FISIOLOGÍA VEGETAL. TEMA 19. AUXINAS: INTRODUCCIÓN.

El descubrimiento de las auxinas surgió como algo colateral a otro tipo de investigaciones. Las observaciones sobre los tropismos contribuyeron al descubrimiento de las hormonas vegetales. Julius von Sachs, a finales del siglo XIX, postula la existencia de sustancias morfogenéticas, algunas sustancias químicas que eran responsables de los efectos morfogenéticos. Charles Darwin se interesa en la capacidad de movimiento que poseen las plantas y principalmente sobre el fototropismo (movimiento de las plantas hacia un estímulo luminoso) en coleoptilos de gramíneas. Boysen-Jensen provoca la curvatura en un coleoptilo decapitado, tras restituir el ápice.

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Las semillas de gramíneas, al germinar, primero emiten la radícula. Tras esto desarrollan el coleoptilo, que tiene como misión proteger a la hoja primaria. Hasta que la semilla germinada no vence la barrera del suelo, el coleoptilo protege al meristemo contenido en la hoja primaria. Una vez que la semilla sobresale, el coleoptilo se rompe, y la hoja primaria sale al exterior, se desenrolla y comienza a captar la luz (autotrofía). Alguna sustancia debía sintetizarse para regular todo este proceso. Darwin, trabajando con coleoptilos de avena, utilizó una fuente de luz lateral y vio como los coleoptilos se orientaban hacia el lado de donde provenía el foco luminoso. Cuando cortó el ápice del coleoptilo, éste no crecía hacia la luz. Lo cubrió con un material opaco, y tampoco había respuesta fototrópica hacia la luz. Sin embargo, cuando lo cubrió con un material transparente que permitía el paso de la luz, sí hubo respuesta hacia la luz. También cubrió el resto del coleoptilo, dejando libre el ápice, con un material opaco y sí había respuesta. Esto indicaba que había algo en el ápice del coleoptilo, que en presencia de luz, era responsable del movimiento dirigido hacia la luz. Boysen-Jensen cortó el ápice del coleoptilo, pero lo mantuvo interconectado al resto de la planta con agar, sí había respuesta. Hizo lo mismo pero interponiendo una lámina de mica (impermeable) entre el ápice y el resto del coleoptilo, y no había respuesta. Esto quería decir que un compuesto sintetizado por el ápice difundía al resto del coleoptilo y producía el fototropismo.

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Thimann. lo que produce la curvatura. el AIA se aisló por primera vez de plantas. si situaba el bloque de agar de forma que cubriera todo el coleoptilo decapitado. Se detectó la presencia de AIA endógeno en el endospermo inmaduro de semillas de maíz. Tras un tiempo. del griego “hacer crecer” o “incrementar” y cuya estructura química resultó ser la del ácido indolil 3-acético. in vivo. derivado del Trp. F. el primer bioensayo que permitía establecer una relación entre la cantidad de estímulo aplicado y la respuesta fisiológica observada. y K. dos grupos: Kijgl. comúnmente llamado ácido indolacético o AIA. W. entre 1934 y 1935. Si lo situaba sobre un lado u otro de manera desigual. Es un derivado clorado. partiendo de orina humana. en ausencia de luz. pero no se curvaba porque la sustancia difundía por igual en los dos lados del coleoptilo. puso sólo el bloque sin ápice sobre el coleoptilo decapitado. éste se alargaba hacia arriba uniformemente. con una cadena lateral de Acetato. AIA es la más importante porque está distribuida ampliamente por todo el Reino vegetal. Haagen-Smit y Erxleben. pero la cadena lateral es un Butirato. son: Ácido fenilacético (detectado en tallos de tomate y girasol). La distribución de auxinas es diferente en la zona enfrentada a la luz y en la que está de cara a la oscuridad. y esta diferencia de concentración de auxinas en las células produce el fototropismo. Tras varios intentos. En 1946.Ellos no sabían qué compuesto era. ya que las células con más auxinas (zona oscura) se elongan más. Otras auxinas naturales importantes. El compuesto presenta un núcleo indólico. Ácido indolbutírico (IBA). 2 .V. Ácido 4-cloro-indolacético (en guisante). Went elaboró. Went decapitó un ápice de coleoptilo y lo situó sobre un bloque de agar y una fuente luminosa. usando extractos de cultivos del hongo Rhizopus Consiguieron obtener una sustancia a la que se denominó auxina. Igual al AIA. En ausencia de luz pero con las sustancias que habían difundido al agar. después se vio que eran las auxinas. en 1928. En las plantas existen otras hormonas con efectos similares al AIA. provocaba una diferencia de concentración y se producía la curvatura.

Para estimular el crecimiento del tallo. y éstas más sensibles que los tallos. la misma concentración estimulará más o menos el crecimiento.4-diclorofenoxiacético (2. 3 . pero superado ese óptimo (en cualquier órgano) producen un efecto contrario e inhiben la elongación. Las auxinas actúan en un rango de concentraciones hasta que llegan a un óptimo. Ácido 2.4-D). y tendrá diferentes efectos en órganos distintos. Cada órgano presenta una sensibilidad diferente frente a la auxina. así como del tipo de órgano tratado. más allá de esta cifra se inhibe el crecimiento. Factores que afectan a la actividad auxínica. El AIA tiene diferentes efectos a diferentes concentraciones. Esto implica que podemos utilizar las auxinas con dos finalidades. en función de si se trata de raíz. La efectividad de la unión receptor-hormona. La sensibilidad va a depender de: La concentración de receptores hormonales. En la raíz se estimulará más y los tallos menos. La concentración óptima de AIA para el crecimiento en la raíz es de 10-7 g/L. Las respuestas que se producen tras la aplicación de auxinas a las plantas dependen de la concentración de hormona. tallo o brote.Los laboratorios han sintetizado compuestos químicos sintéticos similares. el óptimo está en 10-3 g/L. La sensibilidad de un tejido u órgano puede variar con la edad y con las condiciones ambientales. por encima de esa cifra se inhibe el crecimiento. Modulado por muchos factores ambientales. Las raíces son más sensibles que las yemas. Sensibilidad frente a las auxinas. Por ejemplo. para abastecer a la Agricultura. como son: Ácido naftalenacético (ANA). Concentración hormonal. estimular o inhibir el crecimiento (como herbicidas).

Tanto el metabolismo como el transporte van a determinar. Para producir la curvatura. eliminamos el lugar donde se sintetiza la hormona. Parece ser que la ruta mayoritaria para el AIA. También veremos el transporte. Métodos físico-químicos: HPLC. Biosíntesis de AIA. electroquímico y masas). Se van incubando secciones en distintas concentraciones de AIA. Metabolismo y transporte de AIA. o cromatografía líquida de alta presión (detectores: fluorimétrico. Se mide el grado de curvatura que induce la auxina al estar en contacto con un coleoptilo decapitado. es la de la parte central de la figura. En la actualidad existen otros métodos. el 4 . Al decapitar el coleoptilo. mediante descarboxilación. aunque no pertenece a la ruta metabólica. Crecimiento de segmentos de coleoptilo de avena. Se hacen secciones de coleoptilo de avena. Vamos a analizar la biosíntesis. Esas secciones de coleoptilo. GC. que se da en la mayoría de las especies.Métodos para cuantificar las auxinas. la conjugación y el catabolismo. por un proceso de transaminacion se convierte en Ácido Indol-3-pirúvico. Inmunoensayo. La concentración de AIA que se corresponda a ese incremento en el crecimiento será la concentración de AIA presente en el extracto. y los comparamos con la recta de calibrado. habrán crecido más o menos. Incubamos secciones de coleoptilo en ese extracto y observamos el incremento de tamaño de las secciones. Primero se hace una recta de calibrado. al cabo de 24h. Después. Ahora midiendo el grado de curvatura en cualquier coleoptilo y comparando con la recta. Hasta hace pocos años los bioensayos eran el único método para cuantificar estas hormonas. colocamos bloques de agar que contenga auxina sobre la zona decapitada del coleoptilo en posición distorsionada. Todas parten del Trp. Con esto realizamos una recta de calibrado. Test de la curvatura del coleoptilo de avena. Bioensayo. es decir. El grado de curvatura producido en el coleoptilo va a ser proporcional a la cantidad de AIA. Bioensayos. Bioensayo. Con esto realizamos una recta de calibrado. que la planta tenga las cantidades de AIA necesarias para el crecimiento vegetal adecuado a cada momento y cada lugar. que sólo difunda a un lado del coleoptilo. cromatografía de gases (detector: masas). podemos determinar el grado de AIA endógeno. la ruta del ácido indolpirúvico parte de Trp y. regulando homeostáticamente. Luego hacemos un extracto de la planta que queremos estudiar. En la mayoría de las plantas.

La Triptamina. mediante una nitrilasa. Algunas plantas presentan la ruta de la Triptamina. que va a generar Triptamina. mediante oxidación. Éste compuesto puede pasar directamente a Indol-3-acetonitrilo por pérdida de una molécula de H2O. Y ahora. El Trp sufre una descarboxilación. pasa a Ácido Indol-3-acético. Otra ruta minoritaria que sólo se da en las Crucíferas (Brasicaceae). Este Indol-3-acetonitrilo. se transforma en Indol3-acetaldehido. o llegar a lo mismo mediante etapas intermedias.Ácido Indol-3-pirúvico pasa a Indol-3-acetaldehido. el Trp sufre una descarboxilación oxidativa y se forma la Indol-3-acetaldoxima. 5 . mediante desaminación oxidativa. el Indol-3acetaldehido pasa a Ácido Indol 3-acético.

que forman compuestos como el ácido indolacetilaspártico (AIAasp). es decir. oligosacáridos. Estas estructuras conjugadas tienen otras funciones importantes. hay enzimas que pueden hidrolizar de nuevo el AIA cuando la planta requiera niveles de AIA libre. Auxina ligada y auxina conjugada son sinónimas. Además. La unión con azúcares se produce mediante enlaces éster. péptidos. Estas dos rutas son irreversibles. - Estos conjugados se dan como forma de almacenamiento de AIA. Este nuevo compuesto no tiene actividad biológica. la mayor parte del AIA se encuentra en forma de conjugados. etc. En algunos tejidos. 6 .Conjugación de AIA. ya que a niveles elevados podían inhibir el crecimiento. proteínas. Catabolismo de AIA. como hemos dicho. actúan como formas de protección del AIA frente al ataque peroxidativo. Cuando la célula detecta que necesita AIA libre para una etapa fisiológica determinada. glucosa. hidroliza los conjugados. como proteger el AIA de la oxidación por peroxidasa. La oxidación del AIA es un proceso catabólico irreversible. las estructuras conjugadas pueden actuar como un mecanismo de detoxificación para eliminar el exceso de auxina. liberando AIA fisiológicamente activo. Es frecuente la conjugación con aminoácidos. El AIA cuando se conjuga con otras proteínas conserva su estructura. Se utiliza esta terminología para determinar todos los compuestos que se forman mediante enlaces covalentes entre el AIA y otras moléculas. pero pierde su actividad biológica. La oxidación puede ser descarboxilativa o no descarboxilativa. y los productos resultantes carecen de actividad biológica. que implica la pérdida de la actividad biológica de la hormona. La unión de AIA con aminoácidos se produce mediante enlaces amida. para dar compuestos como el indolacetilglucósido (AIAglu). Aunque estos compuestos son inactivos fisiológicamente hablando. y se detectan en semillas u otros órganos de almacenamiento (reserva).

Esto es importante. el H2O2. que tiene actividad peroxidasa. Los compuestos que activan la reacción son.y polifenoles (Flavonoides). la descarboxilación se da en la cadena lateral. La descarboxilación siempre se produce en la cadena lateral. Hay compuestos que pueden modular la actividad catabólica de esta hormona. Aceleran la degradación del AIA. Otros compuestos inhiben a la enzima. Resumiendo. que puede ser en la propia cadena lateral. modulando la actividad de la AIA oxidasa. La oxidación descarboxilativa está catalizada por la AIA oxidasa.Catabolismo de AIA. Oxidación descarboxilativa. y algunos iones metálicos como el Mn . En ambos casos es un proceso descarboxilativo. hay una oxidación. dependiendo de que la oxidación se produzca en la cadena lateral o el núcleo indólico. activándola o inhibiéndola. Estos compuestos fenólicos más complejos protegen al AIA de la AIA oxidasa. dando como primer producto oxindol-3-metanol. dando como primer producto indol-3-metanol. ya que algunos metabolitos secundarios como son los fenoles modulan el crecimiento. como los di. 2+ 7 . de forma indirecta. en la ruta de la oxidación descarboxilativa. Además. o en el núcleo indólico. respectivamente. Los productos iniciales de la reacción son indol-3-metanol y oxindol-3-metanol. los monofenoles.

posteriormente. ya que no se produce en ausencia de O2 ni en presencia de inhibidores de la síntesis de ATP. es decir. Transporte de AIA. es decir. El movimiento del AIA requiere energía metabólica. Oxidación no descarboxilativa. siempre va desde el ápice al tallo. al ácido 7hidroxi-2-oxindol-3-acético.Catabolismo de AIA. sólo que sería acrópeto. células no vasculares. A diferencia de la oxidación descarboxilativa. Se movilizan por los tejidos parenquimáticos. También pueden llegar a los diferentes órganos a través de los tejidos vasculares. se observa que el transporte está bloqueado. la oxidación no descarboxilativa sólo se ha podido comprobar en ciertas especies. tienen un mecanismo propio que las diferencia del resto. Las auxinas no se movilizan a largas distancias como el resto de hormonas. es decir. se produce desde el ápice hacia la base del tallo (transporte basípeto). Es específico de auxinas. Si invertimos el tallo. transcurrido un tiempo. Las mismas conclusiones sacaríamos en la raíz. por xilema o floema. asociados a los elementos conductores (células del cambium. donde se movilizan por difusión. todo el AIA radioactivo se encuentra en la base. Esta vía de transporte polar con gasto de energía se denomina transporte polar activo. Se ve que. Todas las hormonas vegetales pueden recorrer distancias cortas entre células próximas. y en la raíz la dirección es preferentemente acrópeta. La reacción da lugar al ácido 2-oxindol-3-acético y. y ninguna otra hormona lo presenta. Diseccionamos un trozo de tallo. células asociadas a floema). - 8 . Las principales características del transporte polar de auxinas son: La dirección del transporte está polarizada. Esto indica que el transporte está polarizado. desde la base de la raíz hacia el ápice. y un bloque de agar receptor en la base. Colocamos bloques de agar con AIA radioactivo en la sección que daba al ápice. La oxidación no descarboxilativa se produce en el anillo indólico de AIA sin pérdida del grupo carboxilo.

La difusión estaría favorecida por el gradiente de pH existente a ambos lados de la membrana plasmática. a nivel celular. La polaridad del transporte vendría dada por la distribución asimétrica de estos transportadores de salida que estarían localizados. se ha demostrado con la hipótesis quimiosmótica. La entrada de AIA a las células transportadoras se produciría por toda la superficie celular. en la base de las células transportadoras.5).+ H+ debido al mayor pH. La energía se necesita para mantener el gradiente de pH entre la pared celular y el interior de la célula (bombeo de protones) y para el transporte del AIA. Para que el AIA entre de forma no disociada debe existir un pH que facilite que esté en forma protonada. bien por difusión simple del AIA no disociado (AIAH). permitiría la entrada de la molécula que. se disociaría en AIA. Fuera de la célula. La membrana plasmática.Esto. una vez en el interior de la célula. permeable al AIA no disociado (AIAH). La membrana es impermeable al anión AIA-. el bajo pH de la pared regeneraría la molécula de AIA (AIAH) que. bien mediante transportadores de entrada (difusión facilitada).por el plasmalesma basal mediado por transportadores. La hipótesis quimiosmótica presupone el movimiento de AIA de una célula a la inmediatamente inferior a lo largo de una columna de células transportadoras. entraría en la célula siguiente. exclusivamente. Este gradiente de pH sería generado por bombas protónicas (H+/ATPasas de la membrana plasmática) que mantendrían un pH más bajo en la pared celular (pH = 5) que en el citoplasma (pH entre 7 y 7. De esta manera entraría sin gasto de energía en la membrana plasmática. 9 . que sólo podría salir de la célula mediante transportadores específicos. de esta forma.

Otros experimentos que avalan esta hipótesis son el uso de compuestos que pueden acoplarse con los transportadores de salida de AIA e inhibir el transporte polar. el alargamiento de raíces y de tallos. ya que las raíces tienen mayor afinidad por ellas. Se ha visto que controlan: Alargamiento o elongación de las células y. La diferenciación vascular. El transporte polar desempeña un importante papel en el modo de acción de las auxinas. cambian los niveles óptimos. por tanto. A continuación se hace una hendidura que afecta a los elementos conductores (el xilema). la zona de síntesis de la auxina ha sido eliminada. crecimiento y diferenciación de las células. u otros compuestos sintéticos. El enraizamiento de esquejes. En una yema se aplicó AIA exógeno y se vio que el xilema se diferenciaba. Efectos fisiológicos mediados por auxinas. - 10 . El transporte polar puede intervenir en procesos como: El crecimiento del tallo. División celular del cambium. la formación de raíces adventicias. La planta modula la velocidad e intensidad del transporte para que se sincronice con los niveles de auxinas necesarios en cada lugar de la planta y en cada momento. A una rama se le corta el meristemo apical. La dominancia apical. la diferenciación vascular. Van a inhibir el crecimiento al impedir que las auxinas lleguen al lugar donde son necesarias. etc. Estos compuestos pueden bloquear el transporte de forma total o parcial. Pero no van a necesitar la misma concentración de auxinas. Las auxinas están implicadas en muchos procesos del desarrollo vegetal porque afectan a la división. dependiendo de su concentración y el número de transportadores que bloqueen. Por ejemplo. los flavonoides como Genisteína o Quercetina.

colocamos auxina exógena en el ápice amputado. Dominancia apical. Si el estímulo es la luz. Si es la gravedad. se denomina gravitropismo o geotropismo. las citokininas las yemas laterales. Se vio que en las raíces verticales. comienzan a crecer yemas laterales.- - - Formación de raíces adventicias. Si tras esto. en el ovario de la flor se concentran altos niveles de auxinas y giberelinas y lo toma como señal de que ha sido fecundado. en la zona de la cofia había una serie de amiloplastos (plastos donde se acumula el almidón) dispuestos de forma uniforme sobre el RE. Esto se produce por transporte lateral de auxinas desde la zona iluminada a la no iluminada. crecen más y se produce curvatura hacia el lado iluminado. se inhibe la producción de yemas axilares y vuelve a haber dominancia apical. se vio que los amiloplastos no se disponían de forma uniforme y. Las auxinas favorecen la formación de raíces adventicias. con lo cual. A veces. la planta pierde la dominancia apical. Movimientos para alejarse o acercarse a un estímulo. desarrollando un fruto sin semillas. la zona de síntesis de auxinas. Al poco tiempo. ejerciendo una presión. se conoce como fototropismo. Las auxinas favorecen la dominancia apical. Este desequilibrio de la presión sobre el RE es una señal diferencial que hace que la auxina se distribuya de forma 11 . hay mayor nivel de auxinas en el lado que no recibe luz y. Se hicieron estudios microscópicos. Se usa en invernaderos para enraizar más rápido claveles y otras plantas ornamentales Estimulan la partenocarpia de los frutos. por eso. Los tallos presentan fototropismo positivo y las raíces fototropismo negativo. Al eliminar el ápice de una planta. Un fruto partenocárpico se ha desarrollado sin tener semillas en su interior. Están controlados por auxinas. - Tropismos. o Geotropismo. no había una presión uniforme sobre el RE. En el tallo. En las raíces obligadas a estar horizontales frente al suelo.

se produce una distribución desigual de los amiloplastos sobre el RE y se produce una diferencia de presión. Niveles tan altos inhiben el crecimiento en la mitad inferior de la célula de la raíz. en la que existe una estrecha relación entre los amiloplastos y el RE.diferente en el espacio de la raíz. El crecimiento implica una ruptura en algunos de 12 . el AIA que llega a la raíz se distribuye homogéneamente en ambas mitades de la raíz y crecen de manera sincrónica. Mecanismo de acción de las auxinas. Cuando la distribución de los amiloplastos en el RE es simétrica. El desequilibrio en la presión ejercida sobre el RE puede originar una señal diferencial correspondiente a la gravipercepción. Si obligamos a la raíz a estar paralela al suelo. sustancias pécticas y algunas proteínas estructurales. creciendo más la mitad superior. La pared celular es un entramado de fibras de celulosa unidas a hemicelulosas. Esto va a provocar una distribución diferente de AIA. que se distribuye a mucha mayor concentración en la mitad inferior que en la mitad superior.

Como la pared celular ya no tiene tanta rigidez. se deforma y permite el alargamiento. la pared primaria debe perder parte de su rigidez para que la célula pueda elongarse. 13 . y ésta a la pared celular. La vacuola presiona a la membrana plasmática. La incubación de los tejidos en medios ácidos ejerce un efecto similar al de la auxina. La auxina provoca la excreción de protones en las células que crecen (crecimiento primario). Es decir. mientras que en las dicotiledóneas probablemente tenga lugar una despolimerización en los xiloglucanos. mediada por las proteínas llamadas expansinas. La ruptura de puentes de hidrógeno entre microfibrillas de celulosa. podría ser otro mecanismo importante. mientras que la incubación en disoluciones reguladoras neutras contrarresta el efecto de las auxinas.estos enlaces para permitir la expansión celular. aumenta el volumen de la vacuola y la presión de turgencia. Hipótesis ácida del crecimiento. También se produce una entrada masiva de H2O en la célula. Para que este mecanismo tenga lugar debe producirse la unión entre la auxina y su receptor. En el caso de las monocotiledóneas parece existir una degradación en ciertos glucanos de la pared.

14 . La acción de la auxina es doble. la auxina provoca que la entrada de agua pueda alargar a la célula debilitando la pared primaria. El AIA también puede activar segundos mensajeros que activarían la síntesis de mRNA para ATPasas. por el momento. activa las ATPasas.Receptores auxínicos. La fuerza impulsora del crecimiento es la entrada de agua. Activa el bombeo de protones desde el citosol a la pared celular. La unión debe ser reversible. El pH en la pared baja. Una proteína se considera receptor auxínico cuando presenta una elevada especificidad para estas sustancias (naturales o sintéticas). y se activan las enzimas hidrolíticas que van a despolimerizar a la pared. es decir. estimulan la actividad y la síntesis de novo de las ATPasas. así como una alta afinidad. El receptor más aceptado. Es decir. es una ABP-1 (auxin binding protein 1) aislada en coleoptilos de maíz y consistente en un dímero con dos subunidades de 22 kDa cada una. Cuando la auxina se acopla con el receptor (que no se sabe si es soluble o de membrana) hay una mayor tasa de liberación de protones del citosol a la pared.