FISIOLOGÍA VEGETAL. TEMA 19. AUXINAS: INTRODUCCIÓN.

El descubrimiento de las auxinas surgió como algo colateral a otro tipo de investigaciones. Las observaciones sobre los tropismos contribuyeron al descubrimiento de las hormonas vegetales. Julius von Sachs, a finales del siglo XIX, postula la existencia de sustancias morfogenéticas, algunas sustancias químicas que eran responsables de los efectos morfogenéticos. Charles Darwin se interesa en la capacidad de movimiento que poseen las plantas y principalmente sobre el fototropismo (movimiento de las plantas hacia un estímulo luminoso) en coleoptilos de gramíneas. Boysen-Jensen provoca la curvatura en un coleoptilo decapitado, tras restituir el ápice.

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Las semillas de gramíneas, al germinar, primero emiten la radícula. Tras esto desarrollan el coleoptilo, que tiene como misión proteger a la hoja primaria. Hasta que la semilla germinada no vence la barrera del suelo, el coleoptilo protege al meristemo contenido en la hoja primaria. Una vez que la semilla sobresale, el coleoptilo se rompe, y la hoja primaria sale al exterior, se desenrolla y comienza a captar la luz (autotrofía). Alguna sustancia debía sintetizarse para regular todo este proceso. Darwin, trabajando con coleoptilos de avena, utilizó una fuente de luz lateral y vio como los coleoptilos se orientaban hacia el lado de donde provenía el foco luminoso. Cuando cortó el ápice del coleoptilo, éste no crecía hacia la luz. Lo cubrió con un material opaco, y tampoco había respuesta fototrópica hacia la luz. Sin embargo, cuando lo cubrió con un material transparente que permitía el paso de la luz, sí hubo respuesta hacia la luz. También cubrió el resto del coleoptilo, dejando libre el ápice, con un material opaco y sí había respuesta. Esto indicaba que había algo en el ápice del coleoptilo, que en presencia de luz, era responsable del movimiento dirigido hacia la luz. Boysen-Jensen cortó el ápice del coleoptilo, pero lo mantuvo interconectado al resto de la planta con agar, sí había respuesta. Hizo lo mismo pero interponiendo una lámina de mica (impermeable) entre el ápice y el resto del coleoptilo, y no había respuesta. Esto quería decir que un compuesto sintetizado por el ápice difundía al resto del coleoptilo y producía el fototropismo.

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pero la cadena lateral es un Butirato. Si lo situaba sobre un lado u otro de manera desigual. y esta diferencia de concentración de auxinas en las células produce el fototropismo. En 1946. con una cadena lateral de Acetato. provocaba una diferencia de concentración y se producía la curvatura. después se vio que eran las auxinas. ya que las células con más auxinas (zona oscura) se elongan más. La distribución de auxinas es diferente en la zona enfrentada a la luz y en la que está de cara a la oscuridad. Se detectó la presencia de AIA endógeno en el endospermo inmaduro de semillas de maíz. el primer bioensayo que permitía establecer una relación entre la cantidad de estímulo aplicado y la respuesta fisiológica observada. del griego “hacer crecer” o “incrementar” y cuya estructura química resultó ser la del ácido indolil 3-acético. W. Es un derivado clorado. Tras varios intentos. derivado del Trp.Ellos no sabían qué compuesto era. comúnmente llamado ácido indolacético o AIA. in vivo. y K. en 1928. pero no se curvaba porque la sustancia difundía por igual en los dos lados del coleoptilo. si situaba el bloque de agar de forma que cubriera todo el coleoptilo decapitado. En las plantas existen otras hormonas con efectos similares al AIA. Went decapitó un ápice de coleoptilo y lo situó sobre un bloque de agar y una fuente luminosa. lo que produce la curvatura. partiendo de orina humana. usando extractos de cultivos del hongo Rhizopus Consiguieron obtener una sustancia a la que se denominó auxina. el AIA se aisló por primera vez de plantas. Ácido 4-cloro-indolacético (en guisante). entre 1934 y 1935. Haagen-Smit y Erxleben. El compuesto presenta un núcleo indólico. Otras auxinas naturales importantes. F. Went elaboró. 2 . puso sólo el bloque sin ápice sobre el coleoptilo decapitado. Igual al AIA. En ausencia de luz pero con las sustancias que habían difundido al agar. dos grupos: Kijgl. AIA es la más importante porque está distribuida ampliamente por todo el Reino vegetal. éste se alargaba hacia arriba uniformemente. son: Ácido fenilacético (detectado en tallos de tomate y girasol). en ausencia de luz. Ácido indolbutírico (IBA). Thimann.V. Tras un tiempo.

La concentración óptima de AIA para el crecimiento en la raíz es de 10-7 g/L. Cada órgano presenta una sensibilidad diferente frente a la auxina. El AIA tiene diferentes efectos a diferentes concentraciones. La efectividad de la unión receptor-hormona.Los laboratorios han sintetizado compuestos químicos sintéticos similares. Ácido 2. Modulado por muchos factores ambientales. como son: Ácido naftalenacético (ANA).4-diclorofenoxiacético (2. Las respuestas que se producen tras la aplicación de auxinas a las plantas dependen de la concentración de hormona. La sensibilidad va a depender de: La concentración de receptores hormonales. Sensibilidad frente a las auxinas. y éstas más sensibles que los tallos. la misma concentración estimulará más o menos el crecimiento.4-D). En la raíz se estimulará más y los tallos menos. Las auxinas actúan en un rango de concentraciones hasta que llegan a un óptimo. estimular o inhibir el crecimiento (como herbicidas). así como del tipo de órgano tratado. Por ejemplo. Las raíces son más sensibles que las yemas. en función de si se trata de raíz. el óptimo está en 10-3 g/L. y tendrá diferentes efectos en órganos distintos. tallo o brote. Concentración hormonal. más allá de esta cifra se inhibe el crecimiento. 3 . Para estimular el crecimiento del tallo. para abastecer a la Agricultura. La sensibilidad de un tejido u órgano puede variar con la edad y con las condiciones ambientales. por encima de esa cifra se inhibe el crecimiento. Factores que afectan a la actividad auxínica. Esto implica que podemos utilizar las auxinas con dos finalidades. pero superado ese óptimo (en cualquier órgano) producen un efecto contrario e inhiben la elongación.

cromatografía de gases (detector: masas). al cabo de 24h. Luego hacemos un extracto de la planta que queremos estudiar. Se hacen secciones de coleoptilo de avena. la ruta del ácido indolpirúvico parte de Trp y. Metabolismo y transporte de AIA. Todas parten del Trp. Incubamos secciones de coleoptilo en ese extracto y observamos el incremento de tamaño de las secciones. La concentración de AIA que se corresponda a ese incremento en el crecimiento será la concentración de AIA presente en el extracto. es decir. podemos determinar el grado de AIA endógeno. El grado de curvatura producido en el coleoptilo va a ser proporcional a la cantidad de AIA. que la planta tenga las cantidades de AIA necesarias para el crecimiento vegetal adecuado a cada momento y cada lugar. Con esto realizamos una recta de calibrado. regulando homeostáticamente. habrán crecido más o menos. Bioensayo. Hasta hace pocos años los bioensayos eran el único método para cuantificar estas hormonas. Bioensayo. aunque no pertenece a la ruta metabólica. electroquímico y masas). Métodos físico-químicos: HPLC.Métodos para cuantificar las auxinas. También veremos el transporte. por un proceso de transaminacion se convierte en Ácido Indol-3-pirúvico. Tanto el metabolismo como el transporte van a determinar. Vamos a analizar la biosíntesis. Se van incubando secciones en distintas concentraciones de AIA. y los comparamos con la recta de calibrado. Al decapitar el coleoptilo. Para producir la curvatura. Primero se hace una recta de calibrado. Con esto realizamos una recta de calibrado. eliminamos el lugar donde se sintetiza la hormona. Inmunoensayo. Crecimiento de segmentos de coleoptilo de avena. Parece ser que la ruta mayoritaria para el AIA. Después. que se da en la mayoría de las especies. que sólo difunda a un lado del coleoptilo. es la de la parte central de la figura. colocamos bloques de agar que contenga auxina sobre la zona decapitada del coleoptilo en posición distorsionada. Test de la curvatura del coleoptilo de avena. GC. el 4 . Biosíntesis de AIA. En la mayoría de las plantas. la conjugación y el catabolismo. mediante descarboxilación. o cromatografía líquida de alta presión (detectores: fluorimétrico. Bioensayos. Se mide el grado de curvatura que induce la auxina al estar en contacto con un coleoptilo decapitado. En la actualidad existen otros métodos. Esas secciones de coleoptilo. Ahora midiendo el grado de curvatura en cualquier coleoptilo y comparando con la recta.

Ácido Indol-3-pirúvico pasa a Indol-3-acetaldehido. 5 . mediante oxidación. se transforma en Indol3-acetaldehido. El Trp sufre una descarboxilación. mediante una nitrilasa. mediante desaminación oxidativa. que va a generar Triptamina. Y ahora. Éste compuesto puede pasar directamente a Indol-3-acetonitrilo por pérdida de una molécula de H2O. Este Indol-3-acetonitrilo. pasa a Ácido Indol-3-acético. La Triptamina. el Trp sufre una descarboxilación oxidativa y se forma la Indol-3-acetaldoxima. Algunas plantas presentan la ruta de la Triptamina. el Indol-3acetaldehido pasa a Ácido Indol 3-acético. o llegar a lo mismo mediante etapas intermedias. Otra ruta minoritaria que sólo se da en las Crucíferas (Brasicaceae).

la mayor parte del AIA se encuentra en forma de conjugados. y los productos resultantes carecen de actividad biológica. y se detectan en semillas u otros órganos de almacenamiento (reserva). las estructuras conjugadas pueden actuar como un mecanismo de detoxificación para eliminar el exceso de auxina. La unión de AIA con aminoácidos se produce mediante enlaces amida. El AIA cuando se conjuga con otras proteínas conserva su estructura. pero pierde su actividad biológica. Se utiliza esta terminología para determinar todos los compuestos que se forman mediante enlaces covalentes entre el AIA y otras moléculas. Aunque estos compuestos son inactivos fisiológicamente hablando. La oxidación del AIA es un proceso catabólico irreversible. Estas estructuras conjugadas tienen otras funciones importantes. hay enzimas que pueden hidrolizar de nuevo el AIA cuando la planta requiera niveles de AIA libre. es decir. La oxidación puede ser descarboxilativa o no descarboxilativa. que implica la pérdida de la actividad biológica de la hormona. La unión con azúcares se produce mediante enlaces éster. oligosacáridos. Además. 6 . péptidos. liberando AIA fisiológicamente activo. glucosa. En algunos tejidos. para dar compuestos como el indolacetilglucósido (AIAglu). como proteger el AIA de la oxidación por peroxidasa. Este nuevo compuesto no tiene actividad biológica. como hemos dicho. Auxina ligada y auxina conjugada son sinónimas. Es frecuente la conjugación con aminoácidos. - Estos conjugados se dan como forma de almacenamiento de AIA. hidroliza los conjugados. actúan como formas de protección del AIA frente al ataque peroxidativo. Estas dos rutas son irreversibles. Cuando la célula detecta que necesita AIA libre para una etapa fisiológica determinada. Catabolismo de AIA. etc. proteínas.Conjugación de AIA. que forman compuestos como el ácido indolacetilaspártico (AIAasp). ya que a niveles elevados podían inhibir el crecimiento.

La oxidación descarboxilativa está catalizada por la AIA oxidasa. modulando la actividad de la AIA oxidasa. como los di. dando como primer producto oxindol-3-metanol. dependiendo de que la oxidación se produzca en la cadena lateral o el núcleo indólico. Resumiendo. Aceleran la degradación del AIA. En ambos casos es un proceso descarboxilativo. activándola o inhibiéndola. el H2O2.Catabolismo de AIA. 2+ 7 . Además. los monofenoles.y polifenoles (Flavonoides). Los compuestos que activan la reacción son. Estos compuestos fenólicos más complejos protegen al AIA de la AIA oxidasa. hay una oxidación. respectivamente. Otros compuestos inhiben a la enzima. que tiene actividad peroxidasa. Oxidación descarboxilativa. que puede ser en la propia cadena lateral. la descarboxilación se da en la cadena lateral. dando como primer producto indol-3-metanol. ya que algunos metabolitos secundarios como son los fenoles modulan el crecimiento. Los productos iniciales de la reacción son indol-3-metanol y oxindol-3-metanol. Esto es importante. La descarboxilación siempre se produce en la cadena lateral. en la ruta de la oxidación descarboxilativa. Hay compuestos que pueden modular la actividad catabólica de esta hormona. de forma indirecta. y algunos iones metálicos como el Mn . o en el núcleo indólico.

es decir. y en la raíz la dirección es preferentemente acrópeta. También pueden llegar a los diferentes órganos a través de los tejidos vasculares. posteriormente. y un bloque de agar receptor en la base. asociados a los elementos conductores (células del cambium. se observa que el transporte está bloqueado. siempre va desde el ápice al tallo. Las auxinas no se movilizan a largas distancias como el resto de hormonas. donde se movilizan por difusión.Catabolismo de AIA. - 8 . tienen un mecanismo propio que las diferencia del resto. Todas las hormonas vegetales pueden recorrer distancias cortas entre células próximas. células asociadas a floema). es decir. es decir. La reacción da lugar al ácido 2-oxindol-3-acético y. todo el AIA radioactivo se encuentra en la base. la oxidación no descarboxilativa sólo se ha podido comprobar en ciertas especies. Se ve que. ya que no se produce en ausencia de O2 ni en presencia de inhibidores de la síntesis de ATP. Colocamos bloques de agar con AIA radioactivo en la sección que daba al ápice. Es específico de auxinas. sólo que sería acrópeto. por xilema o floema. y ninguna otra hormona lo presenta. Si invertimos el tallo. La oxidación no descarboxilativa se produce en el anillo indólico de AIA sin pérdida del grupo carboxilo. transcurrido un tiempo. al ácido 7hidroxi-2-oxindol-3-acético. desde la base de la raíz hacia el ápice. Esta vía de transporte polar con gasto de energía se denomina transporte polar activo. Oxidación no descarboxilativa. Se movilizan por los tejidos parenquimáticos. Las mismas conclusiones sacaríamos en la raíz. A diferencia de la oxidación descarboxilativa. Transporte de AIA. Diseccionamos un trozo de tallo. El movimiento del AIA requiere energía metabólica. se produce desde el ápice hacia la base del tallo (transporte basípeto). Las principales características del transporte polar de auxinas son: La dirección del transporte está polarizada. Esto indica que el transporte está polarizado. células no vasculares.

entraría en la célula siguiente. La entrada de AIA a las células transportadoras se produciría por toda la superficie celular. una vez en el interior de la célula.+ H+ debido al mayor pH. a nivel celular. el bajo pH de la pared regeneraría la molécula de AIA (AIAH) que. en la base de las células transportadoras. La polaridad del transporte vendría dada por la distribución asimétrica de estos transportadores de salida que estarían localizados. permeable al AIA no disociado (AIAH). La energía se necesita para mantener el gradiente de pH entre la pared celular y el interior de la célula (bombeo de protones) y para el transporte del AIA. La membrana es impermeable al anión AIA-. Fuera de la célula. De esta manera entraría sin gasto de energía en la membrana plasmática. 9 . Para que el AIA entre de forma no disociada debe existir un pH que facilite que esté en forma protonada.5). se disociaría en AIA. La hipótesis quimiosmótica presupone el movimiento de AIA de una célula a la inmediatamente inferior a lo largo de una columna de células transportadoras. bien por difusión simple del AIA no disociado (AIAH). exclusivamente. bien mediante transportadores de entrada (difusión facilitada).Esto. La membrana plasmática. se ha demostrado con la hipótesis quimiosmótica. permitiría la entrada de la molécula que. La difusión estaría favorecida por el gradiente de pH existente a ambos lados de la membrana plasmática. Este gradiente de pH sería generado por bombas protónicas (H+/ATPasas de la membrana plasmática) que mantendrían un pH más bajo en la pared celular (pH = 5) que en el citoplasma (pH entre 7 y 7.por el plasmalesma basal mediado por transportadores. de esta forma. que sólo podría salir de la célula mediante transportadores específicos.

En una yema se aplicó AIA exógeno y se vio que el xilema se diferenciaba. El transporte polar puede intervenir en procesos como: El crecimiento del tallo. la zona de síntesis de la auxina ha sido eliminada. la diferenciación vascular. los flavonoides como Genisteína o Quercetina. - 10 . Van a inhibir el crecimiento al impedir que las auxinas lleguen al lugar donde son necesarias. Efectos fisiológicos mediados por auxinas.Otros experimentos que avalan esta hipótesis son el uso de compuestos que pueden acoplarse con los transportadores de salida de AIA e inhibir el transporte polar. cambian los niveles óptimos. crecimiento y diferenciación de las células. La diferenciación vascular. Se ha visto que controlan: Alargamiento o elongación de las células y. Las auxinas están implicadas en muchos procesos del desarrollo vegetal porque afectan a la división. La planta modula la velocidad e intensidad del transporte para que se sincronice con los niveles de auxinas necesarios en cada lugar de la planta y en cada momento. El transporte polar desempeña un importante papel en el modo de acción de las auxinas. por tanto. La dominancia apical. A una rama se le corta el meristemo apical. Estos compuestos pueden bloquear el transporte de forma total o parcial. El enraizamiento de esquejes. ya que las raíces tienen mayor afinidad por ellas. A continuación se hace una hendidura que afecta a los elementos conductores (el xilema). dependiendo de su concentración y el número de transportadores que bloqueen. División celular del cambium. la formación de raíces adventicias. u otros compuestos sintéticos. Por ejemplo. el alargamiento de raíces y de tallos. Pero no van a necesitar la misma concentración de auxinas. etc.

colocamos auxina exógena en el ápice amputado. A veces. se vio que los amiloplastos no se disponían de forma uniforme y. ejerciendo una presión. o Geotropismo. comienzan a crecer yemas laterales. Si es la gravedad. por eso. Se usa en invernaderos para enraizar más rápido claveles y otras plantas ornamentales Estimulan la partenocarpia de los frutos. la planta pierde la dominancia apical. Movimientos para alejarse o acercarse a un estímulo. Dominancia apical. en la zona de la cofia había una serie de amiloplastos (plastos donde se acumula el almidón) dispuestos de forma uniforme sobre el RE. Los tallos presentan fototropismo positivo y las raíces fototropismo negativo. Al eliminar el ápice de una planta. en el ovario de la flor se concentran altos niveles de auxinas y giberelinas y lo toma como señal de que ha sido fecundado. En las raíces obligadas a estar horizontales frente al suelo. Se vio que en las raíces verticales.- - - Formación de raíces adventicias. con lo cual. Las auxinas favorecen la dominancia apical. se denomina gravitropismo o geotropismo. crecen más y se produce curvatura hacia el lado iluminado. se conoce como fototropismo. hay mayor nivel de auxinas en el lado que no recibe luz y. Un fruto partenocárpico se ha desarrollado sin tener semillas en su interior. desarrollando un fruto sin semillas. Si tras esto. En el tallo. Si el estímulo es la luz. Este desequilibrio de la presión sobre el RE es una señal diferencial que hace que la auxina se distribuya de forma 11 . Esto se produce por transporte lateral de auxinas desde la zona iluminada a la no iluminada. se inhibe la producción de yemas axilares y vuelve a haber dominancia apical. no había una presión uniforme sobre el RE. - Tropismos. Las auxinas favorecen la formación de raíces adventicias. Están controlados por auxinas. Al poco tiempo. la zona de síntesis de auxinas. Se hicieron estudios microscópicos. las citokininas las yemas laterales.

Cuando la distribución de los amiloplastos en el RE es simétrica. Niveles tan altos inhiben el crecimiento en la mitad inferior de la célula de la raíz. creciendo más la mitad superior. en la que existe una estrecha relación entre los amiloplastos y el RE.diferente en el espacio de la raíz. La pared celular es un entramado de fibras de celulosa unidas a hemicelulosas. Si obligamos a la raíz a estar paralela al suelo. El desequilibrio en la presión ejercida sobre el RE puede originar una señal diferencial correspondiente a la gravipercepción. Esto va a provocar una distribución diferente de AIA. que se distribuye a mucha mayor concentración en la mitad inferior que en la mitad superior. el AIA que llega a la raíz se distribuye homogéneamente en ambas mitades de la raíz y crecen de manera sincrónica. El crecimiento implica una ruptura en algunos de 12 . sustancias pécticas y algunas proteínas estructurales. se produce una distribución desigual de los amiloplastos sobre el RE y se produce una diferencia de presión. Mecanismo de acción de las auxinas.

aumenta el volumen de la vacuola y la presión de turgencia. Hipótesis ácida del crecimiento. mediada por las proteínas llamadas expansinas. Para que este mecanismo tenga lugar debe producirse la unión entre la auxina y su receptor. se deforma y permite el alargamiento. Es decir.estos enlaces para permitir la expansión celular. La vacuola presiona a la membrana plasmática. La ruptura de puentes de hidrógeno entre microfibrillas de celulosa. la pared primaria debe perder parte de su rigidez para que la célula pueda elongarse. podría ser otro mecanismo importante. mientras que la incubación en disoluciones reguladoras neutras contrarresta el efecto de las auxinas. En el caso de las monocotiledóneas parece existir una degradación en ciertos glucanos de la pared. Como la pared celular ya no tiene tanta rigidez. La auxina provoca la excreción de protones en las células que crecen (crecimiento primario). 13 . y ésta a la pared celular. También se produce una entrada masiva de H2O en la célula. mientras que en las dicotiledóneas probablemente tenga lugar una despolimerización en los xiloglucanos. La incubación de los tejidos en medios ácidos ejerce un efecto similar al de la auxina.

Es decir. Activa el bombeo de protones desde el citosol a la pared celular. es una ABP-1 (auxin binding protein 1) aislada en coleoptilos de maíz y consistente en un dímero con dos subunidades de 22 kDa cada una. por el momento. es decir. estimulan la actividad y la síntesis de novo de las ATPasas. 14 . La fuerza impulsora del crecimiento es la entrada de agua. la auxina provoca que la entrada de agua pueda alargar a la célula debilitando la pared primaria. Cuando la auxina se acopla con el receptor (que no se sabe si es soluble o de membrana) hay una mayor tasa de liberación de protones del citosol a la pared.Receptores auxínicos. El receptor más aceptado. así como una alta afinidad. El pH en la pared baja. activa las ATPasas. El AIA también puede activar segundos mensajeros que activarían la síntesis de mRNA para ATPasas. La unión debe ser reversible. La acción de la auxina es doble. Una proteína se considera receptor auxínico cuando presenta una elevada especificidad para estas sustancias (naturales o sintéticas). y se activan las enzimas hidrolíticas que van a despolimerizar a la pared.

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