PARA QU SE REALIZA LA TINCIN DE BACTERIAS?

Principalmente porque la mayora de las bacterias son demasiado pequeas. Tanto que son difciles de ver con el microscopio ptico. Una de las dificultades, es que las bacterias no pueden diferenciarse del medio que las rodea, por lo que la forma de solucionarlo es usando algunos colorantes. Para realizar la tincin deben preparase las bacterias. Esto significa que deben tratarse en cuanto a un mtodo: *Fijacin: se refiere a fijar las bacterias en un portaobjetos antes de empezar a teirlas. Esta fijacin se realiza mediante el uso de calor. Pero tambin pueden fijarse mediante sustancias qumicas. La mayora de los colorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los cidos nucleicos y los polisacridos cidos. Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son molculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. El reverso de esta tincin usual, es la tincin negativa, que es en este caso, dejar las clulas sin color, pero colorear el medio. Entonces solo se ve el perfil de las clulas. El colorante para esta accin no tiene ninguna afinidad por los constituyentes celulares, simplemente rodea las clulas, y un ejemplo de estos colorantes es la tinta china.

Preparacin de un frotis
Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y seco, se coloca una gota del material que se va a teir (si es lquido) o se hace rodar el hisopo con que se tom la muestra. Una vez que el hisopo ha tocado la superficie del portaobjetos, que no est estril, ya no puede ser empleado para inocular los medios de cultivo. Puede usarse una aguja estril para transferir una pequea cantidad de un cultivo bacteriano a la superficie del portaobjetos. Este material es suspendido en una gota de agua o solucin salina previamente colocada sobre el portaobjetos. Cuando se trata de colonias muy pequeas que pueden perderse en una gota de lquido se emplea una varilla delgada de madera estril con la cual se toca la colonia obtenindose as una fraccin apreciable del desarrollo. El material se frota directamente sobre el portaobjetos, donde puede visualizarse con facilidad. El material colocado en el portaobjetos se deja secar al aire o bien se pasa varias veces por la zona azul de la llama de un mechero de Bunsen hasta que el vidrio est tan caliente que moleste al tacto pero no queme.

EXAMENES DE MUESTRAS DE TINCIN EN EL MICROSCOPIO

SIN TINCIN

TINCIN SIMPLE

La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes en el laboratorio bacteriolgico. Descrita en forma breve, la secuencia de la tincin es la siguiente: *El Frotis fijado con calor se tie 1 min con Violeta Cristal, se lava con agua, se cubre con solucin Yodada durante 1 min y se lava de nuevo con agua. *Decolorar con mezcla alcohol etlico/acetona. *Escurrir y cubrir con Safranina (color de contraste) durante 20 seg. Lavar y secar. Las clulas fijadas al calor sobre un portaobjetos se tien, primero con una solucin de cristal violeta y son lavadas despus para quitar el exceso de colorante. En este estado, todas las clulas, tanto las gram positivas como las gram negativas, estn teidas de azul. El portaobjetos se cubre entonces con una solucin de yodo-yoduro potsico. El I2 entra en las clulas y forma un complejo insoluble en agua con el cristal violeta. De nuevo tanto las clulas gram positivas como las gram negativas se encuentran en la misma situacin. Se lleva a cabo despus la decoloracin, usando una mezcla de alcoholacetona, sustancias en las que es soluble el complejo I2-cristal violeta. Algunos organismos (gram positivos) no se decoloran, mientras que otros (gramnegativos) lo hacen. La diferencia esencial entre esos dos tipos de clulas est por tanto en su resistencia a la decoloracin. Despus de la decoloracin las clulas gram positivas son todava azules, pero las gram negativas son incoloras. Para poner de manifiesto las clulas gram negativas coloracin de contraste. Habitualmente es un colorante como la safranina o la fucsina bsica. Despus de la contraste las clulas gram negativas son rojas, mientras positivas permanecen azules. se utiliza una de color rojo, coloracin de que las gram

Deben destacarse algunos aspectos cruciales de la tincin de Gram: 1) El tratamiento con cristal violeta debe preceder al tratamiento con yodo. El yodo por s solo tiene poca afinidad con las clulas. 2) La decoloracin debe realizarse con poca agua para evitar que pierdan la tincin las clulas gram positivas. EI proceso de decoloracin debe ser corto y es esencial un clculo preciso del tiempo para obtener resultados satisfactorios. 3) Cultivos ms viejo de 24 horas puede perder su habilidad de retener el complejo cristal violeta-yodo.

PROCESO DE TINCIN

VIDEO: Cmo realizar una tincin gram http://www.youtube.com/watch?v=kgs9IGdsJy8