DETERMINACION DE BACTERIAS COLIFORMES

Las bacterias coliformes son un grupo heterogneo compuesto por varios. El grupo de bacterias coliformes totales comprende todos los bacilos Gramnegativos aerobios o anaerobios facultativos, no esporulados, que fermentan la lactosa con produccin de gas en un lapso mximo de 48 h. a 35C 1C. grupo esta conformado por 4 gneros principalmente: Enterobacter, Escherichia, Citrobacter y Klebsiella. El grupo de coliformes fecales, est constituido por bacterias Gram-negativas capaces de fermentar la lactosa con produccin de gas a las 48 h. de incubacin a 44.5 0.1C. Este grupo no incluye una especie determinada, sin embargo la ms prominente es Escherichia coli. La demostracin y el recuento de organismos coliformes, puede realizarse mediante el empleo de medios de cultivo lquidos y slidos con caractersticas selectivas y diferenciales Prueba del nmero ms probable (NMP) para recuento de coliformes totales

El procedimiento comprende las pruebas: 1. presuntiva, de confirmacin de coliformes totales y 2. De confirmacin de coliformes fecales. Esta prueba se utiliza en muestras con baja densidad de microorganismos.

DETERMINACIN DEL NMP DE COLIFORMES EN AGUA Y HIELO POTABLES

1.1.- Prueba presuntiva Agitar la muestra y transferir volmenes , a cada uno de los tubos con caldo lauril sulfato de sodio que se hayan seleccionado. Agitar los tubos para homogeneizar la muestra.

Incubar los tubos a 35 0,5C. Examinar los tubos a las 24 h. y observar si hay formacin de gas (desplazamiento del medio en la campana de Durham); si no se observa produccin de gas, incubar 24 h. ms. 1.2.- Prueba confirmativa de microorganismos coliformes totales Transferir de 2 a 3 asadas de cada tubo positivo obtenido durante la prueba presuntiva, a otro tubo de 16 x150 mm que contiene caldo de bilis verde brillante (brila), con campana de Durham. Agitar los tubos para su homogeneizacin. Incubar a 35 2C durante 24 a 48 h.. Registrar como positivos aquellos tubos en donde se observe turbidez (crecimiento) y produccin de gas despus de un perodo de incubacin de 24 a 48 h.. Consultar la tabla 1 2 de NMP para conocer el nmero ms probable de organismos coliformes totales/100 mL 1.3 Prueba confirmativa de microorganismos coliformes fecales. Transferir de 2 a 3 asadas de cada tubo positivo obtenido durante la prueba presuntiva (caldo lauril sulfato de sodio) a un tubo de 16 x 150 mm, con caldo EC conteniendo campana de Durham. Agitar los tubos para su homogeneizacin. Incubar a 44.5 0.1C en incubadora o un bao de agua durante 24 a 48 h. Registrar como positivos todos los tubos en donde se observe crecimiento y

produccin de gas despus de un perodo de incubacin de 24 a 48 h. Consultar la tabla 1 2 de NMP para conocer el nmero ms probable de organismos coliformes fecales/ 100 mL.

DETERMINACIN DEL NMP DE COLIFORMES EN MUESTRAS SLIDAS O ALIMENTOS

2.1 Preparacin de la muestra. Moler 10.0 gramos de la muestra en un picador 2 veces o con cubiertos estriles y mezclar. Adicionar el alimento a 90.0 mL de agua peptonada al 0.1 %, licuar y dejar en reposo de 2-3 minutos. Realizar diluciones hasta 10- 3 g/mL con agua peptonada al 0.1 %. En caso de trabajar con muestras congeladas, descongelarlas previamente entre 2 y 5 C.

2.1.1 Prueba presuntiva. Aadir 1.0 mL de la dilucin 10- 1 g/mL a cada uno de 3 tubos con 10.0 mL de caldo lauril sulfato de sodio.
Aadir 1.0 mL de las diluciones 102

g/mL y 10- 3 g/mL a dos series de 3 tubos cada una

con caldo lauril sulfato de sodio. Incubar a 35-37C durante 24-48 h. Los tubos despus de la incubacin, se registrarn como positivos si presentan crecimiento y produccin de gas. 2.2 Prueba confirmativa de microorganismos coliformes totales
Transferir de 2 a 3 asadas de cada tubo positivo obtenido durante la prueba presuntiva a otro tubo de 16 x 150 mm que contiene caldo de bilis verde brillante (brila), con campana de Durham.

Agitar los tubos para su homogeneizacin. Incubar a 35 2C durante 24 a 48 h. Registrar como positivos aquellos tubos en donde se observe crecimiento y produccin de gas, despus de un perodo de incubacin de 24 a 48 h. Consultar las tablas de NMP que se encuentran en el anexo para conocer el nmero ms probable de organismos coliformes totales por mL. 2.3 Prueba confirmativa de microorganismos coliformes fecales. Transferir de 2 a 3 asadas de cada tubo positivo obtenido durante la prueba presuntiva (caldo lauril sulfato de sodio) a un tubo de 16 x 150 mm, con caldo EC conteniendo campana de Durham.

 Agitar los tubos para su homogeneizacin. Incubar a 44.5 0.1C en incubadora o un bao de agua durante 24 a 48 h. Registrar como positivos todos los tubos en donde se observe turbidez y produccin de gas despus de un perodo de incubacin de 24 a 48 h. Consultar la tabla de NMP (ANEXO) para conocer el nmero ms probable de organismos coliformes fecales por mL. http://www.unad.edu.co/fac_ingenieria/pages/Microbiologia_mutimedia/4_1tomamuestras.htm http://depa.pquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Colif-tot-fecales-Ecoli-NMP_6529.pdf

ARTICULO DE INTERS
ESTADOS UNIDOS: ESTUDIO HALLA BACTERIAS COLIFORMES EN 39% DE LAS MUESTRAS DE ENSALADAS ENVASADAS En un estudio sobre ensaladas envasadas realizado en Estados Unidos, 39% de las muestras se encontraron bacterias indicadoras de un estado sanitario deficiente y de contaminacin fecal (recordad el caso de los dispensadores de bebidas). El estudio en cuestin fue realizado por la organizacin Consumer Reports y ser publicado en revista, la Consumer Reports Magazine, en el nmero de marzo. Se utiliz una muestra de 208 contenedores de 16 marcas, compradas en tiendas de los estados de Connecticut, Nueva Jersey y Nueva York. En dicha muestra se busc la presencia de bacterias coliformes totales y otras, incluyendo enterococos, que son indicadores de contaminacin fecal. Los expertos consultados por la organizacin sugirieron que para las verduras de hoja, un nivel inaceptable de coliformes totales y enterococos es de 10 mil o ms unidades formadoras de colonias por gramo. En las pruebas, 39% de las muestras super ese nivel de coliformes totales y 23% los enterococos. De los paquetes con mayores niveles de bacterias muchos contenan espinaca y estaban entre uno y cinco das de su fecha de caducidad. Que fuesen orgnicos o incluyesen brotes tiernos no hizo ninguna diferencia. En la edicin de mayo de 2001 de la revista Consumer se public un artculo sobre las ensaladas envasadas que, entre otros factores, analizaba la higiene de ocho ensaladas envasadas de cuatro marcas distintas. Seis de ellas sobrepasaban el mximo de aerobios mesfilos que admite la norma

sanitaria, aunque ello no entraaba riesgo alguno para el consumidor. En general, se calificaba su estado sanitario como muy mejorable.

Referencias bibliogrficas http://www.salud.gob.mx/unidades/cdi/nom/112ssa14.html http://www.unad.edu.co/fac_ingenieria/pages/Microbiologia_mutimedia/4_1tomamuestras.htm http://es.scribd.com/doc/6456981/Microbiologia-de-Alimentos-Practica-N-05-Determinacion-decoliformes-totales-y-fecales http://depa.pquim.unam.mx/amyd/archivero/TecnicBasicas-Colif-tot-fecales-Ecoli-NMP_6529.pdf