, relojes y pulsos durante la manipulacin de agentes biolgicos. La higiene tambin involucra conductas que puedan dar lugar a la contaminacin, tales como comer, fumar, aplicarse cosmticos u otras prcticas antihiginicas. Asimismo, se recomienda usar ropa adecuada para la produccin y cambiarse antes de la salida del centro. 4. Control de Procesos en la Produccin Para tener un resultado ptimo en las BPM son necesarios ciertos controles que aseguren el cumplimiento de los procedimientos y los criterios para lograr la calidad esperada en un alimento,

garantizar la inocuidad y la calidad de los biopreparados. Estos fueron ya explicados en la conferencia anterior de controles de calidad. Los controles sirven para detectar la presencia de contaminantes microbiolgicos. Para verificar que los controles se lleven a cabo correctamente, deben realizarse anlisis que monitoreen si los parmetros indicadores de los procesos y productos reflejan su real estado. 5. Liberacin microorganismos al medio ambiente. Otro aspecto de la bioseguridad concierne a la liberacin de microorganismos al ambiente, como es el caso de los usados para el control de plagas agrcolas. Hay que establecer diferentes categoras: - Microorganismos modificados genticamente- riesgo ms elevado - Microorganismos autctonos menor riesgo - Microorganismos exticos- evaluacin del riesgo, puede ser variable el nivel de riesgo. Si comparamos los riesgos de los bioplaguicidas con el de muchos agroqumicos que actualmente se emplean en el control de plagas, los agentes microbiolgicos disponen de una mayor seguridad, de ah que puedan estimarse como alternativas ms seguras. Se deben tomar a nivel de nacin regulaciones para su uso, y siempre estos bioproductos deben ser analizados bajo un punto de vista diferente a los qumicos, lo que facilitara su uso para el control de plagas agrcolas.

EQUIPAMIENTO NECESARIO
IDENTIFICACIN DE MAQUINARIA , MATERIAL Y EQUIPOS
DESCRIPCION TUBOS DE ENSAYO 75 ML. PORTATUBOS DE ENSAYO DE 20 2 FRASCOS DE CULTIVO 175 CM - contacto FIOLAS 500 ML QUITASATO - FILTRACION -500 ML EMBUDOS PARA FILTRACION BEAKERS de 500 ml. ESPTULAS PEQUEAS AC. INOX. BANDEJAS DE ACERO INOXIDABLE 90 X 70 CM. KIT DE LIMPIEZA - CEPILLOS Y ESPONJAS ROLLOS DE PAPEL DE ALUMINO 80 MT. MECHEROS BUNSEN DESTILADOR 2 LT. FERMENTADOR 20 LTS. BALANZA ANALITICA electronica 0,1 mg. a 200 Gr. BALANZAS ELECTRONICA 1000 GRAMOS TERMMETROS de 130 C NEVERA DE 30 PIES BOLSAS PLASTICAS ESTERILIZABLES (22 X 28 cm) AIRE ACONDICIONADO 12.000 B.T.U. SPLIT AUTOCLAVE de 250 lts. ESTUFA de 2,3 pie cubico - 225 C CENTRIFUGADORA 10 TUBOS PLANTA ELECTRICA DE 7 KILOVATIOS SELLADORA DE 60 CMTS. EQUIPAMIENTO UNIDAD MATERIAL MATERIAL MATERIAL MATERIAL MATERIAL MATERIAL MATERIAL MATERIAL MATERIAL MATERIAL MATERIAL EQUIPO EQUIPO EQUIPO EQUIPO EQUIPO EQUIPO EQUIPO MATERIAL EQUIPO EQUIPO EQUIPO EQUIPO MAQUINARIA EQUIPO Cantidad 100 8 96 30 10 10 20 10 100 3 20 4 1 Costo Unitario 9,00 120,00 65,00 45,00 50,00 60,00 30,00 25,00 375,00 325,00 45,00 725,00 2.750,00 32.750,00 6.360,00 350,00 150,00 3.750,00 1,20 2.300,00 62.142,50 12.402,00 3.577,50 9.000,00 750,00 TOTAL 900,00 960,00 6.240,00 1.350,00 500,00 600,00 600,00 250,00 37.500,00 975,00 900,00 2.900,00 2.750,00 32.750,00 6.360,00 1.050,00 750,00 7.500,00 360,00 6.900,00 62.142,50 12.402,00 3.577,50 9.000,00 2.250,00 201.467,00 201.467,00

1 1 3 5 2 300 3 1 1 1 1 3

TOTAL DE LA INVERSION DE EQUIPAMIENTO

EQUIPAMIENTO PARA LA INFRAESTRUCTURA


DESCRIPCION CONSTRUCCION DE 3 AMBIENTES LAB. (6 X 4 MT.) CONSTRUCCION DE 1 AMBIENTE (60 M )- salon
2

UNIDAD METROS CUADRADOS METROS CUADRADOS

Cantidad 72 60 9 18 12 6 3 3 20

Costo Unitario 2.500,00 2.500,00 120,00 80,00 60,00 120,00 1.200,00 50,00 750,00

TOTAL 180.000,00 150.000,00 1.080,00 1.440,00 720,00 720,00 3.600,00 150,00 15.000,00 352.710,00 352.710,00

puntos INSTALACION DE EQUIPAMIENTO LABORATORIO puntos INSTALACION ELECTRICA puntos INSTALACION AGUA BLANCA puntos INSTALACION SANITARIA material FREGADEROS DE ACERO INOXIDABLE material MESONES DE TRABAJO CON TOPE GRANITO material ESTANTERIA DE 1 METRO DE ANCHO X 2,2 ALTO EQUIPAMIENTO PARA LA INFRAESTRUCTURA INVERSION DEL EQUIPAMIENTO

IDENTIFICACIN DE PRODUCTOS Y RENDIMIENTOS:

IDENTIFICACIN DE PRODUCTOS, PRODUCCION Y RENDIMIENTO


Descripcin de PRODUCTOS BIOFERTILIZANTES TRICHODERMA BAUVERIA UNIDADES GRAMOS GRAMOS GRAMOS Cantidad / semana 3.200,00 1.500,00 1.200,00 Cantidad /mes 12.800,00 6.000,00 4.800,00 TOTAL ANUAL 166.400,00 78.000,00 62.400,00 306.800,00

TOTAL DE PRODUCTOS

GRAMOS

306.800,00

PROYECCION DE LA PRODUCCION: PRODUCCION TOTAL DE BIOCONTROLADORES INICIAL A SEIS (06) MESES: 306,8 KILOGRAMOS DE PRODUCTOS PRODUCCION TOTAL DE BIOCONTROLADORES INICIAL A DOCE (12) MESES: 613,6 KILOGRAMOS DE PRODUCTOS PRODUCCION TOTAL DE BIOCONTROLADORES INICIAL A DOS AOS (24) MESES: 1.227,2 KILOGRAMOS DE PRODUCTOS CAPACIDAD DE EMPLEO: SE INICIARA CON 4 PERSONAS, QUE SE DUPLICARA AL DUPLICARSE LOS PROCESOS PRODUCTIVOS. CAPACITACION: EN LA PROPUESTA ESTA PLANTEADO CAPACITAR 12 PERSONAS CADA CUATRO (04) MESES, EN HORARIO EXTRA LABORAL Y NOCTURNO, COMPLETANDO UNAS 80 HORAS.

PLAN DE INVERSIN INICIAL


Descripcin Terreno Materia prima e insumos Maquinaria y equipo Construccion de infraestructura Mobiliario y equipo de oficina Insumos aporte de la Produccion textil Gastos Operacionales Total de Inversin Porcentajes de Financiamiento Aporte propio 20.000,00 Financiamiento TOTAL 20.000,00 18.000,00 201.467,00 352.710,00 4.000,00 18.000,00 201.467,00 352.710,00 4.000,00 8.000,00

8.000,00 51.200,00
20.000,00 3,05%

51.200,00
655.377,00
100%

635.377,00 96,95%