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Inmunologa

Publicacin oficial de la Sociedad Espaola de Inmunologa


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ERGON CREACIN S.A. Arboleda 1, 28221 Majadahonda (Madrid) Publicacin autorizada por el Ministerio de Sanidad como Soporte Vlido: Ref. N 288 ISSN: 0213-9626 Depsito legal: M-53681-2002

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SUMARIO
PROGRAMA CIENTFICO . . . . . . . . . . . . . . . . 6 COMUNICACIONES ORALES . . . . . . . . . . . 15 Sesin 1: Autoinmunidad - I . . . . . . . . . . . . . . . 15

Vol. 27, Supl. 1, Mayo 2008

Sesin 7: Inmunologia tumoral - II . . . . . . . . . 37 Moderadores: Federico Garrido, Luis lvarez Vallina Sesin 8: Inmunidad e infeccin . . . . . . . . . . . 40

Moderadores: Joana Ferrer, Julia Sequ Moderadores: Francisco Lozano, Margarita Bofill Sesin 2: Inmunogentica . . . . . . . . . . . . . . . . 19 Sesin 9: Clulas dendrticas . . . . . . . . . . . . . . 43 Moderadores: Estela Paz Artal, Jordi Yage Moderadores: ngel Corb, Francisco Borrs Sesin 3: Inmunologa y trasplante . . . . . . . . . 21 Sesin 10: Clulas T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 46 Moderadores: Joan Mil, Alfredo Minguela Moderadores: Manel Juan, M Luisa Toribio Sesin 4: Inmunologa tumoral - I . . . . . . . . . 25 Moderadores: Francisco Ruiz-Cabello, Ignacio Melero Sesin 5: Inmunodeficiencias: alergia y complemento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 29 Moderadores: Margarita Lpez-Trascasa, Nria Matamoros Sesin 6: Clulas B y NK . . . . . . . . . . . . . . . . . . 34 Moderadores: frica Gonzlez, Miguel Lpez-Botet Sesin 2: Inmunogentica . . . . . . . . . . . . . . . . . 62 Moderadores: Estela Paz Artal, Jordi Yage Sesin 11: Autoinmunidad - II . . . . . . . . . . . . . 48 Moderadores: Carmen Gelp, M Rosa Juli

POSTERS . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 55 Sesin 1: Autoinmunidad - I . . . . . . . . . . . . . . . 55 Moderadores: Joana Ferrer, Jlia Sequ

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SUMARIO
Sesin 3: Inmunologa y trasplante . . . . . . . . . 66 Moderadores: Joan Mil, Alfredo Minguela Sesin 4: Inmunologa tumoral - I . . . . . . . . . 72 Moderadores: Francisco Ruiz-Cabello, Ignacio Melero Sesin 5: Inmunodeficiencias: alergia y complemento . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 75 Moderadores: Nria Matamoros, Margarita Lpez-Trascasa Sesin 6: Clulas B y NK . . . . . . . . . . . . . . . . . 85 Moderadores: frica Gonzlez, Miguel Lpez-Botet Sesin 7: Inmunologa tumoral - II . . . . . . . . . 90 Moderadores: Luis lvarez Vallina, Federico Garrido

Vol. 27, Supl. 1, Mayo 2008

Sesin 8: Inmunidad e infeccin . . . . . . . . . . . 96 Moderadores: Francisco Lozano, Margarita Bofill Sesin 9: Clulas dendrticas . . . . . . . . . . . . . 104 Moderadores: ngel Corb, Francisco Borrs Sesin 10: Clulas T . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 107 Moderadores: Manel Juan, M Luisa Toribio Sesin 11: Autoinmunidad - II . . . . . . . . . . . . 114 Moderadores: M Rosa Juli, Carmen Gelp

ndice de Autores . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . 121

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PROGRAMA CIENTFICO
MIRCOLES, 21 DE MAYO 10.00-14.00 ENTREGA DE DOCUMENTACIN COLOCACIN DE PSTERS (Sala Termas) 1. Autoinmunidad I 2. Inmunogentica REUNIN DE LA JUNTA DIRECTIVA TALLER DE INMUNOQUMICA (Sala Ramn Llull) Coordinadores: Cndido Jurez, Hospital Sant Pau (Barcelona). Juan Jos Rodrguez Molina, Hospital G. Universitario Gregorio Maran (Madrid). Julia Sequi Navarro, Hospital Carlos III (Madrid). Luisa M Villar, Hospital Ramn y Cajal (Madrid) TALLER DE AUTOINMUNIDAD (Sala Luis de Molina A) Coordinadores: Rita lvarez, Hospital Universitario La Paz (Madrid). Marcos Lpez Hoyos, Hospital Universitario Marqus de Valdecilla (Santander) SIMPOSIUM DIASORIN: ENFERMEDAD CELACA (Sala Magna) Inmunopatogenia de la enfermedad celaca Eduardo Arranz, Universidad de Valladolid, Presidente de la Sociedad Espaola de Enfermedad Celaca. La deteccin de la enfermedad celaca, una labor multidisciplinar Carme Farr, Hospital Sant Joan de Deu (Barcelona) CONFERENCIA INAUGURAL (Sala Magna) Complexity and complementarity of cellular and humoral innate immunity Alberto Mantovani. Instituto Clinico Humanitas (Miln) BIENVENIDA E INAUGURACIN OFICIAL (Sala Magna) Cctel de bienvenida JUEVES, 22 DE MAYO 08.30-10.00 COLOCACIN DE PSTERS (Sala Termas) 1. Autoinmunidad I 2. Inmunogentica

13.00-14.00 15.00-16.15

16.15-17.30

17.30-19.00

19.00-20.00

20.00

PROGRAMA CIENTFICO
09.00-11.00 SIMPOSIUM PLENARIO: INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS (Sala Magna) Patrocinador: BAXTER Emilio Gmez de la Concha. Hospital Clnico San Carlos (Madrid) Common Variable Immunodeficiency-genetic dissection of a complex disorder Ulric Salzer. University Hospital Friburgo Sndromes de hiper-IgM Mari Cruz Garca. Hospital Universitario la Paz (Madrid) Mecanismos etiopatognicos de un nuevo grupo de inmunodeficiencias primarias. Enfermedades autoinflamatorias sistmicas Jordi Yage. Hospital Clnico (Barcelona) Up to date: REDIP: Registro Espaol de inmunodeficiencias primarias Natalia Martnez Pomar. Hospital Universitario Son Dureta (Palma de Mallorca) CAF Y VISITA A PSTERS 1. Autoinmunidad I 2. Inmunogentica COMUNICACIONES ORALES 1. AUTOINMUNIDAD I (Sala Luis de Molina A) Moderadores: Joana Ferrer (Palma de Mallorca). Julia Sequi (Madrid) COMUNICACIONES ORALES 2. INMUNOGENTICA (Sala Ramon Llull) Moderadores: Estela Paz Artal (Madrid). Jordi Yage (Barcelona) TALLER HLA (Sala Luis de Molina B) Coordinadores: M Rosario De Pablo y Carlos Vilches, Hospital Puerta de Hierro (Madrid). Jos Luis Vicario, Centro Regional de Transfusiones (Madrid) SIMPOSIUM BECTON DICKINSON (Sala Magna) ALGO MS EN HIV? Actualizacin en los aspectos patognicos de la infeccin por HIV Rosa Garca Delgado, Servicio de Inmunologa. Fundacin Jimnez Daz (Madrid) Vacunas teraputicas en HIV. Perspectivas actuales y futuras Montse Plana. Grupo de Investigacin de Enfermedades Infecciosas. Hospital Clnic/ IDIBAPS (Barcelona) INMUNIDAD Y ADHESIN Dianas y Terapias anti-adhesin en enfermedades autoinmunes y neurodegenerativas Francisco Snchez Madrid, Servicio de Inmunologa. Hospital La Princesa (Madrid) 13.30-15.00 15.00-16.30 ALMUERZO DE TRABAJO SIMPOSIUM PLENARIO CONJUNTO: INMUNIDAD INNATA (1 PARTE) (Sala Magna) Societ Italiana Immunologia, Immunologia Clinica e Allergologia y Sociedad Espaola de Inmunologa. Moderadores: Miguel Lpez-Botet, IMIM-Hospital del Mar (Barcelona). Francisco Lozano, Hospital Clnic (Barcelona) Epithelial cell-dendritic cell cross-talk in bacterial handling Mara Rescigno. Department of Experimental Oncology. European Institute of Oncology (Milan) Gene expression profiling on human macrophages: identification of LSECtin as a novel pathogen-attachement factor in alternatively activated macrophages Angel Corb. Centro de Investigaciones Biolgicas. CSIC (Madrid) Advances in neutrophil-derived cytokines Marco Cassatella, Department of Pathology. University of Verona (Italy) CAF Y VISITA A PSTERS

11.00-12.00

12.00-13.30

16.30-17.00

PROGRAMA CIENTFICO
17.00 -19.00 SIMPOSIUM PLENARIO CONJUNTO: INMUNIDAD INNATA (2 PARTE) (Sala Magna) Societ Italiana Immunologia, Immunologia clinica e Allergologia y Sociedad Espaola de Inmunologa NK cells at the interface between innate and adaptative immunity Alessandro Moretta, Molecular Immunology Laboratories. University of Genova (Italy) Negative regulation of macrophage activation Lisardo Bosc. Instituto de Investigaciones Biomdicas Alberto Sols (Madrid) Matricellular protein SPARC at the interface of macrophage-tumor cell interaction Mario Colombo. Fondazione IRCCS. Istituto Nazionale Tumori (Italy) ACTIVIDAD LDICO-CULTURAL Visita guiada a la Catedral de Palma de Mallorca. VIERNES, 23 DE MAYO 08.30-10.00 COLOCACIN DE PSTERS (Sala Termas) 3. Inmunologa y trasplante 4. Inmunologa tumoral I 5. Inmunodeficiencias, alergia y complemento 6. Clulas B y NK 7. Inmunologa tumoral II VOTACIONES SEI SIMPOSIUM PLENARIO: HOMENAJE AL PROFESOR JEAN DAUSSET (Sala Magna) Moderadora: Roco lvarez. Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca (Murcia) Jean Dausset. Un visionario del siglo XX Edgardo Carosella, Hospital Saint Louis (Paris) La serologa HLA como fundamento del trasplante Guadalupe Ercilla. Hospital Clnic (Barcelona) Papel de los sistemas menores de histocompatibilidad en los trasplantes de rganos slidos Antonio Nez. Hospital Virgen del Roco (Sevilla) De la supresin de la respuesta alognica in vitro al estudio del proceso de tolerancia en trasplantes Roco Alvarez. Hospital Virgen de la Arrixaca (Murcia) Functional characterization of killer cell Ig-like receptors expressed by normal and malignant human CD4+ T lymphocytes Armand Bensussan. Directeur de Dpartement. INSERM U841. Facult de Mdecine de Crteil. Prsident de la Socit Franaise dImmunologie (Pars) SIMPOSIUM IZASA (Sala Luis de Molina A) La tecnologa de los tetrmeros de CMH: herramientas para el estudio de la respuesta T especfica Flix A. Montero-Julian. Directeur du Departement Analyse Cellulaire. Beckman Coulter Immunotech (Marseille) Flow Cytometric Analysis of Signal Transduction Pathways T. Vincent Shankey. Advanced Technology Center. Beckman Coulter, Inc. (Miami) Clulas Madre Hematopoyticas: algo ms que hematopoyesis Jos Carlos Segovia Sanz. Jefe de la Unidad de Diferenciacin y Citometra. Divisin de Hematopoyesis. CIEMAT (Madrid)

19.00

12.00-13.30 15.00-17.00 09.00-11.00

09.00-10.30

PROGRAMA CIENTFICO
11.00-12.00 CAF Y VISITA PSTERS (Sala Termas) 3. Inmunologa y trasplante 4. Inmunologa tumoral I 5. Inmunodeficiencias, alergia y complemento SIMPOSIUM ANLISIS Y GENTICA (Sala Ramon Llull) Designers antigens as diagnostic targets for autoantibody determination W. Schlumberguer. Member of Board of Directors. Division Immunobiochemical Diagnostics. Euroimmun (Lbeck) COMUNICACIONES ORALES 3. INMUNOLOGA Y TRASPLANTE (Sala Luis de Molina B) Moderadores: Joan Mil (Palma de Mallorca). A. Minguela (Murcia) COMUNICACIONES ORALES 4. INMUNOLOGA TUMORAL I (Sala Ramon Llull) Moderadores: I. Melero (Navarra). Francisco Ruiz-Cabello (Granada) COMUNICACIONES ORALES 5. INMUNODEFICIENCIAS, ALERGIA Y COMPLEMENTO (Sala Luis de Molina A) Moderadores: Margarita Lpez Trascasa (Madrid). Nria Matamoros (Palma de Mallorca) MESA REDONDA: PROTOCOLOS CLNICOS EN AUTOINMUNIDAD Consenso europeo. Experiencias espaolas (Sala Magna) Moderadora: Mara Rosa Juli (Palma de Mallorca) Comits de enfermedades autoinmunes en los hospitales: una utopa que puede ser realidad Lucio Pallars, Servicio Medicina Interna. Hospital Universitario Son Dureta (Palma de Mallorca) Grupo de trabajo en autoinmunidad: Propuestas y posibilidades Aresio Plaza. Servicio Inmunologa. Hospital Puerta de Hierro (Madrid) Protocolos clnicos en autoinmunidad: nuestra experiencia M Rosa Juli. Servicio Inmunologa. Hospital Universitario Son Dureta (Palma de Mallorca) 13.30- 15.00 15.00-16.30 ALMUERZO DE TRABAJO COMUNICACIONES ORALES 6. CLULAS B Y NK (Sala Luis de Molina B) Moderadores: frica Gonzlez (Vigo), Miguel Lpez-Botet (Barcelona) COMUNICACIONES ORALES 7. INMUNOLOGA TUMORAL II (Sala Ramon Llull) Moderadores: Luis lvarez-Vallina (Madrid), Federico Garrido (Granada) SIMPOSIUM MENARINI: INMUNOLOGA OCULAR (Sala Magna) Moderadores: Jos M Garca Ruiz de Morales (Len). Autoimmunity in the eye: pathogenic and regulatory T cells Rachel Caspi. Laboratory Immunology. NEI. NIH (Bethesda) Protocolos clnicos en uveitis Jos Luis Olea. Servicio Oftalmologa. Hospital. Universitario Son Dureta (Palma de Mallorca) Uveitis autoinmune: avances en el diagnstico e inmunoterapia Jos M Garca Ruiz de Morales. Servicio Inmunologa Hospital de Len / Laboratory Immunology. NEI. NIH (Bethesda) TALLER DE CITOMETRA (Sala Luis de Molina A) Coordinadores: Natalia Maruri, Hospital de Cruces (Bilbao). Francisco Ruiz-Cabello (Granada) 16.30-17.00 17.00-18.30 21.00 CAF Y VISITA A PSTERS ASAMBLEA DE LA SEI (Sala Magna) CENA DE CLAUSURA Autobuses hoteles

11.15-12.00

12.00-13.30

PROGRAMA CIENTFICO
SBADO, 24 DE MAYO 08.30-10.00 COLOCACIN DE PSTERS (Sala Termas) 8. Inmunidad e infeccin 9. Clulas dendrticas 10. Clulas T 11. Autoinmunidad II COMUNICACIONES ORALES 8. INMUNIDAD E INFECCIN (Sala Luis de Molina A) Moderadores: Margarita Bofill (Barcelona). Francisco Lozano (Barcelona) COMUNICACIONES ORALES 9. CLULAS DENDRTICAS (Sala Ramon Llull) Moderadores: Francisco Borrs (Barcelona). Angel Corb (Madrid) COMUNICACIONES ORALES 10. CLULAS T (Sala Luis de Molina B) Moderadores: Manel Juan (Barcelona). M Luisa Toribio (Madrid) COMUNICACIONES ORALES 11. AUTOINMUNIDAD II (Sala Magna) Moderadores: Carmen Gelp (Barcelona). M Rosa Juli (Palma de Mallorca) MESA REDONDA: PRESENTE Y FUTURO DE LA INMUNOLOGA (Sala Magna) Moderadores: Eduardo Fernndez-Cruz. Presidente de la Comisin Nacional de Inmunologa. Miguel Lpez-Botet. Presidente de la Sociedad Espaola de Inmunologa Inmunologa en los Hospitales: situacin actual y nuevos modelos Margarita Lpez-Trascasa. Vocal de la Junta Directiva de la Sociedad Espaola de Inmunologa Formacin Especializada: Mapa de Unidades docentes y Plan de futuro Mara Jos Herrero. Representante de la Sociedad Espaola de Inmunologa en la Comisin Nacional de Inmunologa La Troncalidad en las Especialidades de Laboratorio Adolfo Campos. Vicepresidente de la Comisin Nacional de Inmunologa CAF Y VISITA A POSTERS (Sala Termas) 8. Inmunidad e infeccin 9. Clulas dendrticas 10. Clulas T 11. Autoinmunidad II CONFERENCIA DE CLAUSURA (Sala Magna) State of the art: class switch recombination and DNA repair activity Q. Pan-Hammarstrom. Karolinska Institute (Estocolmo) PRESENTACIN DE LOS PRXIMOS CONGRESOS (Sala Magna) CCTEL DE DESPEDIDA

09.00-10.30

10.30-11.45

11.45-12.15

12.15-13.15

13.15

Comunicaciones Orales
Inmunologa Vol. 27 / Supl. 1/ Mayo 2008: 15-53

SESIN 1: AUTOINMUNIDAD - I Moderadores: Dra. Joana Ferrer (Palma de Mallorca), Julia Sequ (Madrid) TLRs EN EL SISTEMA INMUNE INTESTINAL. De Andrs A, Marn N, Mirete S, Camarero C, Roy G. Hospital Ramn y Cajal de Madrid. En la enteropata celaca (EC) tiene lugar una respuesta inmune innata a nivel del epitelio intestinal, cuyo estmulo y mecanismos patognicos son prcticamente desconocidos. Dentro de los receptores del sistema inmune innato intestinal, se hallan los PRRs (pattern recognition receptors), amplios sensores de componentes microbianos filogenticamente conservados. Actualmente se especula que una disfuncin de los toll-like receptors (TLRs) reconoce a los pptidos del gluten como no propios/txicos, generando una respuesta inflamatoria inicial innata. Ningn estudio ha examinado el papel de los TLRs y de sus ligandos especficos en el fenotipo de la EC. Objetivo. Analizar la expresin de los TLRs, tanto en el epitelio como en las distintas subpoblaciones de linfocitos intraepiteliales (LIEs), en mucosa intestinal control, para conocer los niveles de expresin normales, o en celacos, con objeto de definir un estado inicial en la patogenia de la enfermedad celaca. Metodologa. Se han analizado un total de 34 biopsias de duodeno: 14 celacos activos y 19 controles. Expresin y cuantificacin por citometra de flujo, de los TLR2 y TLR4 en superficie y de los TLR3 y TLR9 intracelulares, en los distintos subtipos celulares. Resultados
Celacos activos (n = 14) LIEs Media ES TLR2 TLR4 TLR3 TLR9 13 1.5 34.5 5.1 66 9.1 61.4 6.1 Epitelio Media ES 1.5 0.5 22 3.9 51.8 6.1 48.4 5.5 No celacos (n = 19) LIEs Media ES 11.3 2.3 29.5 2.5 56.7 8 45.6 7.1 Epitelio Media ES 1.5 0.5 16.8 2.7 70.2 3.4 48.3 4.0

nes histolgicas en la mucosa intestinal, principalmente atrofia vellositaria y aumento de linfocitos intraepiteliales (LIEs). Objetivo. Estudio del perfil de LIEs en pacientes con sospecha clnica de EC en nuestro medio. Mtodos. De 97 biopsias remitidas de junio del 2006 a febrero del 2008 para el estudio del linfograma por citometria, seleccionamos 70 con datos valorables, para realizar una revisin prospectiva de las historias clnicas de los sujetos (40 mujeres, 25 hombres). Resultados. EC activa: 66%, EC. Silente: 6%, EC potencial: 15%, EC latente: 1% . EC activa
Clnica Distensin abdominal Diarrea Retraso del crecimiento Anemia Hipertransaminemia Trombocitosis Biopsia Atrofia total Atrofia subtotal Atrofia parcial Cambios mnimos Marcadores serolgicos y genticos (HLA-II) Ac antigliadina + Ac antitransglutaminasa + DQ2 DQ8 Linfograma 1.LIEs totales 10% 2.LIEs 10% 3.LIEs CD3- 10% 1+2+3 LIEs en pacientes 3 aos LIE totales LIE LIE CD3LIEs en pacientes > 3 aos LIE totales LIE LIE CD3Frecuencia 78% 72% 59% 54% 50% 46% Frecuencia 9% 67% 20% 2% Frecuencia 79% 88% 90% 7% Porcentaje de pacientes 92% 89% 60% 54% Xm DE % 27 14% 29 15% 13 8% Xm DE % 22 13% 29 19% 10 5%

Conclusiones: No parece que una diferencia en la expresin de los sensores TLRs analizados est implicada en el inicio de una respuesta inflamatoria innata en el compartimento epitelial del intestino.

PERFIL DE LINFOCITOS INTRAEPITELIALES EN EL DIAGNSTICO DE LA ENFERMEDAD CELIACA. Snchez M, Gutierrez EI, Toca M, Gonzalo Ocejo-Vinyals J, Leyva-Cobin F, Lpez-Hoyos M. Servicio de Inmunologa, Hospital Universitario Marqus de Valdecilla, Servicio Cntabro de Salud. Santander. Introduccin. La enfermedad celiaca (EC) es una enteropata crnica mediada por el sistema inmunitario caracterizada por alteracio-

EC silente. Hipertransaminemia 75%. Marcadores serolgicos Ac antigliadina +: 33% Ac antitransglutaminasa + 75%. Linfograma, 1+2+3: 100%. EC latente y potencial. 1+2+3: 20%. Conclusiones. En la poblacin estudiada el perfil: LIEs totales 10% - LIEs LIE 10% -LIEs CD3- 10% constituye un marcador til tanto para el diagnostico de la EC activa como silente. En este ltimo caso, podra ser el mejor marcador de esta forma de presentacin.

15

COMUNICACIONES ORALES

VOL. 27 SUPL. 1/ 2008

Para la EC latente y potencial, el infiltrado linfocitario suele ser < 10% pero los LIEs se mantienen elevados y los LIE CD3- disminuidos.

PAPEL DEL GEN PXR EN ENFERMEDAD INFLAMATORIA INTESTINAL. Mrquez Ortiz AM1, Martnez Doncel A1, Mendoza JL2, Taxonera C2, Fernndez-Arquero M1, Daz-Rubio M2, Gmez de la Concha E1, Urcelay E1. 1Servicio de Inmunologa Clnica, Hospital Clnico San Carlos. 2Servicio de Gastroenterologa, Hospital Clnico San Carlos. Recientemente, se ha descrito una asociacin del gen del receptor de pregnano (PXR/NR1I2) con la susceptibilidad a padecer enfermedad inflamatoria intestinal (EII). PXR es un receptor nuclear que regula genes involucrados en procesos de detoxificacin, entre ellos MDR1. Nuestro objetivo es investigar el impacto de este locus en la predisposicin a padecer EII en poblacin espaola. Para el estudio caso-control se utilizaron 365 enfermos de CU, 331 pacientes de EC y 550 controles. Se analizaron mediante sondas TaqMan tres polimorfismos en el gen PXR as como los seis haplotipos conformados por ellos. Incluimos el marcador -25385C/T (rs3814055) por ser el ms fuertemente correlacionado con la enfermedad en el estudio inicial y otros dos polimorfismos (rs6784598 y rs2276707) con el fin de cubrir toda la variabilidad. Al comparar las frecuencias genotpicas y allicas entre enfermos y controles no encontramos diferencias significativas. Sin embargo, al estratificar los enfermos de colitis por extensin observamos que el alelo -25385T era ms frecuente en pacientes con la forma extensa que en los pacientes con colitis izquierda (p=0.049), y que en los controles (p=0.009). Este efecto se debe principalmente al haplotipo de riesgo TCC significativamente aumentado en colitis extensa con respecto a colitis izquierda [p=0.032; odds ratio (95% IC)=1.51 (1.02-2.24)] y controles [p=0.001; odds ratio (95% IC)= 1.66 (1.20-2.30)]. Posteriormente, analizamos la posible interaccin entre los genes PXR y MDR1 encontrando que un polimorfismo del gen MDR1 (rs3789243), localizado en el intrn 3 y previamente asociado a colitis ulcerosa, presentaba una distribucin genotpica significativamente diferente al comparar portadores y no portadores del alelo de riesgo -25385T (p=0.005). Nuestro estudio confirma la asociacin del gen PXR con la enfermedad inflamatoria intestinal, concretamente con colitis extensa, y encontramos evidencias de interaccin entre este gen y MDR1.

en la regin 5'UTR y tres variantes en los codones 52, 54 y 57 (exn 1) conocidas como alelos D, B y C, respectivamente, mediante PCR-SSO inversa (Innogenetics). A todos los pacientes se les realiz adems determinacin de acs anti-S cerevisiae (ASCA) mediante tcnica de ELISA (Aeskulisa) El anlisis estadstico se realiz mediante los programas SPSS (v.11.0) y EpiInfo (v.6.0); se analizaron tanto los SNPs como los haplotipos comunes en los que stos se organizan. Resultados. Las caractersticas clnicas estudiadas fueron sexo, tabaquismo, edad al dco, localizacin, patrn evolutivo, manifestaciones extradigestivas, necesidad de ciruga, tratamiento con inmunosupresores y presencia de ASCA. En el anlisis por SNPs se ha observado una mayor tendencia a desarrollar un patrn fistulizante (B3 de clasif. de Viena) en los pacientes portadores del alelo 550L (p=0.027; OR=4.97, IC95% 1.02-47.31). Asimismo, dicho alelo se asocia con una mayor necesidad de ciruga (p=0.009; OR=9.97, IC95% 1.38-432). En el anlisis por haplotipos encontramos que en portadores del haplotipo secretor HYPA la enfermedad se limita al colon (L2 de clasif. de Viena) con menor frecuencia (p=0.02; OR=0.31, IC95% 0.08-0.99). Conclusin. El polimorfismo en el gen MBL2 puede influenciar la forma de presentacin de la EC.

GENES IL12B E IL23R: ANLISIS DE SUSCEPTIBILIDAD E INTERACCIN EN ARTRITIS REUMATOIDE. Varad Lpez J1, Perdigones N1, Fernndes-Arquero M1, Jover JA2, Gmez de la Concha E1, MartnezDoncel A1, Fernndez Gutirrez B2, Urcelay E1. 1Inmunologa Clnica Hospital Clnico San Carlos. 2Reumatologa Hospital Clnico San Carlos. La artritis reumatoide (AR) es una patologa de gentica compleja que afecta aproximadamente al 1% de la poblacin. Se ha postulado que existen genes comunes a distintas enfermedades autoinmunes. Recientemente se han descrito polimorfismos de un solo nucletido (SNP) en los genes IL12B e IL23R asociados a la enfermedad de Crohn. La IL23 es un heterodmero compuesto por las cadenas p19 y p40, codificadas por IL23 e IL12B respectivamente; su receptor es tambin un heterodmero compuesto por los productos de dos genes diferentes IL23R e IL12RB. Nuestro objetivo es dilucidar si dichos polimorfismos de IL12B e IL23R estn asociados al desarrollo de AR, tanto de forma individual como combinada. Analizamos 550 pacientes de AR y 546 individuos control. Todos ellos se genotiparon para 4 SNPs con sondas TaqMan. Dos SNPs estn localizados en el gen IL2B (rs688765 y rs3212227) y los otros dos en el gen IL23R (rs7517847 y rs11209026). Las frecuencias genotpicas y allicas de los cuatro SNPs se compararon por el test de c2 o el test exacto de Fisher. La Odds ratio (OR) y los valores de p se calcularon con el paquete estadstico Epi Info v. 6.02. Los alelos minoritarios de los dos polimorfismos de IL23R son ms frecuentes en AR que en controles (rs7517847, p=0.019; rs11209026, p= 0.026), contrariamente a los descrito en Crohn. Por el contrario no encontramos ninguna asociacin de los dos polimorfismos IL12B con AR. Tambin observamos una interaccin entre los marcadores rs7517847 (IL23R) y el rs3212227 (IL12B) [GG/CC vs (TT+TG)/(AA+AC) p=0.004]. Esto se ve reflejado en que un 13% de los enfermos rs7517847-GG son a su vez rs312227-CC siendo la frecuencia de este ltimo genotipo en controles del 5%, lo que supone un incremento del 8% (p=0.006). Nuestros datos sugieren que los alelos minoritarios de los polimorfismos estudiados en IL23R (rs7517847 y rs11209026) incrementan

ANLISIS DEL POLIMORFISMO DEL GEN MBL2 EN ENFERMEDAD DE CROHN. Rodrguez Gutirrez JF1, Rodrguez Bayona B1, Piero A2, Rodrguez C1, Correro F2, Brieva JA1, Nieto A1. 1Hospital Puerta del Mar. 2Servicio de Digestivo, Hospital Puerta del Mar. Introduccin. Genes de la inmunidad innata intervienen en la susceptibilidad y forma de presentacin de la enfermedad de Crohn (EC). La lectina de unin a manosa (MBL) codificada por el gen MBL2 es un importante componente de la inmunidad innata que se une a un amplio rango de microorganismos y activa complemento por la va de las lectinas. Los niveles sricos de MBL y su actividad funcional estn parcialmente regulados por variaciones genticas, las cuales se han asociado a otros procesos relacionados como la enf. de Behet. Objetivo. Analizar la posible influencia del polimorfismo en la regin 5 del gen MBL2 en la forma de presentacin de EC. Pacientes y Mtodos. Se han determinado en 120 pacientes los siguientes SNPs: -550 H/L y -221 Y/X en la regin promotora; +4 P/Q

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la susceptibilidad a AR. Tambin apuntan a la existencia de una interaccin entre los genes IL12B e IL23R.

INTERACCIONES GENTICAS: MIF COMO FACTOR DE SUSCEPTIBILIDAD EN ENFERMOS DE ARTRTITIS REUMATOIDE. Perdigones Borderas MN1, Varade J1, Nez C1, Fernndez-Gutirrez B2, Jover JA2, Urcelay E1, Martnez A1. 1Unidad de Inmunologa Clnica, Hospital Clnico San Carlos, Madrid. 2Departamento de Reumatologa, Hospital Clnico San Carlos, Madrid. La Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad crnica e inflamatoria de etiologa desconocida que afecta al 1% de la poblacin mundial. El carcter polignico de esta inmunopata ha suscitado en el ltimo ao varios estudios de asociacin genmica (GWA, genome wide association). Mientras, investigaciones en otros mbitos como son las interacciones intergnicas o gentico-ambientales se encuentran an en sus comienzos. En este trabajo analizamos polimorfismos de un solo nucletido (SNPs) potencialmente implicados en enfermedades inflamatorias, en busca de interacciones genticas involucradas en la susceptibilidad a AR. Se genotiparon 45 SNPs correspondientes a 17 regiones cromosmicas en 528 pacientes con AR y 518 controles sanos espaoles. Para detectar interacciones genticas evaluamos el desequilibrio de ligamiento (LD) entre loci no ligados con el programa Haploview. Se observaron tres interacciones estadsticamente significativas (p MIF se perfila como un potente factor de susceptibilidad en un determinado grupo de enfermos de AR. Este hecho implica que el efecto de proteccin o susceptibilidad de una mutacin depende del contexto o background gentico de cada individuo.

sentaban una distribucin de frecuencias del alelo minoritario que oscilaba entre el 14 y el 49% en controles. Varios SNPs resultaron asociados en una o ambas patologas. Se detect un haplotipo asociado con ambas patologas con frecuencias del 24.7% en RA, 28.2% en SLE y 18.4% en controles (OR 1.45, 95%CI 1.15-1.83 para RA y OR 1.74, 95% CI 1.38-2.20 para SLE). La regin de asociacin se localiza en las primeras 33 Kb rastreadas y se detect un SNP marcador que slo se encuentra en el haplotipo de riesgo. Conclusin. El presente estudio confirma asociacin entre la regin 3' UTR del gen CTLA y la susceptibilidad a padecer RA y SLE.

MAPEO DEL GEN TIM1 EN ARTRITIS REUMATOIDE Y LUPUS ERITEMATOSO SISTMICO. Abad C1, Torres B1, Garca-Lozano JR1, Escalera A1, Fernndez O1, Snchez E2, Orozco G2, Nez-Roldn A1, Martn J2, Gonzlez-Escribano MF1. 1Servicio de Inmunologa. HU Virgen del Roco. Sevilla. 2Instituto de Parasitologa y Biomedicina "Lpez-Neyra". Granada. Introduccin. La respuesta inmunolgica mediada por clulas T est regulada por una serie de molculas coestimuladoras y coinhibidoras que intervienen en la sinapsis inmunolgica. TIM1 es una molcula coestimuladora que influencia la diferenciacin de las clulas T y la activacin dependiente de TCR y puede estar involucrada en diferentes fases del desarrollo de las enfermedades autoinmunes. Objetivo. Mapear el gen TIM1 para determinar la existencia de posibles regiones de susceptibilidad en artritis reumatoide (RA) y lupus eritematoso sistmico (SLE). Material y mtodos. Se incluyeron 289 pacientes con RA y 398 con SLE que cumplan los criterios de la ACR para ambas enfermedades. El grupo control inclua 371 donantes voluntarios de mdula sea. Se genotiparon 6 SNPs que abarcaban una regin de 22.000 bp. El genotipado se realiz utilizando sondas Taqman. La comparacin de la distribucin de frecuencias genotpicas y allicas se realiz mediante ?2. Resultados. Los 6 SNPs incluidos resultaron polimrficos con una distribucin de frecuencias del alelo minoritario que oscilaba entre el 2 y el 37% en controles. Se detect un SNP (A/T) asociado a ambas patologas, si bien, el sentido de la asociacin sera contrario en RA y SLE. En RA la asociacin se ajustara a un modelo recesivo, en el que los homocigotos AA fueron mas frecuentes en RA (14.9%) que en SLE (5.6%) y controles (9.2%, p=0.02, OR=1.73 95%CI 1.05-2.82); mientras que en SLE se encontr elevada la frecuencia del alelo T (73%) comparado con RA (67%) y controles (68%, p=0.03, OR=1.27, 95%CI 1.01-1.59). Conclusin. El presente estudio sugiere asociacin entre el gen TIM1 y la susceptibilidad a padecer RA y SLE.

MAPEO DE LA REGIN 3 ' UTR DEL GEN CTLA4 EN ARTRITIS REUMATOIDE Y LUPUS ERITEMATOSO SISTMICO. Escalera A1, Torres B1, Garca-Lozano JR1, Abad C1, Fernndez O1, Orozco G2, Snchez E2, Nez-Roldn A1, Martn J2, Gonzlez-Escribano MF1. 1Servicio de Inmunologa. HU Virgen del Roco. Sevilla. 2Instituto de Parasitologa y Biomedicina "Lopez Neyra". Granada. Introduccin. La respuesta inmunolgica mediada por clulas T est regulada por una serie de molculas coestimuladoras y coinhibidoras que intervienen en la sinapsis inmunolgica. Entre los coinhibidores de la respuesta T se encuentra la molcula de CTLA4. El gen CTLA4 es un candidato para determinar la susceptibilidad a enfermedades autoinmunes y aunque no se ha determinado completamente la regin del gen responsable de la asociacin, estudios anteriores de nuestro grupo y otros la han situado en la regin 3' UTR del mismo. Objetivo. Acotar la regin de susceptibilidad encontrada en la regin 3' UTR del gen CTLA4 en artritis reumatoide (RA) y lupus eritematoso sistmico (SLE). Material y mtodos. Se incluyeron 455 pacientes con RA y 459 con SLE que cumplan los criterios de la ACR para ambas enfermedades. El grupo control inclua 463 donantes voluntarios de mdula sea. Se genotiparon 12 SNPs localizados en la regin 3' UTR del gen CTLA4 que abarcaban una regin de 86.367 bp. El genotipado se realiz utilizando sondas Taqman. Para el clculo de haplotipos se utiliz el programa Haploview. La comparacin de la distribucin de frecuencias genotpicas, allicas y haplotpicas se realiz mediante ?2. Resultados. Se analizaron 11 de los 12 SNPs incluidos en un principio, ya que uno de ellos result no polimrfico. Estos 11 SNPs pre-

ASOCIACIN ENTRE EL HLA Y LOS NIVELES DE ANTICUERPOS ANTI PPTIDOS CITRULINADOS CCLICOS Y DE FACTOR REUMATOIDE EN PACIENTES CON ARTRITIS DE RECIENTE COMIENZO. Cabezn Snchez A1, Ramiro Latienda S1, Cobo Ibez T1, Orozco G2, Balsa Criado A1, San Jos Valiente B1, Martn Ibez J2, Lpez-Nevot MA3, Pascual-Salcedo Pascual D1. 1Hospital Universitario La Paz de Madrid. 2Hospital Virgen de las Nieves de Granada. 3Instituto de Parasitologa y Biomedicina Lpez Neyra, CSIC, Granada. Introduccin. La produccin de anticuerpos anti pptidos citrulinados (ac anti-CCP) se asocia con la presencia de los alelos HLA DRB1

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VOL. 27 SUPL. 1/ 2008

con el eptopo compartido (EC) y con la artritis reumatoide (AR). El HLA DR3 se asocia con la AR seronegativa para Factor Reumatoide (FR) y los alelos HLA DRB1 que codifican la secuencia DERAA protegen del desarrollo de AR. Pacientes y Mtodos. En pacientes de una consulta de artritis de reciente comienzo se estudi la presencia de alelos HLA DRB1 con el EC, el HLA DR3 y alelos que codifican la secuencia DERAA. En el suero de estos pacientes se cuantificaron los ac anti-CCP y FR. Las comparaciones estadsticas se realizaron mediante los test de Kruskal-Wallis y U de Mann-Whitney con la correccin de Bonferroni. Resultados. De los 322 pacientes incluidos en el estudio, un 71,4% fueron diagnosticados de AR y un 28,6% de otras artropatas. El FR y los ac anti-CCP fueron positivos respectivamente en el 72,6% y 62,3% de los pacientes con AR y en el 9,2% y 3,5% de pacientes con otras artropatas. Se encontraron diferencias en el ttulo de ac anti-CCP y de FR segn el nmero de alelos con el EC, obteniendo los niveles ms bajos en los pacientes que no tenan ningn alelo con el EC (p No observamos diferencias en la produccin de ac anti-CCP y FR segn el alelo HLA DRB1 con el EC aunque s se encontr un efecto de inhibicin de la produccin de ac anti CCP de los alelos que codifican la secuencia DERAA o del HLA DR3, sobre el efecto producido por el EC (p Conclusin. La presencia del EC est asociada con la produccin de ac anti-CCP y con la magnitud de esta produccin. Observamos un efecto inhibitorio de la produccin de ac anti-CCP cuando el alelo HLA DR3 o los alelos que codifican la secuencia DERAA estn presentes junto a otro alelo con el EC.

Results. Treated and untreated non active RA patients showed a significant decrease in the percentage of classical CD14+highCD16monocytes respect to healthy controls without relationship with disease activity. On the other hand we found a significant increase in the inflammatory CD14+lowCD16+ monocytes in active RA patients treated with anti-TNFa agents with respect to healthy controls and untreated and treated with methotrexate RA patients. We did not find differences in non active disease RA patients. Inflammatory monocytes showed a significant decrease in the expression of CX3CR1 (Fractalkine) in non active untreated patients compared with healthy controls. The Treatment with anti-TNFa agents normalized this altered fractalkine expression. Conclusions: There is an altered distribution of the different monocytic cell subsets in peripheral blood of RA patients that is characterized by a decrease in the classical monocytes and an increase of inflammatory monocytes, as well as changes in their migratory properties. This phenomenon is related with the disease activity and the patient treatment.

POLIMORFISMOS DE Fc RIIA (CD32A) Y Fc RIII A (CD16A) EN LA RESPUESTA A LA TERAPIA CON INFLIXIMAB EN PACIENTES CON ARTRITIS REUMATOIDE. Surez B 1, Caete JD2, Hernndez MV, Rego I3, Sanmart R2, Pinto JA3, Blanco FJ3, Lozano F1. 1Servicio de Inmunologa, Hospital Clnico de Barcelona. IDIBAPS, Facultad de Medicina, Univ. de Barcelona. 2Servicio de Reumatologa, Hospital Clnico de Barcelona. IDIBAPS, Facultad de Medicina, Univ. de Barcelona. 3Servicio de Reumatologa, Hospital Juan Canalejo. A Corua. El polimorfismo de los receptores of Fc gamma (Fc R) influye en su afinidad por las inmunoglobulinas (Ig) y ello puede afectar la eficacia de las terapias basadas en Ig. En el presente trabajo analizamos la relacin entre polimorfismos funcionales de los genes Fc R IIA (CD32A) y IIIA (CD16A) y la respuesta a la terapia con infliximab (antiTNF ) en pacientes con artritis reumatoide (RA). Para ello se analizaron 91 pacientes (89% mujeres; 76.7% Factor Reumatoide positivo). Los pacientes fueron evaluados a las semanas 0, 6 y 30 usando los criterios de respuesta ACR y EULAR. El genotipado de los polimorfismos de CD16A (F158V) y CD32A (R131H) se realiz por PCR-SSP y secuenciacin, respectivamente. Se aplicaron los test Chi-square and Fisher's exact test para mostrar diferencias en las variables analizadas. Los individuos homo y heterocigotos para las variantes de alta afinidad de los dos Fc R analizados se agruparon en una sola categora para realizar comparaciones ms robustas con los individuos homocigotos para alelos de baja afinidad. Se encontraron diferencias estadsticamente significativas a las 6 semanas en el ACR50 en funcin del genotipo CD16A (baja afinidad o F/F: 24.1%; alta afinidad o F/V-V/V:2.2%; p =0.003) y a las 30 semanas en el ACR20 en funcin del genotipo CD32A (baja afinidad o RR: 60 %; alta afinidad o R/H-H/H: 33.3%;p= 0.035). La reduccin de los niveles de protena C reactiva durante la terapia fue siempre mayor en los portadores de variantes de baja afinidad (CD16A-F/F; CD32A-R/R). En conclusin, la respuesta al tratamiento anti-TNF (infliximab) en pacientes con RA est influenciada por los genotipos tanto de CD16A como de CD32A y este efecto se observa a diferentes tiempos del seguimiento (6 y 30 semanas, respectivamente) reflejando la naturaleza dinmica de la interacin Fc R versus Ig.

EFFECTS OF DISEASE MODIFYING DRUGS IN THE DISTRIBUTION AND MIGRATORY PROPERTIES OF PERIPHERAL BLOOD MONOCYTES IN RHEUMATOID ARTHRITIS PATIENTS. Chara L1, Chevarra J1, Daz D1, Snchez A2, Monserrat J1, Mur S1, Prieto A1, Turrin A2, Len MJ2, lvarez-Mon M1,2. 1Unidad I+D asociada UAH/CNB-CSIC, IMMPA, Departamento de Medicina, Universidad de Alcal, Alcal de Henares, Madrid, Espaa. 2Servicio de Enfermedades del Sistema Inmune, Hospital Universidario Prncipe de Asturias, Alcal de Henares, Madrid, Espaa. Background. Rheumatoid arthritis (RA) is a systemic inflammatory disease characterized by a massive synovial infiltration of lymphocytes and macrophages. Functionally altered blood monocytes are associated with joint inflammation and higher disease activity. Disease-modifying anti-rheumatic drugs (DMARDs) have been shown to reduce disease activity with excellent clinical results. OBJECTIVES: To determine the effect of traditional DMARDS and anti-TNFa agents in the distribution of the different peripheral blood monocytes from RA patients compared with healthy controls, and to relate that subset distribution with their migratory properties and disease activity. Methods. Peripheral blood mononuclear cells from 46 rheumatoid arthritis patients and 15 healthy controls were purified and characterized in a FACSCalibur cytometer using fluorochrome-labeled monoclonal antibodies to label CD14, CD16, CD62L and CX3CR1 antigens. The DAS28 score was calculated in each patient in order to determine the disease activity (active disease was considered when DAS28> 3.2). Comparisons between patients and healthy controls were carried out using the Student`s T test and considered significant when p<0.05.

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SESIN 2: INMUNOGENTICA Moderadores: Dra. Estela Paz Artal (Madrid), Dr. Jordi Yage (Barcelona) IDENTIFICACIN Y SECUENCIACIN COMPLETA DE 17 NUEVOS ALELOS HLA DE CLASE. Balas Prez A1, Snchez-Gordo F2, Snchez-Garca F3, Bustamante L1, Garca-Snchez F1, Vicario JL1. 1Centro de Transfusin de Madrid. 2Centro de Transfusin de Mlaga. 3Hospital Doctor Negrin. Gran Canaria. Diecisiete nuevos alelos HLA clase I fueron detectados y posteriormente completamente caracterizados mediante secuenciacin: A*020115, *0281, *0289, *9224, *0326, *0339, *2631, *68020103, *6836, B*0829, *3579, *4077, *9523, Cw*0220, *030203, *0736, *0742. La deteccin de nuevas variantes allicas se realiz en el tipaje de intermedia resolucin mediante PCR-SSO y tecnologa Luminex debido a patrones anmalos de hibridacin as como en el tipaje mediante secuenciacin de los exones 2/3/4. Las muestras portadoras de los nuevos alelos fueron unidades de cordn umbilical, pacientes y donantes no emparentados. La deteccin de nuevos polimorfismo en los exones 2/3/4 se confirmo posteriormente mediante clonaje y secuenciacin de las regiones codificantes restantes. La tabla compara las nuevas secuencias con las secuencias de los alelos ms homlogos, as como la tnia de los individuos portadores y el haplotipo que contiene a los nuevos alelos. Los residuos en negrita corresponden con nuevos residuos polimrficos.
Nuevo alelo A*020115 A*0281 A*0289 A*9224 A*0326 Alelo ms homlogo A*02010101 A*9224 A*02010101 A*0281 A*03010101 Cambios de codn 245GCG>GCC 265GGT>GTT 192CAC>CAA 265GTT>GGT 268AAG>GAG 102GAG>TAC 62CGG>CCG Delecin ocho nucleotidos en el intron 2 76GTG>GAG 77GAG>AAG 79GGG>CGG 80ACC>ATC 81CTG>GCG 82CGC>CTC 83GGC>CGC 82CGC>CAC 211GCG>GAG 116TAC>TTC 131AGC>CGC 147TTG>TGG 167TGG>TCG 152GAG>GTG 169CGC>CAC 271ACC>ACT 17CGC>CAC 113TAT>TTT Cambios aminoacid. Gly>Val His>Gln Val>Gly Lys>Glu Asp>Tyr Arg>Pro Raza Cau.Espaol Cauc.Aleman Cauc.Espaol Cauc.Espaol Cauc.Espaol Haplotipo/Tipaje HLA I

El alelo A*68020103 presenta variabilidad intrnica debido a una delecin de ocho nucletidos en el inicio del intron 2. Esta variacin no afecta, sin embargo, a su expresin en superficie.

ESTUDIO DE ALGUNOS ALELOS HLA EN ENFERMOS DE ALZHEIMER. Leon Moya V1, Cacho Gutierrez J2, Chong Espino Y2. 1Serv Analisis Clinicos. Hospital Universitario de Salamanca. 2Serv. Neurologia. Hospital Universitario de Salamanca. Introduccin. Los alelos HLA relacionados con la susceptibilidad resistencia a ciertas enfermedades, hacen que su presencia module la presentacin antignica, inhibiendo activando la respuesta inmune frente a exo auto antgenos. Hemos aplicado el anlisis individualizado de los alelo HLA A3, B7, DR2 y DR4, mediante PCR, habiendo selecionado estos alelos por su relacin con ciertas enfermedades autoinmunes. Material y Mtodos. 62 pacientes de Alzheimer,EA, de acuerdo con los criterios de NINCDS-ADRDA, y 84 sujetos sanos como grupo control, GC, fueron estudiados. El ADN fue extrado mediante el kit DNA Direct II (Dynal), fundamentado en una resina con ncleo metlico que permite separar el complejo ADN-resina mediante un imn. Los primers para el estudio del gen HLA A3 : For 5 AgC gAC gCC gCg AgC CA 3, Rev 5 CAC TCC Acg CAC gTg CCA 3 ; para HLA B7: For 5` ggA gTA TTg ggA CCg gAA C 3`, Rev 5 TAC Cag CgC gCT CCA gCT 3; para DR2 : For 5 TCC TgT ggC AgC CTA AgA g 3, Rev 5 CgC TgC ACT gTg AAg CTC TC 3 y DR4: For 5gTT TCT Tgg AgC Agg TTA AAC A 3, Rev 5 CgC TgC ACT gTg AAG CTC TC 3. Las condiciones de PCR fueron: 95, 5 min, 1 ciclo; 95 30 seg, 53 30 s, 72 30s 34 ciclos, y 72 10 min. Los amplicones fueron visualizados en electroforesis de agarosa al 2% Resultados. La frecuencia gnica de alelo HLA A3 fue 21,3 EA ( 13,6% en GC), el alelo HLA B7 se un 18,3 EA ( 12,5 % en GC) el alelo DR 2 17,6 %EA (15,5 % en el GC), El DR4 32,4% EA ( 15,6% GC). Las diferencian estatisticas entre las frecuencias gnicas , Chi Cuadrado, entre enfermos y controles fueron significativas , p> 0.001, en todos los alelos. Poniendose de manifiesto la posbilidad de emplearl como marcadoes genicos los alelos HLA estudiados en enfermos de Alzheimer.

A*0339 A*03010101 A*2631 A*260101 A*68020103 A*68020101

A*020115-B*5002-Cw*060201 A*0281-B*440201-Cw*050101 A*0289-B*3701-Cw*0602 A*9224,*23 ; B*40,*56 A*0326,*24020101;B*3701, B*400201; Cw*04010101,*06020101 Cauc.Espaol A*0339-Cw*070101-B*080101 Cauc.Espaol A*2631-B*440201-Cw*050101 Cauc.Espaol A*01,*68020103;B*530101,*5601 Cw*010201,*04010101 Ecuatoriano A*02,*6836; B*40,*51; Cw*06,*15

A*6836

A*680101

Val>Glu Asp>Asn Gly>Arg Leu>Ala Arg>Leu Gly>Arg Arg>His Ala>Gly Tyr>Phe Arg>Ser W>Leu Ser>Trp Glu>Val Arg>His Arg>His Tyr>Phe

B*0829 B*3579 B*4077

B*080101 B*3543 B*401401

Desconocida A*01,A*-;B*0820,*1402 Ecuatoriano A*24020101-B*3579-Cw*010201 Cauc.Espaol A*01,*02; B*08,*4077

B*9523 Cw*0220 Cw*030203 Cw*0736 Cw*0742

B*1591 B*1503 Cw*020202 Cw*030201 Cw*070101 Cw*070201

Cauc.Espaol No definido Cauc. Espaol Desconocida Cauc.Espaol Cau. Hungaro A*3301-B*440301-Cw*0220 A*020104-B*5801-Cw*030203 A*020101-B*180101-Cw*0736 B*070201-Cw*0742

EL ORIGEN DE LOS HABITANTES DE LAS ISLAS ALEUTIANAS (ESTRECHO DE BERING) SEGN LOS GENES HLA. Moscoso J1, Vicario JL2, Crawford M3, Serrano-Vela JI1, Reguera R1, Ferri A1, AbdEl-Fatah-Khalil S4, Millan P1, Arnaiz-Villena A1. 1Dept. Inmunologa, Universidad Complutense, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid, Madrid. 2Dept. Inmunologa, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid, Madrid. 3Dept. Anthropology, University of Kansas, Lawrence, USA. 4Dept. Hematologa, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid, Madrid. Los Aleutianos son una poblacin que vive en las Islas Aleutianas situadas entre las actuales Alaska y Rusia, en la zona Sur del Estrecho de Bering. Su lengua no pertenece a ninguna familia conocida, incluidas las lenguas Amerindias, Na-Dene (Atabascos), Eskimales o Siberianas. Se han identificado los alelos de los genes HLA-A, -B, -C y -DRB1 mediante tcnicas estndar de alta resolucin en 58 individuos Aleutianos no emparentados.

Se definieron dos nuevas variantes caracterizadas por mutaciones no productivas, A*020115 y Cw*030203. Asimismo se han definido dos variantes de A*02, *0281 y *9224 que presentan un eptopo Bw4 equivalente al presente en alelos A*25 y A*32. De forma similar, se ha caracterizado y detectado en dos muestras procedentes de donantes ecuatorianos un nuevo alelo, A*6836, que presenta el eptopo Bw4 presente en alelos A*23 y A*24.

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Los resultados se compararon con poblaciones de todo el mundo, que incluan Amerindios, Eskimos, NaDene (Atabascos), Europeos, Asiticos, Africanos y Australianos; en total, se analizaron 12.298 cromosomas. No se encontraron los alelos HLA caractersticos de Amerindios. Los clculos realizados usando distancias genticas, dendrogramas Neighbour-Joining, anlisis de correspondencia y haplotipos HLA extendidos muestran que genticamente, los Aleutianos estn estrechamente relacionados con los actuales Europeos Finlandeses y Lapones, que emigraron hacia el Oeste desde los montes Altai de Siberia hasta los lugares que actualmente ocupan en Escandinavia. Se discute la hiptesis de que los Aleutianos representen una migracin hacia el Este de las poblaciones originarias de los montes Altai Siberianos.

DIVERSIDAD ALELICA DEl gen MICA Y HAPLOTIPOS mica/hlab EN UNA POBLACIN DE LA REGION DE MURCIA. Lucas D, Campillo JA, Lpez M, Salgado G, Botella C, Lpez-Hernndez R, Sanchs MJ, Alemany JM, Minguela A, lvarez-Lpez MR, Muro M. Servicio de Inmunologa, Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca, Murcia, CIBERehd, Spain. MICA esta localizado a 46 kb centromrico a HLA-B. Su estructura genmica es similar a los genes HLA de clase I, aunque no se asocia a 2-microglobulina. Los exones 2, 3 y 4 del gen codifican los 3 dominios extracelulares (1, 2 y 3, respectivamente), y el exn 5 codifica el dominio transmembrana. MICA es muy polimrfico y se han descrito hasta ahora 63 alelos. El significado funcional de estos polimorfismos no se conoce an, aunque cambios en la secuencia aminoacdica de MICA influencian la afinidad de la interaccin con NKG2D, su ligando en la clulas NK, T y T CD8. As, la presencia de metionina o valina en el codn 129 del dominio 2 confiere fuerte o dbil afinidad, respectivamente. Nuestro propsito fue establecer la diversidad allica de MICA y su ligamiento a HLA-B (gen HLA prximo) en nuestra poblacin. DNA fue extrado con el extractor Maxwell16 (Promega, WI). Genotipaje de MICA y HLA-B se realizo por PCR-SSO y PCR-SSP alelo especfica. Las frecuencias gnicas y haplotpicas se analizaron mediante el programa Arlequin (Universidad de Ginebra). El alelo MICA*008 fue el ms frecuente (25.3%), seguido por MICA*002 (15.6%), MICA*004 (14.9%), MICA*001 (7.8%), MICA*009 y MICA*016 (7.2%), y MICA*010 (4.6%). Los alelos menos representados fueron MICA*005, MICA*007, MICA*017, MICA*023, MICA*030, MICA*033, MICA*046, MICA*050 y MICA*052. En el anlisis de haplotipos, el ms frecuentemente observado es MICA*008-B*07 (9.4%), seguido de MICA*004-B*44 y MICA*001-B*18 (8.1%), MICA*002-B*35 (6.7%), MICA*008-B*44 y MICA*004-B*49 (4.7%) y, MICA*008-B*08 y MICA*002-B*38 (4.1%). Combinaciones no vistas ocasionalmente y no reportadas en poblacin espaola serian MICA*010-B*1501, MICA*015-B*45, MICA*008-B*13 y MICA*008B*4001. En conclusin, la diversidad allica de nuestra poblacin es similar a otras poblaciones ibricas, aunque encontramos una serie de alelos poco frecuentes, as como determinadas asociaciones haplotpicas no descritas en otras poblaciones de la Pennsula Ibrica.

LA IgD DE EUBLEPHARIS MACULARIUS. UN GEN GENERA MLTIPLES ANTICUERPOS. Magadn Momp S1, Snchez Espinel C2, Gambn-Deza F2. 1Hospital Meixoeiro. 2Instituto Superior de Sade do Alto Ave. Al igual que la IgM, la IgD se expresa en la membrana de los linfocitos B maduros como receptor para el antgeno. La ausencia de IgD en aves y su descripcin en peces seos contribuy a la confusin relativa a sus orgenes evolutivos. Recientes estudios han establecido la presencia de IgD en el anfibio Xenopus tropicalis, siendo esencial el estudio gentico en reptiles para conocer mejor el proceso evolutivo de la IgD en vertebrados. En trabajos realizados por nuestro grupo describimos en el reptil Eublepharis macularius (Gecko leopardo) el gen para la IgD. Est constitudo por 11 dominios Ig y un dominio TM. En el presente estudio describimos diferentes ARNs mensajeros generados a partir del gen de la IgD, indicando la presencia de varias formas secretadas y de membrana. El gran nmero de dominios Ig y la diversidad de ARNs mensajeros sugiere una actividad funcional de la IgD relevante. Metodologa. Se obtuvo ARNm a partir de sangre perifrica, bazo y tracto digestivo. Se realizaron RT-PCR con primers especficos para diferentes dominios variables (V) y constantes (C) de inmunoglobulina y TM. Los amplificados obtenidos fueron clonados utilizando el vector pGEM-T y/o secuenciados. Las secuencias obtenidas fueron analizadas utilizando el software DNAstar. Resultados. El anlisis de las secuencias de ADNc obtenidas mediante RT-PCR y/o posterior clonacin, indican la expresin de mltiples ARNm generados, a travs de splacing, a partir del gen de la IgD. A su vez, los resultados indican la produccin de ARNm que codifica para dos formas de IgD secretada. Ambas presentan tallo secretor en el dominio CH11, el cual tiene un menor nmero de aminocidos que el descrito en la IgM e IgA , y no presenta cistenas, sugiriendo que no polimeriza en formas mltiples. Con respecto a la forma transmembrana, hemos descrito al menos 4 formas de ARN mensajero, siendo los dominios CH4, CH9 y CH11, los que realizan splicing con el exn TM. Conclusiones. Un nico gen de anticuerpo IgD puede generar numerosos anticuerpos con capacidades funcionales diferentes, lo que debe conferir ventajas evolutivas que condicionan la permanencia de la IgD en los reptiles. Estos mismos resultados podran obtenerse en otras especies, como peces y anfibios, en los que se encuentran Igs con un gran nmero de dominios, como la IgW e IgY.

EFECTO DE LOS RECEPTORES KIR EN LA RESPUESTA AL TRATAMIENTO COMBINADO EN PACIENTES CON HEPATITIS CRNICA C. Vidal-Castieira JR1, Lpez-Vzquez A1, Daz-Pea R1, Pruneda L1, Alonso-rias R1, Prez R2, Rodrigo L2, Lpez-Larrea C1. 1Servicio de Inmunologa, Unidad de Histocompatibilidad y Transplantes, Hospital Universitario Central de Asturias, Oviedo. 2Servicio de Digestivo, Hospital Universitario Central de Asturias, Oviedo. Los receptores KIR (killer immunoglobulin-like receptors) estn relacionados con la activacin e inhibicin de las clulas NK, y pueden jugar un papel muy importante en la respuesta innata frente a infecciones virales, tales como el HCV. El propsito de este estudio era investigar la posible implicacin de los receptores KIR en la respuesta al tratamiento con interferon pegilado (Peg-IFN--2b) y ribavirina. Para ello se seleccion un grupo de 186 pacientes diagnosticados de infeccin por HCV crnica. Todos los pacientes recibieron tratamiento combinado a lo largo de 6-12 meses y fueron clasificados en

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funcin de su respuesta al finalizar el periodo de seguimiento posttratamiento: 77 fueron no respondedores (NR) y 109 alcanzaron una respuesta viral sostenida (RVS). Todos fueron tipados para HLA-B, HLA-Cw y KIR mediante PCR-SSOr por la tecnologa Luminex. Se observ que la presencia KIR2DL3 estaba significativamente incrementada en pacientes RVS (61.93% vs. 45.46%, p= 0.001). Adems este receptor en homocigosis tambin se encontraba aumentado en este grupo (p=0.05). Por otro lado, la frecuencia de KIR2DL2 era mayor en pacientes NR (54.54% vs. 38.07%, p=0.001, OR= 1.95). Este receptor en homocigosis tambin se encontraba significativamente aumentado en NR (p=0.005, OR=2.52). Tambin se analizaron las distintas interacciones de estos receptores con sus ligandos HLA. Se observ que el genotipo KIR2DL2/KIR2DL2-HLA-C1C2 estaba aumentado en el grupo NR (p=0.007, OR=3.15) frente al genotipo KIR2DL3/KIR2DL3-HLAC1C1 que se encontraba aumentado en el grupo RVS (p= 0.028). Como conclusin hemos observado que la mayora de los pacientes con el genotipo KIR2DL3/KIR2DL3-HLA-C1C1 responden adecuadamente al tratamiento antiviral. Este genotipo buen respondedor parece facilitar la consecucin de una respuesta viral sostenida. En cambio, la mayora de los pacientes con el genotipo KIR2DL2/KIR2DL2-HLA-C1C2 no responden adecuadamente al tratamiento y no pueden eliminar el RNA viral.

REGULACIN EPIGENETICA DEL MHC EN LINEAS EMBRIONARIAS HUMANAS. Lopez-Larrea C, Bravo-Mendoza C, SuarezAlvarez B. Hospital Central de Asturias. Las clulas embrionarias humanas (hESC) son capaces de diferenciarse a la mayoria de tipos celulares y cultivarse durante largos periodos de tiempo. Estas caracteristicas las hacen ser una fuente importante de clulas capaces de ser utilizadas para el futuro del trasplante y la medicina regenerativa. Uno de los problemas principales es el reconocimiento alognico del injerto y la activacin del sistema inmune conduciendo al rechazo del rgano transplantado. Las hESC expresan niveles muy bajos de MHC-I, pudiendo incrementarse pero nnca alcanzando los niveles detectados en una clulas somticas. No existe expresin de MHC-II y HLA-G. Los mecanismos epigeneticos (metilacin del ADN y modificacin de histonas) son claves en la regulacin de genes en eucariotas, implicando la activacin o silenciamientos de los mismos. Las hESC presentan patrones de metilacin y acetilacin nicos que afectan a la regulacin de genes implicados en su pluripotencialidad y diferenciacin. Todos esto nos ha llevado a estudiar la expresin de MHC en la lnea de hESC Shef-1 (Sheffield, UK) en diversos estadios, as como las molculas implicadas en la maquinaria de procesamiento antignico, factores de transcripcin y los mecanismos epigeneticos que podrian regular su expresin. Hemos observado una deficiencia en los niveles de expresin del MHC-I en hESC como consecuencia de la disminucin de expresin en los genes implicados en la maquinaria de procesamiento antignico (Tapasina, TAP y Erp57), adems de la ausencia de expresin de HLA-DR y de los factores de transcripcin CIITA y RFX-5. Mediante tcnicas de secuenciacin de bisulfito, detectamos hypermetilacin en los genes HLA-DR, CIITA, LMP7 y HLA-G. Adicionalmente, y mediante ensayos de inmunoprecipitacin de la cromatina (ChIP) se observ que modificaciones especificas en las histonas H3 y H4 participan tambien en la regulacin de estos genes. Tratamiento de las hESC con inhibidores de deacetilasas de histonas (HDACs), slo o en combinacin con agentes desmetilantes del ADN, inducen la reexpresin en superficie de las molculas MHC. En conclusin, determinamos que la expresin del MHC-I y II en lineas embrionarias humanas puede estar regulada mediante mecanismos epigenticos.

ANLISIS DEL POLIMORFISMO ALLICO DE KIR3DL1 Y SU ASOCIACIN CON ESPONDILITIS ANQUILOSANTE EN LA POBLACIN ESPAOLA. Daz Pea R, Blanco Gelaz MA, Vidal Castieira JR, Lpez Vzquez A, Surez lvarez B, Lpez Larrea C. Hospital Universitario Central de Asturias. Los diferentes loci de receptores KIRs (Killer cell immunoglobulin-like receptors) y antgenos leucocitarios humanos (HLA) son altamente polimrficos, y algunas molculas HLA de clase I se unen a estos receptores KIRs. En el presente estudio se ha realizado un anlisis del polimorfismo allico del loci KIR3DL1 y se ha examinado si la combinacin de los diferentes subtipos junto con genotipos HLA-B27 est asociado con susceptibilidad a desarrollar espondilitis anquilosante (EA). Para llevar a cabo el estudio, fue seleccionada una poblacin espaola HLA-B27 positiva (56 pacientes con EA y 55 controles sanos). Nuestros resultados mostraron que la diferente distribucin de KIR3DL1 en la poblacin espaola se debe principalmente al descenso de los subtipos KIR3DL1*001 y KIR3DL1*004 en pacientes EA (15.6% vs. 4.5%, p<0.05 y 31.8% vs. 15.2%, pc<0.05; respectivamente). Puesto que existen indicios que sugieren que la fuerza de la seal inhibitoria generada por el reconocimiento de HLA-B Bw4 por KIR3DL1 tambin vara dependiendo del alelo presente, tambin se analiz si el ligando natural de KIR3DL1 podra estar involucrado en la susceptibilidad a desarrollar EA junto con algn subtipo o algn grupo de subtipos, clasificados stos en alelos con alta expresin en membrana, con baja expresin y con ausencia de expresin (KIR3DL1*004). Por una par te, se observ que no existan pacientes EA que tuviesen formas homocigticas 3DL1/3DL1 que se expresen en membrana junto con Bw4I80, mientras que su presencia en controles era significativamente mayor (pc<0.005). Adems, tambin se observ un aumento significativo de la frecuencia de KIR3DL1*004 junto con Bw4I80 en pacientes EA (pc<0.05). De esta manera, la susceptibilidad a desarrollar EA podra estar determinada por un balance de activacin e inhibicin compuesto de genotipos KIR-HLA, en el que la interaccin 3DL1-Bw4I80 parece ser decisiva.

SESIN 3: INMUNOLOGA Y TRASPLANTE Moderadores: Dr. Joan Mil (Palma de Mallorca), Dr. Alfredo Minguela (Murcia) FRECUENCIAS ALLICAS Y HAPLOTPICAS HLA EN PACIENTES ESPAOLES EN BSQUEDA DE DONANTE DE PROGENITORES HEMATOPOYTICOS. IMPLICACIONES EN LA OBTENCIN DE DONANTE HLA COMPATIBLE 12/12. Balas Prez A, Garca-Snchez F, Bustamante L. Centro de Transfusin de Madrid. El trasplante de clulas progenitoras hematopoyticas de donante no emparentado (DNE) es la mejor opcin cuando no existe un donante familiar HLA idntico. Los resultados para este tipo de trasplante han demostrado ser mejores cuando existe identidad a nivel allico para los genes HLA-A, -B, -C, -DRB1 y DQB1.

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A pesar de la expansin de los registros de donantes, la identidad a nivel allico sigue siendo un obstculo debido a la gran diversidad de alelos y haplotipos HLA. Pacientes con variantes HLA comunes sobre haplotipos conservados presentaran mas ventaja a la hora de encontrar donantes con compatibilidad 12/12 (HLA-A, -B, -C, -DRB1DRB3/4/5, -DQB1), que aquellos con alelos raros o haplotipos infrecuentes. En stos ltimos, aproximaciones alternativas han demostrado ser mejores que el mantenimiento del paciente en bsqueda durante un periodo de tiempo prolongado. Los registros de donantes no emparentado estn compuestos por donantes tipados para HLA-A, -B, -DRB1 a resolucin baja/media. Es imprescindible por tanto el conocimientos de las frecuencias de cada una de las poblaciones con el fin de evaluar en cada caso la estrategia de bsqueda a seguir. En el presente estudio incluimos 253 pacientes espaoles caucasoides en bsqueda de DNE entre los aos 1992-2008 de los que se tienen datos de segregacin familiar con el fin de conocer la distribucin haplotpica de clase I o clase I y II. Todos ellos fueron tipados para los genes HLA-A, -B, -C, -DRB1, -DRB3/4/5, y DQB1 mediante secuenciacin. A partir de este grupo de pacientes se obtuvieron 506 haplotipos HLA de clase I y 436 incluyendo tambin los genes HLA de clase II. Para este grupo de pacientes se recibi, y tipo al mismo nivel de resolucin, un total de 493 DNE. De los 253 pacientes en bsqueda, 172 recibieron al menos un donante, obtenindose en 81 casos al menos un donante compatible 12/12. El anlisis de frecuencias allicas de clase I demostr la presencia en poblacin espaola de 33, 57 y 31 alelos para los genes HLAA, -B y C, lo cual representa un 5,5%, 5,8% y 9,1% de las variantes descritas para estos tres genes respectivamente. Asimismo, entre 6-8 alelos representan para los tres genes de clase I, entre un 55% y un 75% del total de alelos encontrados. Esta limitada variabilidad contrasta sin embargo con los datos obtenidos de frecuencias allicas, ya que aparecen un total de 245 haplotipos de clase I distintos, de los cuales 169 (69%) aparecen una sola vez. Diecisis haplotipos de clase I presentan una frecuencia superior al 1%. Cuando se analizan haplotipos completos, nicamente son 11 los que presentan una frecuencia superior al 1%. El anlisis de las asociaciones haplotpicas HLA-B-C demostr la distribucin atpica que presenta el antgeno B*510101 pudindose encontrar asociado hasta con 10 diferentes alelos HLA-C. La comparacin de las poblaciones de pacientes que recibieron al menos un donante compatible 12/12 y aquellos para los que no se obtuvo ningn donante completamente idntico demostr que: 1. Se encuentra una diferencia significativa en la frecuencia de haplotipos con frecuencia superior al 1% (p<0,0001). 2. Existe una diferencia significativa en la frecuencia del alelo B*510101 entre ambas poblaciones (p= 0,004). 3. Existe una diferencia significativa en la frecuencia de alelos HLA con una frecuencia inferior al 1% entre ambas poblaciones (p<0,0001). 4. Se encuentra una mayor frecuencia de asociaciones haplotpicas infrecuentes B-C y DRB1-DQB1 en la poblacin de pacientes sin donante HLA idntico. Por lo tanto, considerando todos estos factores asociados al paciente, junto con los datos obtenidos de la bsqueda en el Bone Marrow Dornor Worldwide, es posible realizar una prediccin sobre la posibilidad de obtener un DNE HLA 12/12 idntico.

PIG CHONDROCYTES TRIGGER A XENOGENEIC CELLULAR IMMUNE RESPONSE. Sommaggio R, Mez R, Costa C. Institut d'Investigaci Biomdica de Bellvitge (IDIBELL). Xenotransplantation may be a solution to the shortage of human cells, tissues and organs for transplantation. In particular, transplantation of porcine chondrocytes may benefit patients who suffer articular, nasal or other cartilage defects. Cartilage is an avascular tissue with very low regenerative capacity that is subjected to a not well understood process of xenograft rejection. In this work, we sought to elucidate the molecular bases of cell-mediated rejection of xenogeneic cartilage. To this end, we isolated pig costal chondrocytes (PCC) and conducted a series of functional studies that included treatment with human inflammatory cytokines and xenogeneic cell-based assays. First, we determined by flow cytometry the cell surface expression of SLAI, SLA-II, VCAM-1, ICAM-1, E-selectin, CD86 and CD40 in resting conditions or after treatment with 10 ng/ml TNF-alpha, IL-1-alphafnfnor IL-1-beta for 24 hours. Some molecules were not expressed (SLAII, E-selectin), or barely detected (CD40), at any of the conditions assayed. On the contrary, TNF-alpha and to a lesser extent IL-1-alpha led to a marked upregulation of SLA-I, VCAM-1 and ICAM-1 on PCC. CD86, constitutively expressed at moderate levels, was only slightly elevated by these cytokines. We next studied the interaction of the human monoblastic cell line U937 with untreated or cytokine-activated porcine chondrocytes in an adhesion assay testing various effector:target ratios. U937 demonstrated significant adherence to the PCC in resting and cytokine-stimulated conditions. VCAM-1 played a role in this process, as demonstrated with a specific blocking antibody. Finally, coculture of PCC with Jurkat for various days led also to an increase in IL-2 secretion. In summary, porcine chondrocytes respond to human inflammatory cytokines and trigger a xenogeneic cellular immune response.

AFFINITY STUDIES OF PORCINE TUMOR NECROSIS FACTOR RECEPTOR 2 TO ELUCIDATE ITS ROLE IN XENOGRAFT REJECTION. Bosch L, Uribe-Herranz M, Costa C. Institut dInvestigaci Biomdica de Bellvitge (IDIBELL) Clinical xenotransplantation is precluded by a strong immune response in which innate immunity plays a role. In particular, tumor necrosis factor (TNF) produced by NK cells and macrophages contributes to xenograft rejection by promoting endothelial cell activation and recruitment of inflammatory cells. To elucidate its molecular mechanism, we previously cloned the cDNA of porcine TNFReceptor 2 (pTNFR2) and obtained two isoforms. The longest one comprised the 4 TNFR cysteine-rich domains conserved between species, whereas the short variant lacked the sequence corresponding to exon 4 and one of the cysteine-rich repeats. We have now assessed their affinity for TNF. We produced two recombinant proteins containing the extracellular domain of each pTNFR2 variant fused to GST at the carboxyterminal end and examined their ability to bind pig and human TNF-alpha (pTNF and hTNF) by surface plasmon resonance. In one set of experiments, the GST-fusion proteins were immobilized directly on a CM5 chip and the pig and human TNF were injected at multiple concentrations. It generated very robust results and calculated a comparable KD for pTNFR2 binding to either pTNF or hTNF (2,5E-9 and 2,4E-9 M, respectively) with a 1:1 binding fit. The dissociation was slightly faster for hTNF. In this experiment,

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we also obtained the KD for hTNFR2 binding hTNF (4,2E-9 M) and pTNF (9,9E-9 M) for comparison. In a second series, we orientated the receptor with an anti-GST antibody bound to the chip and obtained one-order-of-magnitude higher affinities overall but with lower reproducibility. In this setting, the pTNFR2 variant lacking exon 4 showed no binding to hTNF and very little to pTNF. In conclusion, pTNFR2 binds hTNF with high affinity, whereas the shorter isoform does not. We continue to work on further elucidating the potential biological function of these variants, which may participate in the process of xenograft rejection.

INFLUENCIA DEL GENOTIPO MBL2 (MANNOSE BINDING LECTIN) DE DONANTE Y RECEPTOR EN LA EVOLUCIN DEL TRASPLANTE HEPTICO. Pascal M1, Cervera C2, Suarez B1, Balderramo D3, Prieto J3, Fuster F3, Moreno A2, Navasa M3, Lozano F1. 1Servicio Inmunologa. 2Servicio Enfermedades Infecciosas. 3Servicio Hepatologa. Hospital Clinic i Provincial de Barcelona. Introduccin. MBL es una colectina srica de produccin heptica que se fija a la superficie de mltiples patgenos contribuyendo a su eliminacin por opsonofagocitosis y/o lisis mediada por complemento. Sus niveles plasmticos estn determinados por polimorfismos del promotor/exn 1 del gen MBL2. El objetivo del trabajo fue evaluar los genotipos MBL2 de donante y receptor de un injerto heptico y su influencia en las infecciones y evolucin del trasplante. Mtodos. Se determinaron por secuenciacin los genotipos de MBL2 de donante y receptor correspondientes a trasplantes hepticos realizados en nuestra institucin entre 2003 y 2007. Los genotipos se dividieron en silvestre (A/A) y variante (A/O; O/O). Se analizaron variables pre y peri trasplante, incidencia de infecciones, rechazo y supervivencia post-trasplante con objeto de identificar variables relacionadas con el desarrollo de infecciones y supervivencia. Resultados. Se analizaron 96 parejas donante-receptor de trasplante heptico. La frecuencia de genotipo variante fue del 38% en donantes y 48% en receptores. No existieron diferencias significativas entre las caractersticas del trasplante en funcin del genotipo del donante o del receptor. La tasa de incidencia total de infecciones fue similar en los receptores de un donante con genotipo salvaje o variante (p= 0.835). Los receptores de un injerto heptico de genotipo variante presentaron una mayor tasa de mortalidad por infeccin. No se observaron diferencias en cuanto a tasa de infecciones o evolucin en funcin del genotipo del receptor. En el anlisis multivariado, genotipo variante del donante (HR 2.83, IC95% 1.00-7.95), puntuacin MELD (HR 1.13, IC95% 1.05-1.22) e infeccin bacteriana post-trasplante (HR 11.0, IC95% 2.8-43.0) fueron factores independientes predictivos de mortalidad. Conclusin. El genotipo MBL2 variante del donante se asocia de forma independiente con una peor evolucin del trasplante, fundamentalmente por una mayor severidad de las infecciones.

CAMBIOS EN LA EXPRESIN DE LOS RECEPTORES ILT-3 (INMUNOGLOBULIN LIKE TRANSCIPT-3) E ILT-4 EN RECEPTORES DE TRASPLANTE RENAL SEGN LA EDAD DEL DONANTE Y RECEPTOR. Benito Almazan MJ1, Fernndez Fresnedo G2, Ruiz JC2, Benito A2, San Segundo D1, Alamillo C2, Arias M2, Lpez Hoyos M1. 1Servicio de Inmunologia. 2Servicio de Nefrologa. Hospital Universitario Marqus de Valdecilla. Entre los nuevos mecanismos tolerognicos con relevancia en la evolucin del trasplante de rganos se ha implicado la generacin de clulas dendrticas con fenotipo y funcin tolerognica. Este mecanismo est muy estudiado en modelos animales pero existen pocas evidencias en humanos. Adems, es posible que la edad pueda influir en la generacin y/o mantenimiento de estas clulas presentadoras de aloantgenos. Objetivo. Determinar el fenotipo de las clulas dendrticas sanguneas en receptores de trasplante renal a los 12 meses del trasplante, con especial atencin a las diferencias de edad entre receptor y donante. Mtodos. Se incluyeron 49 receptores de trasplante renal consecutivos de nuestro centro. Se analiz el nmero de clulas dendrticas inmaduras y maduras en sangre mediante tincin con anticuerpos monoclonales especficos y citometra de flujo, junto con la expresin de receptores inhibidores de la funcin de las clulas dendrticas (ILT3, ILT-4). Para el estudio se seleccionaron cuatro grupos de parejas receptor/donante segn la edad avanzada (M: >60 aos) o joven (J: Resultados. A los 6 meses del trasplante se encuentra un aumento significativo de la frecuencia de clulas dendrticas que expresan ILT-3 en el grupo DJ/RM respecto a DM/RM. No hay cambios en los receptores jvenes donde la expresin es incluso menor que en los receptores mayores. En cambio, ILT-4 aumenta en las clulas dendrticas a los 6 meses del trasplante en la combinacin DJ/RJ respecto a la DM/RJ pero no hay diferencias en los receptores mayores. Observamos adems una correlacin significativa entre el nmero absoluto de clulas dendrticas ILT-4+ y las clulas T reguladoras CD4+CD25high tanto en el momento pre-trasplante (r=0,476; p=0,004) como a los 6 meses post-trasplante (r=0,408; p=0,013) y a los 12 meses (r=0,517, p=0,041).Tambin encontramos correlacin significativa de estas clulas con la subpoblacin CD8+CD28- en el momento pre-trasplante (r=0,540; p=0,001) y a los 12 meses post-trasplante (r=0,609; p=0,012). Conclusin. El trasplante renal con un injerto joven, tanto en receptor mayor como joven, parece inducir ms clulas dendrticas con fenotipo tolerognico (definido por la expresin de ILT-3 e ILT-4) que el donante mayor. Financiacin: FIS, Fundacin Mutua Madrilea, Fundacin Marqus de Valdecilla-IFIMAV.

IDENTIFICACIN DE NUEVAS DIANAS ANTIGNICAS EN PACIENTES TRASPLANTADOS DE CORAZN Y DIAGNOSTICADOS DE ENFERMEDAD VASCULAR DEL INJERTO. Acevedo Calado MJ1, lvarez Mrquez A1, Aguilera I1, Caro Oleas JL1, Lage Gall E2, Wichmann Schlipf I1, Nuez Roldan A1. 1Servicio Inmunologa. 2Servicio de Cardiologa. Hospital Universitario Virgen del Roco. La Enfermedad Vascular del Injerto (EVI) se caracteriza por un engrosamiento progresivo de la ntima arterial. Es la causa principal de morbilidad y mortalidad despus del primer ao del trasplante. Aunque de patogenia desconocida, la EVI podra ser la manifestacin de una respuesta inmunitaria crnica, entre otras posibles causas. Objetivos. El objetivo principal de nuestro trabajo es identificar nuevas dianas antignicas, presentes en el suero de los pacientes, que puedan tener relevancia en la EVI post-trasplante cardiaco. Pacientes y Mtodos. Se seleccionaron 22 pacientes trasplantados de corazn con ms de un ao de evolucin y con EVI diagnosticada por IVUS (ecografa intravascular). Se estudi la presencia de anticuerpos anti-endoteliales en sueros previos y posteriores al trasplante mediante inmunofluorescencia indirecta (IFI) en portas de clulas

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HUVEC y la identificacin de los antgenos se realiz mediante el rastreo inmunolgico de una genoteca de expresin de arteria coronaria humana. Resultados. Dieciocho de los 22 pacientes presentaban un patrn nuclear similar, slo o en combinacin con otros patrones citoplasmticos. Se seleccion el suero de uno de estos pacientes para efectuar el rastreo y se obtuvieron 4 clones positivos que, tras ser secuenciados, correspondan a las siguientes protenas: hnRNP K, IFI16, TYMS y ZIP14. El antgeno hnRNP K es una ribonucleoprotena nuclear heterognea que est implicada en la regulacin de la expresin gnica. Su patrn nuclear, se confirm en IFI con un anticuerpo monoclonal comercial frente a sta protena y en WB de lisado de clulas HUVEC en el que da una banda de 64KDa tambin reconocida por el suero motivo del rastreo. El resto de los antgenos se encuentran bajo estudio. Conclusiones 1. Hemos descrito la presencia de anticuerpos frente a 4 nuevos antgenos en trasplantados de corazn. 2. El antgeno hnRNP K es reconocido por anticuerpos presentes en el suero de al menos 7 de estos pacientes.

protena del rgano donante y que pueden llegar a reproducir en algunos casos la enfermedad original. Es fundamental detectar y caracterizar cualquier anticuerpo aunque sea inusual en pacientes tras transplante con el fin de predecir las disfunciones y poder entender el mecanismo que las produce.

ANLISIS DE LA EVOLUCION DE LA RESPUESTA HUMORAL EN UN RECEPTOR CON DOS TRASPLANTES RENALES. Marin Crespo N, Andres Martin A, Mirete Bachiller S, Castaer Alabau JL. Hospital Ramn y Cajal. Madrid. Caso clnico. Varn de 43 aos con IRC secundaria a GMN mesangial IgA, sin sensibilizacin previa anti-HLA. Recibe un primer trasplante renal en 1996 con prueba cruzada negativa e incompatibilidades A29, A11, B57, B08, DR4, DR8. Rechazo agudo tardo y nefrectoma a los 6 aos post-trasplante. Segundo trasplante renal en marzo de 2000 con prueba cruzada negativa e incompatibilidades A31, B51, DR7. Recidiva de GMN mesangial IgA diagnosticada a los cuatro aos y diagnstico AP de nefropata crnica del injerto en 2006. Transplantectoma del segundo injerto en 2007. Objetivos. Estudio de la evolucin de las especificidades antiHLA a lo largo del tiempo y anlisis estructural de la respuesta de anticuerpos. Materiales y mtodos. Deteccin de anticuerpos anti-HLA-I, HLAII y MICA y estudio de sus especificidades mediante citometra de flujo. Anlisis de tripletes incompatibles mediante el algoritmo Matchmaker. Resultados. Tras el rechazo del primer injerto se detectan anticuerpos dirigidos frente a la incompatibilidad A1 y frente a antgenos con reactividad cruzada, esta respuesta estara dirigida frente a las regiones relacionadas con los tripletes incompatibles 9f y 90D. No se detectan anticuerpos frente a las otras incompatibilidades del injerto. Tras la nefrectoma se detectan anticuerpos frente a las incompatibilidades A29, B8 y B57 as como las especificidades comentadas anteriormente. El nuevo espectro de especificidades se correlaciona como mnimo con las regiones relacionadas con los tripletes 62RMN/66ASA, 62 qif y193av/207s/253q. Tras el rechazo del segundo injerto aparece un patrn de reactividad similar al anterior. Destaca la deteccin de reactividad frente a la incompatibilidad A31 del segundo injerto tanto en los sueros pre- como post-TX2 y que se explica por la regin que comparte con A29. No aparecen sin embargo anticuerpos frente al resto de incompatibilidades del segundo injerto. En el suero posterior a la nefrectoma no se observan variaciones con respecto a los sueros previos. Conclusiones: Tras el rechazo del primer injerto solo se detectan anticuerpos frente a la incompatibilidad A1, aunque la retirada del injerto evidencia la presencia de anticuerpos frente a todas las incompatibilidades del trasplante. El tratamiento inmunosupresor con acondicionamiento previo ha sido efectivo en la supresin de la respuesta humoral frente al segundo injerto. La presencia preTX2 de anticuerpos frente al antgeno A31 del segundo injerto plantea su implicacin en el rechazo tardo de ste, aunque los datos anatomo-patolgicos no permiten confirmarlo. Las intensidades de fluorescencia de los anticuerpos anti-A31 post-nefrectoma indicaran el secuestro de stos en el injerto. La prdida del segundo injerto, as como su posterior extirpacin no altera el patrn de anticuerpos anti-HLA.

IDENTIFICACION DE ANTICUERPOS INUSUALES EN PACIENTES POST-TRANSPLANTE HEPATICO. Alvarez Doforno R1, Alvarez L2, Yaez F1, Diaz MC3, Larrauri J4, Jara P3, Fontan G1. 1Servicio Inmunologa. Hospital La Paz. Madrid. 2Unidad Investigacin. Hospital La Paz. Madrid. 3Servicio Hepatologa. Hospital Infantil La Paz. Madrid. 4Servicio Anatoma Patolgica. Hospital La Paz. Madrid. Introduccin. La hepatitis autoinmune de novo (HAI) tras transplante heptico es una patologa inflamatoria del hgado caracterizada por hipergammaglobulinemia, presencia de autoanticuerpos y buena respuesta a dosis crecientes de inmunosupresores. Caso 1 Paciente de 13 aos de edad en la actualidad, que a los 3 aos de vida se somete a transplante heptico por una colestasis crnica. A partir de los 3 aos y medio posttransplante sufre varios episodios de disfuncin del injerto. Caso2 Paciente de 7 aos que a los dos aos de vida se somete a transplante heptico con diagnostico previo de enfermedad de Jarabe de Arce. A los 5 aos post transplante presenta una disfuncin heptica. Objetivos. 1) Estudiar la presencia de autoanticuerpos en dos nios transplantados que presentan episodios de disfuncin heptica. 2) Identificar los antgenos reconocido 3) Determinar si los episodios de disfuncin estn relacionados con los anticuerpos. Materiales y Mtodos. Las tcnicas empleadas fueron inmunofluorescencia indirecta (IFI) sobre triple tejido de rata (hgado/rin/estmago), Inmunoblot (IMB) sobre extracto de hgado y/o protenas purificadas recombinantes. Resultados. Caso 1, Biopsia patrn histolgico con colestasis y transformacin gigantocelular. Se detecta anticuerpos anti-canalculos biliares a ttulo alto, que van dirigidos contra la protena BSEP. En ensayos in vitro de transporte de cidos biliares, se observa que estos anticuerpos son capaces de inhibir la funcionalidad del BSEP. Caso 2, Biopsia: Tejido heptico con lesiones de rechazo agudo ligero con moderada fibrosis portal. Se detecta Ac anti Mitocondriales a titulo alto tipo M2. Estos Ac reconocen al complejo deshidrogenasa de los cetocidos de cadena ramificada. Conclusiones. En algunos pacientes sometidos a transplante heptico se generan anticuerpos que pueden ser bloqueantes contra una

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PERFIL DE ANTICUERPOS DONANTE ESPECFICOS EN PACIENTES TRASPLANTADOS RENALES CON RECHAZO MEDIADO POR ANTICUERPOS Y DEPSITOS DE C4d. Caro Oleas JL1, lvarez Mrquez A1, Aguilera Garca I1, Gentil MA2, Acevedo Calado MJ1, Cabello V2, Fernndez J3, Wichmann Schlipf I1, Gonzlez Escribano MF1, Nez Roldn A1. 1Servicio de Inmunologa. 2Servicio de Nefrologa. 3Servicio de Anatoma Patolgica del Hospital Universitario Virgen del Rocio Objetivos. La produccin de anticuerpos anti-HLA donante especficos post-trasplante se asocia con rechazo y fallo del injerto. Sin embargo, otros anticuerpos no HLA se asocian tambin al rechazo. Por otro lado, los anticuerpos anti-GSTT1 fueron descritos por nuestro grupo en 2001 en el suero de pacientes con trasplante heptico. Son muy especficos frente al antgeno del donante y aparecen en pacientes que carecen del gen de la GSTT1 cuando reciben un injerto de un donante positivo, dando lugar a una hepatitis inmune de novo. GSTT1 se expresa adems en rin. Por otra parte la presencia de anticuerpos frente a MICA se ha relacionado con una menor supervivencia del injerto renal. El objetivo principal de nuestro trabajo es identificar el perfil de anticuerpos donante especficos en pacientes con rechazo mediado por anticuerpos (RMA), que se pone de manifiesto por la deteccin de anticuerpos circulantes donante especficos (ADE) y el depsito de C4d en biopsias del injerto renal Pacientes y mtodos. Se seleccionaron 19 pacientes que cumplan los criterios histopatolgicos de RMA y que presentaban depsitos de C4d en biopsias renales. Se estudi la presencia, en sueros previos y posteriores al trasplante, de anticuerpos anti-HLA clase I, clase II y MICA especficos del donante mediante tecnologa Luminex. Los anticuerpos anti-GSTT1 se analizaron mediante IFI y/o ELISA. Resultados. En el momento de la biopsia, 4 pacientes (21%) tenan anticuerpos anti-HLA de clase I, tres (15.8%) anti-GSTT1, dos (10.5%) tenan anti-HLA de clase II y dos (10.5%) tenan anti-MICA; 4 pacientes tenan una combinacin de anticuerpos: HLA+MICA (n=1); HLAI + GSTT1 (n=2) y GSTT1+MICA (n=1). En 4 pacientes (21%) no se encontr ningn anticuerpo. La presencia de anti-GSTT1 se asociaba significativamente con RMA (p=0.026). Conclusin. Adems de los anticuerpos anti-HLA, los anticuerpos anti GSTT1 y MICA pueden estar implicados en el rechazo mediado por anticuerpos en el trasplante renal.

Inmunoglobulinas sricas, subclases de IgG, complemento, protena C reactiva, ANA, tipaje HLA y ac citotxicos, subpoblaciones linfocitarias, Rx trax, prueba tuberculnica y booster, hemograma, bioqumica, marcadores tumorales. Profilaxis de rechazo: Micofenolato mofetil (1-3g/24h VO) profilctico durante 1-2 aos. Esta terapia es complementaria al tratamiento habitual con ciclosporina y corticoides tpicos y prednisona oral (4-6 semanas tras el TCor). Tratamiento de rechazo: Tacrolimus (niveles 2-8 ng/ml) o Ciclosporina (niveles 125-175 ng/ml) segn perfil de efectos adversos, y prednisona a bajas dosis segn respuesta. Profilaxis antiinfecciosa: Isoniacida (si riesgo de TBC) y TMP-SMX. Resultados. Excludos: 7, en lista de espera: 2, tratados: 5. Motivos de exclusin: tumores activos (3), enfermedad sistmica descompensada (1), infeccin grave activa (1), otros (2). Estudio pre-TCor: Prueba tuberculnica o booster positivo: 4/9 pacientes; hipogammaglobulinemia: 4/14, 451-746 mg/dl; ac citotxicos positivos: 1/12. Evolucin: En 2 retrasplantes nuevos: los 2 libres de rechazo (1 en paciente con 3 injertos previos rechazados y anticuerpos anti-HLA elevados, se realiz seleccin de donante sin los Ag HLA que reconoce). En 3 TCor con rechazo: 1 injerto transparente sin vascularizacin y buena AV, 1 injerto transparente con persistencia de vascularizacin y buena AV, 1 sin mejora. Complicaciones: 2 episodios de infecciones respiratorias sin consolidacin. Conclusin. La aplicacin del protocolo descrito podra impactar positivamente en el resultado del TCor de alto riesgo.

SESIN 4: INMUNOLOGA TUMORAL - I Moderadores: Dr. Francisco Ruiz-Cabello (Granada), Dr. Ignacio Melero (Navarra) THERAPEUTIC ANTI-TUMOR EFFICACY OF ANTI-CD137 AGONISTIC MONOCLONAL ANTIBODY IN MOUSE MODELS OF MYELOMA. Murillo O2, Dubrot J2, Arina A2, Hervs-Stubbs S2, Melero I1. 1CIMA, Clnica Universitaria. 2CIMA. Purpose. Eradication of post-treatment residual myeloma cells is needed to prevent relapses and immunostimulatory monoclonal antibodies (mAbs) such as anti-CD137, CTLA-4, CD40, etc, that enhance the immune response against malignancies represent a means of achieving this purpose. This study explores anti-CD137 mAbs for mutiple myeloma (MM) treatment in preclinical models of the disease because they safely augment tumor immunity and are in clinical trials for other cancers. Experimental design. The anti-tumor effect of anti-CD137 mAb on mouse plasmacytomas derived from HOPC and NS0 cell lines was studied and compared with that of anti-CTLA-4, anti-CD40 and antiICAM-2 mAbs. The anti-tumor effect of anti-CD137 mAb was also examined in a mouse syngeneic disseminated myeloma (5TGM1) model, which more closely resembles human MM. Depletions of specific cell populations and gene-targeted mice were used to unravel the requirements for tumor rejection. Results. Agonistic mAb against CD137 and blocking anti-CTLA4 mAb showed activity against intra-peritoneal HOPC tumors, resulting in extended survival of mice that also became immune to re-challenge. Anti-CD137 mAbs induced complete eradications of established subcutaneous NS0-derived tumors that were dependent on IFN, NK cells and CD8+ T lymphocytes. NK cells accumulated in tumor draining lymph nodes (TDLNs) and showed increased IFN- produc-

INMUNOSUPRESION SISTEMICA AMPLIADA EN TRASPLANTE CORNEAL CON ALTO RIESGO DE RECHAZO. Sarmiento E1, Balado P2, Baeza A2, Vicario JL3, Acero A2, Palka M4, Carbone J1. 1Servicio de Inmunologa. 2Servicio de Nefrologa. 3Servicio de Anatoma Patolgica del Hospital Universitario Virgen del Rocio 1Servicio de Inmunologa. Hospital Gregorio Maran. Madrid. 2Servicio de Oftalmologa. Hospital Gregorio Maran. Madrid. 3Centro de Transfusiones. CAM. 4Facultad de Medicina. UCM. Madrid. Introduccin. Sin inmunosupresin sistmica los trasplantes corneales (TCor) de alto riesgo presentan ms del 50% de rechazo en el primer ao. Objetivo. Evaluar los riesgos y utilidad de la implementacin de un protocolo individualizado de profilaxis y tratamiento de rechazo en pacientes sometidos a TCor de alto riesgo. Mtodos. Resultados preliminares del estudio de 14 pacientes. Etiologa del TCor: rechazo crnico (7; 1-3 queratoplastas previas), rechazo agudo (1), perforaciones corneales (4), otros (2). PROTOCOLO: Pre-TCor:

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tion. Anti-tumor efficacy of anti-CD137 mAb was preserved in CD28deficient mice, despite the fact that CD28 signaling increases the expression of CD137 on CD8+ T cells. Importantly, anti-CD137 mAb treatment significantly decreased systemic tumor burden in the disseminated 5TGM1 model. Conclusions. Anti-CD137 mAbs immune-mediated anti-tumor activity in mouse models holds promise for myeloma treatment in humans.

IN VIVO DEPLETION OF DENDRITIC CELLS IMPAIRS BUT DOES NOT COMPLETELY ABROGATE THE ANTI-TUMOR EFFECT OF AGONISTIC ANTI-CD137 MONOCLONAL ANTIBODIES. Murillo O2, Arina A2, Azpilicueta A2, Prez-Gracia JL3, HervsStubbs S2, Melero I1. 1CIMA, Clnica Universitaria. Universidad de Navarra. 2CIMA. 3Clnica universitaria. Anti-CD137 monoclonal antibodies (mAbs) are capable of inducing tumor rejection in several murine syngeneic tumor models. This antitumour effect is thought to involve the activation of naive CD8 T cells that are specific for tumor antigens cross-presented by dendritic cell (DCs). However, whether DCs are required for the efficacy of anti-CD137 treatment has never been examined. This study investigates the involvement of DCs in the rejection of EG7-OVA tumors upon treatment with anti-CD137 agonistic mAb. This thymoma expresses chicken ovoalbumin (OVA) as a traceable antigen to which specific immune responses can be monitored in vivo and in vitro following anti-CD137 mAb treatment. The administration of anti-CD137 mAbs cause the eradication of EG7-OVA derived tumors by a CD8+ T cell-dependent mechanism that correlates with increased cytotoxic T lymphocyte (CTL) activity against the immunodominat OVA epitope. Although tumor cells are detectable in the tumor draining lymph nodes (TDLNs) of EG7-OVAbearing mice, tumor antigen presentation to OVA-specific CD8+ T lymphocytes in this model depends primarily on cells derived from the host. Ex vivo analyses to determine the identity of the cell type(s) responsible for tumor antigen cross-presentation has revealed that CD11c+ cells, most likely DCs, mediate this function. Using DTR-GFP C57BL/6 bone marrow chimeric mice, which allow for sustained in vivo ablation of DCs with diphtheria toxin, we confirmed the involvement of this cell subset in tumour antigen cross-presentation and in CTL induction against EG7-OVA. However, exhaustive depletion of DCs incompletely abrogates antitumor efficacy of anti-CD137 mAb indicating that DC-mediated cross-presentation is not an absolute requirement.

geno-especficas mostraron un fenotipo efector/memoria (CD127pos, CD62Lneg). El anlisis del repertorio de TCRs demostr un uso predominante de las cadenas Vbeta4 y Vbeta6 para el reconocimiento del eptopo NY-ESO-1 (157-165). Se observ adems una potente respuesta de clulas T CD4 especficas para NY-ESO-1, que increment significativamente la respuesta CD8 as como una fuerte respuesta humoral frente a diferentes eptopos lineales de NY-ESO-1. En conclusin, la inmunizacin con el antgeno tumoral NY-ESO1 en ratones transgnicos usando vectores lentivirales estimula una respuesta celular y humoral similar a la observada en pacientes con tumores NY-ESO-1+.

INDUCCIN DE APOPTOSIS POR AGENTES DESMETILANTES EN CLULAS T LEUCMICAS. Ruiz Magaa MJ, Morales Camino JC, Ruiz Ruiz MC. 1Centro de Investigaciones Biomdicas. La hipermetilacin del ADN es un mecanismo epigentico relacionado con el desarrollo del cncer que provoca el silenciamiento de genes supresores de tumores. Al contrario de lo que ocurre con los cambios genticos, esta alteracin epigentica se puede revertir mediante agentes farmacolgicos que inducen la hipometilacin del ADN, lo que sugiere el uso de las llamadas drogas epigenticas, solas o en estrategias combinadas, en la terapia del cncer. El objetivo de este trabajo es conocer el efecto que tienen los agentes desmetilantes decitabine y zebularine, solos o en combinacin con el ligando de muerte TRAIL, sobre lneas de clulas leucmicas T y sobre clulas T no transformadas. Hemos analizado la induccin de apoptosis por ambos agentes desmetilantes, as como la posible sensibilizacin a la muerte mediada por TRAIL, tanto en clulas T leucmicas como en T normales, mediante determinacin del ciclo celular con yoduro de propidio. Tambin se han estudiado las seales implicadas en la induccin de apoptosis por decitabine y zebularine y la regulacin de genes pro- y anti-apoptticos por dichos agentes, mediante las tcnicas de Western-blot y RT-PCR. Los resultados obtenidos indican que tanto el decitabine como el zebularine inducen apoptosis dependiente de caspasas y de la activacin de la ruta mitocondrial en lneas de clulas T leucmicas. Sin embargo, no son capaces de potenciar la muerte mediada por TRAIL en este modelo tumoral. Por otro lado, se ha observado que estos agentes desmetilantes no presentan efectos sobre la viabilidad de clulas T normales lo que sugiere su baja toxicidad y por tanto su posible utilizacin en terapia anti-turmoral.

LA INMUNIZACIN CON VECTORES LENTIVIRALES EN RATONES TRANSGNICOS INDUCE RESPUESTA CELULAR Y HUMORAL FRENTE AL ANTGENO TUMORAL NY-ESO-1. Casado JF1, Janda J2, Colombetti S2, Lvy F2. 1Facultad de Veterinaria de la Universidad de Extremadura. 2Ludwig Institute for Cancer Research, Lausanne Branch. Los vectores lentivirales infectan clulas dendrticas permitiendo la expresin estable de un gen y el desarrollo de una repuesta inmune cuantitativa y cualitativamente superior. En este trabajo hemos analizado la respuesta inmune en ratones transgnicos HLA-A2+ inmunizados va subcutnea con vectores lentivirales que codifican para el antgeno tumoral NY-ESO-1. La inmunizacin subcutnea con lentivectores dispar una respuesta de clulas T CD8+ especficas para diferentes eptopos. Esta respuesta fue mayor y ms duradera que la obtenida mediante inmunizacin con pptidos. Las clulas T CD8+ ant-

CORRELACIN ENTRE LA EXPRESIN DE HLA DE CLASE I Y LA PROGRESIN/REGRESIN DE LAS METSTASIS DE MELANOMA EN DOS PACIENTES SOMETIDOS A INMUNOTERAPIA. Carretero R1, Romero JM1, Rodriguez AB1, Maleno I1, Camacho F2, Rodriguez F2, Real LM3, Ruiz-Cabello F1, Garrido F1, Cabrera T1. 1Hospital Universitario Virgen de las Nieves. 2Hospital Universitario Virgen Macarena, 3Neocodex. A pesar de los buenos resultados obtenidos por la inmunoterapia en estudios preclnicos, solo se ha conseguido una regresin tumoral significativa en una pequea proporcin de pacientes. Estos pobres resultados pueden deberse a mecanismos de escape inmunitario por parte de las clulas tumorales, uno de ellos es la alteracin en la expresin de HLA de clase I.

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Hemos estudiado la expresin de MHC de clase I en 16 metstasis obtenidas de dos pacientes con melanoma sometidos a inmunoterapia. Seis fueron obtenidas de un paciente tratado con vacunacin autloga ms BCG (M-VAX) y 10 de otro paciente sometido a dos tratamientos inmunoterpicos, 5 tras interfern-alfa-2b y 5 tras vacunacin autloga ms BCG (M-VAX). Once de las metstasis estaban en regresin en el momento de la extirpacin mientras que 5 estaban en progresin, segn los PET y TAC realizados. Las metstasis en regresin mostraban altos niveles de expresin de HLA de clase I mientras que las metstasis en progresin tenan niveles bajos de HLA de clase I, estos estudios se realizaron mediante tcnicas inmunohistoqumicas con anticuerpos monoclonales especficos frente a diferentes molculas de HLA de clase I y cuantificacin de la beta 2 microglobulina, cadena pesada y los locus A,B y C mediante PCR a tiempo real. Nuestros resultados apoyan la hiptesis de que la alteracin en la expresin de molculas HLA de clase I juega un papel esencial en el escape tumoral del sistema inmunitario que puede ser determinante en la progresin o regresin de las metstasis. La diferente expresin de molculas HLA de clase I en los dos grupos de metstasis puede ser debida a la modificacin del microambiente tumoral por la inmunoterapia, la cual podra aumentar la expresin de clase I solo en las metstasis con alteraciones reversibles.

do: (i) al tropismo selectivo de este tipo celular por ciertas clases de tumores slidos, (ii) a la produccin local y mantenida de agentes teraputicos que, en muchos casos, presentan importantes limitaciones farmacocinticas y de toxicidad sistmica.

ANTICUERPOS RECOMBINANTES TRIVALENTES PARA LA IMAGEN MOLECULAR DEL CNCER. Cuesta Martnez A, Snchez Lpez M, Sanz L, lvarez-Vallina L. Hospital Universitario Puerta de Hierro. El descubrimiento de los anticuerpos monoclonales y el desarrollo de las tcnicas de ingeniera gentica, ha propiciado que los anticuerpos recombinantes (AcR) se conviertan en una slida tecnologa de plataforma para producir molculas diagnsticas, con utilidad para localizar depsitos tumorales in vivo. Los AcR que carecen de la regin Fc, como los fragmentos scFv (del ingls, single chain Fv), ofrecen ventajas: 1) son fciles de producir en sistemas bacterianos, 2) se extravasan ms eficazmente y 3) tienen una mayor capacidad de penetracin tisular. Sin embargo, su vida media es muy corta, ya que las protenas recombinantes con un tamao inferior a 60 Kd son filtradas por el glomrulo y excretadas por la orina rpidamente. Para aumentar su vida media se han propuesto diferentes sistemas, siendo el ms obvio su oligomerizacin. Los AcR mas utilizados son los bivalentes con formato: diabody (scFv con linkers cortos se impiden el apareamiento intramolecular entre dominios VH y VL intracatenarios) y minibody (scFv unido a un dominio CH3/Fc). En este trabajo proponemos un nuevo AcR trivalente (AcR-T) formado por un scFv unido al dominio de trimerizacin del colgeno XVIII. Empleando esta estrategia se generaron AcR-Ts a partir de los scFv: B1.8 (anti-hapteno NIP), L36 (anti-laminina) y MFE-23 (anti-CEA humano). Todos los AcR-Ts se comportaron como trmeros en solucin y fueron muy estables. Para los ensayos de localizacin tumoral (tumor targeting) los AcR-Ts se conjugaron con el fluorocromo cianina 5 (Cy5) que emite en el infrarrojo cercano, y se emplearon tcnicas de imagen molecular, que permiten una visualizacin no invasiva en organismos vivos, y un seguimiento continuado en tiempo real. La conjugacin de los AcR-Ts con Cy5 no alter sus caractersticas moleculares y funcionales. Despus de su administracin sistmica, en ratones portadores de tumores humanos, el AcR-T B1.8 no demostr localizacin tumor-especfica, el AcR-T MFE23 demostr localizacin especficamente en tumores CEA+, y el AcR-T L36 demostr localizacin tumor-especfica en todos los modelos estudiados. Estos datos indican que el formato AcR T es un armazn con propiedades farmacocinticas muy favorables y que equipado con un scFv adecuado presenta una excelente capacidad de localizacin tumoral. Nuestros resultados abren nuevas vas para el desarrollo de procedimientos diagnsticos no invasivos del cncer humano.

CLULAS MADRE MESENQUIMALES: VEHCULOS Y FACTORAS DE ANTICUERPOS TERAPUTICOS. Compte Grau1, Sanz Alcober L2, Vicario JL1, lvarez-Vallina L1. 1Unidad de Inmunologa Molecular, Hospital Universitario Puerta de Hierro. 2Unidad De Histocompatibilidad, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid. Las clulas madre mesenquimales (MSC, del ingls Mesenchymal Stem Cells) son clulas multipotentes y con alta capacidad regenerativa. En los ltimos aos se han desarrollado distintos ensayos para evaluar su utilidad y su potencial teraputico en protocolos de terapia regenerativa y terapia celular antitumoral. Estudios recientes han demostrado que MSCs se incorporan y sobreviven en el microambiente tumoral donde contribuyen activamente a la formacin del estroma tumoral, constituyendo as un modelo potencialmente til para la liberacin local de agentes teraputicos. En este trabajo nos planteamos modificar genticamente MSCs humanas (hMSCs), obtenidas de mdula sea, para estudiar su potencial como factoras de un anticuerpo biespecfico recombinante con formato diabody, con especificidad frente a la cadena epsilon del complejo TCR/CD3 humano y frente al antgeno carcinoembrionario (CEA) humano (antiCEA/antiCD3). Para llevar a cabo esta estrategia, generamos un vector lentiviral (pRRL-dAb-IRES-GFP), derivado del HIV-1, tricistrnico que contiene los genes del diabody biespecfico (dAb cadena 1 y dAb cadena 2) y el gen de la protena verde fluorescente (eGFP) unidos a travs de secuencias IRES derivadas del virus de la encefalomiocarditis. En ensayos in vitro, comprobamos que hMSCs infectadas expresaban, de forma estable, altos niveles de eGFP (85%) durante ms de un mes y secretaban niveles apreciables de diabody antiCEA/antiCD3 funcional. Empleando tcnicas de imagen molecular in vivo, observamos que hMSCs se distribuan de forma homognea en el depsito tumoral y expresaban eGFP al menos 30 das postimplantacin de una mezcla (1:2) de hMSCs modificadas genticamente con clulas tumorales gstricas humanas. El estudio inmunohistoqumico de las piezas tumorales demostr la presencia de diabody antiCEA/antiCD3 en el estroma peritumoral. El uso de hMSCs ofrece ventajas potenciales debi-

DESARROLLO Y VALIDACIN DE UN MODELO DE ANGIOGNESIS HUMANA IN VIVO MONITORIZABLE MEDIANTE TCNICAS DE IMAGEN MOLECULAR. Sanz Alcober L1, Santos-Valle P1, Vicario JL2, Serrano A3, lvarez-Vallina L1. 1Hospital Universitario Puerta de Hierro. 2Unidad de Histocompatibilidad, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid. 3Servicio de Inmunologa, Hospital Universitario Doce de Octubre, Madrid. El proceso angiognico, clave en el crecimiento tumoral, implica complejas interacciones moleculares y celulares que no pueden ser

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recapituladas in vitro. Sin embargo, no disponemos de modelos in vivo de angiognesis humana validados para el screening de agentes potencialmente antiangiognicos. Recientemente se ha descrito, en ratones inmunodeficientes, la formacin de vasos humanos mediante la coimplantacin de clulas endoteliales humanas de vena umbilical (HUVEC) y clulas madre mesenquimales (MSC) murinas, capaces de diferenciarse en clulas murales de soporte. Con el fin de desarrollar un modelo de angiognesis humana, simple y no invasivo, clulas HUVEC fueron transducidas con un vector lentiviral que codifica el gen reportero de la luciferasa. La deteccin de la bioluminiscencia, producida tras la administracin intraperitoneal del sustrato, permite la monitorizacin no invasiva de la actividad angiognica de las clulas HUVECluc. Con el objeto de que este modelo fuera completamente humano, las clulas endoteliales fueron coimplantadas con MSC humanas (HMSC) derivadas de mdula sea. La actividad luciferasa de las clulas HUVECluc implantadas en ratones atmicos pudo ser detectada durante ms de 120 das, y se correlacion, a nivel histolgico, con la formacin de una vasculatura humana madura y estable. La presencia de clulas HMSC result crtica para la maduracin de la vasculatura neoformada. Para estudiar la utilidad de este modelo de angiognesis humana, en el screening de compuestos antiangiognicos, un grupo de ratones portadores de estos implantes vasculares recibi el frmaco antiangiognico SU5416. La monitorizacin seriada de la actividad luciferasa demostr una disminucin estadsticamente significativa de la actividad luciferasa en el grupo tratado, en comparacin con el grupo control. En conclusin, este modelo ofrece nuevas oportunidades para el estudio longitudinal de mecanismos implicados en el proceso de neoformacin vascular y la monitorizacin de las respuestas a agentes inhibidores de angiognesis.

Se estudi la citotoxicidad de las clulas expandidas y de las diferentes sub-poblaciones mediante ensayos de liberacin de 51Cr. No se observaron diferencias en la capacidad de lisis entre cultivos expandidos a partir de clulas de cordn umbilical y sangre perifrica. La comparacin de la citotoxicidad exhibida por las sub-poblaciones CD8+CD56+ y CD8+CD56- demostr que si bien ambas presentan capacidad citotxica, esta es superior en la poblacin CD56+. Se evidenci citotoxicidad frente a lneas celulares con ausencia o disminucin en la expresin de molculas HLA de clase I, sugiriendo el empleo de mecanismos TCR independientes de citotoxicidad. Las clulas CD8+CD56+ presenta capacidad ltica frente a un nmero determinado de clulas diana. Con el fin de determinar si las clulas CD3+CD56+ pueden ser re-direccionadas frente a clulas dianas no susceptibles, mediante el empleo de anticuerpos monoclonales biespecficos, empleamos tetrmeros bi-especficos CD3:CD20 y CD3:CD19. Utilizando esta aproximacin hemos conseguidos incrementar de forma significativa la citotoxicidad de los cultivos de clulas totales as como de poblaciones CD3+CD56+ tanto frente a lneas tumorales CD19+ y CD20+ como a clulas leucmicas primarias.

UTILIDAD Y RIESGOS DE LA DETECCIN DEL FENOTIPO ABERRANTE CD19+CD10+CD38-/+ EN LA ENFERMEDAD MNIMA RESIDUAL. Alcal Pea MI, Rodrguez Martn E, Martnez Viambres E, Coll Mart J, Roldn E. Hospital Ramn y Cajal. Madrid. Introduccin. La deteccin de fenotipos aberrantes en los blastos de las leucemias agudas (LA) al diagnstico resulta fundamental en el seguimiento de la enfermedad mnima residual (EMR). Sin embargo, no siempre se tienen datos disponibles sobre la aparicin de tales poblaciones en otro tipo de patologas o en mdulas seas (MO) en reconstitucin. Objetivos. Estudiar la expresin de distintos antgenos de superficie en precursores B de pacientes con leucemia linfoide aguda (LLA), otras patologas y MO sanas, con el fin de determinar si dicha expresin es til en el estudio de la EMR. Mtodos. Deteccin de linfocitos B (LB) CD10+CD38-/+ (baja intensidad) en MO por citometra de flujo (CTF). Se tuvieron en cuenta aquellos eventos que por tamao, granularidad e intensidad de CD19 podan considerarse LB viables. Determinacin de la capacidad proliferativa de LB CD10+ por BrdU. Resultados. Se estudiaron por CTF muestras de diez pacientes con el objeto de detectar un fenotipo considerado clsicamente aberrante: CD19+, CD10+, CD38-/+ (baja intensidad). Cinco fueron controles sanos, dos leucemias mieloides agudas en remisin completa, dos leucemias crnicas y un LNH. En 5 de ellos no se detectaron clulas con dicho fenotipo, mientras que en los casos restantes s se detectaron estas clulas, con un porcentaje comprendido entre 0,0034%-0,029% sobre la celularidad total (media de 0,015%). Por otro lado, el ndice proliferativo de esta subpoblacin de precursores B (clulas BrdU+) fue variable (5,79%-23,88%), al igual que el observado en enfermos con LLA (1,48%-13,54%), por lo que tal caracterstica no diferenci a las clulas de enfermos con LLA de las de los otros grupos. Conclusiones. Aunque el fenotipo aberrante CD19+CD10+CD38/+ (baja intensidad) puede considerarse como un fenotipo til en el seguimiento de la EMR, su deteccin en enfermos de LLA en porcentajes inferiores al 0,03% de la celularidad total medular no excluye la posibilidad de que se trate de blastos linfoides normales.

LOS LINFOCITOS CIK (CYTOKINE-INDUCED KILLERS) EXPANDIDOS A PARTIR DE SANGRE DE CORDN UMBILICAL Y SANGRE PERIFRICA PUEDEN SER REDIRIGIDOS MEDIANTE ANTICUERPOS BI-ESPECFICOS. Bustamante L, Garca-Snchez F, Vicario JL, Balas A. Centro de Transfusin de Madrid. Las clulas CIK (Cytokine-Induced Killer) son un grupo heterogneos de linfocitos que incluyen fundamentalmente clulas CD3+CD8+ CD56+. Los linfocitos CD3+CD56+ estn presentes tanto en sangre perifrica (1-5%), como en sangre de cordn umbilical (0,1%). Presentan capacidad antitumoral mediante mecanismos independientes del complejo principal de histocompatibilidad (MHC), habiendo demostrado especificidad por un nmero limitado de clulas diana (K562, Jurkat), incluyendo leucemias mieloides agudas y crnicas, as como linfomas B. Partiendo de unidades de cordn umbilical y sangre perifrica de individuos sanos se han realizado expansiones 'in vitro'. Mediante el empleo de IFN, OKT3 e IL-2, se ha conseguido expandir en 21 das 1.461 veces la poblacin inicial de clulas CD3+CD56+ presente en sangre perifrica, y hasta 3.000 veces en 14 das, la misma poblacin presente en unidades de cordn umbilical. Todas las poblaciones incrementan la intensidad de expresin del receptor de activacin NKG2D, as como de perforina, indicando un incremento en la capacidad citotxica de las clulas. Tras 14-21 das de expansin los cultivos se componen de clulas CD3+ 96,2 0,9, CD8+ 60% 12, CD4+ 40 10. La poblacin CD3+CD56+ no demostr uso preferencial de ninguna cadena V.

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DETECCIN DE CLULAS TUMORALES CIRCULANTES EN UN LINFOMA DE EFUSIN PRIMARIA. Alcal Pea MI, Martnez Viambres E, Villar Guimerans ML, Benito Berrinches A, Coll Mart J, Roldn Santiago E. Hospital Ramn y Cajal. Madrid. Introduccin. El linfoma de efusin primaria (PEL), un tipo de linfoma de cavidades, se caracteriza por efusiones y crecimiento en fase lquida de clulas tumorales dentro de cavidades corporales, en ausencia de un tumor slido, adems de infeccin por herpesvirus 8. Aunque se ha descrito que el PEL posiblemente se origine en los centros germinales o postgerminales de los ganglios, hasta el momento no se ha descrito la presencia de clulas tumorales circulantes. Objetivos. Descripcin inmunofenotpica de un caso de PEL en lquido asctico (LA) en varn VIH- y deteccin de clulas clonales en sangre perifrica (SP) como posibles clulas precursoras. Mtodos. Muestras de SP, mdula sea (MO) y LA. El estudio de las poblaciones se llev a cabo por citometra de flujo. Resultados. Paciente diagnosticado desde 2001 de una leucemia mielo-monoctica crnica (LMMC). En 2007 el paciente desarroll ascitis en la cavidad abdominal. En la muestra de LA estudiada se detect una poblacin mayoritaria (87% de la celularidad total) con caractersticas citolgicas aberrantes y cuyo perfil antignico no corresponda con el de la LMMC original. Los resultados inmunofenotpicos descartaron poblacin blstica, de estirpe mielo-monoctica o linfoide. Sin embargo, dicha poblacin presentaba fenotipo de clula plasmtica (CP), con fenotipo CD38+ high, CD138+, CD19-, inmunoglobulina (Ig) de superficie -, kappa citoplsmica+. Mediante la tcnica de inmunofijacin no se detect Ig clonal ni en LA ni en suero. Adems de la poblacin descrita, se detect tanto en SP como en MO una poblacin de linfocitos B (LB) CD19+ con una intensidad de CD79b inferior a lo habitual y kappa de superficie +. Conclusin. Por vez primera se detecta una poblacin tumoral circulante en un PEL, cuyo perfil antignico (LB con una prdida parcial de CD79beta) sugiere una fase madurativa previa a la poblacin mayoritaria que se detecta en LA (clula plasmtica o pre-plasmtica).

marcador de enfermedades alrgicas, ya que la expresin de dicha protena se relaciona directamente con la severidad de la enfermedad. Objetivo. Estudiar la expresin de las protenas SOCS-1, 3 y 5 en linfocitos CD4+ y eosinfilos de sangre perifrica de pacientes con patologa respiratoria Th2 (asma extrnseco y bronquitis eosinoflica) e individuos sanos. Metodologa. Se analiz por PCR cuantitativa a tiempo real, los niveles de expresin gnica de SOCS-1,3 y 5 en los linfocitos CD4+ y eosinfilos de sangre perifrica de pacientes con patologa respiratoria (asma extrnseca y bronquitis eosinoflica) y donantes sanos. Tambin se realiz un anlisis inmunohistoqumico y por inmunofluorescencia en los eosinfilos para corroborar la expresin de la protena SOCS-3 en dichas clulas. Resultados y conclusiones. Los resultados en los linfocitos CD4+ indican que hay diferencias en la expresin de los genes de SOCS-1 y SOCS-3, siendo este ltimo mayor en el grupo de sujetos enfermos frente a los individuos sanos. Sin embargo, no existen diferencias estadsticamente significativas, entre los grupos de sujetos, en la expresin de SOCS-5. En el caso de los eosinfilos, se encuentran diferencias en la expresin de SOCS-3, siendo ms elevada en los eosinfilos de los pacientes. Por lo tanto, se describe por primera vez la expresin de las protenas SOCS en los eosinfilos humanos, existiendo una correlacin en los niveles de SOCS-3 en linfocitos CD4+ y eosinfilos de pacientes, postulando a SOCS-3 como un marcador de enfermedad.

MUTACIONES EN STAT3 EN EL S. DE HIPER IgE. Espaol Boren1, Garces P1, Caragol I1, Hernndez M1, Soler P2, Woellner C3, Grimbacher B3. 1U. Immunologia. H. Vall dHebron.Barcelona. 2U. Infecciosas e Inmunodeficiencias pediatricas. H. Vall DHebron. Barcelona. 3Immunology and Molecular Pathology. Dept. Royal Free Hospital. Londres. Objetivos. El sndrome de Hiper Ig E (HIES) es una inmunodeficiencia primaria (IDP) caracterizada por infecciones recurrentes por hongos y bacterias, eczema, fracturas seas espontneas, lesiones intraorales, eosinofilia y niveles elevados de Ig E > 2000 IU/ml. Los patrones clnicos, inmunolgicos y hereditarios son altamente heterogneos, y el diagnostico diferencial difcil en muchas ocasiones. Se presentan datos clnicos de nuestra serie de casos con los primeros anlisis mutacionales. Material y Mtodos. Revisin de antecedentes clnicos, familiares e inmunolgicos de cinco pacientes diagnosticados de HIES desde 1979 y el posterior anlisis mutacional. Resultados. Los pacientes (3 hombres y 2 mujeres) de entre 4 y 40 aos de edad, se diagnosticaron de HIES. La infeccin por Cndida y/o Aspergillus fue detectada en cuatro de cinco casos. Dos pacientes presentaron neumonia por Staphylococcus aureus con neumatoceles secundarios y fallecieron a los 4 y 14 aos de edad. Las dos mujeres se diagnosticaron a los 2 y 30 aos de edad. Actualmente ambas presentan secuelas pulmonares y reciben tratamiento antibitico profilctico y gammaglobulina ev en la primera paciente. Los niveles de IgE oscilaron entre 2500 y 32000 IU/ml. Se han demostrado dos mutaciones diferentes en el gen STAT3 (cambios aminoacdicos N466T y R382Q) segn estudio realizado en el Royal Free Hospital de Londres, en un caso familiar (herencia autosmica dominante) y en uno aislado, respectivamente. Los dems casos estn en estudio. Conclusiones. HIES es una IDP muy poco frecuente y de clnica muy heterognea. Los estudios genticos abren una puerta importante para facilitar el diagnstico especfico y permitir el consejo gentico.

SESIN 5: INMUNODEFICIENCIAS: ALERGIA Y COMPLEMENTO Moderadores: Dra. Margarita Lpez-Trascasa (Madrid), Dra. Nria Matamoros (Palma de Mallorca) ESTUDIO DE LA EXPRESIN DE PROTENAS SOCS EN LINFOCITOS CD4+ Y EOSINFILOS DE PACIENTES CON PATOLOGA RESPIRATORIA. Lpez Cernada ME1, Sastre B1, Gmez C1, Chacrtegui M1, del lamo C1, Crdaba B1, Palomino P2, Lahoz C2, del Pozo V2. 1Fundacin Jimnez Daz-Capio y Ciberes (ISCII). 2Fundacin Jimnez Daz-Capio. Introduccin. Los supresores de la sealizacin de citocinas (SOCS) representan una familia de protenas descubierta recientemente que estn implicadas en la regulacin negativa de la sealizacin de citocinas, asociada a la ruta JAK-STAT. Se ha visto que la seal reguladora a travs de miembros SOCS puede tener un papel importante en el balance de citocinas que determinan las respuestas mediadas por Th1 y Th2. SOCS-3 y SOCS-5 son principalmente expresadas en Th2 y Th1 respectivamente y ejercen una inhibicin recproca sobre la diferenciacin de dichas clulas Th. Estudios recientes han descrito a SOCS-3 como un nuevo

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IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN DE LOS ALERGENOS DEL EXTRACTO DEL POLEN DE SENECIO JACOBEA. Gmez Gmez C1, Luengo O2, Moll R1, Lpez E1, Sastre B1, Lahoz C1, del Pozo V1. 1Fundacin Jimnez Daz-Capio y Ciberes. 2Hospital Vall dHebrn. Barcelona. Introduccin. La familia de las Asteraceae es una de las familias ms representadas con ms de 1100 gneros y 20000 especies. Aunque cosmopolita, principalmente se localiza en las regiones templadas y subtropicales; en la Pennsula Ibrica han sido descritas ms de 1500 especies siendo Senecio vulgaris y Senecio jacobea las ms comunes. Objteivos. Determinar la importancia alergnica de S. jacobea e identificar sus alergenos principales; as como estudiar si presenta reactividad cruzada con otras plantas. Material y Metodos. Se reclutan 50 pacientes con rinoconjuntivis y prueba cutnea positiva frente a extracto de S. jacobea. La identificacin de sus alergenos se ha llevado a cabo mediante SDS-PAGE, geles 2D e inmunodeteccin. Posteriormente, la identificacin de estos alergenos ha sido realizada por espectrometra de masas y los resultados obtenidos comprobados por inmunoblot y microarray. Se realizan inmunoblot y ELISA de inhibicin para estudiar la reactividad cruzada de S. jacobea con otras especies de la misma familia y con Parietaria judaica. Resultados. El extracto del polen de S. jacobea presenta bandas de protenas entre 14-100KDa. Se han identificado 3 alergenos mayoritarios de 59, 39-42, y 31KDa. El anlisis 2D revela 8 spots de alrededor de 59KDa y 39-42KDa. Estos spots han sido identificados como malato deshidrogenasa y pectato liasa por espectrometra de masas. Se ha comprobado que la malato deshidrogenasa y la pectato liasa son alergenos de S. jacobea ya que son reconocidos por los sueros de los pacientes alrgicos. Los ensayos de inhibicin demuestran la existencia de reactividad cruzada entre S. jacobea y Artemisia vulgaris, as como entre S. jacobea y P. judaica. Conclusin. Se ha demostrado que S. jacobea es una nueva fuente alergnica y presenta reactividad cruzada con A. vulgaris y P. judaica. Se han identificado dos alergenos mayoritarios, una pectato liasa (alergeno ya descrito en Artemisia y Ambrosa) y una malato deshidrogenada, siendo la primera vez que esta enzima se describe como alergeno en plantas.

Realizamos un estudio caso-control con 199 enfermos y 389 controles sanos. Se estudiaron con sondas Taqman 3 mutaciones funcionales descritas (C104R, A181E, R202H) y 8 SNPs adicionales (rs3751988, rs34562254, rs3818716, rs2274892, rs4985700, rs8074984, rs4985762, rs8079130) para estudiar la variabilidad del gen. Las diferencias en frecuencias genotpicas y allicas fueron comparadas por el test chi-cuadrado o test exacto de Fisher. Las frecuencias haplotpicas se estimaron mediante el algoritmo EM (Expectation-Maximization). Todos los polimorfismos se ajustaron a las proporciones HardyWeinberg en nuestra muestra control. Ningn polimorfismo mostr diferencias significativas entre casos y controles. Sin embargo, se encontr un haplotipo constituido por esos 8 SNPs cuya frecuencia estaba incrementada en pacientes: 8,9% en enfermos vs. 5,1% en controles, p=0,002; pc. Nuestros datos preliminares sugieren que algn elemento en TNFRSF13B, distinto de los asociados a SVC, puede modular la predisposicin a padecer DIGA. En la actualidad, pretendemos confirmar esta asociacin en una muestra familiar de DIGA y pacientes con SVC.

LA MUTACIN GLY90SER EN EL GEN CD8A, CAUSANTE DE INMUNODEFICIENCIA DE CD8, SE CONFINA EN POBLACIN GITANA ESPAOLA. Mancebo Sierra ME1, Moreno Pelayo MA2, de la Calle Martn O3, Allende Martnez LM1, Kalaydjieva L4, Bertranpetit J5, Coto E6, Calleja Antoln S1, Ruiz Contreras J7, Paz Artal E1. 1Servicio de Inmunologa. Hospital Universitario 12 de Octubre. 2Unidad de Gentica Molecular. Hospital Ramn y Cajal. 3Servei d'Immunologia. Hospital de la Santa Creu i Sant Pau. 4Western Australian Institute for Medical Research and Centre for Medical Research. University of Western Australia. 5Unitat de Biologia Evolutiva, Departament de Ciencies Experimentals i de la Salut. Universitat Pompeu Fabra. 6Unidad de Gentica. Hospital Universitario Central de Asturias. 7Unidad de Inmunodeficiencias. Hospital Universitario 12 de Octubre. En este trabajo se describe el segundo caso de inmunodeficiencia de CD8, confirmando que el efecto patognico de la mutacin p.Gly90Ser consiste en una ausencia completa de linfocitos T CD8+, aunque las manifestaciones clnicas varan en severidad. Al igual que el primer caso descrito, este paciente es de origen gitano espaol y homocigoto para la mutacin p.Gly90Ser en la cadena alpha del CD8. El paciente sufri infecciones respiratorias de repeticin desde la infancia pero con conservacin del parnquima pulmonar, al contrario que el primer paciente, que muri debido al dao respiratorio. Se ha desarrollado un mtodo de screening de la mutacin por PCR-RFLP con la enzima de restriccin AluI, para el estudio de un total de 1127 controles no relacionados: 734 de origen gitano y de diferentes localizaciones geogrficas de Europa, y 393 controles espaoles (no gitanos). Los resultados indican que p.Gly90Ser est confinada a la poblacin gitana espaola, donde la tasa de portadores es del 0,4%. El anlisis de microsatlites flanqueantes del gen CD8A mutado (D2S2232, D2S388, D2S417, STSCD8A, STSCD8B, D2S2216, D2S2181), revel un nico haplotipo polimrfico lo que sugiere un origen comn para la mutacin p.Gly90Ser que causa la deficiencia de CD8 en la poblacin gitana espaola. La inmunodeficiencia de CD8 debe tenerse en cuenta en el diagnstico de gitanos espaoles con infecciones recurrentes, para establecer recomendaciones especficas en vacunacin y en hbitos de salud y para el consejo gentico de familias afectadas. Molecular Immunology 45(2):479-84; 2008. Financiacin FIS PI06/0170 y PI06/0614

PAPEL DEL GEN TACI EN PACIENTES CON DEFICIENCIA DE IgA EN POBLACIN ESPAOLA. Lpez Mejas R1, del Pozo N1, Garca-Rodrguez MC2, Ferreira A2, Gmez de la Concha E1, Fontn G2, Nez C1, Fernndez-Arquero M1. 1Servicio Inmunologa Clnica. Hospital Clnico San Carlos. 2Servicio de Inmunologa Clnica. Hospital La Paz. La deficiencia selectiva de IgA (DIGA) es la inmunodeficiencia primaria ms comn en caucsicos. Presenta un importante componente gentico pero hasta el momento slo se ha descrito asociacin con diversos alelos del HLA, que explican el 40% de la influencia gentica. TACI (transmembrane activator and CAML interactor), codificado por TNFRSF13B, es un receptor de la superfamilia de TNFR, presente en la superficie de linfocitos B perifricos. La unin de su ligando, APRIL (a proliferation-inducing ligand), induce el cambio de isotipo (fundamentalmente a IgA e IgG) independientemente de las clulas T. Mutaciones funcionales en TNFRSF13B se han visto asociadas al sndrome variable comn (SVC), y se ha postulado un posible papel en DIGA. Nuestro objetivo fue analizar la posible influencia de polimorfismos en este gen en pacientes espaoles con DIGA.

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SNDROME DE WISKOTT-ALDRICH CAUSADO POR UNA MUTACIN PREVIAMENTE ASOCIADA A XLT. Martnez-Martnez L1, Gonzlez-Santesteban C1, Ribes S2, Badell I3, de la Calle-Martn O1. 1Hospital de la Santa Creu i Sant Pau. 2Hospital Sant Joan de Deu. 3Hospital de la Santa Creu i Sant Pau (Pediatra). El Sndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) es una enfermedad ligada al X que se caracteriza por trombocitopenia con microplaquetas, eczema e infecciones recurrentes, y que est causada por alteraciones en el gen WASP. Mutaciones en este gen tambin son responsables de la trombocitopenia ligada al X (XLT), que cursa slo con trombocitopenia y microplaquetas. Presentamos el caso de un nio de 1 ao de edad, segundo hijo de padres no consanguneos, que a partir de los 3 meses padece diarreas sanguinolentas sin relacin clara con infeccin y un eczema mediosevero. El examen hematolgico revel trombocitopenia con plaquetas pequeas. Los estudios de funcin linfocitaria mostraron una respuesta aloreactiva alterada, mientras que la respuesta a mitgenos estaba conservada. El anlisis de las inmunoglobulinas mostr una IgE elevada (764 UI/mL). El estudio de la protena WASP en linfocitos T activados del paciente mediante citometra de flujo y western blot mostr una ausencia completa de dicha protena. El estudio del cDNA de WASP revel la falta de trnscrito normal y la presencia de uno de mayor tamao que contena un fragmento del intrn 6. La secuenciacin del gen WASP determin que el paciente tena la mutacin IVS6+5:G>A, que provoca una alteracin en el splicing, incorporando 38 nucletidos con un codn stop. La madre era la nica portadora de la mutacin (mutacin de novo). La mutacin IVS6+5:G>A ha sido reportada en pacientes con XLT asociada a trnscritos normales residuales que comportan una expresin disminuida de la protena. Nuestro paciente presenta una ausencia total de trnscrito normal y, con ella de protena, lo que explicara el fenotipo de WAS y no de XLT. El paciente fue sometido a un trasplante de progenitores hematopoyticos procedentes de su hermano mayor, HLA idntico. El anlisis de la expresin de la protena WASP en linfocitos T activados mediante citometra de flujo ya mostraba una reexpresin de dicha protena 3 semanas despus del trasplante.

mal en todos los miembros de la familia excepto en el propsitus, en el que era indetectable y se reconstitua con la adicin de C5 purificado. Se analiz el gen de C5, localizado en el cromosoma 9, mediante RT-PCR de 6 fragmentos solapantes a partir de RNA total obtenido de sangre perifrica, detectndose la sustitucin AG>CTCT en el exn 15 del propsitus y en su padre. Esta mutacin afecta a una putativa secuencia exnica reguladora del splicing (ESE) y causa skipping del exn 15, generando una protena truncada en el extremo C-terminal de la cadena alfa, que no es secretada. La secuenciacin del DNA genmico de los 41 exones de C5 revel una segunda mutacin de novo y en trans respecto a la anterior, Y846H, presente solo en el propsitus. En conclusin, aqu describimos el primer caso de un deficiente de C5 heterocigoto compuesto para dos mutaciones, de las que una es de novo.

EL FACTOR NEFRTICO (C3Nef), UN AUTOANTICUERPO DIRIGIDO FRENTE A LA C3 CONVERTASA DEL COMPLEMENTO: ASOCIACIONES CLNICAS Y ANLISI DE FACTORES QUE PUEDEN MODULAR LA APARICIN DE ESTE AUTOANTICUERPO. Domnguez MA1, Garrido S1, Vlagea A1, Martnez Ara J1, Fontn Casariego G1, Lutz H2, Harris C3, Rodrguez de Crdoba S4, Lpez Trascasa M1. 1Hospital Universitario La Paz. Madrid. 2Institute of Biochemistry Eth, Zurich. 3School of Medicine, Cardiff University. 4Centro de Investigaciones Biolgicas. CSIC. Madrid. La Glomerulonefritis membranoproliferativa (GNMP) es una nefropata caracterizada por depsitos de C3, en la que a menudo se detecta la presencia de un autoanticuerpo (autoAc), C3Nef asociado a la activacin de la va alternativa del sistema del complemento. Recientemente se ha puesto de manifiesto la existencia de mutaciones/polimorfismos en genes reguladores de la C3 convertasa de la va alternativa, tanto en el Sndrome Hemoltico Urmico (SHU) como en la GNMP. Se desconoce si este autoAc puede estar relacionado con la aparicin de la enfermedad o con la evolucin clnica de la misma. En la presente comunicacin se presentan varios pacientes con este autoAc. 1. Paciente diagnosticado de GNMP tipo II hace ms de 25 aos, en el que se detect la presencia de este autoAc durante 10 aos. Un anlisis detallado de su especificidad ha mostrado la existencia de Ac anti-C3 y anti-idiotipo. Recientemente, estudios genticos en este paciente han mostrado la existencia de dos mutaciones en el gen de factor H, anlogas a las encontradas en pacientes con SHU. 2. Paciente diagnosticado de GNMP tipo II, presentaba adems del autoAc un polimorfismo en factor B. En este paciente se observ que el efecto estabilizador en la C3 convertasa slo se deba al C3Nef. 3. Se ha encontrado la presencia de C3Nef en al menos dos pacientes sin ninguna evidencia de glomerulonefritis. Una de las pacientes haba sufrido meningitis y la segunda una neumona con derrame pleural. 4. Paciente con un pico monoclonal y un consumo elevado de todos los componentes iniciales del complemento. La IgG purificada del suero de esta paciente no es capaz de estabilizar la C3 convertasa de la va alternativa por lo que vamos a explorar si pudiera estar dirigido frente a la C3 convertasa de la va clsica o del complejo de ataque. Estos resultados nos llevan a considerar que la desregulacin inducida por C3Nef podra tener distintos efectos fisiopatolgicos lo que explicara su asociacin con patologas variadas.

CARACTERIZACIN MOLECULAR DE LA PRIMERA MUTACIN DE NOVO EN UN PACIENTE CON DEFICIENCIA DE C5. Lpez Lera A1, Garrido S1, Mena de la Cruz R1, Ramos JM2, Fontn G1, Lpez Trascasa M1. 1Hospital Universitario La Paz. 2Hospital General Universitari d'Elx. El componente C5 del sistema del complemento es esencial para la formacin del complejo de ataque a membrana en las rutas clsica, alternativa y de las lectinas. Su deficiencia causa una enfermedad autosmica recesiva que se asocia generalmente con episodios de meningitis recurrentes por N. meningitidis. Aqu presentamos el caso de un paciente que sufri varios episodios de meningitis bacteriana durante la infancia, con ausencia total de C5 en suero y perteneciente a una familia sin historia de consanguinidad. Por nefelometra se obtuvieron valores normales de C3 y C4 para el propositus, as como para sus padres y sus dos hermanos. La actividad hemoltica de las rutas clsica y alternativa (CH50, AP50) era nor-

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DEFICIENCIA RECESIVA PARCIAL DE IFN-GAMMAR1 (IFN-GR1). Sologuren I1, Garca-Laorden I1, Santiago E1, Hernndez-Lpez J1, Domnguez A1, Gonzalez-Quevedo N1, Chapgier A2, Florido Y1, Casanova J-L2, Rodrguez Gallego JC1. 1Servicio de Inmunologa. Hospital Universitario de Gran Canaria Dr. Negrn, Las Palmas de Gran Canaria. 2Dpto. de Gentica Humana de Enfermedades Infecciosas, Universidad Ren Descartes, Paris. La deficiencia de IFN-R1 se ha descrito en pacientes con infeccin grave por micobacterias ambientales, BCG, o raramente por Mycobacterium tuberculosis. No suele observarse otro tipo de infecciones, excepto salmonelas en algunos casos. La mayora presentan un defecto recesivo completo (RC, 27 pacientes) o dominante parcial (DP, 54 pacientes). El defecto DP expresa receptores anmalos que ejercen un efecto dominante, y responden a antimicobacterianos, y a IFN-. En ocasiones presentan recidivas. En el defecto RC no se expresa el receptor o expresan receptores mutados que no unen IFN-, la micobacteriosis es crnica y no se resuelve con el tratamiento; el nico tratamiento efectivo es el TMO, en su ausencia los pacientes fallecen antes de los 12 aos. Se han descrito 3 pacientes con defecto recesivo parcial (RP) debido a la mutacin I87T, clnicamente menos severos que el defecto RC. Se presenta el estudio inmunolgico y clnico de 6 pacientes homocigotos para la mutacin I87T y 4 pacientes homocigotos para V63G, la cual se crea que causaba un defecto RC. Se han desarrollado diversas tcnicas que permiten afirmar que los homocigotos para V63G presentan un defecto RP. De los 10 pacientes, 4 presentaron BCGosis tras vacunacin y 1 tuberculosis clnica. Los 6 pacientes con infeccin por micobacterias no-BCG presentaron la enfermedad con una media de 119 aos (1,8-22 aos). No se han observado recurrencias, y todos los pacientes han sobrevivido hasta una edad media de 15,611,4 aos (5 son mayores de 21 aos). Slo 1 paciente ha presentado salmonelosis. Como en el defecto DP, es frecuente la osteomielitis como nica presentacin, lo que no ha ocurrido en ningn paciente con defecto RC. Esta IDP es ms frecuente de lo sospechado inicialmente, puede debutar en edad adulta y no se aconseja TMO. En vista de las importantes implicaciones de pronstico y tratamiento es indispensable un meticuloso diagnstico inmunolgico y molecular en pacientes con deficiencia de IFN-R1.

mia y trompocitopenia autoinmunes, y otro a los 29 aos por carcinoma epidermoide de esfago. Los pacientes producan cantidades normales de IFN- en respuesta a PHA y BCG, aunque no respondan a IL-12, y prcticamente no se observ produccin de IL-17. El anlisis de Th1 y Th2 tambin mostr valores normales. Por otra parte, la paciente sana present una alta produccin de IFN-gamma y TNF-. El estudio de linfocitos de memoria mostr que no se produca IFN- en respuesta a S. enteritidis, toxoide tetnico y Cndidas, y el anlisis de produccin de IFN-gamma en repuesta a antgenos de M. tuberculosis (Quantiferon TB-Gold) fue negativo en los tres pacientes de la familia con dos afectos de MTBC. La presentacin de autoinmunidad y cncer amplia el espectro clnico de la deficiencia de IL-12RB1. En humanos con ausencia de sealizacin IL-12 e IL-23, se observa tras activacin policlonal un nmero normal de linfocitos Th1, un profundo defecto de Th-17, y no se observa incremento de Th2. No se ha detectado la presencia de clulas de memoria productoras de IFN-.

ESTUDIO DEL GEN TNFRSF13B EN LA INMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMN. PAPEL DE LA MUTACIN p.C104R. Martnez-Pomar N1, Detkova D2, Arostegui JI3, Escobar D1, Ferrer J1, Serra A1, Vidaller A4, Soler P5, Vendrell M6, Alvarez A6, de Gracia J6, Caragol I2, Espaol T2, Yage J3, Matamoros N1, Hernndez M2. 1Servicio de Inmunologa. Hospital Son Dureta. Palma de Mallorca. 2Unidad de Inmunologa. Hospital Vall d'Hebron. Barcelona. 3Servicio de Inmunologa. Hospital Clinic. Barcelona. 4Servicio de Medicina Interna. Hospital Bellvitge. Barcelona. 5Unidad de Inmunologa Peditrica. Hospital Vall d'Hebron. Barcelona. 6Servicio de Neumologa. Hospital Vall d'Hebron. Barcelona. La inmunodeficiencia variable comn (IVC) es la inmunodeficiencia predominante de anticuerpos sintomtica de mayor prevalencia. Aproximadamente el 10% de pacientes presentan mutaciones en TNFRSF13B que codifica para la protena TACI. Se han identificado 17 variantes allicas, si bien, slo se ha demostrado alteracin en la expresin y/o funcionalidad de TACI en algunas de ellas (p. ej. p.C104R). Objetivo. Analizar el gen TNFRSF13B en pacientes con IVC. Material y mtodos. Secuenciacin directa del gen de TNFRSF13B en 98 IVC y en 198 controles sanos. Resultados. El anlisis mutacional entre los pacientes identific 4 individuos homocigotos y 2 heterocigotos sencillos para la mutacin p.C104R y 1 individuo heterocigoto compuesto p.C104R/p.A181E. Entre otras variantes describimos 1 homocigoto y 2 heterocigotos para p.L171R; 3 heterocigotos sencillos para cada una de las variantes: p.C89Y, p.E117G, p.E140K. El anlisis de 29 familiares de primer grado de pacientes con la mutacin p.C104R revel dicha variante en 19 individuos sin patologa infecciosa (16 heterocigotos, 3 homocigotos y 1 heterocigoto compuesto p.C104R/p.A181E). Los niveles sricos de IgG en 2 familiares homocigotos y en el heterocigoto compuesto se hallaron en el lmite inferior de la normalidad. El anlisis de 198 controles sanos (Igs normales), revel 5 individuos heterocigotos para p.C104R. Discusin. Clulas B de pacientes homocigotos para p.C104R presentaron alteraciones en su funcin (Saltzer et al). Garivan et al. sugirieron un efecto dominante-negativo para esta mutacin en heterocigosis. Sin embargo, en nuestra serie de controles sanos y familiares de primer grado, observamos un elevado porcentaje de heterocigotos (n=21) y homocigotos (n=3) sin expresin clnica, lo que indicara que la mutacin p.C104R tiene una penetrancia variable, secundaria a un sistema redundante de sealizacin. Se est estudiando la posible relacin de las variantes p.C89Y, p.E117G y p.E140K y la funcionalidad de TACI.

AUTOINMUNIDAD Y CNCER EN LA DEFICIENCIA DEL RECEPTOR BETA-1 DE LA IL-12 (IL-12RB1). ESTUDIO DE LINFOCITOS TH1, TH2 Y TH17. Garca Laorden MI1, Sologuren I1, Santiago E1, Caragol I2, Hernndez-Lpez J1, Florido Y1, Domnguez A1, Fieschi C3, Casanova J-L3, Rodrguez-Gallego C1. 1Servicio de Inmunologa. Hospital Universitario de Gran Canaria Dr. Negrn, Las Palmas de Gran Canaria. 2Servicio de Inmunologa. Hospital Vall d'Hebron, Barcelona. 3Laboratory of Human Genetics of Infectious Diseases, University of Paris Ren Descartes, Paris. IL-12RB1 forma parte del receptor de la IL-12 y de la IL-23. Los pacientes con deficiencia de IL-12RB1 son susceptibles a infeccin grave por micobacterias. La recurrencia es muy rara y la vacunacin con BCG parece prevenir de posteriores infecciones por micobacterias, sugiriendo la existencia de repuesta secundaria. La salmonelosis es menos frecuente. En ratn, IL-12 e IL-12R son necesarios para la generacin de linfocitos Th1, la IL-23 es necesaria para la expansin de linfocitos Th17, e IL-12/IFN e IL-23/IL-17 estn implicados en autoinmunidad y cncer. Se estudiaron 6 pacientes de dos familias con deficiencia de IL12RB1. Cuatro presentaron infecciones diseminadas por salmonellas y uno por M. avium. Dos padecieron infeccin por M. tuberculosis (MTBC), y su hermana de 21 aos, con la deficiencia, nunca ha presentado infecciones reseables. Un paciente falleci a los 7 aos con ane-

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INMUNOLOGA

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ASOCIACIN FENOTIPO-GENOTIPO EN DOS CASOS DE SNDROME DE INMUNODISREGULACIN, POLIENDOCRINOPATA Y ENTEROPATA LIGADA AL CROMOSOMA X (IPEX). Escobar D1, lvarez Doforno R2, Juli MR1, Delgado Cervio E2, Martnez-Pomar N1, Melgosa M2, Lamas R2, Rosell A3, Fontan Casariego G2, Matamoros N1. 1Servicio de Inmunologa. Hospital Son Dureta. Palma de Mallorca. 2Servicio de Inmunologa. Hospital La Paz. Madrid. 3Servicio de Pediatra. Hospital Son Dureta. Palma de Mallorca. Introduccin. IPEX es un sndrome secundario a mutaciones en FOXP3, ligado al cromosoma X, caracterizado por poliendocrinopata autoinmune en el primer ao de vida, enteropata y dermatitis eczematosa. Caso 1. Varn: a los 2 meses enteropata grave de evolucin trpida y dermatitis eczematosa. Requiere: corticoides, gammaglobulina intravenosa (IVIG) y tacrolimus. A los 6 meses: bacteriemias mltiples e hiperglucemia ocasional controlada con insulina y posterior normalizacin. Evolucin favorable. Tratamiento de mantenimiento: IVIG. A los 3 aos retraso pondoestatural, debut brusco diabetes insulino-dependiente. Caso 2. Varn: a los dos meses enteropata secretora; a los 5 aos diagnstico enteropata autoinmune. Tratamiento: corticoides y ciclosporina. Desaparicin de la sintomatologa digestiva, que reaparece al retirar la inmunosupresin. A los 19 aos insuficiencia renal aguda. Materiales y mtodos. Secuenciacin directa de FOXP3. Inmunofluorescencia, ELISA, nefelometra y citometra de flujo. Resultados. Caso 1 linfopenia T, CD4CD25 1%. Hipogammaglobulinemia. IgE elevada (pico 13200 UI/ml); ANCA y AntiGAD: positivos. Biopsia intestinal: atrofia de vellosidades. Mutacin p.R397Q. Caso 2 CD4CD25 2%. Hipogammaglobulinemia. Antienterocito y antimembrana basal tubular positivos. Biopsia renal: nefritis tubulointersticial aguda y nefropata membranosa con IR. Mutacin p.E249K. Conclusiones. Presentamos 2 casos de IPEX con distinto fenotipo clnico. Caso 1. Enteropata, dermatitis y diabetes mellitus. Evolucin trpida desde la infancia. Inclusin en lista para TMO. Caso 2. Enteropata desde la infancia, con evolucin a brotes. Larga supervivencia. A los 19 aos nefropatia autoinmune. Diagnstico IPEX. Posible relacin fenotipo-genotipo: Caso 1: fenotipo severo, la mutacin afecta al dominio forkhead que regula la transcripcin. Caso 2: fenotipo leve, larga supervivencia, una mutacin en el motivo CC, posible alteracin parcial de la funcin proteica.

Filogenia. El hecho de que la mutacin se encuentre en una posicin muy conservada a lo largo de la evolucin desde peces y en una zona crucial para el ensamblaje del TCR, plantea la posibilidad de que pudiera ser un factor de riesgo. Por otro lado, el nico individuo fallecido al empezar el estudio era homocigoto para la mutacin y adems, aparece en heterocigosis en otro paciente de familia no relacionada, aunque con una clnica menos severa. Fenotipo. Analizamos la conformacin del TCR/CD3 en los linfocitos T de los heterocigotos disponibles y observamos los niveles de expresin de CD3 disminuidos. Este inmunofenotipo es similar al encontrado en los heterocigotos para mutaciones deletreas en el gen CD3G, lo que sugiere que p.V131F pudiera serlo tambin. Genotipo. El estudio poblacional realizado en controles espaoles sanos muestra la presencia de p.V131F en homocigosis, lo que la descarta como causa de enfermedad, aunque no como factor de riesgo.

DESARROLLO DE VECTORES LENTIVIRALES TRANSCRIPCIONALMENTE REGULADOS PARA LA TERAPIA GNICA DEL SNDROME DE HIPER IgM LIGADO AL CROMOSOMA X(XHIM1). Romero Z1, Unciti JD1, Carranza D1, Cobo M2, Martn F2, Molina IJ1. 1Centro de Investigacin Biomdica. Universidad de Granada. 2IPB "Lpez Neyra" CSIC. Granada. La terapia gnica de las inmunodeficiencias primarias requiere el desarrollo de vectores seguros y eficientes que minimicen los efectos adversos de una expresin incontrolada del transgen. Esto es crtico en el desarrollo de terapia gnica en el Sndrome de Hiper IgM (XHIM1). En efecto, la reconstitucin de los progenitores hematopoyticos de ratones deficientes en CD40L con vectores retrovirales constitutivos consigui una expresin del transgen en clulas perifricas que logr reconstituir la respuesta humoral y celular: No obstante, estos animales desarrollaron una severa enfermedad linfoproliferativa tmica, de causa no definida pero ligada a la expresin no regulada del transgen teraputico. Por ello, nos hemos propuesto desarrollar vectores lentivirales transcripcionalmente regulados que produzcan una expresin fisiolgica y tejido-especfica en clulas CD4+ de CD40L. Como punto inicial, hemos modificado nuestro vector lentiviral WW, que dirige la transcripcin regulada hematopoytico-especfico del gen WAS a travs de un fragmento proximal de 500 bp del promotor endgeno del gen WAS. Hemos reemplazado en este vector el cDNA de WAS por el de CD40L, amplificado a partir de mRNA de linfocitos T activados, obteniendo as el vector lentiviral WCD40L. Como control, hemos generado el vector lentiviral constitutivo SCD40L, en el que la expresin del trangen es controlada por el promotor constitutivo SFFV. El empaquetamiento viral se realiz mediante cotransfeccin en clulas 293T del plsmido teraputico ms el plsmido conteniendo la envuelta VSVg y un tercero con gag-pol. Los sobrenadantes virales fueron titulados y se utilizaron para translucir un panel de clulas hematopoyticas y no hematopoyticas, a fin de comprobar si el promotor proximal de WAS es capaz de mantener la transcripcin tejido-especfica de CD40L. El anlisis de la expresin se realiz mediante citometria de flujo sobre clulas en las que en paralelo se determin el nmero de inserciones del transgen mediante PCR en tiempo real. Los resultados obtenidos sugieren que el promotor proximal de WAS consigue su mxima regulacin tejido-especfica dirigiendo la transcripcin del propio gen WAS, pero su eficacia para dirigir la expresin regulada de otros genes especficos del linaje hematopoytico, como CD40L, es menor.

MUTACIN p.V131F EN LA REGIN TRANSMEMBRANAL DE CD3G: FACTOR DE RIESGO O POLIMORFISMO? Recio Hoyas MJ1, Busto E1, Crespo A1, Prez V1, Rein J1, Allende L2, Moreno-Pelayo MA3, Van Montfrans J4, Lefranc G5, Regueiro JR1. 1Inmunologa. Facultad de Medicina. Universidad Complutense. Madrid. 2Inmunologa. Hospital 12 de Octubre. Madrid. 3Unidad de Gentica Molecular. Hospital Ramn y Cajal. Madrid. 4Wilhelmina Children's Hospital. Utrecht. Holanda. 5Institut de Gntique Humain. Montpellier. Francia. Casos: 1) Paciente con clnica SCID, homocigoto para la mutacin p.V131F en CD3G, familia consangunea de origen libans, fallece a los 7 aos de edad. La hermana, heterocigota para la mutacin, presenta una clnica y analtica similares. Respuesta T normal a mitgenos, pero disminuida frente a OKT3 y antgenos. Padres sanos, heterocigotos para la mutacin. 2) Nio de 2 aos de edad, heterocigoto para la mutacin, familia no consangunea, que ingresa con un episodio severo de neumona por HHV-6. Niveles disminuidos de Igs y una leve linfopenia TCD4. Respuesta T defectuosa frente a antgenos pero normal a mitgenos.

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EXPRESIN DE WASP EN LINFOCITOS T DE PACIENTES CON SNDROME DE WISKOTT-ALDRICH TRAS EL TRATAMIENTO CON INHIBIDORES DE LA CALPANA Y EL PROTEASOMA. Zaldivar G1, Torres S1, Srivastava GK1, Vidal C2, Matamoros N2, Molina IJ1. 1Instituto de Biopatologa y Medicina Regenerativa, Centro Investigacin Biomdica. Parque Tecnolgico de Ciencias de la Salud. Universidad de Granada. 2Servicio de Inmunologa. Hospital Universitario "Son Dureta". Palma Mallorca. El sndrome de Wiskott-Aldrich (WAS) es una enfermedad ligada al cromosoma X caracterizada por eczema, trombocitopenia e inmunodeficiencia progresiva. El gen mutado, WASP, codifica para la protena WASP que es especficamente degradada por calpana. La protena WIP (WASP Interacting Protein) se une a WASP en su dominio EVH1, presente en el extremo N-terminal de WASP, y se ha demostrado que las mutaciones por cambio de sentido que afectan a la zona de unin WASP-WIP dan como resultado que WIP no pueda unirse a WASP. Hemos postulado, por tanto, que WIP podra proteger a WASP de una degradacin acelerada, y que por consiguiente, aquellos pacientes con mutaciones por cambio de sentido que afectan a la zona de interaccin con WIP podran alcanzar niveles apreciables de WASP tras el tratamiento con inhibidores de la calpana. Igualmente, WIP acta como chaperona protegiendo a WASP a su paso por el proteasoma, por lo que estos mismos pacientes podran beneficiarse de un tratamiento con inhibidores del proteasoma. Por ello, hemos secuenciado a una serie de pacientes con sospecha de WAS y generado lneas celulares aloespecficas de aquellos que presentaban mutaciones que daban lugar a cambios de aminocidos en la zona de interaccin WASPWIP. El anlisis de la expresin de WASP se realiz mediante Western Blot cuantitativo, encontrando niveles ausentes o muy reducidos de WASP. Las clulas T fueron tratadas con calpeptina (inhibidor de la calpana) o con Velcade o MG-132 (inhibidores del proteasoma). La expresin de WASP fue examinada por Western Blot tras 6 horas de tratamiento con los mencionados agentes. Hemos podido comprobar que estos tratamientos conseguan alcanzar niveles de expresin de WASP en dos de los tres pacientes estudiados equivalentes al 25% de la cantidad de WASP encontrada en individuos sanos. El tercer paciente tiene una mutacin en el nucletido 336 T>G, lo que da lugar a un cambio en el AA 101 Leu>Prol. Esta mutacin afecta a la zona final del dominio EVH1, y probablemente se encuentre fuera del lugar de acoplamiento de WIP. Por tanto, el tratamiento con inhibidores de la calpana y proteosoma slo sera efectivo en pacientes con mutaciones que afecten directamente a la zona de interaccin WASP-WIP.

y una expansin de linfocitos T CD8 CD57+ DR+. Se inicia tratamiento sustitutivo con IGIV, con adecuado control de las infecciones. A los dos aos debuta con episodios recurrentes de fiebre sin foco, plaquetopenia, neutropenia y anemia, coincidentes con expansines de T CD8 y con adenopatas, gran esplenomegalia e infiltracin nodular en higado y riones. Se realiza esplenectoma en un intento de controlar la plaquetopenia. Dos aos despus desarrolla una neumona por P. carinii (linfocitos T CD4: 723/mmc), corroborandose la disfuncin T (muy bajas respuestas proliferativas a PHA, IL2 y anti-CD3). Se detectan asimismo concentraciones sricas muy elevadas de IL6, TNFalfa, IFNgamma y CD95L. En Diciembre de 2007 la paciente desarrolla una insuficiencia hepatorenal severa tras un episodio de diarrea, fiebre, pancitopenia y sntomas B, coincidentes con infiltracin sistmica por linfocitos T CD8 de carcter oligoclonal. Los sntomas se atenuan con corticoides y se plantea la posibilidad de un Tx hematopoytico de hermano HLA-identico, como posible solucin terica a la inmunodeficiencia B y T y a la expansin de linfocitos T clnicamente agresiva. Se traslada al hospital ValldHebron para valoracin, y se diagnostica un shunt hepato-pulmonar aadido. El shunt hepato-pulmonar es una patologa de mal pronostico, habitualmente asociada a cirrosis y/o hipertensin portal, y que no se ha descrito en la IDVC. En este punto se replantea la idoneidad de Tx hematopoytico versus inmunosupresin.

SESIN 6: CLULAS B Y NK Moderadores: Dra. frica Gonzlez (Vigo), Dr. Miguel Lpez-Botet (Barcelona) LA LEUCEMIA LINFTICA CRNICA B MIGRA EN RESPUESTA A LOS LIGANDOS DE CCR7 A TRAVS DE UN MECANISMO DEPENDIENTE DE PI3K Y RHO. Cuesta Mateos C, Alfonso Prez M, Lpez Giral S, Muoz Calleja C. Hospital Universitario de la Princesa. Nuestro grupo de investigacin ha demostrado que las neoplasias de clulas B con amplia diseminacin a ganglio linftico expresan altos niveles de los receptores de quimioquinas CCR7, CXCR4 y CXCR5, que median la entrada de los linfocitos en los rganos linfoides secundarios. Los ndices de migracin de la leucemia linftica crnica de clulas B (LLC-B) en respuesta a los ligandos de CCR7, CCL19 y CCL21, correlacionan con la presencia de linfadenopata clnica y mediante experimentos in vitro demostramos que anticuerpos anti-CCR7 eliminan clulas de LLC y bloquean su migracin. El objetivo de este estudio es estudiar las vas de sealizacin que median la migracin de clulas de LLC en respuesta a CCL19/21 dada la posible relevancia de CCR7 como diana teraputica. As, mediante ensayos de inmunoblot y quimiotaxis in vitro, analizamos la participacin de las MAPKs, de PI3K y de la familia Rho de pequeas GTPasas, que se encuentran entre los principales mediadores de la quimiotaxis linfocitaria. Los ligandos de CCR7 indujeron una fuerte activacin de ERK1/2, y en menor medida de p38 y JNK, que sin embargo no jugaron ningn papel en la migracin de clulas LLC. En cambio, las vas PI3K y Rho s regularon la quimiotaxis dependiente de CCR7 de esta leucemia. As, inhibidores de PI3K y del efector de Rho, ROCK, redujeron notablemente la migracin celular de LLC en respuesta a los ligandos de CCR7. Ensayos de inmunoblot evidenciaron niveles de Akt constitutivamente fosforilado que aumentaron tras estimulacin con CCL19/21.

INMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMUN CON DISFUNCIN T, SNDROME LINFOPROLIFERATIVO, PANCITOPENIA Y SHUNT HEPATO-PULMONAR: INDICACIN DE TRASPLANTE HEMATOPOYTICO? Sampalo A, Rodriguez-Gutierrez JF, Bernal MJ, Nieto A, Fernandez-Valle C, Giron JA, Espaol T, Barrenechea C, Juli A, Brieva JA. Servicios de Inmunologa, Hematologa y Medicina Interna. Hospital Puerta del Mar (Cdiz), Hospital Vall dHebron (Barcelona). Mujer de 32 aos diagnosticada hace 11 de IDVC por infecciones otosinusales de repeticin que comienzan a partir de una mononucleosis infecciosa de evolucin torpida. Al diagnstico presenta panhipogammaglobulinemia (IgG 258 mg/dl; IgA: < 5 mg/dl, IgM: 9 mg/dl, IgE: < 2 UI/ml), incapacidad de produccin de anticuerpos, baja respuesta proliferativa T y ausencia de linfocitos B (<0.2%) . Tiene una hermana con deficiencia de IgA. El estudio fenotpico inicial confirma un perfil MB0

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INMUNOLOGA

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Confirmamos el papel de PI3K y Rho en la migracin de LLC-B mediada por CCR7 mediante nucleofecciones transitorias con mutantes dominante negativo y constitutivamente activo de ambas molculas. Por tanto, la sern/treonn quinasa PI3K y la pequea GTPasa Rho juegan un papel primordial en la migracin in vitro de la LLC en respuesta a las quimioquinas homeoststicas CCL19/21, apoyando su posible participacin en la infiltracin ganglionar de esta leucemia.

AID, LA DEAMINASA INDUCIDA POR ACTIVACIN, ES HAPLOINSUFICIENTE. Vidal Sernndez I, Rodrguez Ramiro A. Centro Nacional de Investigaciones Oncolgicas (CNIO). En respuesta al antgeno, los linfocitos B tienen la capacidad nica de remodelar somticamente los genes de inmunoglobulinas (Igs) mediante dos mecanismos: hipermutacin somtica (SHM) y cambio de isotipo (CSR). Ambos son iniciados por la enzima Deaminasa Inducida por Activacin (AID) a travs de la deaminacin de citosinas en el loci de Igs. Adems, AID promueve la generacin de translocaciones cromosmicas (TCs) linfomagnicas lo que tiene una enorme relevancia clnica, ya que la gran mayora de los linfomas diagnosticados en occidente se originan a partir de clulas B maduras. El estudio de la regulacin de AID es por ello de vital importancia. Nuestro objetivo ha sido determinar si los niveles de expresin de AID son limitantes para su actividad. Analizamos el efecto funcional de la dosis de AID usando linfocitos B de bazo de ratones AID+/+, AID+/- y AID-/- cultivados in vitro en condiciones que promueven el CSR. Observamos por citometra que las clulas B que portan una copia nica de AID reducen la eficiencia de CSR un 50% respecto a cuando existen dos copias. Ocurre tanto para el CSR a IgG1 como a IgG3. Para conocer el efecto de la dosis de AID en la generacin de lesiones linfomagnicas, estudiamos la generacin de TCs c-myc/IgH en animales transgnicos para IL6 y deficientes en p53. Nuestros resultados indican que los ratones IL6tgAID+/-, a diferencia de los controles IL6tgAID+/+, carecen de TCs distales Salfa y que la frecuencia de TCs proximales Smu est reducida al 50% en animales AID+/-p53+/-, con respecto a ratones con dos alelos funcionales de AID (AID+/+p53+/). Conclumos que AID es haploinsuficiente, lo cual es excepcional en genes que codifican actividades enzimticas. Los niveles fisiolgicos de AID estn sometidos a una regulacin estricta, probablemente para asegurar una respuesta humoral eficiente sin comprometer la estabilidad genmica de la clula B.

Nuestros resultados indican que la ausencia de miRNAs 1) bloquea parcialmente la diferenciacin de clulas B en la mdula sea, lo que da lugar a una reduccin de la poblacin B en los tejidos linfoides perifricos, 2) las proporciones de las distintas poblaciones de linfocitos B en bazo se encuentran alteradas, existiendo un incremento de la poblacin de zona marginal y una reduccin de la poblacin folicular, 3) las clulas deficientes para Dicer muestran tambin patrones de hiperactivacin en placas de Peyer. Estos datos indican que los miRNAs tienen un papel crucial en la diferenciacin del linaje B y en la generacin de sus distintas subpoblaciones.

CARACTERIZACIN DE PROTENAS DE LOS CUERPOS NUCLEARES EN LEUCEMIA LINFOBLSTICA AGUDA DE LINFOCITOS B. Gngora Fernndez R, Martn Martn N, Alonso Chamorro L. Universidad de Salamanca. Objetivos. Los cuerpos nucleares (NBs) son complejos proteicos cuyo significado funcional permanece todava mal conocido, aunque pueden regular la expresin gnica, y en consecuencia aspectos tan esenciales como el control de ciclo celular y la apoptosis. PML, el componente prototpico de estos NBs es esencial en la ontogenia y apoptosis de progenitores mieloides, y por otra parte, la protena de fusin PML-RXR es el agente causal de la leucemia promieloctica aguda, una leucemia aguda mieloide. Nosotros hemos visto en ratn que PML no es esencial para el desarrollo y apoptosis de progenitores B, mientras que Daxx otro componente de los NBs, si es esencial para la apoptosis inducida por interfern en estos progenitores. Nuestro inters actual se centra en estudiar la dinmica de los NBs en el crecimiento y apoptosis de clulas con leucemia linfoblstica aguda (B-ALL) en el hombre, la vertiente tumoral de una normal ontogenia B. Mtodos. Nuestro inters se centr en el anlisis de la lnea celular EU-12, que muestra distintas subpoblaciones de linfocitos B en continua diferenciacin. Se estudi la expresin y localizacin de protenas de PML y Daxx en estas clulas, as como su comportamiento en apoptosis, mediante inmunofluorescencia y microscopa confocal. Resultados. No se observ una obvia colocalizacin nuclear de Daxx y PML (como en progenitores mieloides), y la expresin y localizacin de estas protenas no se vio alterada en los mecanismos de apoptosis analizados. El interfern no indujo apoptosis ni la expresin de Daxx (como en progenitores primarios de ratn). Conclusiones. Los componentes de los NBs no se vieron afectados en expresin/localizacin durante la diferenciacin y apoptosis de estas clulas leucmicas. Los NBs podran estar involucrados en el crecimiento aberrante de estos progenitores, pero se hace necesario el estudio de progenitores leucmicos frescos obtenidos de pacientes y de progenitores normales en mdula sea.

LOS MICRORNAS REGULAN LA GENERACIN DE CLULAS B. Belver Miguel L, Rodrguez Ramiro A. Centro Nacional de Investigaciones Oncolgicas (CNIO). Los microRNAs (miRNAs) son molculas pequeas de RNA no codificantes que actan como reguladores de la expresin gnica, inhibiendo la traduccin o induciendo la degradacin de mRNAs. Los miRNAs controlan importantes funciones celulares y su expresin aberrante se ha ligado a procesos de transformacin celular y linfomagnesis. Los miRNAs se generan a partir de precursores de RNA de mayor longitud que son procesados por la RNAsa Dicer. Para estudiar el papel de los miRNAs en la diferenciacin y funcin de clulas B, hemos generado ratones en los que el gen Dicer est eliminado especficamente en clulas B (Dicer-flox/flox CD19-Cre ki/+).

CD38 IS RELEASED IN ASSOCIATION WITH CD81 AND HSC-70 IN EXOSOMES IN HUMAN LYMPHOBLASTOID B CELLS. Zumaquero Martnez EC1, Muoz Fernndez P1, Pavn Castillero EJ1, Garca Prez A1, Garca Veguillas A1, Sancho Lpez J1, Zubiaur Marcos M1,2. 1Instituto de Parasitologa y Biomedicina "Lpez-Neyra". CSIC. 2Instituto de Salud Carlos III. CD38 a type-II transmebrane protein is specifically recruited to membrane rafts in human lymphoblastoid B cell lines. We have identified several cellular proteins that preferentially associate with CD38

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in the B cell membrane rafts: 1) CD38/CD19/Lyn; 2) CD38/CD81; and 3) CD38/HSC70. These associations are dependent of membrane rafts integrity since they are disrupted in the presence of 60 mM n-octyl[beta]-D-glucopyranoside. Stress and tetrapanin proteins, including HSC-70 and CD81, have been identified in a discrete population of nano-vesicles (40-90 nm in diameter) called exosomes, which are secreted by a variety of cells including B cells. We set for to isolate exosomes from Namalwa B cells and demonstrate that CD38 is released in association with these vesicles. Examining multiprotein complexes from CD38-exosomes vesicles we found that are enriched in HSC-70, Lyn and CD81. Our results present evidence supporting i) the exportation of CD38 out of the cells through the exosome pathway, and ii) the identification in membrane rafts and in exosomes of key signaling components of CD38-protein complexes.

LA DUPLICACIN DE LOS GENES KIR2DL5-KIR2DS3 FACILITA LA GENERACIN DE HAPLOTIPOS CON NUEVAS DELECIONES Y DUPLICACIONES DE VARIOS GENES KIR. Ordez del Valle D1, Meenagh A2, Gmez-Lozano N1, Castao J1, Middleton D2, Vilches C1. 1Inmunologa. Hospital Universitario Puerta de Hierro. 2N. Ireland Regional Histocompatibility and Immunogenetics Laboratory, Belfast, UK. En el complejo KIR (19q13.4), los genes KIR2DL5 y KIR2DS3 estn localizados de manera consecutiva y muestran una fuerte asociacin entre ellos. A lo largo de la evolucin, se han producido recombinaciones que han resultado en la duplicacin de ambos genes, formndose un grupo centromrico y otro telomrico de 2DL5-2DS3 separados por otros cinco genes KIR. La duplicacin debi haberse producido en un periodo reciente de la historia evolutiva humana, ya que ambos grupos 2DL5-2DS3 difieren uno de otro en pocos cambios de nucletido. La casi total identidad en las secuencias de ambos grupos de genes probablemente facilite que se produzcan nuevas recombinaciones entre ellos. En este trabajo presentaremos la existencia de dos haplotipos inusuales (uno en una familia espaola y otro en una irlandesa), cuyo origen aparente es una misma recombinacin entre los dos grupos 2DL5-2DS3. En el haplotipo de la familia espaola hay una delecin de siete genes KIR localizados en la region central (100 kb aproximadamente), que yuxtapone el gen 2DL5 centromrico con el gen 2DS3 telomrico. El otro haplotipo presenta la duplicacin de los mismos genes que estn delecionados en la familia espaola, formando un haplotipo largo de 18 genes KIR.

in the elderly, likely as a consequence of thymus involution, accompanied by the expansion of effector and effector-memory cells is well established. Moreover, recent evidences also support that many alterations observed in the CD8 T cell compartment can be explained by the chronic activation of the immune system by latent viruses such as CMV. The possibility that this abnormal subset distribution is the consequence of chronic antigen stimulation by latent viruses as CMV has been previously proposed by ourselves and others. The relevance of CMV in this process is underlined by the demonstration of oligoclonal expansion of CMV-specific CD8 T cells. However, it is unclear to what extent the accumulation of CMV-specific CD8 T cells is a major factor contributing to the phenotypic changes found in CD8 T cells. The phenotypic analysis of CMV-specific CD8 cells has demonstrated that the proportion of cells coexpressing CD27 and CD28 is strongly decreased in the elderly when compared with young individuals. Furthermore, the analysis of the differentiation stages defined by the combined use of CCR7 and CD45RA also showed that in elderly donors CMV-specific CD8 T cells exhibit a phenotype associated with effector-memory (CCR7? CD45RA low) or effector (CCR7? CD45RA+) T cells, whereas in young individuals a significant proportion of CMV-specific CD8 cells are included in the nave subpopulation (CCR7+CD45RA+). These results indicate that the majority of CMV-specific CD8 cells in elderly individuals have effector-memory 2 and terminally differentiated effector phenotypes. These cells also have an increased expression of NK associated receptors. The findings that CMV-specific CD8 T cell phenotype in elderly individuals is similar to the predominant phenotype of CD8 T cells in the elderly and that the accumulation of CD28null T cells expressing CD57 and CD56 is preferentially observed in CMVseropositive elderly suggest that the latent infection with CMV can be considered a major factor contributing to the differentiation of CD8 T cells to poorly functional senescent cells with an effector-memory 2 phenotype.

LOS iNKRs REGULAN LA PRODUCCIN DE IFN- INDUCIDA TRAS LA ACTIVACIN DE CLULAS NK CON DENDTICAS INMADURAS O PRODUCTOS VIRALES. Morel Brcena E, Belln Heredia T. Hospital Universitario La Paz. Las clulas Natural Killer (NK) se activan en respuesta a patgenos, tumores y transplantes de clulas hematopoyticas alognicas. Sus funciones principales son: citotoxicidad y produccin de citoquinas, principalmente IFN-. Se ha descrito que la interaccin de clulas NK y dendrticas inmaduras (iDCs) conduce, a travs de la sealizacin de NKp30, a una importante liberacin de esta citoquina. Adems, las clulas NK pueden participar en la respuesta contra infecciones virales mediante el reconocimiento directo, a travs de los Toll-like receptors (TLRs), de productos virales. As, el agonista de TLR3 poly I:C sinergiza con IL-12 para inducir la secrecin de IFN-. La respuesta NK se regula a travs de receptores especficos de molculas del complejo principal de histocompatibilidad (MHC) de clase I. En humanos existen tres familias: KIRs (killer cell Ig-like receptors), LIRs/ILTs (leukocyte Ig-like receptor/ Ig-like transcripts) y los heterodmeros de la familia de las lectinas CD94/NKG2. El papel que desempean los receptores NK inhibidores (iNKRs) en el control de la citotoxicidad ha sido ampliamente estudiado; pero existen pocos trabajos acerca del efecto que puedan tener en la liberacin de citoquinas. Por tanto, se estudi el posible papel regulador de los iNKRs sobre la produccin de IFN- inducida en clulas NK tras la interaccin con iDCs alog-

CMV-SPECIFIC CD8 T CELLS ARE EXPANDED IN THE ELDERLY: EXPRESSION OF COSTIMULATORY MOLECULES AND NK ASSOCIATED RECEPTORS. Pita ML1, Gayoso I1, Alonso C1, Peralbo E1, de la Rosa O1, Casado JG2, Tarazona R2, Solana R1. 1Inmunologa. Hospital Universitario Reina Sofia, Universidad de Crdoba. 2Unidad de Inmunologa, Universidad de Extremadura, Cceres. Immunosenescence is a complex series of alterations that are dependent not only on chronological ageing itself, but also on exogenous factors such as persistent antigenic stress leading to chronic activation of the immune system. Ageing is associated with immunological changes in the T cells primarily due to thymus involution resulting in a decreased production of naive cells. The decrease of nave CD8 cells

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nicas o mediante el tratamiento con poly I:C. La concentracin de IFN liberado al medio se cuantific mediante Cytometric Bead Array Flex Set (CBA). Los resultados indican que CD94/NKG2A e ILT2/CD85j regulan la produccin de IFN- inducida tras el cocultivo con iDCs alognicas o estimulada especficamente a travs de NKp30 en un sistema libre de clulas. Finalmente, se comprob que los iNKRs modulan la produccin de IFN- en NKs estimuladas con poly I:C y dosis subptimas de IL-12. Los resultados sugieren los iNKRs participan en la regulacin de la produccin de IFN- inducida por iDCs o ligandos de TLRs a travs del reconocimiento de molculas del MHC de clase I.

EXPRESIN Y LOCALIZACIN INTRACELULAR DE LAS PROTENAS v-SNARE DE LA VA EXOCTICA EN LAS CLULAS NK HUMANAS. Delgado-Prez L, Campos-Caro A. Hospital U. Puerta del Mar. El principal mecanismo por el que las clulas NK ejercen su actividad citotxica es la exocitosis de los lisosomas de secrecin. Existen varias enfermedades hereditarias en las que este proceso se encuentra alterado y entre ellas la causada por la mutacin del gen de la sintaxina 11 un miembro de la familia de protenas SNARE (Soluble N-ethylmaleimide-sensitive factor Attachment protein REceptors)- y la causada por la mutacin del gen de la munc13-4 un regulador de las protenas SNARE-. Sin embargo, y a pesar de que las protenas SNARE se consideran en eucariotas los mediadores universales de la fusin entre membranas, se desconoce qu miembros de esta familia de protenas participan en la exocitosis citotxica de las clulas NK. Este trabajo se centr en la familia VAMP (vesicle-associtated membrane protein) cuyos miembros constituyen habitualmente el componente v del complejo SNARE. Se estudiaron clulas NK aisladas de sangre perifrica as como lneas celulares NK. Se identificaron los transcritos primarios (RT-PCR) y las protenas (western blot) correspondientes a varios SNARE previamente identificados como elementos de la va exoctica en otros tipos celulares de origen hematopoytico: VAMP-2, 7 y 8. Adems, se confirm su expresin y se determin su localizacin mediante microscopa de fluorescencia confocal. Destaca la localizacin ampliamente coincidente de VAMP7 con los grnulos citotxicos, en consonancia con estudios previos de otros autores. En conclusin, las clulas NK humanas expresan las protenas v-SNARE VAMP-2, VAMP-8 y VAMP-7, y la localizacin intracelular de esta ltima sugiere un posible papel de la misma en la exocitosis de los lisosomas de secrecin.

bidores analizados, se encontr que la clorometilcetona TPCK inhiba la activacin de STAT6 dependiente de IL-4. Sorprendentemente, esta inhibicin estaba acompaada por la prdida de protena de STAT6 por un mecanismo sensible al inhibidor de serina-proteasas AEBSF. Sin embargo, este efecto de TPCK no pareca estar mediado por la inhibicin de proteasas puesto que mltiple inhibidores de proteasas no tenan efecto en la expresin de STAT6. Los datos encontrados indican que el efecto de TPCK fue mediado por su actividad alquilante. As, compuestos reactivos con cistenas y tiol antioxidantes previenen la degradacin de STAT6 inducida por TPCK. Adems, otros agentes alquilantes como la mecloretamina tambin inducen la prdida de STAT6. De hecho, tratamientos conteniendo ciclofosfamida disminuyen la expresin de STAT6 como se observ en clulas obtenidas de pacientes con cncer de mama. Anlisis de otras molculas indican que los agentes alquilantes promueven la prdida de otros miembros de la familia STAT pero no de Shc y c-Rel. Estos datos revelan un novedoso mecanismo por el que agentes alquilantes pueden promover la degradacin de factores de transcripcin STAT, lo que podra ser relevante para comprender su mecanismo de accin.

ACTIVACIN DE LA EXPRESIN DE LAS UL16-BINDING PROTEINS POR HDAC2 Y REPRESIN POR HDAC3 EN TUMORES EPITELIALES. Gonzlez Rodrguez S, Rodrguez Folgueras A, Seto E, Lpez Soto A. Universidad de Oviedo. Las ULBPs son ligandos del receptor activador NKG2D presente en las clulas T y NK. La expresin de las ULBPs se induce en clulas estresadas, infectadas y transformadas, marcando a estas clulas para ser eliminadas por el sistema inmune. En este trabajo caracterizamos que los mecanismos epigenticos desempean un papel esencial en la represin de la expresin de ULBP1-3. Nuestros resultados muestran que los promotores de las ULBP1-3 no estn metilados, pero que la estructura de la cromatina desempea un papel crucial en su expresin. Hemos caracterizado que la desacetilasa de histona HDAC3 se une a los promotores de ULBP1-3 y reprime de una forma muy significativa la trascripcin de estos genes. La sobreexpresin de HDAC3, que se observa frecuentemente en tumores de pacientes con cncer de colon y diversos tumores epiteliales, reprime la expresin de ULBP13; mientras que el bloqueo de su expresin usando siRNA induce significativamente su expresin. Mediante anlisis de sus regiones promotoras y tcnicas de inmunoprecipitacin de cromatina caracterizamos que HDAC3 reprime la expresin de las ULBP1 por la interaccin con los factores de trascripcin Sp1/Sp3. Significativamente, HDAC2 desempea un papel opuesto al de HDAC3, ya que induce la expresin de las ULBPs. Esto sugieren que dado que diferentes desacetilasas de histonas desempean un papel opuesto en la expresin de las ULBPs sera necesario desarrollar inhibidores especficos para cada HDAC para mejorar su eficacia teraputica.

SESIN 7: INMUNOLOGIA TUMORAL - II Moderadores: Dr. Federico Garrido (Granada), Dr. Luis lvarez Vallina (Madrid) REGULACION PROTEOLITICA DEL FACTOR DE TRANSCRIPCION STAT6 POR AGENTES ALQUILANTES. Perez-G M, Cortes JR, Rivas MD, Borrega P, Zamorano J. Hospital San Pedro de Alcantara. El factor de transcripcin STAT6 se ha implicado en diversas enfermedades por lo que la investigacin de compuestos capaces de regular su activacin tiene importancia biolgica y mdica. La activacin de STAT6 est estrechamente regulada por quinasas, fosfatasas y proteasas. En este estudio, se pretendi inicialmente investigar la utilidad de inhibidores de proteasa en la regulacin de STAT6. Entre los inhi-

ERp5 SE ASOCIA EN LA MEMBRANA DE LAS CLULAS TUMORALES CON MICA Y PARTICIPA EN SU LIBERACIN COMO FORMA SOLUBLE. Gonzlez Rodrguez S1, Kaiser BK2, Yim D2, Chow I-T2, Dai Z2, Mann HH2, Strong R2, Groh V2, Spies T2. 1Universidad de Oviedo. 2Fred Huthcinson Cancer Research Center, Seattle, USA. MICA es un ligando del receptor activador NKG2D. La expresin de MICA se induce en clulas tumorales por el dao genotxico y el

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estrs celular, causando la activacin de las cluas NK y la coestimulacin de los linfocitos T. En tumores avanzados, MICA es liberado en forma soluble de la superificie celular por proteolisis. MICA soluble inhibe la respuesta inmune mediada por NKG2D y favorece la activacin de linfocitos T NKG2D+CD4+ con caractersticas inmunosupresoras, lo que favorece la evasin inmune de las clulas cancergenas. En este trabajo demostramos que MICA est asociado en la superficie de las clulas tumorales con la isomerasa disulfuro ERp5. La inhibicin farmacolgica de la actividad tioreductasa y el silenciamiento de la expresin de ERp5 indican que la actividad de ERp5 es esencial para la liberacin o shedding de MICA soluble. ERp5 y MICA forman complejos transitorios mediante la formacin de enlaces disulfuro en la membrana de las clulas tumorales, de los cuales es liberado MICA soluble despus del procesamiento proteoltico en el dominio 3 prximo a la membrana celular. La reduccin de un enlace disulfuro aparentemente inaccesible en el dominio 3 de MICA por ERp5 produce un cambio conformacional que permite la digestin proteoltica de MICA. Estos resultados describen un nuevo mecanismo por el que se forma MICA soluble, promoviendo de esta manera la evasin de la respuesta inmune. Adems identifica ERp5 como una diana.

c-myc y presentan traslocaciones cromosmicas t(12:15). En conclusin, nuestro estudio muestra la existencia de sinergias entre alteraciones en la regulacin del ciclo celular y de la apoptosis linfocitaria en el desarrollo de patologas autoinmunes y linfoproliferativas.

ANTICUERPOS ANTI-SOX1 COMO MARCADOR DE PARANEOPLASIA EN EL SNDROME MIASTNICO DE LAMBERT EATON. Sabater L, Titulaer M, Saiz A, Verschuuren J, Gure AO, Graus F. Servicio de Neurologia, Hospital Clnic, Universidad de Barcelona, Institut d' Investigaci Biomdica August Pi i Sunyer (IDIBAPS). Department of Neurology, Leiden, University Medical Center, The Netherlands Molecular Biology and Genetics Department, Bilkent University, Ankara, Turkey El sndrome miastnico de Eaton-Lambert (LEMS) es un desorden de la transmisin neuromuscular mediado por anticuerpos contra canales de calcio. El origen de la enfermedad, en el 50% de los pacientes, es paraneoplsico, esto es, existe una neoplasia subyacente que provoca el sndrome neurolgico, generalmente cncer de pulmn de clula pequea (CPCP). Actualmente no existe ningn marcador biolgico eficaz para predecir los pacientes de LEMS que desarrollarn cncer. Previamente encontramos que el 43% de pacientes con LEMS y CPCP tenan un anticuerpo, que llamamos AGNA (anti-glial nuclear antibody), definido por la inmunoreaccin con los ncleos de la glia de Bergmann del cerebelo. Este estudio se abord para identificar el antgeno reconocido por AGNA y para confirmar la asociacin con el LEMS paraneoplsico en una serie mayor de pacientes. Cribamos una genoteca de cDNA de cerebro fetal con sueros positivos para AGNA. La presencia de anticuerpos contra el antgeno aislado se detect por inmunoblot de calvas de lisis de fagos de dos clones positivos. Estudiamos 105 pacientes con LEMS (55 con CPCP). Como resultado del cribaje de la genoteca de expresin de cerebro fetal con sueros AGNA aislamos el gen SOX1, un antgeno tumoral altamente inmunognico en CPCP. La elucin de la IgG que se una a los clones SOX1 produca la misma immunoreactividad cerebelar que los sueros AGNA. Los anticuerpos SOX1 estaban presentes en el 64% de los pacientes con LEMS y CPCP y en ninguno de los pacientes LEMS idiopticos (p<0.0001). La deteccin de los anticuerpos SOX1 en pacientes con LEMS predice la presencia de CPCP y puede usarse para un seguimiento ms preciso de aquellos pacientes con LEMS sin evidencia de cncer al inicio de la enfermedad.

INTERACCIN ENTRE REGULADORES DEL CICLO CELULAR Y DE LA APOPTOSIS EN EL DESARROLLO DE AUTOINMUNIDAD Y LINFOMA. Santiuste I1, Iglesias M1, Buelta L3, Snchez M2, Tamayo E4, Merino J4, Merino R4. 1Instituto de Biomedicina y Biotecnologa de Cantabria. 2Seccin de Inmunologa, Hospital Universitario Marqus de Valdecilla. 3Departamento de Ciencias Mdicas y Quirrgicas, Universidad de Cantabria. 4Departamento de Biologa Molecular, Universidad de Cantabria. En el desarrollo de enfermedad autoinmune participan conjuntamente mltiples factores genticos, epigenticos y ambientales. El acmulo de un nmero suficiente de estos factores por encima de un determinado umbral impacta sobre los mecanismos que regulan la tolerancia inmunolgica hacia lo propio. Adems, muchas de las anomalas genticas que promueven el desarrollo de patologas autoinmunes, tambin estn involucradas en la aparicin de neoplasias linfoides. Sin embargo, la relacin causa-efecto entre autoinmunidad y cncer aun no se ha clarificado. En el presente estudio, se ha analizado la posible interaccin entre anomalas en la regulacin del ciclo celular y de la apoptosis linfocitaria sobre el desarrollo de autoinmunidad y linfomas en ratones C57BL/6 (B6), no susceptibles a autoinmunidad. Para ello, ratones B6 deficientes en p21 (CIP1/WAF1) (B6-p21-/-), que desarrollan espontneamente un cuadro autoinmune ligero, se cruzaron con ratones B6 que sobre-expresan un transgn (Tg) de la molcula anti-apopttica Bcl-2 humana (hBcl-2) en linfocitos B, obtenindose 4 tipos de ratones B6: p21+/+-hBcl-2-; p21+/+-hBcl-2+; p21-/--Bcl-2y p21-/--Bcl-2+. Se ha analizado el desarrollo de lupus en los 4 grupos, estudiando los niveles sricos de autoanticuerpos en suero, la aparicin de nefropata y la supervivencia de los animales. Nuestros resultados muestran que, en comparacin con los ratones B6 normales o los mutantes simples, los mutantes dobles p21-/--hBcl-2+ presentan ttulos elevados de anticuerpos anti-DNA circulantes a los 8 meses de edad y desarrollan una glomerulonefritis severa a los 10 meses de edad, lo que acelera su mortalidad. As mismo, los ratones B6 mutantes dobles p21-/--hBcl-2+, a diferencia de los Tg simples y no Tg, presentan una incidencia muy alta de linfomas de clulas B. Estos tumores son policlonales, de aspecto plasmocitoide, tienen desregulada la expresin de

GENERACIN Y CARACTERIZACIN DE ANTICUERPOS RECOMBINANTES HUMANOS FRENTE AL RECEPTOR DEL DOMINIO GLOBULAR DEL SUBCOMPONENTE DEL COMPLEMENTO 1Q (GC1QR). Snchez-Martn D1, Fogal V2, Ruoslahti E2, lvarez-Vallina L1. 1Unidad Inmunologa Molecular, Hospital Universitario Puerta de Hierro, Madrid. 2Burnham Institute for Medical Research (at UCSB), University of California, Santa Barbara, CA, USA. El receptor para el dominio globular de C1q (gC1qR/p33) es una protena celular expresada de forma ubicua que tambin se encuentra en el plasma y en la matriz extracelular. Adems de su implicacin en la modulacin de la activacin del sistema de complemento y la cascada de quinina, gC1qR se ha identificado como un ligando putativo de patgenos endovasculares y como potencial diana antitumoral en un modelo experimental con ratones inmunodeficientes portadores de

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tumores humanos MDA-MB-435 en los que, al ser tratados con anticuerpo policlonal de conejo frente a la regin aminoterminal de gC1qR (obtenido por la inmunizacin con secuencias peptdicas correspondientes a esa regin), se observ una disminucin significativa del crecimiento tumoral. El presente estudio tiene como objetivo la obtencin de una coleccin de anticuerpos humanos en formato de fragmentos variables de cadena nica (scFv single chain Fragment variable) empleando la tecnologa de exposicin de bibliotecas combinatorias en la superficie de fagos filamentosos. Tras dos rondas de seleccin con la biblioteca Griffin.1 (de origen humano y con una diversidad de 1.2x109 clones distintos) frente a gC1qR recombinante humano se obtuvo un sesenta por ciento de clones con capacidad de reconocimiento del antgeno, seleccionndose diez anticuerpos distintos con representantes de las principales familias de cadenas: IGHV1, IGHV3, IGLV1 e IGLV3, as como un clon perteneciente a la familia IGHV4 para estudios preliminares de especificidad y caractersticas de unin mediante ELISA. Tres anticuerpos, sintetizados en formato soluble y purificados, han mostrado su capacidad para detectar la protena en la superficie de lneas celulares por citometra de flujo. Actualmente se est estudiando el posible efecto teraputico en modelos animales portadores de tumores humanos as como su valor diagnstico empleando herramientas de imagen molecular in vivo.

POLIMORFISMO DE LA REGIN TRANSMEMBRANA DEL GEN MICA EN CNCER DE MAMA ESPORDICO. Lavado Valenzuela R1, Bravo Romero MJ1, Benavides Orgaz M2, Als Daz I2, Cobos Dols M2, Alonso Ortiz A1, Caballero Gonzlez A1. 1Servicio de Inmunologa. 2Seccin de Oncologa Mdica. Hospital R. U. Carlos Haya. Introduccin. La respuesta antitumoral la realiza sobre todo la inmunidad innata (NKT, NK y clulas T ?/?). Las clulas tumorales son reconocidas por el sistema inmune a travs de receptores como NKG2D. MICA es un ligando de este receptor y se expresa en clulas estresadas, tales como clulas transformadas. MICA es muy polimrfico. Su exn 5 codifica el dominio transmembrana que tiene un STR (repeticiones GCT), que da lugar a los alelos A4, A5, A6 y A9. El alelo A5.1 produce una forma soluble de la protena. Objetivo. Analizar el polimorfismo de la regin transmembrana de MICA en pacientes con cncer de mama espordico. Material y mtodo. Se incluyeron 110 pacientes de la provincia de Mlaga y 121 controles sanos de la misma regin geogrfica. El anlisis del STR se hizo por PCR y anlisis de fragmentos en secuenciador automtico. Resultados. Al comparar pacientes y controles, slo se observaron diferencias en la frecuencia del alelo MICA-A5, la cual se encontr reducida en pacientes frente a controles (11% vs 20%, X2 (1 d.f.)=6.971; p=0.008). Dado que se haba descrito una asociacin entre HLA-B7 y cncer de mama en nuestras pacientes, se analiz la frecuencia de los alelos MICA en pacientes con HLA-B7 frente a controles HLA-B7. Se encontr que la frecuencia del alelo MICAA5.1 era mayor en pacientes que en controles (58% vs 16%, X2 (1 d.f.)=15.776; p=0.0002). Al comparar la frecuencia del alelo MICAA5.1 en pacientes HLA-B7 y pacientes con otros alelos de HLA-B, los resultados mostraron que se encontraba aumentada en pacientes HLA-B7 (58% vs 22%, X2 (1 d.f.)=20.837; p=0.00005). Esta diferencia no se encontr en controles sanos. Se observ que el 100% de las pacientes que portaban el alelo HLA-B7 tambin tenan el alelo MICA-A5.1. Conclusiones. El alelo MICA-A5 parece conferir proteccin frente al cncer de mama espordico en nuestras pacientes. La combinacin HLA-B7/MICA-A5.1 parece conferir susceptibilidad al cncer de mama espordico en nuestra rea geogrfica.

EL CANCER RENAL SE ASOCIA A UN INCREMENTO EN LA EXPRESION DE MOLECULAS HLA DE CLASE I. Senz-Lpez Garrocha P, Vazquez F, Rodrguez AI, Jimnez P, Czar JM, Tallada M. Hospital Universitario Virgen de las Nieves. Una de las caractersticas de las clulas tumorales es la adquisicin de un estado de baja inmunogenicidad al que contribuyen factores intrnsecos de la clula tumoral y factores extrnsecos, por un deterioro progresivo, al menos in situ, de la respuesta inmune antitumoral. El mecanismo mejor estudiado, y que contribuye a esta baja Inmunogenicidad son las alteraciones en la expresin de antgenos HLA de clase I y en la maquinaria de presentacin antignica. Hemos observado que la transformacin celular en el epitelio tubular renal, lleva aparejada un incremento en la expresin de los niveles de mRNA de la cadena pesada y de b2m . Este incremento de expresin se correlaciona con la mayor expresin de citoquinas proinflamatorias. Estos hallazgos en cncer renal difieren de lo encontrado en una variedad amplia de tumores, que cursan con alteraciones frecuentes en la expresin de antgenos HLA de clase I. En nuestro estudio hemos querido analizar, por inmunohistoqumica, la expresin HLA de clase I en tejido normal y neoplsico en 93 casos de tejidos tumorales de rin de pacientes y 29 muestras de tejido normal. Nuestros resultados confirmaron, el anlsis previo a nivel de RNA sobre muestras microdisectadas: la mayora de los tumores expresaron molculas HLA de clase I en la superficie. La expresin detectada en tejido neoplsico, contrast en intensidad y homogenidad con lo observado a nivel de los tbulos en las muestras de rion normal. Slo en un 16% de las muestras de tejido normal, se detect expresin de molculas HLA. Es probable que el incremento en la expresin de molculas HLA de clase I sea inducido por la mayor infiltracin linfocitaria en el tejido neoplsico. Si el incremento en la expresin observada es una estrategia para evadir la respuesta de clulas NK (que se encuentran en un nmero elevado en el infiltrado del cncer renal) es algo que quedara por demostrar.

CLULAS TUMORALES CON PRDIDA TOTAL DE EXPRESIN DE MOLCULAS MHC DE CLASE I MUESTRAN BAJA EXPRESIN DE LOS GENES: AP-2, MYC, GLIS Y FHIT. Romero Garca I, Stefanski J, Berruguilla Prez E, Linares Dickler I, Garrido C, Garrido Torres-Puchol F, Garca Lora AM. Hospital Universitario Virgen de las Nieves. En nuestro laboratorio, hemos generado un modelo tumoral murno compuesto por diferentes lneas celulares metastsicas derivadas de metstasis espontneas generadas a partir de un mismo clon tumoral obtenido desde un fibrosarcoma inducido por metilcolantreno. Estas lneas celulares metastsicas presentan diferente expresin en superficie de molculas MHC de clase I, mostrando dos diferentes fenotipos: el primero presenta expresin en superficie de las molculas de clase I Kd, Dd y Ld; el segundo fenotipo H-2 se caracteriza por la prdida total de expresin de molculas de clase I debida a una baja regulacin coordinada a nivel transcripcioonal de varios componentes de la maquinaria de presentacion y procesamiento antignicas (APM). En

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este estudio, teniendo en cuenta que todas las lneas metastsicas derivan del mismo clon tumoral, analizamos los posibles genes que pueden estar implicados en esta prdida de expresin de varios componentes de la APM. Se ha realizado una librera de sustraccin de cDNAs, as como microarrays, comparando las metstasis H-2 positivas con las H-2 negativas. Los genes encontrados expresados diferencialmente, han sido analizados mediante RT-PCR cuantitativa utilizando sondas Taqman. En la librera de sustraccin encontramos 12 genes expresados diferencialmente, entre los que debemos destacar cuatro: AP-2, Myc, Glis1 y Fhit. Estos genes eran expresados en las metstasis H-2 positivas y su expresin disminua en las metstasis H-2 negativas. Esta expresin diferencial fue corroborada por RT-PCR a tiempo real. Estos resultados podrian indicar una relacin directa en tre la perdida de expresin de estos genes y la perdida de expresin de los componentes de la APM y de las moculas MHC de clase I. a continuacin realizaremos estudios de transfeccin y de bloqueo de estos genes mediante siRNA para poder determinar claramente su implicacin en la expresin de molculas MHC de clase I.

NFAT5 PARTICIPA EN LA REGULACIN DE LA EXPRESIN GNICA EN RESPUESTA A LA ACTIVACIN DE LOS RECEPTORES TIPO TOLL. Minguilln J1,2, Buxad M1,2, Berga R1, Aramburu J1, Lpez-Rodrguez C1. 1Unidad de Inmunologa, Departamento de Ciencias Experimentales y de la Salud (DCEX), Universitat Pompeu Fabra (UPF), Parc de Recerca Biomdica de Barcelona (PRBB), Barcelona. 2Estos autores han participado por igual en el trabajo presentado. Los receptores tipo Toll (TLRs) participan directamente en la respuesta inmune innata ya que, tras su activacin por reconocimiento de patrones moleculares asociados a los patgenos, desencadenan una cascada de seales intracelulares destinada a la induccin de los genes responsables de la respuesta inflamatoria contra los patgenos. Aunque el control transcripcional de la expresin de genes proinflamatorios en respuesta a patgenos resulta clave, nuestro conocimiento de las interacciones moleculares que ocurren a este nivel es todava relativamente limitado. En respuesta a la activacin de los TLRs en clulas inflamatorias macrfagos-, NFAT5 no slo se induce, sino que adems es reclutado especficamente a las regiones que regulan la expresin de diferentes genes proinflamatorios. Asimismo, los macrfagos derivados de mdula sea que carecen de NFAT5 son deficientes en la expresin (mRNA y protena) de diferentes mediadores inflamatorios y antimicrobianos que se inducen tras la activacin de los TLRs. Nuestro trabajo revela que NFAT5 acta como un regulador transcripcional durante la activacin de los TLRs y por lo tanto incrementa el conocimiento de los mecanismos moleculares que actan durante esta respuesta.

SESIN 8: INMUNIDAD E INFECCIN Moderadores: Dr. Francisco Lozano (Granada), Dra. Margarita Bofill (Barcelona) LOS FAGO-RECEPTOSOMAS DE IFN-GAMMA/IL-6 SON COMPARTIMIENTOS DE SELIZACIN Y LISTERICIDAS. Fernndez Prieto L, Gomez Lopez MT, Madrazo Toca F, del Cerro Vadillo E, Alvarez Domnguez C, Carrasco Marin E. Hospital Universitario Marqus de Valdecilla-IFIMAV. Los fagosomas son compartimientos intracelulares de destruccin de Listeria monocytogenes; as si dichos fagosomas pertenecen a macrfagos activados con ciertas citocinas su potencial listericida es ms exacerbado. Aqu describimos una nueva ruta de sealizacin mediada por Stat1 que implica a las citocinas: IFN-gamma e IL-6 y que se compartamentaliza en fago-receptosomas de IFN-gamma/IL-6. Esta compartimentalizacin permite que tanto la destruccin del patgeno, la respuesta immune especfica y la regulacin de la IL-6 queden ligados en el mismo microambiente. La ruta listericida y compartimentalizada induce dos ondas de sealizacin Stat1-Rab5a dependientes y ligadas a la accin listericida de dos protenas lisosomales; la esfingomielinasa cida y la catepsina-D. Como parte de estas dos seales Stat1dependientes se regulan positivamente los mediadores de la phox: p67phox/Rac2-GTP y se activa la iNOS fagosomal. Por otro lado, la activacin de Rab5a en esta va, induce la transformacin de dichos fago-receptosomas listericidas IFN-gamma/IL-6 en compartimientos de MIIC, donde se localizan molculas MHC-II cargadas con pptidos, se degrada el antgeno listeriolina O y se detectan otros marcadores MIIC como Lamp-2 y Limp-2, pero de forma independiente a Stat1. Nuestro grupo ha verificado la existencia de esta va de compartimentalizacin en macrofagos deficientes geneticamente en los posibles mediadores iniciales de esta va como Stat1 y Stat3 y mediadores finales como esfingomielinasa cida, catepsina-D, Lamp-2 y Limp-2; lo cul ha confirmado el papel de estos ltimos en la inmunidad innata frente a este patgeno.

VACUNAS: EL DIRECCIONAMIENTO AL RECEPTOR DE LA SIALOADHESINA MEJORA LA PRESENTACIN DE ANTGENO A LAS CLULAS T. Poderoso Garca T, Revilla Calvo C, lvarez Vega B, Chamorro Prez S, Martnez de la Riva S, Alonso Moreno F, Ezquerra Martnez A, Domnguez Juncal J. INIA (Instituto Nacional de Investigacin y Tecnologa Agraria y Alimentaria). El principal objetivo de una vacuna es inducir una respuesta inmune capaz de proteger de forma duradera frente un determinado patgeno. Una de las estrategias que se estn investigando para potenciar la respuesta frente antgenos poco inmunognicos es el direccionamiento de stos a clulas presentadoras de antgeno (APCs), mediante su conjugacin con anticuerpos especficos. La sialoadhesina (Sn) es un miembro de la familia de protenas Siglec (sialic acid binding Iglike lectins) cuya expresin est restringida a subpoblaciones de macrfagos tisulares, monocitos inflamatorios y algunas clulas dendrticas. En este estudio hemos analizado la expresin de la sialoadhesina en tejidos porcinos, su regulacin por citocinas y su potencial como receptor para el direccionamiento antignico. En el cerdo, la sialoadhesina se expresa en macrfagos de la zona marginal del bazo y en clulas dendrticas derivadas de monocitos cultivados con GM-CSF y IL-4 (MoDC). Los monocitos sanguneos (Mo) no expresan esta molcula pero puede inducirse mediante un tratamiento previo con IFN-a. Para analizar si el direccionamiento de antgeno hacia este receptor favorece la presentacin a las clulas T, comparamos la respuesta proliferativa obtenida con un anticuerpo monoclonal anti-Sn (1F1) con la obtenida con una Ig control del mismo isotipo (1D9). Como clulas respondedoras se utilizaron clulas T sanguneas de cerdos inmunizados con un pool de Igs de ratn y, como APCs, MoDc o Mo incubados con IFNa. Para obtener niveles similares de proliferacin se necesitaron de 100 a 1000 veces menos cantidad de Ig control que de Ab anti-Sn. En con-

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sonancia con estos resultados, la incubacin de macrfagos y MoDC con mAb 1F1 y 1D9 marcados con Alexa 488 a 37C durante 30 minutos, demostr que la Sn es un receptor endoctico. Estos datos sugieren que el direccionamiento de antgenos hacia la molcula de Sn podra mejorar la eficiencia de su captacin y/o procesamiento por las APCs. Actualmente se est evaluando el potencial in vivo de esta molcula como diana del direccionamiento de antgenos.

MECANISMOS DE ADYUVANCIA INMUNOLGICA: PAPEL DE GITR EN EL EFECTO PROADYUVANTE DE LA ENTEROTOXINA TERMOLABIL DE ESCHERICHIA COLI. Tamayo E1, Postigo J1, Santiuste I2, Riccardi C3, del Giudice G4, Merino R2, Merino J1. 1Departamento de Biologa Molecular, Universidad de Cantabria. 2Instituto de Biomedicina y Biotecnologa de Cantabria, CSIC-Universidad de Cantabria-IDICAN. 3Departamento de Medicina Clnica y Experimental, Universidad de Perugia. 4Research Center, Novartis Vaccines. La administracin de antgenos proteicos en superficies mucosas induce tolerancia sistmica a los mismos. Este efecto se evita administrando determinados adyuvantes orales, como la enterotoxina termolabil de Escherichia Coli (LT) junto al antgeno vacunal. No obstante, el uso de LT en vacunacin en mucosas se ve lastrado por su gran toxicidad y por el desconocimiento de los mecanismos inmunolgicos implicados en su efecto adyuvante. Para investigar estos mecanismos se analiz la capacidad de LT para inducir la activacin y proliferacin de los linfocitos a diferentes periodos tras su administracin por va parenteral. El anlisis de la expresin de diferentes marcadores de activacin linfocitaria y de la incorporacin de BrdU en linfocitos, muestra que LT induce selectivamente la expresin de GITR en linfocitos T, pero no su proliferacin. Este efecto es dependiente de la actividad mono-ADPribosiltransferasa de LT, dado que LTK63, un mutante atxico de LT carente de esta actividad y con un efecto pro-adyuvante reducido, no es capaz de inducir GITR en linfocitos T. As mismo, otro adyuvante inmunolgico ampliamente utilizado en animales de experimentacin como el adyuvante completo de Freund, tampoco induce la expresin de GITR en linfocitos T. El tratamiento de ratones adultos con gammaglobulina humana monomrica (GGHM) induce un estado de tolerancia linfocitaria que impide la respuesta frente a la forma inmunognica del antgeno, la gammaglobulina humana agregada (GGHA). Usando este modelo experimental, observamos que LT, pero no LTK63, bloquea la induccin de tolerancia a la GGH. Un bloqueo similar se observa si se administra DTA1, un AcM agonista anti-GITR, al mismo tiempo que la GGHM. Por el contrario, LT no bloquea la induccin de tolerancia a la GGH en ratones deficientes en GITR. En conjunto, nuestros resultados demuestran que la induccin de GITR en linfocitos T por LT constituye uno de los mecanismos implicados en la actividad adyuvante de esta toxina.

Objetivo. Conocer la prevalencia de la respuesta inmune de clulas T frente al VHC en parejas heterosexuales de pacientes con hepatitis crnica VHC. Mtodo. Se han incluido 30 parejas heterosexuales, sin Anticuerpos-VHC ni ARN-VHC (PCR a tiempo real, Taqman, Roche y Elisa, Bep III, Dade Behring). Se realiz encuesta sobre riesgos de exposicin. Adems se estudiaron 15 pacientes en diferentes situaciones respecto al VHC (infeccin activa, respondedores y aclaramiento espontneo) y 10 controles sanos. Para la deteccin de una poblacin de clulas T memoria que responden a antgenos del VHC solubles, se parti de sangre completa, que se enfrent a los siguientes 6 pptidos del VHC: 1)NS3 (aa 1241-1260); 2)NS3 (aa 1531-1550); 3 NS3 (aa 1581-1600); 4)NS4b (aa 1771-1790); 5)NS5b (aa 2571-2590); 6)NS5b (aa 2941-2960). Tras 6 horas de incubacin en presencia de molculas coestimuladoras y brefeldina A (BFA), se lisaron los hemates y fijaron los leucocitos, para proceder al anlisis mediante citometra de flujo, donde se analizaron la siguientes combinaciones: CD69/CD3; CD69/CD4; CD69/CD8; IFN?-IL-4/CD3; IFN-IL-4/CD4; IFN-IL-4/CD8. Todos estos datos se analizaron estadsticamente mediante el programa SPSS v.14.0 (H de Kruskal-Wallis y U de Mann Whitney). Resultados. Los valores mayores que la media de los 10 controles, y mayores que la media ms dos desviaciones estndar de los 10 controles para cada mezcla, fueron considerados positivos. Se comprob mayor activacin de CD4+ frente al pptido 5) en parejas que en controles. Estos signos de respuesta inmune son significativamente mayores en pacientes que en controles, y se comprob mayor porcentaje de clulas CD3+ y CD8+ que secretan IL-4 frente al pptido 3). Conclusiones. Las parejas de pacientes infectados crnicamente por VHC muestran signos de haber entrado en contacto con el virus y de respuesta inmune celular especfica a pptidos VHC. El papel potencial de esta respuesta en la proteccin contra la infeccin por VHC es de gran inters.

LA APOPTOSIS DE LINFOCITOS MADUROS INDUCIDA POR LA TOXINA TERMOLABIL DE E. COLI IMPLICA TANTO A LOS RECEPTORES DE MUERTE EN MEMBRANA COMO A LA VIA MITOCONDRIAL. Postigo J1, Tamayo E1, Fernndez-Rey M1, Merino R2, Merino J1. 1Departamento de Biologa Molecular, Universidad de Cantabria. 2Instituto de Biomedicina y Biotecnologa de Cantabria, CSIC-Universidad de Cantabria-IDICAN. En estudios previos hemos demostrado que la enterotoxina termolabil de Escherichia Coli (LT) promueve apoptosis en linfocitos T y B inmaduros en el timo y mdula sea, respectivamente. Esta apoptosis no implica a las vas de membrana de Fas o TNF, pero es inhibida tras la hiperexpresin de Bcl-2. As mismo, demostramos que LT induce la secrecin por las glndulas suprarrenales de niveles elevados de glucocorticoides que son los responsables directos de la apoptosis en linfocitos inmaduros. En vista de estos hallazgos, nos planteamos analizar en primer lugar la posible participacin de receptores de muerte diferentes de Fas y TNFR, o de mecanismos independientes de la activacin de caspasas mediados por AIF, en el efecto pro-apopttico de LT sobre los timocitos inmaduros (como ejemplo de linfocitos inmaduros). En segundo lugar, analizamos si LT promueve tambin apoptosis en linfocitos T y B maduros y sus posibles mecanismos. Para ello, estudiamos el efecto proapopttico de LT sobre timocitos y linfocitos T maduros en ratones deficientes AIF en linfocitos T o en Bim as como en animales transgnicos para un dominante negativo de FADD (FADD-DN Tg) en linfocitos T, que bloquea la apoptosis inducida por todos los receptores de muerte.

RESPUESTA CELULAR INMUNE ESPECFICA AL VIRUS DE LA HEPATITIS C (VHC) EN PAREJAS HETEROSEXUALES DE PACIENTES INFECTADOS. Roque Cuellar MC1, Aguilar Reina J1, Alvarez Mquez MA2, Garca Lozano JR2, Gonzlez Escribano MF2, Nuez Roldan A2, Snchez Snchez B2. 1Seccin de Hepatologa. Servicio de Aparato Digestivo. 2Servicio de Inmunologa. Hospital Universitario Virgen del Rocio. En algunas series se ha encontrado respuesta inmune celular especfica al VHC en parejas y familiares de pacientes con infeccin aguda o crnica.

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Nuestros resultados muestran que la ausencia de AIF o la sobre-expresin de FADD-DN en timocitos no bloquea la apoptosis inducida por LT. La ausencia de Bim reduce significativamente esta apoptosis en concordancia con el papel regulador de Bcl-2 en la misma. Por el contrario, la apoptosis inducida por LT en linfocitos T maduros esta reducida en los animales FADD-DN Tg a un nivel similar al observado en ratones que sobre-expresan Bcl-2 en linfocitos T o adrenalectomizados. En este sentido, la inhibicin fue completa en ratones FADD-DN/Bcl-2 dobleTg. Estudios preliminares con ratones lpr o tratados con un mAb antiTRAIL sugieren que el receptor Fas es el responsable de la muerte inducida por LT mediada a travs receptores de membrana. En conclusin, nuestro estudio demuestra que LT promueve apoptosis de linfocitos maduros e inmaduros mediante mecanismos diferentes.

CARACTERIZACIN DE LAS CLULAS PRODUCTORAS DE IL10 EN RGANOS LINFOIDES DE CERDOS AFECTADOS NATURALMENTE POR CIRCOVIROSIS PORCINA. Crisci E1, Domnguez J2, Segals J1,3, Montoya M1. 1Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), UAB-IRTA, Campus de la Universitat Autnoma de Barcelona, Barcelona. 2Departamento de Biotecnologa, Instituto Nacional de Investigacin y Tecnologa Agraria y Alimentaria (INIA), Madrid. 3Department de Sanitat i dAnatomia Animals, Facultat de Veterinaria, Universitat Autnoma de Barcelona (UAB), Barcelona. La circovirosis porcina es una enfermedad de distribucin mundial que afecta a los cerdos. Se considera un proceso multifactorial causado esencialmente por circovirus porcino tipo 2 (PCV2). Esta enfermedad se caracteriza patolgicamente por deplecin linfocitaria e inflamacin granulomatosa en los rganos linfoides, y actualmente se sabe que el sistema inmune es clave en la patognesis de la enfermedad. Estudios previos han revelado un perfil de citoquinas indicativo de inmunosupresin de clulas T, una discapacidad en la respuesta innata y sugieren que la interleuquina 10 (IL-10) tiene una importante funcin durante el curso de la infeccin. El objetivo principal de este estudio fue caracterizar y localizar las subpoblaciones de clulas inmunitarias involucradas en la secrecin de IL-10. Para ello, se us la inmunofluorescencia indirecta en criosecciones de rganos linfoides (bazo y linfonodo mediastnico) de 4 animales sanos y 4 animales afectados con la enfermedad. Los resultados obtenidos mostraron que las subpoblaciones linfocitarias CD4+ y CD8+ producen IL-10 en los tejidos estudiados, mientras que en las clulas presentadoras de antgeno (MHCII+), los macrfagos/monocitos (CD163+) y los granulocitos no se detect co-localizacin con la IL-10. Mediante el contaje visual de las clulas doblemente positivas, los resultados indicaron que el nmero de clulas productoras de IL-10 es aproximadamente el doble en los animales enfermos en comparacin con los sanos. Este es el primer estudio de caracterizacin de las clulas productoras de IL-10 en animales con circovirosis porcina. Actualmente se est estudiando su correlacin con la presencia de PCV2 en las mismas secciones.

contribuye a la persistencia viral inhibiendo la respuesta inmune celular especfica. En este estudio se analiza el nivel, fenotipo y grado de activacin de las Treg en pacientes con infeccin por VHC y/o VIH. Mtodos. Se estudiaron 91 pacientes: 20 controles, 20 pacientes VHC-/VIH+, 20 VHC+/VIH- y 31 coinfectados VHC+/VIH+. Las Treg se definieron como CD4+Foxp3+. El nivel, fenotipo (basado en CD25, CD45RA, CD27 y CD127) y el grado de activacin (basado en CD38) de estas clulas fueron analizados por citometra de flujo de 5 colores. Las diferencias entre grupos se evaluaron con pruebas estadsticas no paramtricas. Resultados. El nivel de Treg fue mayor en pacientes VIH+ que en controles y que en pacientes VHC+/VIH- (p=0.01). Tanto en pacientes como en controles slo el 50% de las Treg expresaron CD25. El 95% de las Treg CD25+ tenan fenotipo CD45RA-CD127- en todos los grupos, mientras que las Treg CD25- fueron ms heterogneas en su fenotipo. El 65% de las Treg fueron CD45RA- CD27+ (memoria central), sin diferencias entre controles y pacientes. Sin embargo, las Treg CD45RA+CD27+ (naive) fueron menos frecuentes en pacientes que en controles (p=0.04). La activacin de las Treg fue mayor que la de clulas CD4+ totales en todos los grupos (p<0.0001). Conclusiones. La infeccin por VIH induce un incremento de las Treg activadas. CD25 define dos poblaciones de Treg con diferente perfil fenotpico. El nivel de Treg aumenta en paralelo a la disminucin de CD4, lo que podra contribuir al curso acelerado de la lesin heptica en pacientes VHC+/VIH+.

ESTIMACIN DE LA INFECCIN TUBERCULOSA EN DONANTES DE SANGRE DE LA COMUNIDAD DE CANTABRIA MEDIANTE LA DETERMINACIN DE IFN-GAMMA TRAS ESTIMULACIN CON ANTGENOS DE MYCOBACTERIUM TUBERCULOSIS. Villegas N1, Gonzalo Ocejo-Vinyals J1, Amunrriz C2, Ausn F1, Leyva-Cobin F1, Arroyo JL2. 1Hospital Universitario Marqus de Valdecilla. 2Banco de Sangre y Tejidos de Cantabria. Introduccin. Las comunidades del norte de Espaa, como Cantabria, junto con Portugal tienen la mayor incidencia y prevalencia de infeccin tuberculosa en Europa. En los ltimos aos, la introduccin de un ensayo para medir mediante enzimoinmunoanlisis (ELISA) la produccin especfica de IFN-gamma (interferon-gamma release assay, IGRA) tras estimulacin de las clulas linfoides con antgenos de Mycobacterium tuberculosis, ha contribuido a aumentar la sensibilidad y especificidad en el diagnstico inmunolgico de la infeccin tuberculosa. Nuestro objetivo ha sido utilizar el IGRA para conocer la prevalencia de la infeccin por M. tuberculosis en la poblacin sana donante de sangre de nuestra Comunidad. Materiales y Mtodos. Se incluyeron en este estudio 167 donantes de sangre (111 varones, 56 mujeres) con edades comprendidas entre 19-65 aos y que tras ser adecuadamente informados consintieron participar en este estudio. Todos fueron sometidos a los cuestionarios y anlisis habitualmente establecidos en un Banco de Sangre. Para este estudio, el IGRA utilizado fue el comercialmente conocido como QuantiFERON-TB Gold In-Tube. Se obtuvieron tres muestras de sangre circulante en tubos estriles con vaco previo. Un tubo contenia antgenos de M. tuberculosis (ESAT-6, CFP-10 y TB 7.7), otro una concentracin ptima de fitohemaglutinina y un tercero sin aditivos. Todos los tubos se incubaron (37C, 16-24 hr) y tras centrifuga-

NIVEL, FENOTIPO Y ACTIVACIN DE LAS CLULAS T REGULADORAS FOXP3+CD4+ EN PACIENTES CON INFECCIN POR LOS VIRUS DE LA HEPATITIS C Y/O VIH. Ibn Ralln N, Lpez M, Soriano V, Garca-Samaniego J, Romero M, Labarga P. Hospital Carlos III. Introduccin. Las infecciones por VIH y VHC pueden alterar la poblacin de clulas T CD4+ reguladoras (Treg). Esta poblacin

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cin (4oC, 15 min, 2,000 X g), se determin la concentracin de IFNgamma presente en el plasma recogido mediante ELISA. Los resultados se interpretaron con un soporte informtico proporcionado por el proveedor. Para el anlisis estadstico se utiliz la prueba de Chi 2 con correccin de Yates o la prueba exacta de Fisher cuando fue necesaria. Resultados. De los 167 individuos analizados, 27 presentaban concentraciones elevadas de IFN-gamma y fueron considerados positivos (16,17%). No se encontr una diferencia estadsticamente significativa entre sexos (20 varones, 7 mujeres). Sin embargo, si que existan diferencias significativas cuando se agruparon los donantes en tres grupos de edad (18-35, 36-50 y 51-65 aos) siendo la prevalencia mayor en el grupo de ms edad (prueba de homogeneidad entre niveles, p = 0.02; prueba de tendencia lineal, p = 0.006). Conclusin. La utilizacin del IGRA supone una ventaja para el despistaje de la infeccin por M. tuberculosis frente al mtodo clsico de la intradermorreaccin de Mantoux, pues aporta mayor sensibilidad y especificidad. Los resultados de este estudio apuntan a una elevada prevalencia de infeccin tuberculosa en la poblacin sana donante de sangre de Cantabria.

LA EXPRESION DE LA MOLECULA MR1 (MHC-RELATED 1) HUMANA EN LA SUPERFICIE CELULAR NECESITA LIGANDOS QUE SON INDEPENDIENTES DE LA ACTIVIDAD DEL PROTEASOMA. Abos Gracia B, Gmez del Moral M, Gozalbo Lpez B, Cedenilla Horcajuelo M, Martnez Naves E. Universidad Complutense. Madrid. Introduccin. MR1 (MHC-related 1) es una molcula HLA de clase I no clsica que restringe el desarrollo de los linfocitos MAIT (Mucosal Associated Invariant T cells), caracterizados por poseer un TCR invariante. La funcin de las clulas MAIT se desconoce, pero parecen tener propiedades inmunoreguladoras. Tampoco se conoce el ligando presentado por MR1 a los MAIT. Objetivos. Analizar la expresin de MR1 en la superficie celular, su dependencia de temperatura (como marcador de dependencia de ligando) y de la actividad del proteasoma. Metodologa. La expresin celular de MR1 se analiz mediante tcnicas de citometra de flujo e inmunohistoqumica utilizando anticuerpos monoclonales y policlonales anti-MR1. Se analizaron lneas celulares de diferente linaje incluyendo L721.221 y C1R transfectadas con MR1 y denominadas MR1.221 y MR1.C1R respectivamente. Resultados. Las lneas transfectadas MR1.221 y MR1.C1R expresaron altos niveles de MR1 en la superficie, a diferencia del resto de lneas analizadas. Sin embargo a 26 C MR1 fue detectable en todas las lneas linfoblastoides y las clulas transfectadas tambin incrementaron la expresin de MR1. Esto sugiere que la expresin de MR1 en la superficie celular est limitada por la disponibilidad de ligandos ya que su comportamiento es similar a las molculas HLA de clase I clsicas. Tambin estudiamos la dependencia de la expresin de MR1 del proteasoma. Para ello analizamos la re-expresin en superficie de MR1 en la lnea MR1.221 despus de someterla a condiciones de elucin a pH cido. Hemos observado que MR1 es sensible al tratamiento cido, al igual que lo son las molculas HLA de clase I clsicas. Sin embargo, al contrario de lo que sucede con stas, la re-expresin de MR1 en la superficie despus de la elucin cida no es bloqueada por inhibidores especficos del proteasoma. Conclusin. La expresin de MR1 en la superficie celular necesita de ligandos que son independientes de la actividad del proteasoma.

SESIN 9: CLULAS DENDRTICAS Moderadores: Dr. ngel Corb (Madrid), Dr. Francisco Borrs (Barcelona) MHC DE CLASE I PROTEGE DEL RECORTE POR AMINOPEPTIDASAS DEL RETCULO ENDOPLSMICO IN VITRO. Infantes S1, Samino Y2, Lorente E1, Jimnez M1, del Val M2, Lpez D1. 1Unidad de Protemica. 2Unidad de Inmunologa Viral. Centro Nacional de Microbiologa. ISCIII. En la denominada va clsica de presentacin antignica asociada a molculas MHC de clase I, las protenas virales sufren diversos cortes proteolticos que generan pptidos de diferente longitud, algunos de los cuales pueden ser posteriormente transportados al lumen del Retculo Endoplsmico (ER) en donde se encuentran expuestos a la actividad de aminopeptidasas del ER (ERAAP). Actualmente, se han propuesto dos modelos diferentes para explicar el mecanismo de accin de ERAAP. El primero denominado "molecular ruler" propone la unin del sustrato largo por sus extremos a la enzima. El carboxilo terminal interacciona con un pocket hidrofbico y el amino terminal queda accesible al sitio activo de la enzima que va eliminado los residuos de forma no procesiva. Los productos finales de 9-10 aminocidos se uniran despus a MHC. El segundo modelo propuesto o template model supone que los precursores peptdicos largos se unen primero a MHC por su extremo carboxilo, dejando accesible su extremo amino protuberante a la actividad de la enzima. Hemos estudiado la degradacin por ERAAP de un ligando natural de 16 aminocidos que es reconocido por linfocitos T citolticos. Los datos in vitro obtenidos indican que este pptido amino-protuberante es eficientemente recortado por ERAAP hasta el eptopo mnimo de 9 residuos mientras se encuentra soluble y que su unin a la molcula de histocompatilibidad lo protege de la actividad proteoltica de la enzima.

FUNCTIONAL ANALYSIS OF THE IREM-2 RECEPTOR (CD300e) IN HUMAN MONOCYTES. Brckalo T1, Cassatela MA2, Lpez-Botet M1. 1Universitat Pompeu Fabra. 2University of Verona. The CD300e (IREM-2) was originally reported to be expressed by mature monocytes and peripheral blood myeloid dendritic cells The receptor was associated with the DAP-12 adaptor in co-transfected cells and was capable of inducing NFAT transcriptional activity upon engagement by a specific mAb (Aguilar et al. 2004. J. Immunol. 173:6703-6711). In this study we have investigated the functional effects of CD300e ligation in various responses of human monocytes. Upon engagement by an agonistic mAb, CD300e triggered an intracellular calcium mobilization and the release of reactive oxygen intermediates in freshly isolated cells. Stimulation via CD300e triggered the release of pro-inflammatory chemokines and cytokines (i.e. IL-8/CXCL8 and TNF), up-regulated the expression of cell surface activation markers (i.e. CD25, CD83 and CD86) and promoted cell survival. Primary monocytes differentiated into alternatively activated macrophages following the activation through CD300e, as evidenced by higher expression of CD14, CD16 and CD163 cellular markers. Monocytes sti-

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mulated by IL-4, GM-CSF, but not M-CSF modulated CD300e expression within the first 24h of culture. Overall, our data demonstrate that CD300e is a functional activating receptor in human monocytes involved in regulating the innate immune response.

CARACTERIZACIN DE MACRFAGOS PERITONEALES ALTERNATIVAMENTE ACTIVADOS (MAA): IMPLICACIONES PARA UN PAPEL EN MECANISMOS DE FIBROSIS RELACIONADOS CON ANOMALAS EN LA MEMBRANA PERITONEAL. Martnez Cabeza V, Lucendo B, Auxiliadora Bajo M, Castro MJ, del Peso G, Selgas R, Belln T. Hospital Universitario La Paz, Madrid. La dilisis peritoneal puede desencadenar un proceso de fibrosis peritoneal que finalmente condiciona el estado funcional de la membrana peritoneal. Las infecciones peritoneales y la composicin de los lquidos de dilisis influyen en el estado del peritoneo. Los macrfagos peritoneales (Mp) no han sido asociados con capacidades defensivas eficientes contra infecciones en pacientes de dilisis peritoneal. Esto sugiere que los Mp podran haber desarrollado otras funciones como las que presentan los macrfagos alternativamente activados (M2/MAA) cuya capacidad para participar en fibrosis de rganos ha sido demostrada. Se ha usado citometra de flujo, RT-PCR y qRT-PCR para analizar el fenotipo de los macrfagos de efluente peritoneal en pacientes a los que se les realiza dilisis peritoneal, y se ha probado su capacidad para estimular la proliferacin de la lnea celular de fibroblastos humanos IRM90 y de fibroblastos primarios de piel. Se han comparado Mp de pacientes con y sin peritonitis activa. Los resultados muestran la presencia de M2/MAA en el peritoneo y sugieren que distintas subpoblaciones de M2/MAA podran participar en fibrosis peritoneal produciendo citoquinas y quimioquinas profibrognicas y estimulando el crecimiento de fibroblastos.

Objetivos. Implementar una metodologa Dual Beam System (SEM/FIB) - que combina las tcnicas ya conocidas de microscopa electrnica de barrido (SEM) con aquellas derivadas del uso de un can de iones (FIB), como la obtencin de cortes en lminas muy finas (tcnica de milling)- que permita la localizacin y el seguimiento de nanopartculas de oro en el interior celular. Metodologa. Se incubaron macrfagos peritoneales durante 24h con Nps de oro recubiertas con slice (NPs de 50nm de dimetro). Se fijaron y se incluyeron en resina Epoxy y se realizaron cortes de dichas preparaciones mediante la tcnica de miling. Las preparaciones fueron visualizadas mediante SEM (detector de electrones retrodispersados) y se realiz una composicin tridimensional del conjunto de las observaciones. Resultados. Las Nps de oro aparecen fundamentalmente en los fagosomas y endosomas de los macrfagos, sin observarse la llegada de ninguna Np al ncleo celular. El estudio de diversos cortes realizados con un Dual Beam System y la posterior composicin tridimensional, muestra varias Nps en el interior del mismo fagosoma, y hasta un total de 14 vesculas mostraron en su interior nanopartculas. No se observ una polarizacin del proceso de fagocitosis, observndose NPs distribuidas bastante homogneamente por el interior de los macrfagos. El estudio se complet mediante la tcnica de TEM, que permiti confirmar los datos obtenidos por SEM-FIB. Conclusiones. La combinacin de las tcnicas de SEM y FIB puede ser empleada con xito para la visualizacin intracelular de nanopartculas de oro en el interior de distintos compartimentos celulares.

TLR-TRIGGERING ON TOLEROGENIC DENDRITIC CELLS RESULTS IN TLR2 ENHANCEMENT AND AN IMPAIRED PROINFLAMMATORY PROGRAMME. Chamorro Prez S1, Garca-Vallejo JJ1, Unger W2, Fernandes R1, Bruijns S CM1, Laban S2, Roep BO2, THart BA3, Van Kooyk Y1. 1VUmc, msterdam, 2 LUMC, Leiden, 3 BPRC, Rijswijk. Dendritic cells modulated with either cytokines or pharmacological mediators offer a therapeutic potential to ameliorate or prevent autoimmune diseases. These modulated tolerogenic cells (TDC) inhibit adaptative immune responses by using immunosuppressive mechanisms as anergy induction or Treg generation. However, little is know about their TLR repertoire and how TLR agonists different than LPS modulate their responses. We here have made a full analysis and comparison of the innate characteristics of three types of human tolerogenic DC obtained by addition of either IL10 (IL10-DC), dexamethasone (DX-DC) or calcitriol (1,25(OH)2D3-DC) to monocyte-derived dendritic cells. A detailed analysis of TLR mRNA expression (TLR1-TLR10) was performed by qRT-PCR. Likewise we investigated the effects on maturation, cytokine release, allostimulatory capacity and T cell driven differentiation on TDC triggered by TLR2, 3, 4 and 5 agonists. We show that TDC are endowed with the same TLR set as monocyte-derived dendritic cells although responding differently to TLRmediated stimulation. Strikingly, only tol-DC upregulated the expression of TLR2 (mRNA and protein) in response to specific TLR agonists (pam3CSK4, poly I:C, LPS and flagellin). TLR2 increase decodes TDC to further pam3CSK4 restimulation and it is partially modulated by p38MAP kinase. TDC expressed low/no IL12-related cytokines and remarkably elevated IL10 levels. Nevertheless differences among stimulated-TDC were detected, DX-DC and 1,25(OH)2D3-DC upregula-

VISUALIZACIN DE NANOPARTCULAS POR LA TCNICA DE SEM-FIB EN EL INTERIOR DE MACRFAGOS. Daz-Freitas B1, Mndez J2, Pastoriza I3, Snchez-Espinel C1, Faro J1, Magadn S5, Lz Marzn L3, Gonzlez-Fernndez A1. 1rea de Inmunologa -Campus Lagoas Marcosende, Universidad de Vigo (Pontevedra). 2Centro de Apoyo Cientfico-Tecnolgico a la Investigacin (CACTI)-Campus Lagoas Marcosende, Universidad de Vigo (Pontevedra). 3Grupo de Qumica Coloidal- Campus Lagoas Marcosende, Universidad de Vigo (Pontevedra). 4Estudos Avanados de Oeiras, Instituto Gulbenkian de Cincia, Oeiras, Portugal. 5Instituto Superior de Saude do Alto Ave (ISAVE), Quinta de Matos, Geraz do Minho, Portugal. Antecedentes. La nanotecnologa ha irrumpido con fuerza en el campo biomdico especialmente en el campo del diagnstico, pero en los ltimos aos tambin se est evaluando su gran potencial en terapia humana. La mayora de las nanoparticulas (Nps) son reconocidas y rpidamente fagocitadas por los macrfagos del sistema retculo endotelial (fundamentalmente en hgado y bazo). Este proceso depende del tamao, cobertura e hidrofobicidad de las Nps. Las Nps pequeas (inferiores de 90 nm de dimetro) son fcilmente visualizables mediante microscopa electrnica de transmisin (TEM), pero sta es una tcnica costosa y tediosa, mientras que la tcnica de microscopa electrnica de barrido (SEM), no permite visualizar el interior de las clulas. Por todo ello, el desarrollo y uso de nuevas tcnicas de microscopa electrnica podran ayudar a conocer las rutas de internalizacin de estas nanoestructuras, proporcionando mapas intracelulares.

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ted TLR2 irrespective the TLR triggered whereas LPS-mediation was observed on IL10-DC. Likewise DX-DC and 1,25(OH)2D3-DC exhibited reduced allostimulatory properties, impaired ability to maturate and hampered capacity to differentiate nave T cells to effector Th1 cells. Therefore both DX-DC and 1,25(OH)2D3-DC display the strongest tolerogenic and anti-inflammatory features and might be beneficial for the treatment of autoimmune diseases.

IDENTIFICACIN Y CARACTERIZACIN FENOTPICA, MORFOLGICA Y FUNCIONAL DE LOS PRECURSORES DE CLULAS DENDRTICAS PLASMOCITOIDES EN MDULA SEA DE ADULTOS SANOS. Martn Martn L1,2, Almeida Parra J1,2, Hernndez Campo PM2, Snchez Garca ML2, Lcrevisse Q1, Orfao de Matos A1,2. 1Centro de Investigacin del Cncer (CSIC/USAL), Salamanca. 2Servicio de Citometra y Departamento de Medicina, Universidad de Salamanca. Introduccin. Actualmente se desconoce la secuencia de maduracin de los precursores de clulas dendrticas plasmocitoides (preCDp). Objetivo: analizar las caractersticas fenotpicas, morfolgicas y funcionales de los pre-CDp durante su maduracin en mdula sea normal (MON) de adultos. Metodologa. El estudio fenotpico (n=33 MON) se realiz mediante citometra de flujo con combinaciones sxtuples de anticuerpos monoclonales; la caracterizacin morfolgica (n=4) sobre pre-CDp purificados, teidos con May-Grmwald-Giemsa; la secrecin de IFN-alfa (n=3) se determin mediante ELISA, tras estimulacin de poblaciones purificadas con CpG, y la capacidad de endocitosis (n=3), mediante captacin de dextrano. Resultados. Sistemticamente se identificaron tres estadios madurativos de pre-CDp, de acuerdo a la expresin de HLA-DR/CD34/ CD45/CD123. La expresin de molculas presentadoras de antgeno se mantuvo alta a lo largo de la maduracin, mientras que la de las molculas asociadas a CDp aument progresivamente. Curiosamente, CD86 se expresaba en las clulas ms inmaduras, siendo indetectable en las ms maduras, mientras que CD40 slo se detect en el estadio ms maduro. El anlisis morfolgico de las subpoblaciones purificadas de pre-CDp de MON revel un aumento progresivo de la indentacin nuclear y una disminucin de la basofilia citoplasmtica con la maduracin. Slo se observaron prolongaciones citoplasmticas en los pre-CDp estimulados con CpG. La nica poblacin capaz de secretar IFN-alfa tras estimulacin fue la ms madura, mientras que la de mayor capacidad endoctica fue la ms inmadura. Conclusiones. En MON de adultos existen al menos tres estadios de diferenciacin de la lnea de CDp, con caractersticas fenotpicas, morfolgicas y funcionales distintas; adems, nuestros hallazgos sealan que los pre-CDp ms inmaduros tendran capacidad de endocitosis y/o presentacin antignica, lo que sugiere que podran tener un papel relevante en la induccin de tolerancia.

que la actividad inmunitaria est disminuida. La apoptosis de las clulas inmunitarias ha sido propuesta como un mecanismo para el mantenimiento del privilegio inmunolgico, participando no solo el sistema TRAIL-TRAIL-R sino tambin el sistema FAS-FASL. Por otro lado la expresin de receptores inhibidores, como el ILT2, participaran en la deshinibicin de las funciones citotxicas. La actividad inmunolgica materna frente al feto podra ser un mecanismo biolgico eficiente para eliminar fetos cuando se presente algn problema con la gestacin, determinndose que solo los fetos en un estado adecuado llegarn al final de la gestacin. Objetivo. El objetivo del presente trabajo es determinar la expresin de FAS, FASL e ILT2 en decidua de aborto espontneo y decidua normal. Materiales y mtodos. Las muestras de decidua normal (ABI) y de aborto espontneo (ABE) fueron procesadas y tratadas por gradiente de Ficoll-Histopaque. Las clulas dendrticas fueron estudiadas mediante citometra de flujo en base a la expresin de DC-SIGN (marcador caracterstico de las DC inmaduras, iDC), estudindose mediante doble marcaje la expresin de FAS, FASL e ILT2. Resultados. La poblacin DC-SIGN+ (marcador de iDC) indica una poblacin principal de iDC, confirmada por la baja expresin de CD83 (marcador de mDC). Se ha podido ver la co-expresin de FAS, FASL e ILT2 tanto en ABI como en ABE, siendo esta expresin inferior en ABE y con diferencia estadsticamente significativa. Conclusiones. Las DC de ABE participaran en menor grado en los mecanismos de apoptosis que tiene lugar en la decidua, y seran menos susceptibles a ella en comparacin con las DC de ABI. Adems estaran menos protegidas de la actividad citotxica celular debido a la menor expresin del receptor inhibidor ILT2.

CONTRIBUCIN DE LAS CLULAS DENDRTICAS PLASMACITOIDES INTRATMICAS A LA GENERACIN DE CLULAS T REGULADORAS NATURALES. IDENTIFICACIN DE PROGENITORES FISIOLGICOS. Martin Gayo E, Toribio Garca ML. Centro de Biologa Molecular. El timo constituye un rgano clave en la educacin de los linfocitos T. Durante el desarrollo intratmico, los progenitores de los linfocitos T generan timocitos CD4+CD8+ (DP) que expresan por primera vez un TCR, que participa directamente en los procesos de seleccin positiva y negativa mediante el reconocimiento de antgenos presentados por clulas del epitelio cortical (TEC) o por clulas dendrticas medulares (DCs), respectivamente. Adems, el timo es tambin el lugar de generacin de las clulas T reguladoras naturales (Treg), caracterizadas por el fenotipo CD4+ CD25+ Foxp3+. Estas clulas son potentes inmunosupresoras, que pueden inhibir la proliferacin de linfocitos perifricos va la secrecin de citoquinas tales como IL-10 y TGF. Actualmente, el origen de las Treg intratmicas es desconocido, aunque algunos estudios sugieren que estas clulas podran proceder de timocitos auto-reactivos que logran escapar de la seleccin negativa. En el timo humano habitan dos tipos de DCs: DCs convencionales (cDCs) y DCs plasmacitoides (pDCs). Estudios previos sugieren una implicacin de las cDCs intratmicas en la generacin de Treg, mientras que la capacidad de las pDCs en dicho proceso no ha sido analizada. En este estudio demostramos que las pDCs intratmicas activadas con CD40L e IL3 (MpDCs), pero no las pDCs inmaduras, son capaces de inducir la generacin de clulas CD25+Foxp3+, con caracters-

EXPRESIN DE FAS, FASL E ILT2 POR LAS CLULAS DENDRITICAS DE DECIDUA HUMANA NORMAL Y DE ABORTO ESPONTNEO. Tirado Gonzlez I, Muoz-Fernndez R, Blanco O, Leno E, de Lamata Espinosa C, Ortiz-Ferrn G, Abada Molina AC, Olivares G. Centro de Investigacin Biomdica. Introduccin. La decidua es el tejido materno que se encuentra en ntimo contacto con el trofoblsto fetal. Es un lugar privilegiado en el

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ticas funcionales idnticas a las descritas para clulas Treg, a partir de timocitos 4SP y linfocitos CD4+ perifricos alognicos. Adems, hemos identificado una poblacin de timocitos DP TCRhiCD69hi que contiene progenitores capaces de generar clulas Treg en respuesta a MpDCs autlogas. Por ltimo, hemos descrito la expresin de la molcula HLA-G en las pDCs intratmicas y su implicacin en el proceso de induccin de Treg. Por tanto, estos resultados indican que las pDCs intratmicas podran desempear una importante funcin en el establecimiento de la tolerancia central va la generacin de Treg naturales en el timo.

NOTCH1 CONTROLA LA EXPANSIN DE LOS PROGENITORES HUMANOS DE CLULAS T Y DE CLULAS LEUCMICAS A TRAVS DE LA REGULACIN DEL RECEPTOR DE IL-7. Gonzlez Garca S1, Garca Peydr M1, Martn Gayo E1, Ferrando AA2, Toribio ML1. 1Centro de Biologa Molecular Severo Ochoa, Madrid. 2Institute for Cancer Genetics, Columbia University. New York, USA. La diferenciacin de los linfocitos T implica la adquisicin de un patrn de expresin gnica especfico, el silenciamiento de genes de desarrollo de linajes no-T y la expansin de los progenitores T. En este proceso participan coordinadamente las vas de sealizacin de Notch1 y del receptor de interleuquina 7 (IL-7R). Recientemente mostramos que la cadena alfa de IL-7R (IL-7R) es una diana transcripcional directa de Notch1, va el factor de transcripcin CSL. En este estudio hemos analizado el papel funcional de la va de Notch y de IL-7R durante el desarrollo intratmico humano. Estudios de expresin gnica muestran una alta correlacin en el patrn de expresin de ambas vas durante la maduracin de los linfocitos T. En ensayos funcionales de diferenciacin de clulas T, demostramos que la inhibicin de la seal de Notch provoca una drstica reduccin en los niveles de expresin en membrana de IL-7R, bloqueando la proliferacin de clulas pre-T. Sin embargo, este bloqueo en proliferacin es rescatado tras la sobre-expresin de IL-7R mediante vectores retrovirales, indicando que el papel de Notch durante los estadios ms inmaduros de diferenciacin T es el mantenimiento de la proliferacin en respuesta a IL-7. As mismo, mostramos que este mecanismo de regulacin del IL-7R mediado por Notch ocurre tambin en leucemias linfoblsticas agudas T dependientes de Notch, en las cules la sobre-expresin del IL-7R es capaz de rescatar el bloqueo en proliferacin consecuente a la inhibicin de Notch. Por tanto, proponemos que la sealizacin por Notch1 contribuye a la proliferacin de los precursores T y de clulas T leucmicas regulando los niveles de expresin del receptor de IL-7 y la capacidad de respuesta a IL-7.

SESIN 10: CLULAS T Moderadores: Dr. Manel Joan (Barcelona), M Luisa Toribio (Madrid) LA PROTENA ADAPTADORA AKAP450 REGULA LA TRANSLOCACIN DEL MTOC, LA ORGANIZACIN DE LA SINAPSIS INMUNE Y LA SEALIZACIN TRAS LA ACTIVACIN DEL TCR EN CLULAS T. Robles Valero J1, Martn-Cfreces NB1, Lamana Domnguez A1, Ros RM2, Snchez-Madrid F1. 1Hospital Universitario La Princesa. 2Departamento de Microbiologa, Facultad de Biologa, Universidad de Sevilla. La translocacin del centro organizador de microtbulos (MTOC) es un evento temprano que tiene lugar cuando una clula T o NK interacciona con una clula presentadora de antgeno (APC), con la consiguiente formacin de la denominada sinapsis inmune. Sin embargo, es ahora cuando se empiezan a conocer los mecanismos moleculares implicados en la polarizacin del MTOC al rea de contacto. AKAP450, miembro de la familia de las protenas de anclaje a PKA (AKAPs) localizada fundamentalmente en el centrosoma, es una protena adaptadora de gran peso molecular capaz de ensamblar y compartimentalizar mltiples molculas sealizadoras y estructurales, adems de servir de nexo entre el MTOC y el aparato secretor. En el presente estudio abordamos el posible papel que podra desempear AKAP450 en la polarizacin del MTOC, la organizacin de la sinapsis inmune y la activacin de la clula T. La sobreexpresin del dominio C-terminal de AKAP450 unido a GFP, que acta como dominante negativo, y oligos de interferencia (siRNA) especficos que reducen considerablemente la expresin de la protena, previenen el anclaje del MTOC en la zona de contacto entre la clula T y la clula presentadora, llegando a evitar la propia translocacin, utilizando tanto un sistema antgeno como superantgeno especfico. Adems, AKAP450 es requerida para una correcta sealizacin tras la activacin del TCR en respuesta a presentacin de antgeno, ya que el silenciamiento de la protena provoca un descenso considerable de la fosforilacin de protenas tales como LAT, PLC1 o PKC. Este defecto en sealizacin corrobora con una reduccin considerable de la produccin de IL-2 medida mediante ELISA. Igualmente, AKAP450 es necesaria para la polarizacin a la sinapsis de ciertas molculas bsicas para la formacin correcta de la misma, tales como PKC. Por ello, nuestros resultados sugieren un papel fundamental de AKAP450 en la organizacin de la sinapsis inmune y en la reorientacin antgeno especfica del MTOC.

ICOS (CD278) ES NECESARIO PARA LA HOMEOSTASIS PERIFRICA DE LAS CLULAS Treg CD4+CD25+FoxP3+. Ojeda G1, Pini E1, Bello R2, Portols P1, Rojo JM2. 1Centro Nacional de Microbiologa, I.S. Carlos III. 2Centro de Investigaciones Biolgicas, CSIC. ICOS (CD278) es una molcula coestimuladora de la familia de CD28, expresada de modo caracterstico por los linfocitos T activados. Comparando linfocitos de ratones genticamente deficientes en ICOS (ICOSko) y de ratones normales, se ha examinado el posible papel de ICOS en el desarrollo y las funciones de la poblacin de clulas T reguladoras naturales CD4+CD25+FoxP3+ derivadas del timo. En primer lugar, se ha observado que las clulas CD4+CD25+ de ratones deficientes en ICOS son plenamente funcionales, de acuerdo con los datos de ensayos de Treg in vitro. As, la capacidad para suprimir la proliferacin o la produccin de IL-2 en clulas CD4+CD25- es comparable usando Treg de ratones ICOSko o de ratones normales, independientemente del origen (ICOSko, o normales) de las clulas respondedoras y accesorias. Esto indica que ICOS no es necesario para la funcin supresora de estas clulas. En cambio, el nmero de clulas Treg CD4+CD25+ se encuentra significativamente reducido en el bazo de ratones ICOSko, si se compara con el bazo de ratones normales de la misma edad y sexo. Esta reduccin no es debida ni a una expresin ms baja de CD25 por las clulas Treg CD4+FoxP3+ en los ratones ICOSko, ni a una generacin deficiente en el timo de las clulas Treg CD4+CD25+FoxP3+. Adems, las clulas T CD4+ de ratones ICOSko pueden recibir eficientemente coestmulos de CD28

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y producir IL-2, que son dos factores muy importantes en la generacin eficiente de clulas Treg CD4+CD25+. En cambio, s se ha observado una mayor susceptibilidad a la apoptosis espontnea en las clulas Treg CD4+CD25+ procedentes de ratones deficientes en ICOS. Esto podra contribuir a su menor nmero en estos animales y a explicar algunos fenmenos ligados a ICOS, incluyendo la mayor sensibilidad de los ratones ICOSko a enfermedades autoinmunes como EAE.

CARACTERIZACION FUNCIONAL DE CELULAS TH17/1 INTESTINALES EN PACIENTES CELIACOS. Santamaria Ossorio M2, Fernandez S1, Ortega C1, Carillo J2, Rodriguez F2, Snchez F2. 1Unidad de inmunologia Facultad de Medicina Universidad de Cordoba. 2H.U. Reina Sofia. Se ha estudiado la presencia de celulas productoras de IL-17 en biopsias de duodeno distal de pacientes con enfermedad celiaca. Las biopsias fueron cultivadas en presencia de Il-2 (20UI) durante 12 dias. Las poblaciones de celulas T obtenidas clonadas mediante dilucion limite y los clonos resultantes fueron testados mediate RT-PCR para determinar si expresaban seal especifica de Il-17 e IFNgamma. Se encontraron clonos productores de cada una de ellas de manera aislada y conjunta. El analisis de los clonos positivos indica que son celulas memoria/efctoras, con un fenotipo caracterizado por la expresion en superficie de CCR6 y receptor de IL-23. las celulas resultaron Th17/1 en base al patron de citounas que secretan y que se determinaron mediante ELISA y marcaje intracelular. Es interesante que ademas d las citoquinas mencionadas, las celulas Th17/1 de pacientes celiacos expresan TGF beta 1. Il17 se ha demostrado estar regulada por el factor de transcripcion RORA y C en humano. Tambien se necesita IRF4 para su diferenciacion en el raton. Nosotros encontramos expresion elevada de RORC y aun mas marcada de IRF4. Esta es la primera demostracion de que en humanos IRF4 se encuentr upregulado en celulas diferentes de Th2. Funcionalmente se trata de celulas capaces de responder a estimulos mediados por CD3/TCR, no son citotoxicas ni reguladoras y tampoco sensibles a regulacion al igual que sucede con este tipo celular en enfermedades autoinmunes digestivas como enfermedad inflamatoria intestinal. Nuestros datos indican que el papel de TGF beta secretado por ellas parece ser facilitar la regulacion positiva de RORC e IRF siguiente a la estimulacion CD3/TCR.

apunta a un posible papel de este virus en el origen y expansin de las linfocitosis monoclonales LGG-TCD4+. Objetivo. Analizar la especificidad de la respuesta inmunolgica frente a CMV de las clulas T clonales de pacientes con distintos sndromes linfoproliferativos crnicos T, SLPcT. Metodologa. Se analiz in vitro la respuesta funcional frente a CMV y EBV en 30 sangres perifricas de pacientes con linfocitosis LGGTCD4+TCRalphabeta+ (n= 12) u otros SLPcT (n= 18). En 4 pacientes con expansin monoclonal de LGG-TCD4+TCRVbeta13.1+ se evalu la respuesta al pptido de CMV MQLIPDDYSNTHSTRYVTVK complementario de HLADRB1*0701. Mediante microarrays de expresin se identificaron los genes que experimentaban cambios en los LGGTCD4+ en respuesta a CMV. Resultados. Los casos con linfocitosis LGG-TCD4+ mostraron una respuesta funcional frente a CMV caracterstica y especfica, que no se encontr en otros SLPcT. Esa respuesta se reprodujo frente al pptido MQLIPDDYSNTHSTRYVTVK en los pacientes con haplotipo HLADRB1*0701+ y expansin monoclonal de LGG-TCD4+TCRVbeta13.1+. Adems la respuesta a CMV en los LGG-TCD4+ clonales se asociaba a cambios especficos en la expresin de genes implicados en respuesta inflamatoria e inmune, progresin de ciclo celular, resistencia a apoptosis e inestabilidad gnica. Conclusiones. Por primera vez se demuestra que las clulas clonales de un grupo de neoplasias de clulas T (LGG-TCD4+) son especficas de antgenos de CMV, que podran ser responsables de la iniciacin y mantenimiento de la enfermedad.

REEVALUACIN DE LA CONTRIBUCIN DE HLA-DRB3 EN LA RESPUESTA CELULAR T. Faner Canet MR1, James E2, Yang J2, Houston L2, Pujol-Borrell R1,3, Kwok WW2,4, Juan M5. 1Laboratory of Immunobiology Research and Applications to Diagnosis (LIRAD). Banc de Sang i Teixits. 2Benaroya Research Institute at Virginia Mason, USA. 3Department of Cell Biology, Physiology and Immunology. Universitat Autnoma de Barcelona (UAB). Badalona, 4 Department of Immunology, University of Washington, Seattle, USA. 5Servei dImmunologia. Centre de Diagnstic Biomdic. Hospital Clnic. Barcelona. En la regin HLA hay diversos loci DRB (DRB1/3/4/5) que codifican para diferentes cadenas DR beta. Dichas cadenas beta se combinan con la misma cadena alfa y forman las diferentes molculas HLADR que se encuentran en la superficie de las clulas presentadoras de antgeno. La funcionalidad y relevancia de la molcula DRB1 ha sido extensamente estudiada, pero habitualmente se ha despreciado la contribucin de las molculas DR generadas a partir de los loci DRB3/ 4/ 5 a la presentacin de antgenos. Tanto es as que an hay cierta controversia en referencia al nivel de expresin de dichos loci DRB secundarios. Por ello hemos cuantificado los niveles de mRNA producidos por DRB3 y comparado con los producidos por el DRB1 de su haplotipo DR52 [DRB1(52)]. Esta comparacin se ha realizado en clulas CD19+ y CD14+, observando en ambos tipos celulares una menor produccin de DRB3 en relacin a su DRB1, pero una muy diferente distribucin de la abundancia relativa de dichos transcritos, mostrando en las clulas CD14+ una proporcin mayor de DRB3 respecto a DRB1. Estos resultados se han corroborado a nivel proteico analizando la tincin de superficie de ambas molculas en dichos tipos celulares. Para analizar el papel funcional de DRB3 hemos generado tetrmeros de HLA-DRB3 y usado TGEM (Tetramer-guided epitope mapping) en la valoracin de la contribucin de DRB3 a la respuesta inmu-

EXPANSIONES MONOCLONALES DE LINFOCITOS GRANDES GRANULARES (LGG)-T CD4+ RECONOCEN ANTGENOS DE CITOMEGALOVIRUS (CMV). Rodrguez Caballero MA1, Garca Montero AC1, Brcena P1, Almeida J1, Ruiz-Cabello F2, Tabernero MD3, Garrido P4, Muos-Criado S5, Balanzategui A6, Orfao A1. 1Centro de Investigacin del Cncer/IBMCC. CSIC-Universidad de Salamanca. 2Servicio de Anlisis Clnicos. Hospital Universitario Virgen de Las Nieves. Granada. 3Unidad de Investigacin, IECSCYL. Hospital Universitario de Salamanca. 4Servicio de Hematologa. Hospital Universitario Virgen de Las Nieves. Granada. 5Servicio de Microbiologa, Hospital Universitario de Salamanca. 6Servicio de Hematologa, Hospital Universitario de Salamanca. Introduccin. Estudios recientes sugieren que las linfocitosis monoclonales LGG-TCD4+ se originaran por una estimulacin antignica crnica, como se ha demostrado en otros sndromes linfoproliferativos cuyo desarrollo est favorecido por infecciones vricas persistentes (p.ej. HTLV-1, EBV, HHV8). El hecho de que en individuos sanos seropositivos frente a CMV, se hayan detectado expansiones (oligo)clonales de clulas T CD4+ con fenotipo de LGG en respuesta a CMV,

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ne T frente a antgenos altamente inmunognicos como el toxoide tetnico y la protena de la matriz del virus de la gripe. En ambos antgenos hemos identificado eptopos presentados por DRB3 y al evaluar el nmero de linfocitos T CD4+ que responden a ellos, hemos observado que es similar al descrito para DRB1. Todos nuestros resultados sugieren que DRB3 juega un papel en la presentacin de antgenos equivalente al atribuido a DRB1 pero con un repertorio de eptopos que al ser diferente se complementa. De este modo DRB3 parece ampliar y completar el repertorio peptdico que puede ser presentado por HLA-DR. Financiado por ayuda FIPSE 36487/05, FIS 07/0329 y Profit FIT 010000-2006-38.

EPH/EPHRINAS B COMO REGULADORAS DE LA MADURACIN DE LOS TIMOCITOS Y LA MORFOGNESIS EPITELIAL TMICA. Cejalvo Goyanes T1, Garca-Ceca J1, Alfaro Snchez D1, Jimnez Prez E2, Muoz Oliveira JJ3, Zapata Gonzlez A1. 1Dpto. Biologa Celular, Facultad de Biologa, UCM. 2Dpto. Biologa Celular, Facultad de Medicina, UCM. 3Centro de Citometra y Microscopia, UCM. Resultados previos de nuestro grupo demuestran que los receptores EphB2 y EphB3 son expresados tanto por timocitos como por clulas epiteliales tmicas (TECs) y participan tanto de forma autnoma como no autnoma en la diferenciacin y el desarrollo de ambos tipos celulares as como en las interacciones que los dos realizan entre si. Con el fin de definir la importancia de las seales trasmitidas por estos receptores y profundizar en el conocimiento de su papel en las interacciones celulares tmicas se analiz el efecto de diferentes mutaciones en las ephrinas B1 y B2, ligandos de Eph B2 y Eph B3, sobre los distintos componentes celulares del timo El anlisis de la diferenciacin T, en animales con timocitos deficientes en la ephrina B1 o en la ephrina B2, mutantes condicionados generados mediante tecnologa LoxP-Cre, revela una reduccin en la celularidad tmica y alteraciones en la diferenciacin T con diferente grado de severidad dependiendo del background gentico de la cepa de ratn utilizada, lo que confirma un papel autnomo de estas molculas sobre la maduracin del timocito. Sin embargo, al menos en el caso de los mutantes para la ephrina B2, la red epitelial no presenta alteraciones importantes. Por otro lado, animales ephrinaB2 LacZ/+ y ephrina B2 LacZ/LacZ en los que el alelo ephrina B2 LacZ codifica para una forma de ephrina B2 que carece del dominio citoplsmico, mostraban nuevamente menor celularidad tmica pero, en este caso, tambin alteraciones histolgicas en la red epitelial tmica indicando la necesidad de estas protenas no solo como estimuladoras de Ephs sino como receptores, as como su participacin autnoma en el establecimiento de la red epitelial. El presente trabajo discute finalmente el papel global de las interacciones Eph-ephrinas B en la modulacin de las interacciones celulares tmicas homo y/o heterotpicas que determinan la histognesis del rgano y la diferenciacin de los linfocitos T.

De este modo, el NFAT5 selecciona los mismos elementos de DNA que unen in vivo las protenas NFATc (Lpez-Rodrguez et al., 1999) y, por otra parte, el NFAT5 conserva la estructura presente en todas las protenas NF-B para controlar su dimerizacin, unin a DNA y transactivacin (Lpez-Rodrguez et al., 2001; Stroud et al., 2002). Aunque el NFAT5 se caracteriz inicialmente como un importante regulador de un programa de expresin de genes osmoprotectores (Lpez-Rodrguez et al., 2004; Aramburu et al., 2006), tambin regula la migracin de clulas de carcinoma, participa en la miognesis de msculo esqueltico, y acta como factor husped para el HIV (Jauliac et al., 2002; OConnor et al., 2006; Ranjbar et al., 2006). La expresin del NFAT5 en clulas primarias y rganos est bastante restringida a ciertos tejidos proliferantes (Aramburu et al., 2006), como linfocitos T activados y timocitos (Trama et al., 2000; Lpez-Rodrguez et al., 2001; Lpez-Rodrguez et al., 2004), donde los niveles de NFAT5 son relativamente altos y su distribucin subcelular es predominantemente nuclear (Trama et al., 2000; Lpez-Rodrguez et al., 2001; datos de nuestro laboratorio). Modelos de ratn desarrollados recientemente (Trama et al., 2002; Lpez-Rodrguez et al., 2004; Go et al., 2004) apoyan la idea de un papel de NFAT5 durante el desarrollo de los linfocitos T y sugiere su implicacin en la proliferacin de clulas T y su supervivencia. Los ratones deficientes en NFAT5 presentan una inmunodeficiencia consistente en una linfopenia de clulas T que es ms acusada para las clulas CD8+. Estas observaciones son de relevancia sustancial ya que, in vivo, los ratones deficientes en NFAT5 son incapaces de producir una respuesta inmune mediada por clulas CD4+ (Go et al., 2004) o CD8+ (datos de nuestro laboratorio). Datos recientes de nuestro laboratorio indican que los ratones deficientes en NFAT5 sufren de hipernatremia en plasma como resultado de su incapacidad de inducir un programa de expresin de genes osmoprotectores a nivel sistmico (Lpez-Rodrguez et al., 2004). Para analizar selectivamente los efectos intrnsecos de las clulas T derivados de la falta de NFAT5, y con ayuda de la tecnologa CRE-LOX, hemos llevado a cabo un modelo de ratn que elimina la expresin de NFAT5 en estados tempranos (Lck-CRE NFAT5Flox/Flox) o ms tardos (CD4CRE NFAT5Flox/Flox) del desarrollo de los timocitos. El anlisis de estos ratones revela que NFAT5 participa en la ontogenia de las clulas T en estados tempranos. Asimismo, nuestros datos indican que la falta de NFAT5 altera la homeostasis de diferentes poblaciones de clulas T en periferia.

SESIN 11: AUTOINMUNIDAD - II Moderadores: Dra. Carmen Gelp (Barcelona), Dra. M Rosa Juli (Palma de Mallorca) ESTUDIO ANATOMOPATOLOGICO DE ANTICUERPOS DE CLASE IgG, IgM Y COMPLEMENTO EN LA ESCLEROSIS MLTIPLE. Sdaba Argaiz MC1, Tzartos J2, Sloan C2, Gonzlez-Porqu P1, Espio Martnez M1, lvarez-Cermeo JC1, Villar-Guimerans LM1, Esiri M2. 1Servicio Inmunologa. Hospital Ramn y Cajal. 2Neuropathology Department. John Radcliffe Hospital. Introduccin. La esclerosis mltiple (EM) es una enfermedad inflamatoria de posible etiologa autoinmune. Su principal caracterstica patolgica es la placa de desmielinizacin, aunque tambin se ha demostrado dao axonal desde los primeros estadios. Si bien se ha con-

ESTUDIO DE NFAT5, UN FACTOR DE TRANSCRIPCIN DE LA FAMILIA REL, EN EL DESARROLLO Y LA HOMEOSTASIS DE LOS LINFOCITOS T. Berga Bolaos R, Lpez Rodrguez C. Parc de Recerca Biomdica de Barcelona. El NFAT5 es un factor de transcripcin que pertenece a la familia de protenas Rel (NF-kB y protenas NFATc) (Aramburu et al., 2006).

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siderado clsicamente a la EM como una enfermedad Th1, existen evidencias de la importancia de los anticuerpos y el complemento en su fisiopatologa. Objetivos. Estudiar la presencia de IgM, IgG y complemento en cortes de pacientes con EM. Materiales y mtodos. Bloques de tejido del sistema nervioso central incluidos en parafina y fijados con paraformaldehido. Se analizaron 62 cortes de 15 pacientes y 5 cortes de 2 controles. Se pusieron a punto las tcnicas inmunohistoquimicas correspondientes para analizar la presencia de IgG, IgM y C3B en las muestras obtenidas. Se realizaron mediante inmunofluorescencia dobles marcajes IgG/C3b e IgM/C3b. Resultados. Se pudo observar heterogeneidad en las lesiones dentro de un mismo paciente. Un 20% no mostraban depsitos de anticuerpos ni complemento, en un 90% se detect IgG y un 60% presentaban IgM. Algunos cortes con sustancia blanca aparentemente normal (SBAN) tambin presentaban dichos depsitos. En las placas que mostraban anticuerpos se determinaron los siguientes patrones de reconocimiento: 1. Axonal. 2. Oligodendrocitos. 3. Mielina. Al analizar el factor C3b del complemento se vieron los mismos patrones y mediante doble inmunofluorescencia se demostr que anticuerpos y complemento colocalizan. Tambin se observ la presencia de macrfagos con anticuerpos fagocitados junto a los depsitos de anticuerpos. Conclusiones. Anticuerpos, complemento y macrfagos intervienen en la desmielinizacin y en el dao axonal. Adems, la presencia de anticuerpos en la SBAN indica que podran ser el mecanismo efector primario en la enfermedad.

con respecto a controles (8% en EC vs 6% en controles, p=0.02; 9% en EM, p=0.006). En EM se observ un efecto ms fuerte en pacientes con la forma clnica primaria progresiva (PP) (16%, p=0.004). Adems, la frecuencia de heterocigotos para el SNP rs7517847 es significativamente mayor en este grupo de pacientes (81% PP vs 48% controles, p=0.0002). Conclusin. El alelo minoritario del polimorfismo funcional Arg381Gln (rs11209026) aumenta la susceptibilidad a EC y EM, resultado opuesto al descrito anteriormente para EII. En EM se observa un efecto ms fuerte en pacientes con la forma clnica primaria progresiva.

ANLISIS DE RECEPTORES DE QUIMIOCINAS ASOCIADOS CON LA RESPUESTA CLNICA AL TRATAMIENTO CON IFNB EN LA ESCLEROSIS MLTIPLE. Lpez Garca C1, Rio J1, Nos C1, Deishenhammer F2, Espejo C1, Montalban X1, Comabella M1. 1Institut de Recerca, Unitat de Neuroimmunologia, Hospital Universitari Vall d'Hebron. 2Clinical Department of Neurology. Innsbruck Medical University. Introduccin. El tratamiento con interferon-beta (IFNb) ha demostrado tener un efecto beneficioso en pacientes con esclerosis mltiple remitente-recurrente (EMRR). Actualmente existe una ausencia de marcadores biolgicos que correlacionen de forma fiable con la respuesta al tratamiento. Diversos estudios han implicado a los receptores de quimiocinas en la patogenia de la EM ya que intervienen en el paso de leucocitos a travs de la barrera hematoenceflica. Objetivo. Identificar receptores de quimiocinas asociados con la respuesta al tratamiento con IFNb. Mtodos. Se incluyeron 41 pacientes con EMRR en tratamiento con IFNb clasificados como respondedores (27) y no-respondedores (14) en base criterios clnicos. La expresin de receptores de quimiocinas (CCR1-5, CXCR2-4, CXCR6) se analiz mediante citometra de flujo en clulas T y monocitos antes del tratamiento, y tras 3, 6, 12, y 24 meses. Resultados. El IFNb aument el porcentaje de clulas T y monocitos que expresaban CCR4, CXCR2, y CXCR4, y disminuy la expresin de CCR2 en monocitos. Los pacientes no-respondedores mostraron mayor expresin de clulas T CD8+CXCR2+ que los pacientes respondedores. Finalmente, se observ una tendencia hacia una mayor expresin de CCR4 en clulas T de pacientes no-respondedores. Conclusiones.El IFNb podra modular los niveles de expresin de receptores de quimiocinas en clulas T y monocitos. Las diferencias de expresin de CXCR2 y CCR4 en clulas T de pacientes respondedores y no-respondedores podran utilizarse como potenciales marcadores de respuesta clnica.

INFLUENCIA DEL LOCUS IL23R EN LA SUSCEPTIBILIDAD A ESCLEROSIS MLTIPLE Y ENFERMEDAD CELACA EN LA POBLACIN ESPAOLA. Cnit MC1, Dema B1, Nez C1, Polanco I2, Maluenda C3, de las Heras V4, Arroyo R4, de la Concha EG1, Urcelay E1, Martnez A1. 1Servicio de Inmunologa Clnica, Hospital Clnico San Carlos (Madrid). 2Servicio de Gastroenterologa Peditrica, Hospital la Paz (Madrid). 3Servicio de Pediatra, Hospital Clnico San Carlos (Madrid). 4Unidad de Esclerosis Mltiple, Hospital Clnico San Carlos (Madrid). Introduccin y objetivos. El receptor de IL-23 est formado por dos cadenas, una de ellas compartida con el receptor de IL-12, denominada IL-12R1, y otra cadena especfica denominada IL-23R. El gen IL23R codifica dicha subunidad especfica y est ubicado en la regin 1p31. IL-23 interviene en el desarrollo de los linfocitos Th17, implicados en procesos de autoinmunidad. Estudios recientes han mostrado asociacin de algunos alelos de IL23R con enfermedad inflamatoria intestinal (EII), psoriasis y espondilitis anquilosante. Nuestro objetivo es el estudio de la implicacin del gen IL23R en enfermedad celiaca (EC) y esclerosis mltiple (EM). Material y mtodos. Realizamos un estudio caso-control incluyendo 598 pacientes con EC, 414 pacientes con EM y 546 controles espaoles blancos. Tras extraer el DNA de todos los individuos, todas las muestras fueron genotipadas para dos SNPs (single nucleotide polymorphisms), rs7517847 (localizado en un intrn) y rs11209026 (Arg381Gln) mediante sondas Taqman (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). El anlisis estadstico fue llevado a cabo mediante la prueba Chi-cuadrado o el test exacto de Fisher (si los valores observados eran menores de 5) utilizando el programa EpiInfo. Resultados. Observamos que la frecuencia del alelo minoritario del SNP exnico est incrementada significativamente en EC y EM

VARIANTES GENTICAS DEL GEN TSHR QUE AFECTAN A SU EXPRESIN EN EL TIMO CONFIEREN SUSCEPTIBILIDAD A LA ENFERMEDAD DE GRAVES-BASEDOW. Colobran Oriol R, Armengol Barnils MP, Ruiz Riol M, Martnez Cceres E, Otero MJ, PujolBorrell R. Banc de Sang i Teixits (BST) / Universitat Autnoma de Barcelona (UAB). La enfermedad de Graves como modelo de tiroiditis autoinmune, y causa de hipertiroidismo ms comn, est mediada por la produccin de anticuerpos contra el receptor de la hormona estimulante de la tiroides (TSHR). La hiptesis de este trabajo es que variaciones gen-

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ticas del gen TSHR que modifiquen su expresin pueden afectar a su proceso de tolerizacin central. Recientemente nuestro grupo ha descrito un conjunto de SNPs y haplotipos de este gen que presentan una distribucin significativamente diferente entre los pacientes con enfermedad de Graves y la poblacin control, destacando algunos de ellos por su elevada significacin (p<0,0008 y ORs de hasta 5,94). Para determinar el posible papel de estos polimorfismos en la expresin del TSHR en el timo, se ha optimizado un protocolo de cuantificacin especfica de alelo utilizando PCR a tiempo real. La cuantificacin especfica de alelo se aplica en muestras de individuos heterozigotos para la variante de estudio, asegurando que las diferencias sean debidas a variaciones del propio gen y no por variaciones del resto del genoma (como puede suceder cuando se comparan grupos de individuos). Se ha realizado la cuantificacin especfica de alelo del mRNA del TSHR proveniente de timo total de 44 individuos donantes heterozigotos para la variante de inters (SNP11 A/G), que es el marcador ms significativamente asociado a la enfermedad y que, a su vez, representa los principales haplotipos asociados a la enfermedad. Los resultados indican que el alelo protector (G) produce claramente una mayor expresin de TSHR en el timo respecto el alelo de susceptibilidad (A). La ratio media de expresin del alelo G vs A en las 44 muestras es de 1,65. Este efecto es especfico del timo ya que en los tiroides analizados no se observa este fenmeno. Estos resultados muestran que existen variaciones del gen TSHR que confieren susceptibilidad a la enfermedad de Graves posiblemente a travs de un proceso deficiente de tolerizacin central.

PERFIL DE EXPRESIN GNICA DE GLNDULAS TIROIDEAS DE PACIENTES DE CORTA Y LARGA EVOLUCIN CON GRAVES-BASEDOW. IMPLICACIN DE LAS SEALES DE PELIGRO Y MECANISMOS PERPETUADORES. Ruz Riol M1, Armengol Barnils MP1, Colobran Oriol R1, Martnez Cceres E1, Lucas Martn AM2, Pujol Borrell R1. 1Hospital Universitari Germans Trias i Pujol (Badalona), Facultat de Medicina, Universitat Autonnoma de Barcelona. 2Servei d' Endocrinologia i Diabetes. La enfermedad de Graves-Basedow (GB) es una de las patologas autoinmunes rgano especficas ms frecuentes. Se desconocen los mecanismos que desencadenan y cronifican esta enfermedad, pero se postulan las seales de peligro como molculas importantes en este proceso. Para valorar la contribucin de stas en el inicio y en la perpetuacin de la enfermedad, hemos estudiado el perfil de expresin gnica diferencial por microarrays en 6 tiroides agrupados segn el tiempo de evolucin de la enfermedad (corta < 9 meses y larga > 36 meses) y en 2 controles sanos. Los genes diferencialmente expresados relacionados con el sistema inmune fueron clasificados en: 1/ seales de peligro/receptores y dao celular, 2/ homing a HEV y zonas de inflamacin, 3/ inflamacin, 4/ inmunidad innata, 5/ inmunidad adaptativa, y 6/ neognesis de tejido linfoide. De los 297 genes diferencialmente expresados entre controles vs corta evolucin, aproximadamente el 20% de los del sistema inmune estaban en el grupo de seales de peligro/receptores y respuesta a dao celular (ej: Hsp90, AGER, MT1G). Precisamente en la comparacin corta vs larga evolucin, 212 genes se hallaron diferencialmente expresados, principalmente incluidos en las categoras de homing hacia HEV, IFN signature e inmunidad adaptativa. Entre controles vs larga evolucin (n=540 genes), se repartan entre todos los grupos establecidos (quimiocinas y receptores, molculas relacionadas con procesamiento y presentacin de antgeno, y reordenamiento de Igs). Para validar los resultados del primer grupo, los genes seleccionados (OAS2, NOD27, IRF8, HSP90, MT1G, AGER, CD36, CD163, SERPINA, AIF1, ISG15, IFN-alpha, -beta, -gamma) han sido estudiados por inmunofluorescencia y RT-qPCR. Los resultados obtenidos hasta el momento apuntan a la participacin de macrfagos y clulas dendrticas en el inicio y en la evolucin de la patologa.

PATRN DE EXPRESIN DEL GEN DEL RECEPTOR DE LA TSH EN EL TIMO HUMANO: IMPLICACIONES PARA LA PATOGENIA DE LA ENFERMEDAD DE GRAVES-BASEDOW. Armengol Barnils MP, Ruz Riol M, Colobran Oriol R, Martnez Cceres EM, Pujol Borrell R. Hospital Universitari Germans Trias i Pujol (Badalona), Facultat de Medicina, Universitat Autonnoma de Barcelona. Se acepta que el timo es el rgano en el que se imparte la tolerancia a los linfocitos T y recientemente se considera que esta funcin incluye la tolerancia a los antgenos expresados en tejidos muy diferenciados o perifricos. Se conoce la participacin del gen AIRE como factor regulador de la expresin de algunos de ellos en el timo. El timo, aunque de forma decreciente, contribuye a mantener hasta edad avanzada el pool de clulas T circulantes y su diversidad, por tanto variaciones en el nivel de expresin de autoantgenos y en la cantidad y calidad de los linfocitos T exportados por el timo influyen en la aparicin y curso clnico de las enfermedades autoinmunes. La enfermedad de Graves-Basedow (GB), est mediada por la presencia de autoanticuerpos contra el receptor de la tirotropina (TSHR). Para valorar la variabilidad interindividual de la expresin del TSHR se ha cuantificado mediante qRT-PCR con sondas Taqman los niveles de expresin tmica de las dos isoformas del TSHR y su correlacin con los niveles de AIRE, GAPDH, Leptina, Keratina-14 en 200 timos humanos (4 das a 82 aos). Los resultados obtenidos muestran una variabilidad interindividual de los niveles de TSHR en el timo que se mantienen en todos los rangos de edad. A pesar de que la abundancia en clulas epiteliales medulares tmicas aumenta con la edad respecto al peso total de la glndula, la falta de correlacin con los niveles del TSHR indicara una menor transcripcin del gen por clula epitelial y una reduccin en la eficiencia de las clulas medulares epiteliales tmicas en la seleccin negativa a partir de una cierta edad.

LAS HORMONAS SEXUALES INFLUYEN EN EL EFECTO PROTECTOR DE LA AUTOINMUNIDAD MEDIADO POR LINFOCITOS T QUE SOBRE-EXPRESAN BCL-2. Iglesias M1, Santiuste I1, Gonzlez J2, Postigo J2, Ferndez-Rey M2, Merino J2, Merino R1. 1Instituto de Biomedicina y Biotecnologa de Cantabria, CSIC-Universidad de Cantabria-IDICAN. 2Departamento de Biologa Molecular, Universidad de Cantabria. Recientemente nuestro grupo ha demostrado que la sobre-expresin de Bcl-2 humano en linfocitos T (hBcl-2-T) de ratones transgnicos (Tg), protege contra el desarrollo de autoinmunidad. Este efecto protector esta mediado por linfocitos T reguladores CD4+ CD25+. Dada la asociacin de algunas enfermedades autoinmunes con el sexo de los pacientes, estudiamos la influencia de las hormonas sexuales sobre la capacidad moduladora de Bcl-2 en el desarrollo de artritis inducida por colgeno (AIC), tras inmunizacin con colgeno bovino de tipo II (articular). Para ello, se compar en primer lugar el desarrollo de AIC entre ratones (DBA/1 x C57BL/6)F1-hBcl-2-T (F1.Tg) y (DBA/1 x C57BL/6)F1 (F1.no-Tg) machos y hembras. Como se ha descrito ante-

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riormente, los machos F1.no-Tg desarrollan una AIC ms acelerada e intensa que las hembras y las hembras F1.Tg estn protegidos contra el desarrollo de la enfermedad. Sin embargo, los machos F1.Tg desarrollan una AIC similar a la observada en las hembras F1.no-Tg. En segundo lugar, se observ que la castracin de los machos F1.Tg inhibe el desarrollo de AIC y que la administracin de 5alfa-dihidrotestosterona a hembras F1.Tg bloquea el efecto protector observado en los controles no tratados. En conclusin, nuestros resultados muestran que las hormonas sexuales condicionan la capacidad de Bcl-2 para modular la actividad de los linfocitos CD4+CD25+ reguladores y el desarrollo de AIC.

SOBREEXPRESION DE CITOCINAS TH17 EN LA FIBROSIS PULMONAR INDUCIDA POR ADMINISTRACIN ENDOTRAQUEAL DE ADRIAMICINA. Fernandez Rey M1, Buelta L2, Tamayo E1, Iglesias M3, Merino J1, Merino R3. 1Departamento de Biologa Molecular, Universidad de Cantabria. 2Departamento de Ciencias Mdicas y Quirrgicas Universidad de Cantabria. 3Instituto de Biomedicina y Biotecnologa de Cantabria, CSIC-Universidad de Cantabria-IDICAN. La bleomicina es un antibitico genotxico con actividad antitumoral, que induce fibrosis pulmonar cuando se administra por va i.v., endotraqueal e incluso subcutnea. Por ello es el modelo experimental de esclerodermia ms utilizado. La administracin subcutnea de adriamicina o doxorrubicina, otro antibitico empleado en el tratamiento de mltiples tumores, tambin provoca fibrosis cutnea en el sitio de puncin, pero no afecta al pulmn. No existiendo reportes previos, hemos puesto a punto un modelo de fibrosis pulmonar mediante inyeccin endotraqueal de adriamicina y hemos analizado los mecanismos inmunolgicos que intervienen en el desarrollo de las lesiones. Los resultados de expresin (Q-PCR) de distintos tipos de colgenos, de citocinas y de factores de transcripcin especficos de linaje de diferenciacin de clulas T-CD4, muestran un marcado aumento en la expresin de colgeno-I (fibrilar) y colgeno IV (membranas basales) en relacin con el incremento en la expresin de citocinas asociadas a clulas TH17 y del factor de transcripcin RORgT, especfico de este linaje. En las clulas obtenidas mediante lavado broncoalveolar en estos animales hemos constatado un incremento en la frecuencia de linfocitos CD4+ activados productores de IL-17. Estos resultados sugieren un papel destacado de los linfocitos TH17 en la produccin de fibrosis pulmonar por adriamicina.

expresin de S100A8 y S100A9 en procesos inflamatorios. Se analizaron 30 muestras de pacientes con lupus previamente diagnosticados segn los criterios de reumatologa americano, y 16 muestras de personas sanas voluntarias que sirvieron como controles. Las PBMCs se obtuvieron por centrifugacin en gradiente de densidad con Histopaque 1077 (Sigma-Aldrich qumica S.A Spain) de sangre perifrica a la que se le ha aadido el anticoagulante K2-EDTA (BD Vacutainer). La separacin de las protenas en geles 2-DE se realiz utilizando el sistema Protean IEF (Bio-Rad) en la primera dimensin y el sistema CRITERION (Bio-Rad) en la segunda. Los geles se tieron secuencialmente con Pro-Q-Diamond, Sypro-Rubi y Bio-Safe Coomassie. La identificacin de protenas por MALDI-TOF MS o por secuenciacin utilizando nano(n)ESI. IT MS/MS se realiz de forma idntica a la de nuestro trabajo previo. Hemos podido identificar por espectrometra de masas S100A9 wild-type (spot 7), S100A9 truncada en su extremo N-terminal (spot 6 inferior), S100A9 wt fosforilada en la Thr C-terminal (spot 6 superior) y S100A9 truncada y fosforilada en la Thr C-terminal (spot 19). La expresin de las variantes del spot 6 est aumentada en pacientes con lupus eritematoso sistmico respecto a controles sanos. La utilizacin de geles 2-D, tincin secuencial con Pro-Q-Diamond y SyproRuby e identificacin de las protenas por MS y posterior secuenciacin de pptidos especficos por MS/MS permite identificar modificaciones postraduccionales como fosforilacin en treonina o truncaciones naturales, as como determinar cambios relativos de estas modificaciones en situaciones patolgicas (enfermedad autoinmune vs controles sanos).

TRATAMIENTO CON IL-4 INCREMENTA LA ACTIVACIN DE STAT6 POR IFN. Cortes JR, Perez-G M, Rivas MD, Zamorano J. Hospital San Pedro de Alcantara. El interfern es una citoquina con numerosas actividades biolgicas lo que explica sus aplicaciones clnicas. La respuesta celular est mediada por la activacin de la va JAK/STAT, principalmente STAT1, 2 y 3. Recientes estudios indican que interferones tipo I tambin pueden activar STAT6. La regulacin de STAT6 por IFN podra tener importantes consecuencias biolgicas debido al papel propuesto de STAT6 en enfermedades autoinmunes donde IFN es empleado. Puesto que STAT6 est principalmente regulado por la IL-4, nuestro objetivo fue investigar la interaccin entre IL-4 e IFN en la activacin de STAT6. Nuestros resultados confirman que el IFN puede inducir la activacin de STAT6. Sin embargo, la fosforilacin de STAT6 inducida por IFN es muy inferior a STAT1 o a la inducida por IL-4, indicando que STAT6 no es un principal sustrato para IFN. Sin embargo, cuando las clulas fueron pre-tratadas con IL-4, la activacin posterior de STAT6 por IFN fue considerablemente aumentada llegando a niveles de fosforilacin similares a los inducidos por IL-4. El empleo de inhibidores descarta un papel de fosfatasas o raft de lpidos en este proceso. Los resultados obtenidos sugieren la regulacin por la IL-4 de una protena adaptadora implicada en la activacin de STAT6 por el IFN puesto que: 1) inhibidores de la sntesis de protenas inhiben el efecto de la IL-4 sobre la activacin de STAT6 por el IFN, 2) la unin de STAT6 al receptor del IFN est aumentada tras el tratamiento con IL-4, 3) IL-4 induce la sntesis de RACK1, una protena adaptadora que facilita el reclutamiento de STATs por el receptor de interferones. La interaccin entre IL-4 e IFN en la activacin de STAT6 podra ser relevante para enfermedades como la esclerosis mltiple donde tienen un papel destacado.

EXPRESIN DIFERENCIAL DE LA CUATRO ISOFORMAS DE LA PROTENA DE UNIN A CALCIO S100A9 (CALGRANULINA B) EN CLULAS MONONUCLEARES DE SANGRE PERIFRICA DE PACIENTES CON LUPUS ERITEMATOSO SISTMICO RESPECTO A CONTROLES SANOS. Pavn Castillero EJ1, Callejas Rubio JL2, Ortego Centeno N2, Zubiaur Marcos M1,3, Sancho Lpez J1. 1Instituto de Parasitologa y Biomedicina. Consejo Superior de Investigaciones Cientficas. 2Hospital Clnico Universitario San Cecilio, 3 Instituto de Salud Carlos III. La S100A8 y la S100A9 pertenecen a la familia S100 de protenas de unin a calcio. Normalmente forman un heterodmero (S100A8/S100A9) llamado Calprotectina. Se expresan preferentemente en clulas de origen mieloide. Se han descrito incrementos en la

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PREVENCIN DE LA DIABETES TIPO 1 EXPERIMENTAL MEDIANTE ADMINISTRACIN DE CLULAS DENDRTICAS Y CUERPOS APOPTTICOS. Marn Galln S1, Clemente X1, Planas R1, Ampudia RM1, Carrillo J2, Carrascal J2, Pujol-Borrell R3, Verdaguer J2, Borrs FE1, Vives-Pi M1. 1Lirad-BST. Fundacio Institut d'Investigaci en Cincies de la Salut Germans Trias i Pujol. Badalona. 2Unitat d'Immunologia. Universitat de Lleida. 3Banc de SAng i Teixits. Badalona. La diabetes tipo 1 (DT1) es una enfermedad autoinmune causada por la destruccin selectiva de las clulas beta pancreticas. Dada su etiologa desconocida, hasta el momento no se ha desarrollado una terapia preventiva o curativa para esta enfermedad. Nuestro objetivo es valorar la eficiencia de las clulas dendrticas singnicas pulsadas con cuerpos apoptticos de clulas de islote pancretico, como tratamiento preventivo de la DT1. El estudio se ha llevado a cabo en un modelo experimental de DT1, el ratn NOD (Non Obese Diabetic) que expresa la citocina IFN-beta en las clulas productoras de insulina. Este modelo desarrolla diabetes acelerada a partir de las tres semanas de edad con una incidencia del 60%. Hemos generado clulas dendrticas (DCs) inmaduras a partir de mdula sea de ratn NOD mediante cultivo con GM-CSF. La terapia ha consistido en administrar DCs pulsadas con cuerpos apoptticos de la lnea celular beta pancretica murina NIT-1 (DCs-NITapo) a ratones de 12-14 das por via intraperitoneal. Como controles, se han transferido: 1) DCs; 2) Cuerpos apoptticos de clulas insulares NIT-1; 3) Sham o suero fisiolgico. El seguimiento de los ratones se ha llevado a cabo durante 30 semanas para determinar el efecto de la inmunoterapia en la incidencia de la DT1. Los resultados indican una prevencin de la diabetes con DCsNITapo (incidencia 15%). El anlisis de la insulitis muestra una disminucin de la intensidad de infiltracin leucocitaria con esta terapia. El tratamiento con DCs no pulsadas no vara la incidencia de la enfermedad respecto a la colonia (60%). Por otro lado, la administracin de cuerpos apoptticos de NIT-1 resulta en una disminucin en la incidencia de DT1 (25%) aunque sin alcanzar los valores obtenidos con DCs-NITapo. La determinacin de los mecanismos implicados en el establecimiento de tolerancia mediante este tratamiento contribuir a valorar su futura aplicacin.

efecto de la dexametasona incrementado la expresin de Foxp3 fue mucho ms pronunciado en el caso de las clulas Treg generadas con TGF . Todas las clulas generadas con el esteroide eran anrgicas, sin embargo, al estudiar la capacidad antiproliferativa, se observ que slo aqullas generadas con TGF? eran capaces de inhibir la proliferacin, y que el incremento en la expresin de FoxP3 no supona un aumento significativo del porcentaje de inhibicin (25.2% vs 32.6%). Estos resultados estn de acuerdo con los encontrados en el estudio de pacientes de LES, en los que la actividad supresora de los linfocitos T CD4+CD25+ aislados de pacientes con tratamiento esteroideo fue similar a la de las clulas aisladas de pacientes sin este tratamiento. Estos resultados indican que aunque los esteroides incrementan significativamente la expresin de FoxP3, tanto in vivo como in vitro, no son capaces de generar clulas con funcin reguladora y sugieren que FoxP3 no es un buen marcador de clulas Treg en humanos, apoyando las diferencias descritas entre humanos y ratones en la regulacin de la actividad supresora/reguladora de esta poblacin celular.

EFICACIA TERAPEUTICA DE LA POLINEUROPATIA MIXTA SENSITIVO-MOTORA CON FATIGA INCAPACITANTE EN EL SINDROME DE SJGREN TRAS TRATAMIENTO CON RITUXIMAB. Velastegui Ordoez A, Oliver D, Rodrguez-Mahou M, Gil J, Fernandez-Cruz E, Sanchez-Ramon S. Hospital Gregorio Maraon. Madrid. Introduccin. Las manifestaciones neurolgicas en pacientes con Sndrome de Sjgren Primario (SSP) pueden aparecer hasta en el 20% de los casos, sin embargo su diagnstico en muchas ocasiones puede resultar difcil. Presentamos un caso clnico de SSP refractario al tratamiento convencional (corticoides, inmunosupresores, IGIV) cuyo sntoma principal es la fatiga incapacitante en el contexto de Polineuropata Mixta Sensitivomotora y con sintomatologa leve de sndrome seco tratado con Rituximab en monoterapia. Objetivos. Determinar la correlacin entre evolucin de sntomas y signos clnicos con niveles de anticuerpos asociados al SSP tras el tratamiento con Rituximab en monoterapia. Y evaluar la mejora en la calidad de vida del paciente. Mtodo. Administracin de Rituximab (375 mg/m2 I.V. cada 4 semanas) con seguimiento de parmetros de laboratorio, estudio isotpico de gandulas salivares, test de Schirmer, biopsia glandular, estudio neurofisiolgico y TAC craneal. Se monitorizaron en tiempo basal, 1 mes, 6 mes, 9 mes, 1 ao. Peridicamente se evalu la respuesta subjetiva del paciente en relacin al grado de incapacidad para actividades cotidianas mediante los Test de calidad de vida SF-36 y WHOQOL-100 de la OMS. Resultados. Se objetiv mejora progresiva y mantenida principalmente de los sntomas de fatiga incapacitante y debilidad en miembros inferiores, asociado con una mejora leve de la conduccin nerviosa en los estudios neurofisiolgicos. A pesar de la evolucin favorable de los sntomas clnicos neurologicos y de la xerostoma/xerotalma, comprobado por estudio isotpico de glndulas salivares y Test de Schirmer, no existi cambio en los ttulos sricos de FR y Ac. AntiRO/SSa. No se objetivaron efectos adversos en la terapia con Rituximab, ni fue necesaria la administracin concomitante de IGIV ni otros tratamientos. Con mejora de la calidad de vida del paciente. Conclusiones. En este paciente se comprob la efectividad de rituximab en monoterapia con control del cuadro tipico de SSP y de las complicaciones atribuibles a la Polineuropata mixta sensitivo-motora.

LA DEXAMETASONA INCREMENTA LA EXPRESIN DE FOXP3 INDEPENDIENTEMENTE DE LA ACTIVIDAD SUPRESORA. Prado C1, Gmez J2, Lpez P1, de Paz B1, Gutierrez C1,2, Surez A1. 1Dpto. Biologa Funcional. Universidad de Oviedo) 2Servicio de Inmunologa. Hospital Universitario Central de Asturias. Dado que los pacientes de LES tratados con corticoides presentan un mayor porcentaje de clulas Treg, nos planteamos si estos agentes eran capaces de generar clulas Treg in vitro. Para ello se trataron clulas CD4+CD25- durante 24 h con dexametasona y se expandieron con anti-CD3/CD28 en presencia de IL-2 durante 14 das. En las clulas obtenidas se analiz el fenotipo, la expresin gnica de FoxP3, GITR y CTLA-4 y la actividad funcional. Igualmente se analiz el efecto de la dexametasona sobre las clulas Treg generadas con TGF . Las clulas expandidas tras el tratamiento con dexametasona presentaron un fenotipo similar al de las clulas Treg (CD4lowCD25highCD127GITR+iCTLA4+CD69lowFoxp3+), mientras que los linfocitos sin dexametasona posean una expresin significativamente menor de FoxP3 y iCTLA-4 (mRNA y protena) y mayor de CD69. Es de destacar que este

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INMUNOLOGA

COMUNICACIONES ORALES

RESPUESTA CLINICA FAVORABLE DE UVEITIS REFRACTARIA TRAS USO DE INFLIXIMAB. Carbone J, Sarmiento E, FernndezCruz E. Hospital Gregorio Maraon. Madrid. La uveitis agrupa a una serie de enfermedades inflamatorias oculares que afectan la capa media del ojo (iris, cuerpo ciliar y coroides) pudiendo causar prdida visual grave. Un subgrupo de uveitis de causa no infecciosa es de etiologa autoinmune. Objetivo. Evaluar la respuesta a infliximab (anticuerpo monoclonal anti-TNF alfa) en pacientes con uveitis refractaria. Mtodos. Revisin del curso clnico de 2 pacientes con pan uveitis bilateral refractaria a terapia convencional tratados con infliximab en la Unidad de Inmunologa Clnica del HGUGM. Respuesta teraputica: incidencia de recurrencias de uveitis, evidencia oftalmolgica de disminucin de la actividad inflamatoria ocular, agudeza visual, reduccin de la dosis de glucocorticoides sistmicos y efectos adversos; a mes 0, 3, 6 y 12. Protocolo: 3 infusiones de infliximab las semanas 0, 2, y 6. Se evalu respuesta clnica en semana 10. Si haba respuesta clnica se continuaba con una infusion en semana 14 y luego cada 8 semanas hasta el ao.

Resultados. Dos pacientes [1H (29a), 1M (46a)]. Ambos haban utilizado distintas combinaciones de corticoides sistmicos, azatioprina, ciclosporina y gammaglobulina intravenosa a alta dosis. Tiempo de enfermedad: 60 m y 41 m. Tratamiento de base al comenzar infliximab: prednisona 50 mg/d + azatioprina 100 mg/d y prednisona 90 mg/d. Tiempo de seguimiento tras primera dosis de infliximab: 24 m y 18 m. A sem 10 ninguno de los pacientes tena actividad inflamatoria ocular y completaron el protocolo hasta el ao. Al ao ninguno tena actividad inflamatoria ocular. A 12 m y 6 m tras ltima infusion de infliximab ambos siguen libres de uveitis. No se registraron efectos adversos salvo un episodio de prurito transitorio en la penltima infusin en la paciente. El tratamiento inmunosupresor se pudo reducir en ambos pacientes: El paciente varon suspendi azatioprina y redujo prednisona hasta dosis actual de 5 mg de prednisona cada semana; la paciente redujo la dosis de corticoides hasta dosis actual de deflazacort 7.5 mg cada 48 horas. Durante el seguimiento tras uso de infliximab la paciente tuvo ANA positivo a ttulo bajo. Conclusiones. Infliximab fue bien tolerado y efectivo en 2 pacientes con uveitis refractaria de larga duracin.

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Posters
Inmunologa Vol. 27 / Supl. 1/ Mayo 2008: 55-120
SESIN 1: AUTOINMUNIDAD - I Moderadores: Dra. Joana Ferrer (Palma de Mallorca), Dra. Jlia Sequ (Madrid) 1. ASOCIACIN INDEPENDIENTE DE LOS GENES IL23R E IL12B CON ENFERMEDAD INFLAMATORIA INTESTINAL: NO EVIDENCIA DE INTERACCIN. Mrquez Ortiz AM1, Mendoza JL2, Taxonera C2, Daz-Rubio M2, Gmez de la Concha E1, Urcelay E1, Martnez-Doncel A1. 1Servicio de Inmunologa Clnica, Hospital Clnico San Carlos. 2Servicio de Gastroenterologa, Hospital Clnico San Carlos. Estudio genmicos recientes han identificado a los genes IL23R e IL12B como loci de susceptibilidad a enfermedad inflamatoria intestinal (EII). Nuestro objetivo es dilucidar si estos genes tambin se asocian a la enfermedad en nuestra poblacin as como analizar la posible interaccin gentica entre polimorfismos localizados en los genes IL12B e IL23R, ligando y receptor r espectivamente. En este estudio se incluyeron 707 pacientes con EII, 344 con enfermedad de Crohn y 363 con colitis ulcerosa, y 547 controles sanos caucsicos. Se analizaron cuatro polimorfismos de un solo nucletido (SNPs), dos de ellos localizados en el gen IL23R (rs7517847 y rs11209026) y otros dos en el gen IL12B (rs3212227 y rs6887695). Las frec uencias genticas se analizaron mediante un test CHI-CUADRADO. Nuestros datos muestran una asociacin con EII de los dos SNPs localizados en el gen IL23R, siendo estadsticamente ms fuerte para el marcador rs7517847 (OR=0.79, frecuencias del alelo minoritario: 0.355 in pacientes con EII vs. 0.410 en controles; p=0.005). Ambos polimorfismos presentaban un efecto mayor en los pacientes de Crohn (OR=0.74) que en los enfermos de colitis (OR=0.84). Uno de los marcadores analizados en el gen IL12B (rs6887695) mostr una asociacin dbil con EII (OR=1.24, frecuencias del alelo minoritario: 0.375 in pacientes con EII vs. 0.326 en controles; p=0.012), con un efecto ms fuerte en colitis ulcerosa (OR=1.31, p=0.007). La estratificacin de los pacientes atendiendo a caractersticas clnicas no mostr diferencias significativas. No se observ interaccin entre ninguno de los polimorfismos estudiados en los genes IL12B e IL23R. Nuestro estudio confirma la asociacin de los genes IL23R e IL12B con EII en poblacin espaola, no encontrando evidencias de interacc in entre los dos genes analizados. Los polimorfismos hallados para el grupo control fueron: IL-1alpha/ - 889 (52.5 CC/40 CT/7.5 TT), IL-1beta/ -511 (40 CC/ 45 CT/15 TT), IL-1beta/ 396 (60 CC/35CT/5 TT),IL-1RA/mspa 11100 (5 CC/47.5 CT/47,5 TT), IL1R/psti 1970 (50 CC/40 CT/10 TT), IL-2/ - 330 (15 GG/ 45 GT/40 TT), IL-2/ 166 (50 GG/40 GT/10 TT), IL-4/ - 1098 (10 GG/ 27.5 GT/ 62,5 TT), IL-4/ - 590 (72.5 CC/25 CT/ 2,5 TT), IL-4/ - 33 (75 CC/20 CT/5 TT), IL-4R alpha/1902 (60 AA/35 AG/5 GG), IL-6/ - 174 (20 CC/ 40CG/40 GG), IL-6/ 565 (12.5 AA/52,5 AG/35 GG), IL-10/ - 592 (5 AA/45 AC/50 CC), IL-10/ - 819 (50 CC/40 CT/10 TT) IL-10/ - 1082 (25 AA/50AG/25 GG), IL-12/ - 1188 (62.5 AA/32.5 AC/5CC), IFN gamma/utr 5644 (32.5 AA/42,5 AT/25 TT), TNF alpha/ - 238 (0 AA/2O AG/80 GG), TNF alpha/ - 308 (10 AA/25 AG/65 GG), TGF beta1/codon 10 (25 CC/50 CT/25 TT), TGF beta1/codon 25 (0 CC/15 CG/85 GG) Grupo Pacientes Artritis Reumatoide: IL-1alpha/ - 889 (57.5 CC/40 CT/2.5 TT), IL-1beta/ -511 (40 CC/ 50 CT/10 TT), IL-1beta/ 3962 (50 CC/32.5CT/7.5 TT),IL-1RA/mspa 11100 (0CC/50 CT/50 TT), IL1R/psti 1970 (45 CC/52.5 CT/7.5 TT), IL-2/ - 330 (15 GG/ 50 GT/35 TT), IL2/ 166 (55 GG/35 GT/10 TT), IL-4/ - 1098 (10 GG/ 22 GT/ 70 TT), IL4/ - 590 (75CC/25 CT/ 0 TT), IL-4/ - 33 (75 CC/20 CT/5 TT), IL-4R alpha/1902 (75 AA/15 AG/10 GG), IL-6/ - 174 (15CC/ 45CG/40 GG), IL-6/ nt 565 (10 AA/50 AG/40 GG), IL-10/ - 592 (5 AA/45 AC/50 CC), IL-10/ - 819 (55 CC/35 CT/10 TT) IL-10/ - 1082 (20 AA/50AG/30 GG), IL-12/ - 1188 (65 AA/35 AC/0 CC), IFN gamma/utr 5644 (35 AA/40AT/25 TT), TNF alpha/ - 238 (0 AA/2O AG/80 GG), TNF alpha/ - 308 (5 AA/30 AG/65 GG), TGF beta1/codon 10 (20 CC/50 CT/30TT), TGFbeta1/codon 25 (0 CC/15CG85 GG).

3. ICAM-1 NO MUESTRA EVIDENCIAS DE ASOCIACIN A ENFERMEDAD CELACA EN POBLACIN ESPAOLA. Dema Jimnez B1, Martnez Doncel A1, Polanco I2, Malvenda C1, Figueredo MA1, Fernndez-Arquero M1, Gmez de la Concha E1, Urcelay E1, Nez Pardo de Vera C1. 1Hospital Clnico San Carlos. 2Hospital La Paz. La enfermedad celaca (EC) es una enfermedad inflamatoria crnic a intestinal que se desarrolla en individuos genticamente susceptibles tras exposicin al gluten. El gen ICAM1, localizado en la regin de ligamiento a EC 19p13, codifica la molcula de adhesin intercelular-1 (ICAM-1). En celacos se ha observado mayor expresin de ICAM-1 en el subepitelio intestinal y en suero. Adems, la gliadina induce la expresin de ICAM-1 en cultivos de biopsias de pacientes. Recientemente, polimorfismos en ICAM1 se han asociado a EC en poblacin franc esa. Nuestro objetivo es estudiar si polimorfismos en ICAM1 estn asociados a EC en la poblacin espaola. Para ello se llev a cabo un estudio caso-control, con 608 pacientes y 535 individuos sanos, todos espaoles blancos. La mayora de los enfermos fueron peditricos (debut anterior a 15 aos). Estudiamos 4 polimorfismos de un nico nucletido (SNPs) de ICAM1: rs281432 (intrnico), rs1799969 (G241R), rs1801714 (P352L) y rs5030400 (R478W), con sondas Taqman. Los haplotipos se estimaron con el algoritmo EM (Expectation-Maximization). La comparacin de frecuencias genotpicas, allicas o haplotpicas caso-control no mostr diferencias estadsticamente significativas. La subdivisin de pacientes por edad de debut tampoco mostr diferencias significativas entre ambos grupos, ni la estratificacin por el principal factor gentico de susceptibilidad a EC conocido, HLA-DQ2. Esto nos permite concluir

2. COMPARACION DEL LOS POLIMORFISMOS DE GENES DE INTERLEUCINAS EL PACIENTES CON ARTRITIS REUMATOIDE Y UN GRUPO CONTROL. Leon Moya V1, Leon Arroyo A2, Montilla C3, Gomez S3. 1Serv Analisis Clinicos. Hospital Universitario de Salamanca. 2Laboratorio Pediatria e Inmunologia. Universidad de Valladolid. 3Serv. de Reumatologia, Hospital Universitario de Salamanca. Hemos estudiado polimorfismos de IL en 22 pacientes diagnosticados de artritis reumatoide y 28 controles. Los polimorfismos fueron analizados empleando el kit Citokine genotiping Kit (Pel-freez). No hemos encontrado diferencias significativas enter los grupos de pacientes de artritis reumatoide y el control.

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que, en contra de lo descrito en poblacin francesa, en la que el polimorfismo G241R pareca conferir susceptibilidad a EC, con mayor efecto en poblacin adulta, nosotros no observamos que ninguno de los 4 polimorfismos estudiados aumente el riesgo a padecer EC, a pesar de tener ms del 99% de potencia para detectar el efecto de G241R descrito en pacientes peditricos. Nuestra escasa muestra de pacientes con debut de la enfermedad en edad adulta (posterior a 18 aos) no permite descartar que ICAM1 afecte slo a este subgrupo de enfermos.

4. EPTOPO COMPARTIDO Y ANTICUERPOS ANTI PPTIDO CITRULINADO: RELACIN CON EDAD DE COMIENZO Y TIEMPO DE EVOLUCIN DE LA ARTRITIS REUMATOIDE. Varad Lpez J1, Loza-Santamara E2, Perdigones N1, FernndezArquero M1, Figueredo MA1, Rodrguez L2, Gmez de la Concha E1, Fernndez-Gutirrez B2, Urcelay E1, Martinez-Doncel A1. 1Inmunologa Clnica Hospital Clnico San Carlos. 2Reumatologa Hospital Clnico San Carlos. Introduccin. La artritis reumatoide es una patologa compleja con un fuerte componente autoinmune; el principal factor gentico de riesgo conocido hasta ahora son ciertos alelos del complejo principal de histocompatibilidad (HLA). Los alelos de susceptibilidad en DRB1 comparten una secuencia comn; denominada eptopo compartido (SE). Los anticuerpos anti-pptido cclico citrulinado (anti-CCP) son uno de los mejores marcadores predictores del desarrollo de AR. En este estudio queremos analizar la relacin entre SE, anti-CCP y edad de inic io de los sntomas de AR, teniendo en cuenta el posible efecto de la duracin de la enfermedad. Materiales y mtodos. Analizamos, en un estudio transversal, 411 pacientes de AR que fueron genotipados para HLA-DRB1 con el kit Lifecodes HLA-SSO; los anticuer pos anti-CCP se determinaron por ELISA con el ensayo Immunoscan Euro-Diagnostica. El anlisis estadstico se realiz con el paquete estadstico STATA v9.0. Resultados. Como esperbamos, SE y anticuerpos anti-CCP estaban fuertemente correlacionados (p<10-5). Observamos una modesta correlacin entre la edad de inicio de los sntomas y ambos marcadores (SE: p=0.12; anti-CCP: p=0.07). Observamos que existe una correlacin entre la edad de inicio de los sntomas y el tiempo de evolucin de la enfermedad (p<10-7, r=-0.43). Al corregir este efecto mediante un anlisis multivariado, se pone de manifiesto que los anticuerpos anti-CCP estn correlacionados con el tiempo de evolucin de la enfermedad (p=0.009) pero no con la edad de inicio de los sntomas (p=0.52). Conclusin. Nuestros datos sugieren que los anticuerpos anti-CCP no slo son detectables antes de que aparezcan los primeros sntomas de la enfermedad, como se describe en la literatura, sino que tambin pueden aparecer durante el desarrollo de la misma como resultado del proceso inflamatorio en los pacientes genticamente proclives.

cin linfocitaria efectora, las clulas Th17. Esta poblacin y sus mediadores (IL-17, IL-22, as como tambin la citocina activadora de esta respuesta, IL-23) se han identificado como determinantes en la patologa de diversas enfermedades inflamatorias as como en modelos experimentales de colitis. Objetivo. Caracterizar la contribucin de la respuesta Th17 frente a la Th1 en la enfermedad de Crohn. Mtodos. Aislamiento de linfocitos CD4+ de sangre de controles sanos y pacientes con enfermedad de Crohn activa o en remisin. Cultivo de estas clulas y determinacin de la proporcin de clulas productoras de citocinas por marcaje intracelular y citometra de flujo. En algunos experimentos, activacin de las clulas con a-CD3/aCD28 y adicin de IL-12, IL-23 o medio de cultivo. Cuantificacin por ELISA de la produccin total de IFN-, IL-17 e IL-22 en el sobrenadante de los cultivos. Resultados. Los pacientes con enfermedad de Crohn activa presentan un mayor porcentaje de clulas IL-17+ (p-valor<0.05) as como un aumento en la secrecin de IL-17 con respecto a los enfermos en remisin y a los controles. El porcentaje de clulas IL-22+, y tambin la cantidad de esta citocina, en los enfermos activos es mayor que en los inactivos. Por el contrario, tanto el porcentaje como la cantidad de IFN- no se correlacionan con la enfermedad ni con su actividad. Adems, los enfermos que presentan su primer o segundo brote de actividad no se comportan como los activos con antecedentes sino que sus niveles de IL-17 son ms bajos y comparables a los de los enfermos inactivos y los controles. En respuesta a activacin los linfocitos CD4+ producen ms IFN- y ms IL-17. La adicin al cultivo de IL-23 no afecta a la secreci n de IFN- pero en cambio pone de manifiesto una mayor sensibilidad de los enfermos de Crohn a esta citocina ya que provoca un incremento en la produccin de IL-17 (p-valor<0.01) no observado en los controles. Conclusiones. Nuestros experimentos muestran que la respuesta linfocitaria tipo Th17, y no la Th1, se correlaciona con la actividad de la enfermedad de Crohn. Adems esta subpoblacin Th17 aparece aumentada en los enfermos crnicos pero no en los primeros brotes de la enfermedad sugiriendo que este tipo de respuesta puede jugar un papel importante en los estadios crnicos pero no en el debut de la enfermedad.

6. EL GRADO DE INFLAMACIN MODIFICA EL FENOTIPO DE LAS CLULAS T REGULADORAS EN PACIENTES CON ARTRITIS REUMATOIDE. Marn Alberca MG1, Prez Garca V1, Peris Pertusa A1, Navarro Blasco FJ2, Sempere Ortells JM1. 1Universidad de Alicante, Departamento de Biotecnologa, Divisin de Inmunologa. 2Hospital General Universitario de Elche, Unidad de Reumatologa. Introduccin. Las clulas T reguladoras (Treg) participan en la tolerancia perifrica evitando la activacin y correcto funcionamiento de clones autorreactivos y, por tanto, la aparicin de enfermedades autoinmunes como la Artritis Reumatoide (AR). Objetivos: Caracterizar de manera ms completa el fenotipo de membrana de Treg de sangre perifric a de pacientes con AR, para buscar posibles cambios dinmicos en estos parmetros segn el grado de actividad de la enfermedad (DAS28) y los periodos de actividad/remisin. Metodologa: Se analizaron muestras de sangre perifrica de 58 pacientes con AR y 38 controles sanos. 22 pacientes estaban en remisin (DAS28?3.2), 21 presentaban una actividad moderada (>3.2 DAS28?5.1) y 15 se encontraban muy activos (DAS28>5.1). Se analiz la expresin de los mar-

5. RESPUESTA Th17 FRENTE A Th1 EN LA ENFERMEDAD DE CROHN. Veny M1, Closa D1, Esteller M1, Pique JM2, Pans J2, Salas A1. 1Departament d'Isqumia i Inflamaci, IIBB-CSIC-CIBEREHD, Barcelona. 2Departament de Gastroenterologia, Hospital Clnic, IDIBAPS-CIBEREHD, Barcelona. Introduccin. La enfermedad de Crohn es una enfermedad inflamatoria crnica del tracto digestivo caracterizada por un exceso de respuesta linfocitaria Th1. Recientemente se ha descrito una nueva pobla-

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cadores de membrana CD28, CD45RA, CD45RO, CD45RBlow, CD38, CD62L, CD134, CD152 y CD154 en linfoci tos CD4, CD8 y CD19, con o sin baja, intermedia o alta expresin de CD25. El anlisis se realiz por citometra de flujo. Resultados: Descenso del porcentaje de CD4+CD25+ en pacientes (p<0.0005), especialmente CD4+CD25high y CD4+CD25int. Pacientes ms activos presentan menor porcentaje de clulas CD4+CD25high y CD4+CD25int (p=0.007). Tambin descienden CD4+CD38+ (p<0.0001), CD4+CD62L+ (p<0.005), CD8+CD25highCD45RA+ y CD8+CD25intCD45RA+ (p<0.01) en pacientes. Aumenta la expresin de diferentes antgenos como CD134 (p<0.05), CD45RBlow (p<0.0001) o CD152 (p<0.000001) en clulas CD4+CD25+, y la proporcin de otras Treg como las CD4+CD152+ (p<0.05) o las CD8+CD28- en pacientes. Demostramos que la mayora de estos cambios guardan relacin con el grado de inflamacin, alcanzando sus menores o mayores niveles en pacientes moderados/activos respecto a controles y, en algunos casos, frente a inactivos. Conclusiones: Un balance apropiado de estas poblaciones de Treg, podra determinar el grado de inflamacin y, por tanto, podra r elacionarse con los periodos de actividad/remisin.

8. EL ESTADO HETEROCIGOTO PARA LOS POLIMORFISMOS DEL GEN VDR ES PROTECTOR DE CELIAQUA. Manzanares Martn B, Casado A, Gonzlez Fernndez R, Jimenez Gmez J, Snchez Ruiz F, Rodriguez Reynoso F, Quesada Gmez M, Pea Martnez J. Hospital Reina Sofia. Introduccin. La enfermedad celiaca (MIM 212750) es un desorden crnico autoimmune causado por intolerancia al gluten en sujetos genticamente susceptibles. Los genes HLA slo confieren un 40% del riesgo gentico de padecer esta enfermedad. Los enfermos celiacos (EC) presentan alteraciones en el metabolismo de la vitamina D, que adems de su efecto en el metabolismo del calcio, tiene un efecto inmunomodulador. Recientemente se han demostrado diferentes asociac iones entre los polimorfismos del gen del receptor de la vitamina D (VDR) y enfermedades autoinmunes. Por lo tanto, en el presente estudio nos planteamos determinar si los polimorfismos CDX-2, BSM-I, FOK-I deVDR son factores de r iesgo de EC. Se estudiaron 50 familias con al menos un hijo con EC y algn hermano HLA idntico al paciente. Se tiparon por PCR-SSO de Dynal (tipaje genrico) y PCRSSO Innogenetics (AR) los loci DRB1, DRB3, DRB4, DRB5, DQB1 y DQA1 de los padres, el paciente y sus hermanos para confirmar la identidad HLA. El paciente y su(s) hermano(s) HLA idntico(s) fueron genotipados para el polimorfismo de VDR (CDX 2, Fok I, Bsm I) usando una amplificac in por PCR seguido por digestin por endonucleasas de restriccin y electroforesi s en geles de agarosa. Resultados. La comparacin de los genotipos VDR de los pacientes con sus hermanos HLA idnticos demostr que la proporcin de heterocigotos en CDX-2, Bsm-I y Fok-I para los tres polimorfismos estudiados era significativamente superior en el grupo de los hermanos sanos. Ningn EC result ser heterocigoto para los tres polimorfismos a la vez. En el grupo control tambin encontramos una mayor proporcin estadsticamente significativa de sujetos heterocigotos respecto a los pacientes celiacos. Cuando se compararon los haplotipos resultantes de las combinaciones de dos polimorfismos (CDX + Bsm I, CDX-2 + Fok I, Bsm I + Fok I) el porcentaje de dobles heterocigotos fue mayor en los hermanos sanos (28%, 28%, 28% respectivamente) con relacin a EC (4.35%, 8.7%, 17.39%). Los controles se comportaron como los hermanos sanos.

7. DETECCIN DE FOXP3 EN CLULAS T REGULADORAS DE PACIENTES CON ARTRITIS REUMATOIDE A DIFERENTES GRADOS DE INFLAMACIN. Prez Garca V1, Marn Alberca G1, Peris Pertusa A1, Navarro Blasco F2, Sempere Ortells JM1. 1Universidad de Alicante. 2Hospital General Universitario de Elche. Introduccin. La Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad crnica inflamatoria de carcter autoinmune, en la cual los pacientes sufren una dinmica inflamatoria caracterizada por fases de remisin/activacin. Las clulas T reguladoras, fundamentales para el mantenimiento de la autotolerancia y la prevencin de enfermedades autoinmunes, expresan de manera constitutiva el factor de transcripcin FoxP3. Objetivos. Analizar la expresin de FoxP3 por citometra de flujo en diferentes poblaciones celulares de sangre perifrica en pacientes AR (vs. controles sanos), y determinar si existen cambios en su deteccin asociados al grado de inflamacin segn el DAS28 (Disease Activity Score). Mtodos. Clulas mononucleares de sangre perifrica de 23 pacientes AR (5 en remisin, 11 con actividad inflamatoria moderada, 7 muy activos) y 10 controles sanos fueron analizadas. Las clulas fueron marcadas con anti-CD4-FITC, anti-CD8-FITC o anti-CD19-FITC en combinacin con anti-CD25-Pe-Cy5. Posteriormente, las clulas se procesaron segn el Kit FoxP3-PE Staining Set (clone PCH101, eBioscience). FoxP3 fue analizado por citometra de flujo teniendo en cuenta diferentes intensidades para el CD25. Resultados. El porcentaje de clulas FoxP3+ aparece aumentado en las clulas CD4+ (p<0.01) y subpoblaciones CD4+CD25low/int/high (p<0.05) de los pacientes, respecto a los controles. Existe una tendencia al aumento de clulas CD8+CD25+FoxP3+ en los pacientes respecto a los controles sanos. El anlisis segn el DAS 28, muestra un aumento de clulas CD4+FOXP3+ y subpoblaciones CD4+CD25low/int/high FoxP3+ en paralelo al grado de inflamacin, siendo sobretodo en los pacientes activos vs. controles (p<0.01) o vs. en remisin (p<0.05) donde las diferencias son ms significativas. Conclusiones. El aumento de clulas FoxP3+ en la sangre perifrica de pacientes, especialmente marcado durante los brotes, podra traducirse en un intento del sistema inmunolgico por controlar la enfermedad.

9. LA PRESENCIA DE DRB1*0405 EN PACIENTES CON ARTRITIS REUMATOIDE SE ASOCIA A REFRACTARIEDAD A LOS TRATAMIENTOS CONVENCIONALES (MTX / SLZ / HCLQ). Manzanares Martn B, Martnez Snchez F, Gonzlez Fernndez R, Carrasco JA, Collantes Estevez E, Pea Martnez J. Hospital Reina Sofia. La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad inflamatoria articular crnica mediada por alteraciones inmunolgicas que afecta al 0.5% de la poblacin adulta espaola. La presencia de una secuencia comn de aminocidos en las posiciones 70-74 de la tercera regin hipervariable de la cadena beta (DRBI-SE), se relacionan a un peor curso clnico sobre todo los alelos que contienen la secuencia de aminocidos (motif) QRRAA. Tambin es conocida la relacin existente entre los alelos DRB1-SE(+) , los ac antiPCC y el FR a las formas de mayor severidad clnica. Por tanto nuestro objetivo ha sido determinar la presencia de alelos DRB1-SE, Ac antiPCC y FR en pacientes con AR iniciales refractarios al tratamiento secuencial con los DMARDs clsicos hidroxichloroquine (HCQ), salazopiry ne (SLZ) y methotrexate(MTX). Pacientes y mtodos. Se incluyeron 153 pacientes con AR inicial (menor de 1 ao), que cumplan criterios diagnsticos del ACR y de

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ellos 42 cumplan criterios de refractariedad a los DMARDs clsicos. Todos disponan del tipaje de alta resolucin de los alelos DRB1, niveles de Ac antiPCC y FR, variables clnicas, tiempo de evolucin hasta suspensin de MTX, nmero de DMARDs administrados; variables del DAS 28, HAQ y la progresin radiogrfica segn mtodo Sharp modificado por Van der Heijde. Resultados. En los pacientes refractarios enc ontramos mayor frecuencia de DRB1*0405 (p=0.012; OR 6.31), de Ac antiPCC (p=0.03; OR 3.79), predominancia del gnero femenino (p=0.006), mayor numero de DMARDs (p<0.000) y una prevalencia ms alta del FR (p=0.002). El alelo DRB1*0101 fue el ms frecuente en ambos grupos: refractarios (17.6%) vs no refractarios (15.2%).

10. INFLUENCIA DE LOS GENOTIPOS DE IL-10 Y TNF-ALPHA EN LA ARTRITIS REUMATOIDE. de Paz B1, Alperi M2, Lpez P1, Prado C1, Ballina J2, Gutirrez C1, Surez A1. 1rea de Inmunologa. Departamento de Biologa Funcional. Universidad de Oviedo. 2Servicio de Reumatologa. Hospital Universitario Central de Asturias. Los genotipos funcionales de la IL-10 y el TNF se han asociado con la susceptibilidad y la evolucin clnic a de varias enfermedades autoinmunes, por lo que nos propusimos analizar su posible influencia en el desarrollo de la AR. Para ello analizamos los alelos presentes en -1082 IL-10 y -308 TNF de 343 controles sanos y 165 pacientes de AR en los que se recogieron los parmetros clnic os al diagnstico, el tratamiento en el momento de la toma de muestra y, en algunos pacientes, la respuesta observada a los 6 meses. La distribucin de genotipos de la IL10 mostr diferencias significativas entre pacientes y controles, estando disminuidos los genotipos bajos productores de esta citocina (1082AA) en pacientes (26% vs 39%), mientras que los portadores del alelo -1082G* presentaban un mayor ri esgo de padecer la enfermedad (OR=1,8, IC: 1,2-2,7, p=0.004). Adems, el anlisis de los parmetros clnicos indic que la presencia de este alelo incrementaba la VSG, la PCR, el DAS y la edad al diagnstico, pero no se asociaba con presencia de autoanticuerpos (antiCCP, FR). No se encontr una asociacin significativa con los genotipos del TNF , aunque el genotipo combinado alto IL-10/bajo TNF era el que tena un mayor riesgo de padecer la enfermedad. Por otra parte, en otras patologas se ha sugerido que la respuesta a los esteroides puede estar influida por el genotipo de la IL-10. En nuestros pacientes de AR la prednisona se suministra habitualmente en combinacin con otros tratamientos, frecuentemente con metrotrexato, por lo que analizamos la respuesta al tratamiento combinado con estos 2 agentes midiendo la mejora en el DAS a los 6 meses. Resultados preliminares (n=37) sugieren una mejor respuesta al tratamiento en los pacientes altos productores de IL-10. En resumen, estos resultados sugieren que los portadores del genotipo alto productor de IL-10 presentan una mayor susceptibilidad a padecer AR pero tienen mayor pr obabilidad de respuesta al tratamiento con prednisona y metrotrexato.

molculas como DNA, carbohidratos, protenas y lpidos, y contribuir as en la patogenia de diversas enfermedades. En este sentido, la ingesta de dietas ricas en antioxidantes puede tener un efecto modulador en determinados estados patolgicos. El objetivo del presente estudio se centra en determinar el estado oxidante/antioxidante en un modelo de artritis experimental (artritis adyuvante, AA) y establecer la influencia sobre el desarrollo del proceso inflamatorio de una dieta rica en antioxidantes como es el cacao, producto con un elevado contenido en flavonoides. El estudio se ha realizado en ratas Wistar, alimentadas con un 5 o un 10% de cacao, incorporado en el pienso. A las 4 semanas de la induccin, se han obtenido macrfagos peritoneales y muestras esplnicas. Se ha cuantificado la producc in de ROS a partir de macrfagos mediante tcnicas fluorimtricas y se han determinado las actividades catalasa y superxido dismutasa (SOD) en tejido esplnico mediante kits especfic os (Calbiochem). A las 4 semanas de la induccin, la inflamacin articular se encuentra ligeramente atenuada en los animales que han recibido las dietas ricas en cacao respecto a los animales artrticos de referencia. La produccin de ROS fue superior en macrfagos procedentes de AA que en animales sanos (p<0,05). Este incremento fue inferior en los animales que recibieron cacao. Por otro lado, la AA causa, en bazo, disminucin de la actividad catalasa (p<0,05) y aumento de la actividad SOD (p<0,05), alteraciones que no son tan marcadas tras una dieta rica en cacao. En conclusin, una dieta rica en flavonoides atena el estrs oxidativo del proceso artrtico.

12. INFLUENCIA DE UNA DIETA RICA EN FLAVONOIDES SOBRE LAS POBLACIONES LINFOCTICAS DURANTE UN PROCESO ARTRITICO EXPERIMENTAL. Ramos-Romero S, Prez-Berezo T, Surez-Germ C, Castell M, Franch A, Prez-Cano FJ. Facultad de Farmacia, Universidad de Barcelona. Los flavonoides son compuestos de origen vegetal, con una reconocida capacidad antioxidante. Esta actividad parece ser la causante de sus efectos beneficiosos a nivel cardiovascular y tambin en procesos cancerosos. Sin embargo, hasta ahora, poco se sabe sobre el efecto de los flavonoides sobre el sistema inmunitario. El objetivo de este estudio se ha centrado en determinar el efecto de una dieta rica en cacao, producto con un elevado contenido en flavonoides, sobre diferentes poblaciones linfocticas y sobre la respuesta humoral durante la artritis adyuvante (AA). Se ha dispuesto de ratas Wistar adultas que recibieron dietas ricas en cacao. La artritis se ha inducido mediante inyeccin i.d. en la base de la cola de Mycobacterium butyricum (Mb) inactivado. A los 30 das de la induccin, se ha procedido al estudio de las diferentes poblaciones linfocticas presentes en ganglios linfticos inguinales y sangre por tcnicas de citometra de flujo. Asimismo se han cuantificado los anticuerpos anti-Mb presentes en suero. Los ganglios linfticos inguinales de los animales con AA presentan una menor proporcin de linfocitos B y un mayor porcentaje de clulas NKT as como de linfocitos T activados. Los animales sometidos a las dietas ricas en flavonoides no modifican estas alteraciones si bien disminuyen la proporcin de linfocitos T CD4+ (Th) y aumentan la de linfocitos T CD8+ (Tc), tanto los correspondientes a clulas TCR + como a clulas TCR +. A nivel perifrico, el proceso artrtico provoca un aumento en la relacin Th/Tc, que se restablece con las dietas ricas en flavonoides.

11. EFECTO DE UNA DIETA RICA EN ANTIOXIDANTES SOBRE EL ESTRS OXIDATIVO DE LA ARTRITIS ADJUVANTE. Ramos-Romero S, Ramiro-Puig E, Ramrez-Santana C, PrezCano FJ, Castellote C, Franch A, Castell M. Facultad de Farmacia, Universidad de Barcelona. Durante un proceso inflamatorio se eleva la produccin de especies reactivas de oxgeno (ROS), molculas capaces de oxidar macro-

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Por otra parte, la concentraci n de anticuerpos anti-Mb disminuye un 60-75% en los animales artrticos que consumen las dietas ricas en cacao. En resumen, las dietas ricas en flavonoides no revierten las alteraciones en las proporciones de linfoci tos presentes en los animales con AA, si bien causan un aumento de los linfoci tos Tc y producen una disminucin de los anticuerpos especficos.

14. DECREASE IN THE PERCENTAGE OF REGULATORY T CELLS FROM RHEUMATOID ARTHRITIS PATIENTS INVERSELY CORRELATES WITH DISEASE ACTIVITY. Chara L1, Daz D1, Chevarra J1, Snchez A2, Monserrat J1, Mur S1, Prieto A1, Prez A2, Turrin A2, lvarez-Mon M1,2. 1Unidad I+D asociada UAH/CNBCSIC, IMMPA, Departamento de Medicina, Universidad de Alcal, Alcal de Henares, Madrid. 2Servicio de Enfermedades del Sistema Inmune y Reumatologa, Hospital Universitario Prncipe de Asturias, Alcal de Henares, Madrid. Background. The balance between T regulatory cells and proinflammatory effector cells has shown to be of great relevance for the development and persistence of autoimmune diseases, becoming this regulatory cell population important to the development of a therapeutic target of interest in autoimmune arthritic conditions suc h as rheumatoid arthritis. Objectives. To determine the distribution of T regulatory cells of peripheral blood of rheumatoid arthritis patients compared with healthy controls, and to relate that distribution with the disease activity. Methods. Peripheral blood mononuclear cells from 15 rheumatoid arthritis patients and 12 healthy controls were purified and char acterized in a FACSCalibur analyzer using fluorochrome-labeled monoclonal antibodies for CD3, CD4, CD25 membrane antigens combined with intracellular staining of FOXP3 molecule. Likewise, the DAS28 score was calculated in each patient in order to determine the disease activity. Comparisons between patients and healthy controls were carried out using the non parametric Mann-Whitney test and considered significant when p<0.05. Results: A significant decrease in the CD3+CD4+FOXP3+ cell population was found in peripheral blood lymphocytes from rheumatoid arthritis patients with respect to healthy controls, more over a significant decrease in the CD3+CD4+FOXP3+ cell population was found in peripheral blood lymphocytes of patients with active disease (DAS28 > 3.2), observing a negative correlation between the percentage of CD3+CD4+FOXP3+ and DAS28 score value (r= -0.78; p< 0.05). Conclusions. There is an important decrease of T regulatory cells in rheumatoid arthritis patients that correlates inversely with the disease activity, being this way an important therapeutic target and biological marker of this disease.

13. EFFECTS OF DISEASE MODIFYING DRUGS IN THE ABNOR MAL DISTRIBUTION OF MYELOID AND PLASMACYTOID DENDRITIC CELLS IN RHEUMATOID ARTHRITIS PATIENTS. Chara L1, Daz D1, Chevarra J1, Snchez A2, Monserrat J1, Mur S1, Prieto A1, Albarrn F2, Cuende E2, lvarez-Mon M1,2. 1Unidad I+D asociada UAH/CNB-CSIC, IMMPA, Departamento de Medicina, Universidad de Alcal, Alcal de Henares, Madrid. 2Servicio de Enfermedades del Sistema Inmune y Reumatologa, Hospital Universitario Prncipe de Asturias, Alcal de Henares, Madrid. Background. Several lines of evidence point to a polarized Dendritic Cells (DC) immune response in Rheumatoid Arthritis (RA). At least two peripheral blood DC subsets have been described: myeloid DCs (mDC-I: Lin-HLADR+CD123-CD11c+high and mDC-II: LinHLADR+CD123-CD11c+low) and Plasmacytoid DCs (pDC: Lin-HLADR+CD123+CD11c-). In this study we conducted a quantitative analysis of the peripheral blood DC subsets in treated and untreated RA patients compared with healthy controls. Objectives. To compare the distribution of the different subsets of DC in RA patients treated with disease modifying antirheumatic drugs (DMARDs) or Anti-TNF alfa with respect to untreated RA patients and healthy controls and to relate this distribution with the disease activity. Methods. Peripheral blood mononuclear cells from 46 rheumatoid arthritis patients and 15 healthy controls were purified and characterized in a FACSCalibur cytometer using fluorochrome-labeled monoclonal antibodies to label CD3, CD11c, CD14, CD19, CD56, HLADR, and CD123 antigens. DAS28 score was calculated in each patient in order to determine thedisease activity (non active disease < 3.2, active disease ? 3.2). Comparisons between patients and healthy controls were carried out using the non parametric Mann-Whitney test and considered significant when p<0.05. Results. We found a significant increase in mDC subset and significant decrease in pDC subset in RA patients with respect to healthy controls. In RA patients with non active disease, we did not find significant differences in plasmacytoid DC subset with regard to healthy controls. However, we found significant differences in mDC of RA patients treated with DMARDS. In RA patients with active disease, we found a significant decrease in pDC from untreated RA patients with regard to healthy controls. In the other hand, we found a marked decrease of pDC in RA patient treated with DMARDS and Anti-TNFalfa with respect to healthy controls. We also found a significant increase in the percentage of mDC-II subset in treated and untreated RA patients compared with healthy controls. Conclusions: RA is characterized by an increase in peripheral blood of mDC and a decrease of pDC subsets. The response to the treatment with DMARDS and anti-TNFalfa increases the percentage in peripheral blood of pDC and mDC-II subsets. This may explain that the treatment effect is probably due to their traffic to the inflamed synovial membrane. The fact that RA patients with active disease present higher increases of these subsets agree with this idea.

15. ABNORMAL DISTRIBUTION OF MONOCYTES AND DENDRITIC CELLS IN RHEUMATOID ARTHRITIS PATIENTS. Chara L1, Chevarra J1, Daz D1, Snchez A2, Monserrat J1, Mur S1, Prieto A1, Albarrn F2, Len MJ2, lvarez-Mon M1,2. 1Unidad I+D asociada UAH/CNB-CSIC, IMMPA, Departamento de Medicina, Universidad de Alcal, Alcal de Henares, Madrid. 2Servicio de Enfermedades del Sistema Inmune y Reumatologa, Hospital Universitario Prncipe de Asturias, Alcal de Henares, Madrid. Background. Since the rec ent evolution of the immunopathologic thought proposes that reumatoid arthritis is an i nnate autoimmune pathology, the knowledge of the distribution of the dif ferent monocytic and dentritic cells (DC) subsets in these patients is important to understand the immunopathogenic process of this disease. Objectives. To determine the distribution of the different monocytic and dendritic cells (DC) subsets from rheumatoid arthritis patients compared with healthy controls, and to relate that subset distribution with the disease activity.

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Methods. Peripheral blood mononuclear cells from 15 rheumatoid arthritis patients and 12 healthy controls were purified and char acterized in a FACSCalibur c ytometer using fluorochrome-labeled monoclonal antibodies for CD3, CD4, CD8, CD11c, CD14, CD16, CD19, CD56, HLA-DR, and CD123 antigens. The DAS28 score was calculated in each patient in order to determine the disease activity. Comparisons between patients and healthy controls were carried out using the non parametric Mann-Whitney test and considered significant when p<0.05. Results. A significant decrease in the percentage of CD14+highCD16monocyte subset was found in peripheral blood from rheumatoid arthritis patients with respect to healthy controls, no significant differences were found in the CD14+lowCD16+ subset. On the other hand, a significant decrease in the percentage of plasmacyotid DCs (LinHLADR+CD123+CD11c-) subset was found in peripheral blood monocytes from rheumatoid arthritis patients with respect to healthy controls, as well as a significant inc rease in the myeloid DC subsets (Lin-HLA-DR+CD123-CD11c+high and Lin-HLADR+CD123-CD11c+ low). There were no signific ant differences in the distribution of these subsets between the patient group with active disease (DAS28 > 3.2) and the group with controlled disease (DAS28<3.2). Conclusions. There is an altered distribution of the different monocytic and dendritic c ells subsets in peripheral blood of rheumatoid arthritis patients characterized by a decrease in the c lassical monocyte subset and a decrease in the plasmacytoid dendritic cell subset, probably due to their traffic to the inflamed synovial membrane. This phenomenon could be independent of the disease activity.

tosis of lymphocytes from refractory RA patients was always lower than that found in T lymphocytes from active RA patients. Conclusions. Patients with active RA show an impressive decrease in spontaneous and mitogen-induced apoptosis within nave/effector/memory CD4+ and CD8+ T-cell subsets. This decrease in T lymphocyte apoptosis was specially marked in refractory RA patients.

17. LA PRESENCIA DE AUTOANTICUERPOS CONTRA LA PROTENA MICA COMO NUEVO MARCADOR DE ENFERMEDADES AUTOINMUNES ASOCIADAS EN PACIENTES CELIACOS. Lpez Vzquez A1, Alonso rias R1, Surez lvarez B1, Vidal Castieira JR1, Rodrigo L2, Fuentes D2, Lpez Larrea C1. 1Unidad de Histocompatibilidad. Hospital Universitario Central de Asturias. 2Servicio de Digestivo. Hospital Universitario Central de Asturias. Estudios recientes han demostrado que la protena MICA se expresa en exceso en enterocitos de pacientes con enfermedad celiaca (EC), en respuesta a un efecto txico directo del gluten. Esta activacin produce dao tisular y podra ser el fenmeno inicial que conduce a la atrofia vellositaria. Debido al dao experimentado por la mucosa intestinal y a la expresin excesiva de MICA, es posible que estos pacientes desarrollen anticuerpos anti-MICA, tal y como sucede en algunos tumores y en el trasplante de rganos slidos. Decidamos investigar la presencia de anticuerpos anti-MICA en sueros obtenidos de 323 pacientes con EC no tratada y en 100 controles sanos. Empleamos una tcnica de citometra de flujo en fase slida (Luminex) utilizando los kits LABScreen Mixed y MICA Single Antigen de OneLambda Inc. Observamos que el 42% de los celacos tenan anticuerpos anti-MICA mientras que estos anticuerpos se detectaron en el 3% de los controles sanos. En una 2 muestra despus de un ao a dieta sin gluten encontramos que estos se mantenan en menos del 10% de los pacientes. 57 pacientes tenan adems una enfermedad autoinmune adicional, especialmente Diabetes Mellitus Tipo I, fenmeno relacionado con el tiempo excesivo de exposicin al gluten por un retraso en el diagnostico de la EC. En este grupo de pacientes encontramos que el 73.6% eran positivos para anticuerpos anti-MICA mientras que estos slo estaban presentes en el 34% de pacientes afectados solamente por EC. La aparicin de estos anticuerpos era adems independiente de la edad a la que se haba realizado el diagnstico de EC. Estos resultados sugieren que el desarrollo de enfermedades autoinmunes en pacientes celiacos est asociado a la presencia anticuerpos anti-MICA. En c onclusin, el diagnstico temprano y el tratamiento de la enfermedad celaca son esenciales para prevenir el desarrollo de autoinmunidad, tanto para evitar la exposicin al gluten como el posible efecto patolgico de los anticuerpos anti-MICA.

16. APOPTOSIS ANALYSIS OF T NAVE/EFFECTOR/MEMORY SUBSETS FROM RHEUMATOID ARTHRITIS PATIENTS BY POLYCHROMATIC FLOW CYTOMETRY. Chara L1, Chevarra J1, Daz D1, Snchez A2, Monserrat J1, Mur S1, Prieto A1, Cuende E2, Prez A2, lvarez-Mon M1,2. 1Unidad I+D asociada UAH/CNBCSIC, IMMPA, Departamento de Medicina, Universidad de Alcal, Alcal de Henares, Madrid. 2Servicio de Enfermedades del Sistema Inmune y Reumatologa, Hospital Universitario Prncipe de Asturias, Alcal de Henares, Madrid. Background. Dysregulation of T lymphocyte apoptosis has been involved in the pathogenesis of rheumatoid arthritis (RA). We have analyzed the apoptosis in specifically defined nave/effector/memory T lymphocyte circulating subpopulations of RA patients. OBJECTIVE: To quantify spontaneous and induced apoptosis in lymphocytes of RA patients with regard to a control population of sex and age matched healthy individuals. Methods. Peripheral blood mononuclear cells from 7 RA patients diagnosed according to the Am C Rh criteria (4 with active untreated RA and 3 with refractory di sease) and 5 healthy controls were purified and characterized using monoclonal antibodies and annexin V by eight color flow cytometry in a FACSAr ia sorter. The apoptotic index (AI) of lymphocyte subsets were determined after 24 hour culture under two conditions: spontaneous apoptosis and after phytohemagglutinin induction. Results. A marked decrease in spontaneous ex vivo apoptosis was found in peripheral blood T lymphocytes from RA patients. This decreased apoptosis was found in effector (CD45RA+/-CD27-), nave (CD45RA+CD27+) and memory (CD45RA-CD27+) subsets of both CD4+ and CD8+ T lymphocyte subpopulations. Similar impressive decreases in AI were found in mitogen-induced T cell apoptosis. Apop-

18. RELACIN ENTRE ANTICUERPOS ANTI-CCP Y POLIMORFISMOS DRB1 Y CD154 EN PACIENTES ESPAOLES CON ARTRITIS REUMATOIDE. Oliver A1, Calleja S1, Gamoneda E1, Matas JA1, Romo E1, Mateo I2, Joven B2, Prez-Aciego P3, PazArtal E1, Castro MJ1. 1Inmunologa. Hospital 12 de Octubre. Madrid. 2Reumatologa. Hospital 12 de Octubre. Madrid. 3Fundacin LAIR. Madrid. Introducin. La Artritis Reumatoide (AR) es una enfermedad compleja, polignica y de etiologa desconocida, que afecta al 0.8-1% de la poblacin en proporc in de 3 mujeres: 1 hombre.

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Sobre la AR actan tanto factores genticos como ambientales. La asociacin HLA-DRB1*04 y AR se ha demostrado hace ms de 25 aos. Los alelos DRB1 poseen una secuencia aminoacdica muy conservada, posiciones 72-74, el eptopo compartido (SE). Las distintas variantes del SE (S1, S2, S3P, S3D) se relacionan con esta asociacin y favoreceran en distinto grado, predisposicin o proteccin, la unin de pptidos citrulinados (CCP) y la produccin de anticuerpos antiCCP. Otro gen que se postula como asociado a AR es el ligando CD40 (CD40L). CD40/CD40L es importante en la respuesta inmune humoral T dependiente. Participa en la produccin y regulacin de Ig, activacin de seales inflamatorias, produccin de citocinas, quimoquinas y molculas de adhesin. CD40L, o CD154, posee un microsatlite (CA)n que podra modular la unin de factores reguladores y variar la produccin de protena. Objetivos. Comprobar si hay diferencias de asociacin DRB1 (SE)/Ac anti-CCP y si hay asociacin entre AR/(CA)n/anticuerpos anti-CCP. Mtodos. Se han estudiado los alelos DRB1 y los niveles de anticuerpos anti-CCP en 107 paci entes de AR, y en 92 se han determinado los alelos (CA)n de CD154. Resultados. Mayor frecuencia de DRB1*01 (p=0.004) y DRB1*04 (p<0.0001) en pacientes que controles. DRB1*0101 (S3P), *0401 (S2), *0405 (S3P) asociados a pacientes de AR, anti-CCP+. DRB1*0402 (S1) asociado a AR anti-CCP-. Asociacin de distintos alelos SE en pacientes AR, CCP+ y CCP-. Tambin se establece el nivel de significacin entre alelos (CA)n en pacientes AR, CCP+ y CCP-. Conclusiones. Los alelos DRB1, portadores de distintos SE, condicionan la produccin de anticuerpos anti-CCP. Encontramos distinta asociacin entre alelos (CA)n del gen CD154 y pacientes AR antiCCP+ y anti-CCP-.

Resultados. El RR de ser portador del dmero DQA1*0501/ DQB1*0201 es 9,7. ste incrementa a 11,2 en combinacin con DQA1*0201/DQB1*0202 y disminuye a 2,9 con otros haplotipos noDR7; en homocigosis es 5,8. El RR de ser portador del dmero DQA1*03/DQB1*0302 es inferior a la unidad. Por otra parte, el RR global de DQA1*0201/DQB1*0202 es 2.9, disminuyendo a 0,4 en homocigosis. En combinacin con DQA1*0505/DQB1*0301 incrementa a 6,9 pero con otros haplotipos no-DR3, no-DR11, disminuye a 0,2. El anlisis de secuencias revela similaridad estructural en la regin de unin a pptidos y de contacto con el TCR entre DQA1*0501 y *0505 y entre DQB1*0201 y *0202. En conclusin, parece que el dmero trans DQA1*0505/DQB1*0202 es ms efectivo presentando pptidos celiacognicos que el dmero ci s DQA1*0201/DQB1*0202, y podra pr esentar los mismos eptopos que DQA1*0501/DQB1*0201. El dmero DQA1*03/DQB1*0302 no parece ser determinante de susceptibilidad a celiaqua en nuestra poblacin.

20. EVALUACION DE UN NUEVO TEST ELISA EN EL SCREENING DE LA ENFERMEDAD CELIACA EN POBLACION PEDIATRICA. Prada Iurrategui A, Rion Martinez-Gallo M, Maruri Machado N, Luque I, Arrieta Gutierrez A. Hospital de Cruces.

19. EFECTIVIDAD DE PRESENTACIN DE EPTOPOS CELIACOGNICOS POR LOS DMEROS trans HLA-DQA1*0505/ DQB1*0202 E INEFECTIVIDAD DE LOS HETERODMEROS DQA1*03/DQB1*0302. Planelles D1, Donat E2, Capilla A3, Rodrguez M1, Gmez I1, Alba E1, Granell R1, Jarque D1, Ribes-Koninckx C2, Montoro J1. 1Unidad de Histocompatibilidad, Centro de Transfusin de la Comunidad Valenciana. 2Unidad de Gastroenterologa Peditrica, Hospital la Fe de Valencia. 3Laboratorio de Gentica, Instituto de Biomedicina del CSIC, Valencia. Gran parte de la predisposicin gentica a celiaqua se encuentra ligada a los alelos HLA DQA1*0501, DQB1*0201, habindose descrito que los pacientes no portadores de estos dmeros DQ2 son DQ8 positivos. Esto ha conducido a la hiptesis de que estas molculas son importantes presentadoras de pptidos en esta enfermedad. El OBJETIVO de este trabajo ha sido analizar la contribuci n de los diferentes dmeros cis y tr ans DQab como determinantes de susceptibilidad a celiaqua en la poblacin mediterrnea. En una serie de pacientes peditricos se ha realizado un anlisis comparativo del riesgo relativo (RR) de los haplotipos marcadores clsicos de celiaqua (DRB1*0301/DQA1*0501/DQB1*0201 y DRB1*04/DQA1*03/ DQB1*0302) y no-clsicos (DRB1*07/DQA1*0201/DQB1*0202), tanto en homocigosis como en heterocigosis, calculndose la fraccin etiolgica o preventiva de cada combinacin haplotpica. Por otra parte, se ha realizado un anlisis de similaridad de secuencias entre los distintos alelos implicados en la enfermedad.

Introduccin. Los marcadores serolgicos, anticuerpos antigliadina (AGA) y antitransglutaminasa (ATG), han demostrado su utilidad como mtodo de screening de la enfermedad celiaca (EC) en la poblacin peditrica. Recientes estudios han revelado que la desamidacin de la gliadina por la enzima transglutaminasa favorece su unin a los AGA y consiguen una mayor exactitud en el screening de la EC que la determinacin de los AGA que utilizan la molcula convencional. Objetivo. Evaluar un ELISA (INOVA) que utiliza como sustrato una molcula de gliadina desamidada (AGA-D) en el screening de la EC en poblacin peditrica. Comparar sus resultados con los resultados obtenidos por ELISAs que utilizan como sustrato una gliadina convencional (AGA-C) y la transglutaminasa humana recombinante (ATGhr). Materiales y Mtodos. Se analizaron 245 sueros de pacientes peditricos (1-6 aos. Media de edad 2.2aos). En todas las muestras se determinaron los AGA desamidada (AGA-D), los AGA convencional (AGAC) y ATG humana recombinate (ATGhr). Se cuantifico la IgA en los sueros. En los pacientes con resultado positivo para ATGhr se analiz el HLA DR. Resultados. De las 245 muestras analizadas 29 muestras fueron positivos para la ATGhr (25 muestras fueron positivas para los tres test ATGhr+, AGA-D+ y AGA-C+, 2 muestras fueron nicamente ATGhr+ y 2 muestras fueron ATGhr+AGA-D+) y presentaban un tipaje HLADR relacionado con la EC. Una muestra fue slo AGA-D+ y pertenec a a un paciente diagnosticado de Diabetes Mellitus tipo I. Los muestras de 5 pacientes fueron AGA-D+ AGA-C+ presentaban cuadros abdominales inespecificos y/o alergias alimentarias continuandose el estudio de estos pacientes. 42 muestras fueron AGA-C+ y 160 muestras fueron negativas para los tres tests. El dficit de IgA se diagnostico en las muestras de 8 pacientes. Los resultados de sensibilidad (S) y especificidad (E) para cada test fueron: ATGhr AGA-C AGA-D Sensibilidad 100% 86.3% 93% Especificidad 100% 78.8% 97%

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Los resultados del Test de Concordancia fueron: Concordancia global entre ATGhr y AGA-D: 96% Concordancia global entre ATGhr y AGA-C: 80% Concordancia global entre AGA-D y AGA-C: 81% Conclusiones: 1. Los anticuerpos AGA-D son tiles como mtodo de screening de la EC en poblacin peditrica. 2. Los anticuerpos AGA-D presentan una sensibilidad y especificidad superior a los anticuerpos AGA-C y parecida a los ATGhr en el screening de la EC en poblacin peditrica.

SESIN 2: INMUNOGENTICA Moderadores: Dra Estela Paz Artal (Madrid), Dr. Jordi Yage (Barcelona) 21. POLIMORFISMOS EN GENES IMPLICADOS EN INMUNIDAD INNATA NO ESTN ASOCIADOS CON EL RIESGO DE SUFRIR SEPSIS. Guzmn Fulgencio M1, Sirgo Rodrguez G2, Castillo Rama M1, Bernardo Gonzalez I1, Mancebo Sierra E1, Romo Pasamar E1, Prez V1, Paz Artal E1, Morales Prez P1. 1Hospital Universitario12 de Octubre, Madrid. 2Departamento de Medicina Intensiva, Hospital Universitario Joan XXIII, Tarragona. La sepsis es una patologa que se define como la respuesta inflamatoria sistmica a la infeccin. El objetivo de este estudio es evaluar si polimorfismos de genes implicados en la primera lnea de defensa de la inmunidad innata como aquellos localizados en los genes de los receptores de membrana TLR2 (Arg753Gln), TLR4 (Asp299Gly y Thr399Ile) y el polimorfismo en la regin promotora del gen del receptor de macrfagos y monocitos CD14 (-159C>T), incr ementan el riesgo de sufrir sepsis. El estudio se ha realizado con 100 pacientes spticos que proceden de la unidad de cuidados intensivos de dos hospitales universitarios y 107 controles. Los distintos genotipos han sido determinados mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) a tiempo real y anlisis con curvas de melting (TLR2 y TLR4) y mediante PCR y anlisis de fragmentos de restriccin (CD14), todos a partir de ADN extrado de sangre perifrica. Los r esultados obtenidos fueron comparados por el test estadstico de Chi-cuadrado aplicando la correccin de Yates. El anlisis estadstico revel la falta de diferencias significativas en las frecuencias genotpicas de los polimorfismos estudiados comparados con controles tanto en los polimorfismos de los genes TLRs (TLR2: p=0,32, TLR4: p=0,96 y p=0,8 en los polimorfismos Asp299Gly y Thr399Ile respectivamente), como en el polimorfismo del gen CD14 (p=0,42) Podemos concluir entonces que polimorfismos estudiados no estn asociados con el riesgo a sufrir sepsis.

los simplemente poblacionales a servir de base comparativa en los estudios de ciertas enfermedades, sobre todo las que presentan un componente autoinmune. Material y Mtodos. Hemos estudiado la distribucin de polimorfismos del gen HL-C en nuestra poblacin ( n= 126)de Castilla y Len. Muestras de sangre, de 50 a 200 mcl, fueron depositadas en un papel Whatman 3MM secadas a almacenadas a temperatura ambiente hasta su utilizacin. El ADN fu extraido con el kit DNA Direct II de Dynal, obteniendo de 1- 4 mcg de ADN. El locus HLA C fu estudiado con el kit Dynal SSP HLA-Cw. Hemos cambiado las condiciones generales de la PCR a fin de adaptarla a nuestras cantidades de ADN, 2-4 ng y 0,1 U de Taq Polymerasa, por tubo (en vez de 100 ng de ADN y 0.4 U de Taq del protocolo original). Las condiciones de la PCR fueron: 1) 94C, 2 min., 1 ciclo. 2) 94C 10 sec., 65C 60 sec. 10 ciclos. 3) 94C 10 sec., 61C 50 sec., 72C 30 sec. 30 ciclos. 4) 72C 3 min. Los productos PCR fueron visualizados por electroforesis en agarosa al 2%. Resultados. Las frecuencias de los alelos HLA-C halladas fueron: HLA Cw 01*, 3,6% ; Cw 02*, 4,4% ; Cw 03*, 8,2% ; Cw 04*, 10,8% ; Cw 05*, 13,8% ; Cw 06*, 8,6% ; Cw 07*, 16,2% ; Cw 08*, 5,6% ; Cw 012*, 10,8% ; Cw 014*, 2,4% ; Cw 015*, 3,4% ; Cw 0116*, 12,4% ; Cw 017*, 3,2%. No se hallaron diferencias signifi cativas con otros estudios efectuados en poblaciones espaolas y portuguesas.

23. ALELOS DPB1*, HLA CLASE II, EN LA POBLACION DE CASTILLA Y LEON. Leon Moya V1, Leon Arroyo A2, Alonso Sardon M3. 1Serv. Analisis Clinicos. Hospital Universitario de Salamanca. 2Laboratorio de Pediatria e Inmunologia. Universidad de Valladolid. 3Dept. de Med. Preventiva. Universidad de Salamanca. Introducin. Los estudios de alelos HLA en poblaciones localizadas tienen un gran interes a fin de disponer de datos basales de poblaciones concretas, aplicable a una gran diversidad de estudios, desde los simplemente poblacionales a servir de base comparativa en los estudios de ciertas enfermedades, sobre todo las que presentan un componente autoinmune. Material y Mtodos. Hemos estudiado la distribucin de polimorfi smos del gen DPB1* en nuestra poblacin (n= 128)de Castilla y Len. Muestras de sangre, de 50 a 200 mcl, fueron depositadas en un papel Whatman 3MM secadas a almacenadas a temperatura ambiente hasta su utilizacin. El ADN fu extraido con el kit DNA Direct II de Dynal, obteniendo de 1- 4 mcg de ADN. El locus DPB1* fu estudiado con el kit Dynal SSP allset DPB1*. Hemos cambiado las condiciones generales de la PCR a fin de adaptarla a nuestras cantidades de ADN, 2-4 ng y 0,1 U de Taq Polymerasa, por tubo (en vez de 100 ng de ADN y 0.4 U de Taq del protocolo original). Las condiciones de la PCR fueron: 1) 94C, 2 min., 1 ciclo. 2) 94C 10 sec., 65C 60 sec. 10 ciclos. 3) 94C 10 sec., 61C 50 sec., 72C 30 sec. 30 ciclos. 4) 72C 3 min. Los productos PCR fueron visualizados por electroforesis en agarosa al 2%. Resultados. Las frecuencias de los alelos DPB1* halladas fueron: DPB1* 0101, 3,6%; DPB1* 0201, 13,6%; DPB1* 0202, 3,2%; DPB1* 0301, 10,6%; DPB1* 0401, 34,4%; DPB1* 0402, 7,6%; DPB1* 0501, 1,8%; DPB1* 0601, 2,4%; DPB1* 0901, 2,2%; DPB1* 1001, 2,4%; DPB1* 1101, 7,6%; DPB1* 1301, 0,6%; DPB1* 1401, 1,2%; DPB1* 1501, 1,2%; DPB1* 1701, 2,8%. No se hallaron diferencias signifi cativas con otros estudios efectuados en poblaciones espaolas y portuguesas.

22. DISTRIBUCION DE ALELOS HLA-C EN LA POBLACION DE CASTILLA Y LEON. Leon Moya V1, Leon Arroyo A2, Alonso Sardon M3. 1Serv. Analisis Clinicos. Hospital Universitario de Salamanca. 2Laboratorio de Pediatria e Inmunologia. Universidad de Valladolid. 3Dept. Med. Preventiva. Universidad de Salamanca. Introducin. Los estudios de alelos HLA en poblaciones localizadas tienen un gran interes a fin de disponer de datos basales de poblaciones concretas, aplicable a una gran diversidad de estudios, desde

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24. POLIMORFISMOS EN GENES DE CITOKINAS EN PACIENTES DE ALZHEIMER. Leon Moya V1, Cacho J2, Hernandez Cerceo MI1. 1Serv. Anlisis Clnicos. Hospital Universitario de Salamanca. 2Serv. de Neurologa. Hospital Universitario de Salamanca. Hemos estudiado 24 pacientes con Enfer medad de Azheimer ,EA, de acuerdo con los cr iterios de NINCDS-ADRDA, y 28 sujetos control. Los polimorfismos fueron analizados empleando el kit Citokine genotiping Kit (Pel-freez). Los polimorfismos halladosen el grupo control fueron: IL-1alpha/ - 889 (52.5 CC/40 CT/7.5 TT), IL-1beta/ -511 (40 CC/ 45 CT/15 TT), IL-1beta/ 396 (60 CC/35CT/5 TT),IL-1RA/mspa 11100 (5 CC/47.5 CT/47,5 TT), IL1R/psti 1970 (50 CC/40 CT/10 TT), IL-2/ - 330 (15 GG/ 45 GT/40 TT), IL-2/ 166 (50 GG/40 GT/10 TT), IL-4/ - 1098 (10 GG/ 27.5 GT/ 62,5 TT), IL-4/ - 590 (72.5 CC/25 CT/ 2,5 TT), IL-4/ - 33 (75 CC/20 CT/5 TT), IL-4R alpha/1902 (60 AA/35 AG/5 GG), IL-6/ - 174 (20 CC/ 40CG/40 GG), IL-6/ 565 (12.5 AA/52,5 AG/35 GG), IL-10/ - 592 (5 AA/45 AC/50 CC), IL-10/ - 819 (50 CC/40 CT/10 TT) IL-10/ - 1082 (25 AA/50AG/25 GG), IL-12/ - 1188 (62.5 AA/32.5 AC/5CC), IFN gamma/utr 5644 (32.5 AA/42,5 AT/25 TT), TNF alpha/ - 238 (0 AA/2O AG/80 GG), TNF alpha/ - 308 (10 AA/25 AG/65 GG), TGF beta1/codon 10 (25 CC/50 CT/25 TT), TGF beta1/codon 25 (0 CC/15 CG/85 GG) Los polimorfismos para el grupo de pacientes EA: IL-1alpha/ 889 (52.5 CC/40 CT/7.5 TT), IL-1beta/ -511 (35 CC/ 50 CT/15 TT), IL1beta/ 3962 (55 CC/35CT/10 TT),IL-1RA/mspa 11100 (0CC/50 CT/50 TT), IL1R/psti 1970 (45 CC/52.5 CT/7.5 TT), IL-2/ - 330 (15 GG/ 50 GT/35 TT), IL-2/ 166 (55 GG/35 GT/10 TT), IL-4/ - 1098 (10 GG/ 22 GT/ 70 TT), IL-4/ - 590 (75CC/25 CT/ 0 TT), IL-4/ - 33 (75 CC/20 CT/5 TT), IL-4R alpha/1902 (75 AA/15 AG/10 GG), IL-6/ - 174 (15CC/ 45CG/40 GG), IL-6/ nt 565 (10 AA/50 AG/40 GG), IL-10/ - 592 (5 AA/45 AC/50 CC), IL-10/ - 819 (55 CC/35 CT/10 TT) IL-10/ - 1082 (20 AA/50AG/30 GG), IL-12/ - 1188 (60 AA/35 AC/5 CC), IFN gamma/utr 5644 (35 AA/40AT/25 TT), TNF alpha/ - 238 (0 AA/2O AG/80 GG), TNF alpha/ - 308 (5 AA/30 AG/65 GG), TGF beta1/codon 10 (25 CC/50 CT/25 TT), TGFbeta1/codon 25 (0 CC/10CG90 GG) El test de Chi-Cuadrado no muestra diferencis signific ativas p<0.05, entre los polimorfismos del grupo

mente) que a otras poblaciones Amerindias geogrficamente ms cercanas. Se ha observado tambin que: a) todos los Amerindios representan un grupo separado del resto de las poblaciones del mundo (incluidos Na-Dene, Eskimos y Siberianos); b) se confirma que los grupos de Amerindios genticamente relacionados pueden estar geogrficamente distantes; c) lenguas y genes no se correlacionan y esto es particularmente llamativo en los grupos tnicos en Amerindios.

26. GENES HLA EN LA POBLACIN DE LOS MAYOS DEL NORESTE DE MXICO. Arnaiz-Villena1, Fernandez M2, Abd-El-FatahKhalil S2, Serrano-Vela JI1, Reguera R1, Millan P1, Ferri A1, Vargas-Alarcon G3, Moscoso J1. 1 Dept. Inmunologa, Universidad Complutense, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid. 2Dept. Hematologa, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid. 3Dept. Inmunologa, Instituto Salvador Zubiran, Ciudad de Mxico. Se han identificado los alelos de clase I y clase II de 60 individuos no relacionados de un grupo de Mayos, que viven en el Estado Mexicano-Pacfico de Sinaloa. Se compararon los resultados HLA de Mayos con los de otros Amerindios y poblaciones de todo el mundo. Para estas comparaciones se utilizaron un total de 14.896 cromosomas. Se calcularon distancias genticas entre las poblaciones, dendrogramas Neighbour-Joining y se realizaron anlisis de correspondencia para determinar las relaciones genticas entre las poblaciones analizadas. Los nuevos haplotipos especficos encontrados fueron: HLA-A*02B*35-DRB1*1406-DQB1*0301; HLA-A*02-B*48-DRB1*0404-DQB1*0302; HLA-A*24-B*51-DRB1*0407-DQB1*0302 y HLA-A*02-B*08-DRB1*0407DQB1*0302. Sin embargo, el alelo tpico Centro-Americano HLADRB1*0407 representa un 40% de todos los alelos DRB1. Al mismo tiempo que se observan caractersticas HLA comunes con grupos tnicos de Amerindios que se encuentran alejados, tambin se detectan nuevos haplotipos HLA especficos de grupo (elevado DRB1*0407), lo que sugiere un efecto fundador comn. Probablemente, la aparicin de los nuevos haplotipos HLA seguramente se deba a una seleccin especfica por patgenos. El leguaje de los Mayos es prximo al de los Tarahumaras (otro grupo geogrfic amente cercano), a pesar de que estos dos grupos no son genticamente prximos segn nuestros resultados, haciendo constar de nuevo la diferente evolucin de genes y de lenguas, que no se correlacionan. Sinaloa es uno de los Estados Mexicanos en los que se encuentran ms genes europeos. Sin embargo, no se observan genes HLA europeos en Mayos y nuestros resultados podran utilizarse en programas de trasplante y para estudio de enfermedades HLA.

25. ORIGENES Y RELACIONES GENTICAS HLA DE LOS UROS: HABITANTES DE ISLAS-FLOTANTES EN EL LAGO TITIKAKA (BOLIVIA/PER). Arnaiz-Villena1, Serrano-Vela JI1, Barbolla L2, Reguera R1, Ferri A1, Abd-El-Fatah-Khalil S2, Ruiz-Tovar M2, Millan P1, Moscoso J1. 1Dept. Inmunologa, Universidad Complutense, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid. 2Dept. Hematologa, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid. Los Uros viven en islas flotantes (de juncos o totora) en el Lago Titikaka, que hace frontera entre Bolivia y Per y se cree que fueron los primeros habitantes del altiplano Andino en esa zona. En este trabajo, se han identific ado alelos de los genes HLA-A, -B, -C, -DRB1 y DQB1 mediante tipaje de alta resolucin de ADN. Se han estimado los haplotipos extendidos y los resultados se han comparado con poblaciones de todo el mundo (unos 12.450 cromosomas) mediante dendrogramas Neighbour-Joining y anlisis de correspondencia. Los Uros son genticamente ms prximos a los Aymaras Sudamericanos, los Tarahumaras y los Indios Terena (de Bolivia, Mxico y Brasil, respectiva-

27. CAMBIO DE AMINOACIDO EN EL DOMINIO ALFA-3 DE UN NUEVO ALELO HLA-G (HL A-G*0108). Moscoso J1, SerranoVela I1, Prez-Saborido B2, Moreno E2, Barbolla L3, Algora M3, Reguera R1, Ferri A1, Arnaiz-Villena A1. 1Dept. Inmunologa, Universidad Complutense, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid. 2Dept. Ciruga Gastrointestinal y Heptica, Hospital 12 de Octubre, Madrid. 3Dept. Hematologa, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid. El gen de histocompatibilidad de clase I no clsico HLA-G muestra un bajo polimorfismo. Codifica para molculas HLA tolerognicas que pueden ser importantes en el control de la autoinmunidad y el rechazo de trasplante (y tambin del feto semialognico). Las molcu-

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las HLA-G dan seales negativas a las clulas NK (Natural Killer) y a los linfocitos T. En este trabajo, se describe un nuevo alelo, HLAG*0108, que puede ser til para una tolerizacin natural HLA y/o la inducida por frmacos en trasplantes y para el estudio de enfermedades ligadas a HLA. Es el segundo alelo encontrado hasta la fecha donde el polimorfismo se encuentra en el dominio alfa-3 de la valva de HLA-G. Se discute la importancia de los cambios en el dominio de alfa3 de la molcula HLA-G en relacin con su funcin.

28. CAMBIO NO-CODIFICANTE DE BASE EN EL ADN DEL EXON 2 DE UN NUEVO ALELO, HLA-G*010114. Arnaiz-Villena A1, Serrano-Vela JI1, Reguera R1, Barbolla L2, Algora M2, Ferri A1, Prez-Saborido B3, Moreno E3, Moscoso J1. 1Dept. Inmunologa, Universidad Complutense, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid. 2Dept. Hematologa, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid. 3Dept. Ciruga Gastrointestinal y Heptica, Hospital 12 de Octubre, Madrid. El gen de histocompatibilidad de clase I no clsico, HLA-G, muestra un bajo polimorfismo proteico y una mayor variabilidad de su ADN (ocho protenas y 28 alelos). Este polimorfismo del ADN en HLA-G se debe mayoritariamente a cambios en la tercera base de los codones en los exones que, generalmente, no producen cambio de aminocido. Este alto polimorfismo en el ADN en comparacin c on su polimorfismo proteico sugiere que existe una presin evolutiva que se opone a la variacin de HLA-G. Esto puede estar relacionado con la funcin inmunotolerognica que se postula para HLA-G y la seleccin para invarianza, puede ser de purifi cacin al no tener que presentar HLAG gran variedad de pptidos microbianos, c omo lo hacen las molculas HLA de clase I clsicas. La descripcin de nuevos alelos HLA puede servir en un futuro prximo para medir el grado de tolerancia o aceptacin de determinados injertos y as proceder con la terapia adecuada.

obtenida de pjaros salvajes en su hbitat natural. Las secuencias de ADN analizadas incluyen exn 2- intrn 2 - exn 3 de molculas de clase I y se han obtenido mediante amplificacin por PCR y posterior secuenci acin. Las ambigedades debidas a los polimorfismos se han resuelto mediante clonacin. Se ha detectado la presencia de al menos dos genes de clase I en el jilguero europeo con una variabilidad gentica que en la mayora de los casos se traduce en una variabilidad proteica. Sin embargo, en los jilgueros sudamericanos se ha detectado un nico gen de clase I con una variabilidad reducida, hasta el punto de que los mismos alelos estn presentes en distintas especies (evolucin transespecfica). Las posiciones variables de la regin de unin al pptido en las protenas de Carduelis carduelis son diferentes a las encontradas en los jilgueros sudamericanos. Se contrapone la gran variabilidad MHC en modelos no salvajes (humanos, ratones de laboratorio y pollos) y la escasa en salvajes (hamster sirio, rata, topo, guepardo). Se relaciona la gran variabilidad de especies no salvajes con fenmenos de autoinmunidad.

30. EL ALELO HLA-B*8301 SE GENERA POR UN EVENTO DE CONVERSIN GNICA QUE INCLUYE EL EXN 2 COMPLETO. Martinez Laso J1, Roman A1, 2, Cervera I1, Rodriguez M1, Gutierrez-Solar B1, Head J1, 2. 1Unidad de Inmunoterapia Celular. Instituto de Salud Carlos III. Centro Nacional de Microbiologa. Majadahonda. Madrid. 2Servicio de Microbiologa. Hospital Clnico San Carlos. Se han propuesto tres mecanismos diferentes de generacin de polimorfismo de alelos del MHC: mutacin puntual, recombinacin y conversin gnica. Se ha descrito previamente que varios alelos de HLAA y de HLA-B se generaron por fenmenos de conversin gnica y de recombinacin que involucran regiones no codificantes. Varios estudios indican que la conversin gnica es el fenmeno ms importante cuando se analiza la secuencia de los intrones. El alelo HLA-B*8301 fue el primero en el que se describi un proceso de recombinacin consistente en la inclusin del exn 2 del alelo B*5603 en la secuencia del B*4402. Los exones 1, 3 y 4 del alelo B*8301 eran idnticos a la mayora de los alelos B*44 mientras que el exn 2 presentaba una diferencia de 23 nucletidos con el alelo B*4402 y de slo un nucletido con el alelo B*5603 en el codn 24. Para confi rmar la implicacin de los intrones en la generaci n del alelo B*8301 se secuenciaron parci almente el exn 1 y la totalidad del intrn 1, exn 2, intrn 2 y exn 3 de los alelos B*8301 y B*5601. Teniendo en cuenta todos los resultados se puede plantear la hiptesis de que B*8301 se genera por un fenmeno de conversin gnica entre B*44020101 como receptor y B*5601 como donante del exn 2 completo, el extremo 3 del intrn 1 y el extremo 5 del intrn 2. Estos datos reflejan la importancia de los intrones para establecer el correcto mecanismo de generacin de polimorfismo del MHC.

29. VARIABILIDAD DE LOS GENES DE HISTOCOMPATIBILIDAD EN UN MODELO DE AVES SALVAJES EUROPEAS Y SUDAMERICANAS (JILGUEROS, GNERO CARDUELIS). Serrano-Vela JI, Reguera R, Ferri A, Millan P, Ferre S, Arnaiz-Villena A. Dept. Inmunologa, Universidad Complutense, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid. Los genes que componen el sistema principal de histocompatibilidad humano (HLA) estn bien caracterizados en cuanto a su localizacin cromosmica, su variabilidad (gentica y proteica) y su funcionalidad. Sin embargo, no est claro que esta organizacin sea paradigmtica ni que pueda utilizarse como modelo representativo de los sistemas de histocompatibilidad de la generalidad de vertebrados. De hecho, numerosos estudios realizados en otros grupos de mamferos y en otros vertebrados (anfibios, peces, reptiles y aves) no siempre muestran el gran polimorfismo observado en humanos. En este trabajo se plantea el estudio de genes de histocompatibilidad de clase I (MHC-I) en una especie de jilguero europeo (Carduelis c arduelis) y en varias especi es estrechamente emparentadas de jilgueros sudamericanos (otras especies del gnero Carduelis). El objetivo es determinar su variabilidad y evolucin, analizando especialmente los puntos de variacin en la protena que puedan tener implicaciones en su funcin. El estudio se ha realizado a partir de ADN extrado de sangre

31. LA INMUNOGLOBULINA M Y LA IMMUNOGLOBULINA D EN EL REPTIL GECKO LEOPARDO (Eublepharis macularius). Snchez Espinel C1,3, Magadn Momp S2,1, Gambn Deza F3. 1rea de Inmunologa. Facultad de Ciencias. Universidad de Vigo. 2Instituto Superior de Saude do Alto Ave (ISAVE). Portugal. 3Unidad de Inmunologa. Hospital do Meixoeiro. Complejo Hospitalario Universitario de Vigo (CHUVI). Introduccin. La inmunoglobulina D (IgD) ha sido un misterio desde que fue descubierta en los mamferos hace 40 aos. Comparte

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con la inmunoglobulina M (IgM) el papel de receptor antignico en la membrana de las clulas B maduras. La ausencia de esta inmunoglobulina en las aves y su descripcin en peces seos contribuy a la confusin acerca de su origen evolutivo. Objetivos. Estudios recientes han demostrado la presencia de IgD en el anfibio Xenopus tropicalis, la cual convierte en esencial su bsqueda y estudio en reptiles para poder comprender la evolucin de esta inmunoglobulina en los vertebrados. Metodologa. Se realiz una extraccin de DNA genmico y se obtuvo una primera secuencia, empleando primers degenerados, la c ual se alarg por ambos extremos utilizando la tcnica de DNA walking previa construccin de una librera de DNA (GenomeWalker Universal Kit Clontech de TAKARA BIO). Para las extracciones de RNA total se utiliz el kit QUIamp (QIAGEN) y para la realizacin de RTPCRs el kit One Step QIAamp RNA (QIAGEN). La secuenciacin se llev a cabo empleando BigDye Terminator v3.1 Cycle Sequencing Kit (Applied Biosystems) y el secuenciador ABI PRISM 3130-Avant Genetic Analyzer (Applied Biosystems). Para los anlisis fi logenticos se emple el software MEGA4 y a nivel estadstico el software SPSS. Resultados y conclusiones. En el presente trabajo se describe la IgD e IgM en el reptil Eublepharis macularius. El gen de la IgM tiene caractersticas similares a aquellas descritas en otras especies, mientras que la IgD tiene una estructura particular en esta especie. Est formada por 11 dominios de inmunoglobulina sin ningn tipo de evidencia de duplicaciones intragnicas de los exones, como ha sido descrita en la de los peces y anfibios. Es posible que esta inmunoglobulina est compuesta por dominios heredados de especies anteriores y que esta forma sea similar a la presente en animales que dejaron el mar para vivir en la tierra. Tambin describimos una segunda inmunoglobulina D (IgD2), la cual debi aparecer recientemente por duplicacin de una inmunoglobulina anterior y recombinacin con la IgA-like descrita para esta especie. La expresin de ambas inmunoglobulinas en los tejidos del animal es similar a la de la IgM sugiriendo un papel funcional para la IgD de reptil.

branas secundarias a otras patologas como las secundarias a miopa o corioretinopata central serosa, entre otras. Se realiz el tipaje HLA A, B y DR por una tcnica de PCR-SSO (Dynal y/o I nnogenetics) y a 250 sujetos sanos mayores de 55 aos sin patologa oftalmolgica conocida. Resultados: El anlisis de los datos demostr la ausencia de los 10 haplotipos ms frecuentes en nuestro medio en la mayora de nuestros pacientes. Se presentarn las frecuencias de los haplotipos en los pacientes y nuestro grupo control. En el anlisis de los alelos (HLA-A, B y DRB1) no se observaron diferencias signif icativas entre los pacientes y el grupo control excepto el alelo HLA-B*27 que era ms frecuente en el grupo con DMAE exudativa (p 0.0113). No se encontr ningn alelo protector para esta patologa.

33. DETERMINACIN DEL GENOTIPO HLA-DQ2/DQ8 POR PCR A TIEMPO REAL. Faner Canet MR1, Ruiz E1, Campos E1, PujolBorrell R1,2, Juan M3, Palou E1. 1Laboratori dImmunobiologia per a la Recerca i Aplicacions Diagnstiques (LIRAD), Banc de Sang i Teixits (BST). 2Universitat Autnoma de Barcelona (UAB). 3Servei dImmunologia. Centre de Diagnstic Biomdic, Hospital Clnic Barcelona. La enfermedad celiaca (EC) es una enteropata mediada por una respuesta inmune que se desencadena por la ingestin de gluten. En estos pacientes, se ha descrito que la molcula HLA-DQ es un factor de susceptibilidad gentica muy importante: ms del 90% de enfermos celiacos son HLA-DQ2 y los restantes son HLA-DQ8. Debido a esta alta asociacin la tipificacin HLA se usa como un marcador diagnostico, que es muy til cuando las pruebas serolgicas y las biopsias son de resultado inconcluyente. Para la deteccin de DQA1*05, DQB1*02 (codificando DQ2) y DQB1*0302 (codificando DQ8) se usan habitualmente diversos mtodos de PCR-SSP, pero ninguno es del todo satisfactorio ya que requieren la realizacin de muchas reacciones y tambin manipulaciones post-PCR. Por ello hemos desarrollado un mtodo de tipificacin basado en la PCR a tiempo real con sondas FRET capaz de determinar el genotipo DQA1*05, DQB1*02 y DQB1*0302 de la muestra mediante cuatro reacciones y sin necesidad de manipulacin post-PCR. Para la validacin de dicha aproximacin se han analizado 40 muestras que haban sido tipificadas mediante otros mtodos obteniendo resultados equivalentes, demostrando la reproducibilidad y precisin de la tcnica. En resumen, podemos decir que el uso de esta tcnica en los laboratorios de tipificaci n HLA puede ayuda a incrementar el nmero de muestras procesables a la vez, minimizar el esfuerzo y reducir los riesgos de contaminacin. Financiado por ayuda Profit FIT 010000-2006-38.

32. LA PRESENCIA DE LOS HAPLOTIPOS HLA MS FRECUENTES EN NUESTRO MEDIO PROTEGE FRENTE A LA DEGENERACIN MACULAR ASOCIADA A LA EDAD. Gonzlez Fernndez R, Villegas Becerril E, Manzanares Martn B, Gallardo Galera JM, Pea Martnez J. Hospital Reina Sofia. La degeneracin macular asociada a la edad (DMAE) es la causa ms comn de ceguera en mayores de 60 aos en pases desarrollados. En su patogenia se involucra tanto la predisposicin gentica como la participacin del sistema inmune. En este sentido, el sistema HLA sera un buen candidato porque juega un papel crucial en la regulacin del sistema inmune y presenta un amplio polimorfismo. Nuestro objetivo es establecer la relacin existente entre la DMAE en concreto de tipo exudativo y los alelos de HLA clase I (HLA-A y HLA-B) y c lase II (HLA DRB1). Pacientes y mtodos: Se incluyeron en este estudio 75 pacientes con NVC subfoveales/yuxtafoveales secundarias a DMAE diagnosticadas mediante angiografa con fluorescena, predominantemente clsicas con agudeza visual comprendida entre 3/60 y 20/60 y tamao de la lesin inferior a 5400 &#956;m de dimetro. Tambin se incluyeron pacientes con NVC oculta, con visin inferior a 20/50, o con membranas ocultas de tamao menor de 4 reas de disco con visin mejor de 20/50 y con lesiones mnimamente clsicas con AV > 0.08 y tamao menor de 6 reas de disco. Se excluyeron del estudio las mem-

34. UTILIZACIN DE UN MTODO DE HIBRIDACIN CON SONDAS ESPECFICAS DE SECUENCIA PARA LA DETERMINACIN DE LA FRECUENCIA DE GENOTIPOS KIR EN LA POBLACIN DE DONANTES DE SANGRE DE CANTABRIA. Snchez-Velasco P1, Lavn-Alconero L1, Arroyp JL2, Ausn F1, Amunrriz C2, Leyva-Cobin F1, Gonzalo Ocejo-Vinyals J1. 1Hospital Universitario Marqus de Valdecilla. 2Banco de Sangre y Tejidos de Cantabria. Introduccin. El estudio con sondas especficas de secuencia ha demostrado ser de gran utilidad en el estudio de polimorfismos en el MHC. Esta tcnica se utiliza de forma rutinaria en el tipaje HLA, tanto en el trasplante como en estudios de asociacin HLA-enfermedad.

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El objetivo de este estudio es valorar su utilidad en el genotipado de receptores de clulas NK, concretamente los genes KIR. Materiales y Mtodos. Se incluyeron en el estudio 144 donantes de sangre. Se utiliz una tcnica de PCR-SSO que detecta 14 genes KIR y 2 pseudogenes. Las muestras hibridadas fueron analizadas mediante fluorimetra (Luminex 100). La frecuencia de los individuos que tenan al menos una copia de cada gen KIR se determin por recuento directo. Para analizar diferencias en la frecuencia de los diferentes genes KIR respecto de otras poblaciones cercanas, se us la prueba de Chi 2 con correccin de Yates. Resultados. Todos los individuos analizados, eran positivos para los tres genes estructurales KIR2DL4, KIR3DL2 y KIR3DL3. Se observ una variacin, estadstic amente significativa respecto de la mayora de las poblaciones estudiadas hasta la fecha, en la frecuencia de KIR2DL3. Una frecuencia tan baja, slo ha sido descrita en poblaciones tnicamente muy alejadas de la poblacin cntabra (vietnamitas, aborgenes australianos y etnias sudafricanas de xhosa y san). Conclusin. La tcnica de PCR-SSO es una tcnica fcilmente automatizable que posibilita el anlisis de un gran nmero de muestras en menos tiempo que los tradicionales mtodos de PCR-SSP. No obstante, la resolucin de esta metodologa es actualmente inferior. Estudios previos han demostrado una concordancia de casi un 100% entre ambas tcnicas. Sin embargo, debido a la baja frecuencia de KIR2DL3 en nuestra poblacin en comparacin con la de poblaciones vecinas, convendra realizar ms estudios con el objetivo de comprobar realmente si la tecnologa Luminex permite detectar todos los alelos de KIR2DL3.

ma, IL-1R, IL-4R alfa, IL-12. Al estar en un fuerte desequilibrio de ligamiento, los haplotipos generados por estos polimorfismos tambin mostraban unas diferencias significativas entre pacientes con OM e individuos sanos Conclusin. Existen muy pocos datos sobre polimorfismos de citocinas en la OM. El presente estudio muestra que existen diferencias estadsticamente significativas en las frecuencias de polimorfismos de ciertas citocinas. Algunos de ellos no tienen efecto sobre la expresin de estas; otros aumentan su expresin y finalmente, otros la disminuyen. Estos hallazgos, junto con variaciones genticas estructurales o polimrficas en otros genes, podran contribuir a una susceptibilidad a padecer OM. Se necesitan estudios ms amplios, con una seleccin ms estricta de los pacientes y quiz con diseos diferentes (v.g. cohortes) para tratar de esclarecer el papel que todos estos genes juegan en la predisposicin y desarrollo de la OM.

SESIN 3: INMUNOLOGA Y TRASPLANTE Moderadores: Dr. Joan Mil (Palma de Mallorca) Dr. Alfredo Minguela (Murcia) 36. DISTRIBUCIN ALELICA DRB1* EN EL BANCO DE CORDON DE ANDALUCIA. de Paula Sanchez Gordo F, Carrasco Hidalgo A, Jaen J, Marie Christensen E, Rodriguez Pena R, Prat Arrojo I. Centro de Transfusin y Banco de Tejidos. Introduccin. La sangre de placenta (SCU) ha demostrado ser una fuente de progenitores hematopoyticos adecuada para su uso en el rescate post-acondicionamiento TMO. Dada la complejidad del tipaje HLA y la necesidad de compatibilidad DRB1 a nivel allico, hemos realizado un anlisis de frecuenci a del locus HLA-DR.Material y mtodos. El mtodo utilizado en nuestro laboratorio es SSOP Luminex, complementndolo con SSP con el fin de poder informar el tipaje de DRB1 a nivel allico, o bien con nomenclatura NMDP de tal forma que slo estuviera presente un alelo de alta frecuencia. Hemos analizado la frecuencia DR (baja resolucin)de 7.159 muestras (donantes y SCU) y de ellas, analizamos el tipaje a nivel allico de 1000 ADNs procedentes de SCU consecutivas correspondientes a unidades criopreservadas en los meses de abril a junio de 2007. En caso de no disponer del tipaje a nivel allico, hicimos una traduccin de la nomenclatura NMDP al alelo mas frecuente (>99% probabilidades) considerando que dado el nmero de muestras no interferira la posible existencia de un alelo raro. Resultados y conclusiones. La frecuencia fenotpica del anlisis de las 7.159 muestras fue por orden de frecuencia DR7 (30%), DR4 (26%), DR13 (26%), DR3 (25%), y DR11 (25%). A nivel allico los ms frecuentes son DRB1*0701 Y DRB1*0301 . La distribucin para DR4, DR11 y DR13 son: DR4 (224 casos), frecuencia: *0404 (26,78%), *0405 (20,10%), *0403 (14,73%), *0402 (13,85%), *0401 (12,95%), *0407 (4,91%), *0408 (4,01%), *0406 (2,23%), *0411 (0,44%). DR11: (216 casos), frecuencia: *1101 (39,82%), *1104 (39;35%), *1102 (12,96%), *1103 (6,49%), y *1106, *1114 y *1136 con un 0,46% cada uno. DR13: (266 casos), frecuencia: *1301 (50%), *1302 (33,46%), *1303 (13,91%), *1305 (1,50%), *1304 (0,75%) y *1325 (0,38%). El tipaje de DR4 es el mas heterogneo. Debido al importante porcentaje de nacimientos de inmigrantes y su multiplicidad tnica, el inters principal del presente estudio se basa en la probabilidad de encontrar una unidad de cordn DRB1 compatible dentro de nuestro banco de cordn.

35. POLIMORFISMO DE CITOCINAS, RECEPTORES DE CITOCINAS Y ANTAGONISTAS DE RECEPTORES DE CITOCINAS EN PACIENTES CON OBESIDAD MRBIDA. Ausin Ortega F, Snchez Castaon M, Leyva-Cobian F, Ocejo-Vinyals JG. Servicio de Inmunologa. Hospital Universitario Marqus de Valdecilla. Introduccin. El trmino obesidad mrbida (OM) hace referencia a pacientes que estn desde un 50 a 100% 45 kg por encima de su peso corporal ideal. Por otro lado, un valor mayor a 39 en el ndice de masa corporal se puede utilizar para diagnostic ar este tipo de obesidad. Hasta la fecha apenas hay estudios de asociacin de esta patologa con polimorfismos en los genes de citocinas. El objetivo de este estudio se ha centrado en comprobar si existe alguna asociacin significativa entre OM y polimorfismos en los genes de algunas citocinas y sus receptores. Materiales y Mtodos. Se incluyeron en el estudio 191 pacientes diagnosticados de OM. Como grupo control, se analizaron 94 individuos sanos, no obesos, donantes de sangre. Para el estudio de los polimorfismos se utiliz un ensayo comercial basado en la tcnica de PCRSSP, el cual detecta 22 posiciones polimrficas en 13 citocinas (IFNg, IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-1R, IL-1RA, IL-2, IL-4, IL-4R alfa, IL-6, IL-10, IL12, TGF-beta, TNF-alfa): PROTRANS Cytokines 2. El anlisis de la frecuencia de los diferentes polimorfismos en pacientes con OM y controles sanos se realiz mediante recuento directo. Para el anlisis estadstico de la diferencia entre ambos grupos se recurri al test exacto de Fisher. Resultados. Se encontraron diferencias estadsticamente significativas en los polimorfismos de los genes de las siguientes citocinas: IL-1 alfa, IL-1 beta, IL-1RA, IL-2, IL-4, IL-6, IL-10, TGF-beta y TNF-alfa. No hubo diferencias significativas en los polimorfismos de: IFN-gam-

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37. RELACIN DEL FENOTIPO ANTIGNICO ENTRE LAS CLULAS DECIDUALES ESTROMALES HUMANAS Y LAS CLULAS MADRE MESENQUIMALES. De la Mata Espinosa CT, Ortiz-Ferrn G, Tirado I, Muoz-Fernandez R, Blanco O, Leno E, Abada-Molina AC, Olivares EG. Instituto de Biopatologa y Medicina Regenerativa, Centro de Investigaciones Biomdicas, Universidad de Granada. Introduccin. La decidua es el tejido materno que se encuentra en contacto directo con el trofoblasto fetal. Durante el embarazo, los mecanismos inmunolgicos que llevan a un embarazo exitoso o al aborto, se encuentran en la decidua. Las clulas deciduales estromales (DSC) constituyen una proporcin de alrededor del 50% del total de las clulas de la decidua y se ha demostrado que tienen actividades inmunolgicas como produccin de citoquinas (IL-6, IL-8, MCP-1, RANTES) fagocitosis y activacin de clulas T. Nuestro grupo ha aislado DSC de embarazo normal humano y las mantuvo en cultivo. Estas clulas expresaron CD10, CD13, CD29, CD34, CD73, CD90, ICAM-1,VCAM-1, STRO1, -SM actin, y ALP, y falta de CD3, CD15, y CD45. Las DSC presentan morfologa semejante a las MSC (clulas madre mesenquimales) de mdula sea, por lo que pensamos que estn estrechamente relacionadas entre s. Objetivo. El objetivo general de este trabajo es estudiar las relaciones inmunofenotpicas entre las MSC de mdula sea y las DSC y la posible diferenciacin de las DSC a linajes mesenquimales. Mtodos. Las MSC de mdula sea se aislaron aplicando la misma metodologa utilizada por nuestro grupo para la obtencin de DSC. Se estudi el fenotipo antignico de las dos poblaciones por medio de citometra de flujo y la diferenciacin de las DSC por medios especficos de linaje mesenquimal. Resultados. Los anlisis revelaron que la expresin de los antgenos superficiales de las MSC cultivadas, tales como CD29, CD10, sm-actina, y STRO-1 eran fuertemente positivos; CD34, CD21, CD73, y 106 estaban positivos en baja intensidad y CD45 fue negativo. Una poblacin en clulas frescas de mdula sea tambin demostr tener los mismos antgenos de superficie de la clula. Las DSC se diferenciaron a osteoblastos, adipocitos y condrocitos. Conclusiones. Nuestros resultados confirman que las DSC esta estrechamente relacionadas con las MSC.

determinar si existan diferencias estadsticamente significativas entre los grupos. Para estudiar la correlaci n entre tcnicas (CDC y Luminex) y entre anticuerpos prefor mados y rechazo se utilizaron tablas 2x2 y el test del Chi-cuadrado. Resultados. Existe una fuerte correlacin entre las dos tcnicas y su capacidad para detectar anticuerpos preformados (p<0.0001). La presencia de anticuer pos preformados detectados por CDC y Luminex xMAP esta asociada con una disminucin en la supervivencia del injerto heptico dentro del primer ao post-trasplante (p=0.01 y p= 0.016 respectivamente) Una prueba cruzada positiva con linfocitos T tiene un impacto negativo en la supervivencia del injerto a 1 y 5 aos (p =0.043 y p= 0. 0019 respectivamente). Asimismo, los anticuerpos clase II detectados por Luminex tienen un impacto negativo en la supervivencia del injerto a 1 y 5 aos (p=0.005 y p= 0.038 respectivamente). Se observ una asociacin entre los anticuerpos preformados clase II detectados por Luminex o anticuerpos clase I y II detectados por Luminex y el rechazo del injerto heptico ( p=0.001 y p=0.042 respectivamente). Conclusiones. El screening de anticuerpos HLA con tcnicas de Luminex y CDC puede ser til en la deteccin de pacientes de alto riesgo que podran beneficiarse de una vigilancia post-trasplante ms estrecha y una terapia inmunosupresora ms agresiva. Financiacin Fundacin MMA 2004-008. In press Liver Transplantation 2008.

39. SCREENING DE ANTICUERPOS ANTI-HLA. COMPARACIN ENTRE DOS TCNICAS: LUMINEX VERSUS ELISA. Calleja Antoln S1, Castro Panete MJ1, Nevado Cestero J1, Bernardo Gonzlez I1, Castillo Rama M1, Serrano Hernndez A1, Ramrez Bustillo E2, Morales Cerdn JM2, Mrida E2, Paz Artal E1. 1Servicio de I nmunologa. Hospital Universitario 12 de Octubre. 2Servicio de Nefrologa. Hospital Universitario 12 de Octubre. Madrid. Introduccin y objetivos. Comparar la sensibilidad y la especificidad entre dos tcnicas de deteccin de anticuerpos anti-HLA en suero: ELISA y citometra de flujo Luminex. Material y mtodos. Se realiz screening de anticuerpos anti-HLA por ELISA (LAT Mixed, One Lambda Inc., CA, EE. UU.) y Luminex (LABScreen Mixed, One Lambda Inc., CA, EE. UU.) a 290 sueros seleccionados aleatoriamente de entre 2.074 sueros de los receptores de la lista de espera de trasplante renal. El anlisis estadstico de los resultados obtenidos se realiz mediante tablas de contingencia 2 x 2 y curvas ROC, con el programa de anlisis estadstico SPSS.11.0. Resultados. La tecnologa Luminex presenta una mayor sensibilidad como prueba de screening para la deteccin de anticuer pos antiHLA en suero. Luminex presenta una sensibilidad del 92%, frente al 81% de la de ELISA. Por otra parte, se observa una menor especifici dad en la deteccin de estos anticuerpos por Luminex respecto a ELISA (89% frente a 96%). Las c urvas ROC demuestran una relacin ms ptima de sensibilidad/especificidad en la tecnologa Luminex que en ELISA (variables resultado de contraste: rea Luminex 0,910; rea ELISA 0,887). Conclusiones. Luminex LABScreen Mixed presenta una sensibilidad mayor para detectar anticuerpos anti-HLA y, aunque su especificidad es menor que la de ELISA, su mejor relacin entre sensibilidad y especificidad la convierte en una prueba de screening ms potente que ELISA.

38. ANTICUERPOS ANTI-HLA PREFORMADOS FAVORECEN EL RECHAZO Y DISMINUYEN LA SUPERVIVENCIA DEL INJERTO HEPTICO. RESULTADOS DE UNA SERIE DE 896 TRASPLANTES. Castillo-Rama M1, Castro MJ1, Bernardo I1, Calleja-Antoln S1, Morales P1, Romo E1, Meneu-Diaz JC2, PrezSaborido B2, Moreno Elola-Olaso A2, Paz-Artal E1. 1Inmunologa. Hospital Doce de Octubre. 2Ciruga Digestiva y Trasplante de rganos Abdominales. Hospital Doce de Octubre. Madrid. 896 trasplantes hepticos realizados en nuestro centro entre 1986 y 2006 se analizaron retrospec tivamente con el objetivo de investigar el impacto de los anticuerpos anti-HLA en el rechazo y la supervivencia del injerto heptico. La prueba cruzada se realiz por citotoxicidad dependiente del complemento (CDC). Los anticuerpos anti-HLA clase I y II se detectaron por citometra multiparamtrica con microesfer as (Luminex xMAP). La supervivencia actuarial se calcul con las tablas de vida y la acumulada con el mtodo Kaplan-Meier. El test log rank se aplic para

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40. ACUTE HUMORAL REJECTION MEDIATED BY ANTIBODY, UNDETECTED BY CDC. Osrio E1, Mendes C1, Sinde Monteiro M1, Teixeira J1, Castro Henriques A2, Alves H1. 1Centro de Histocompatibilidade do Norte, Porto, Portugal. 2Hospital Geral de Sto.AntnioServio de Nefrologia, Porto, Portugal. Introduction. Knowing that pregnancy is a risk factor in the formation of anti-HLA antibodies (Ab), we should detect them before the renal transplant. Objective. Identify the causes that led to acute humoral rejection. Methods. Crossmatch (XM) was performed by Cytotoxicity (CDC) and Flow Cytometry (FC) FACSCalibur (Becton Dickinson), with antiIgG/FITC Dako and anti-CD2/PE BD. HLA Ab screening was done by CDC, LAT-M (ELISA), Luminex LABScreen Mix and LABScreen PRA (OneLambda). The patient was a 51 years-old female with no past transfusions or infections, three pregnancies, with a cadaver kidney transplant after 48 months of haemodialysis. Donor HLA-A1,2;B8,51;DR3,8 patient HLA-A1,11;B8,35;DR3,8 Mismatch-A2,B51. HLA Ab screening by CDC was done every 3 months since 2002 and was negative at all times, whereas HLA Ab by ELISA or Luminex was positive for class I and II. The transplant CDCXM was negative for T and B cells, whereas FCXM was positive for T cells. Induction therapy with CyA, MMF, Pred, ATG. The patient had immediate graft function. Serum creatinine dropped to 2,7mg/dL. On the 8th day the patient was anury. The biopsy showed acute rejection Banff II b with diffuse positive C4d. The FCXM was positive on the 8th day. The patient went through 10 Plasmapheresis with IVIg. She currently (45 days after transplant) keeps class II Ab positive, being negative for class I (Luminex), 1,8mg/dL of creatinine with proteinuria, treated with MMF, Pred and Tacrolimus. Taking as hypothesis that the patient's sensitivity was due to her past pregnancies (last 27 years ago), we typed her husband: HLAA2; B44; DR1,15. The CDC XM with her husband's cells tested negative for T and B (XM's with serum before TX) and FCXM positive for T and B cells. We detected anti-A2 in patient serum by Lum LS1PRA (the husband was HLA-A2). Conclusion. In the case of women, sensitized because of their pregnanc ies, XM by CDC might not be enough (low title antibody) and FCXM should be performed afterwards.

15/8/98 Male patient, 44 years, end-stage renal disease (familial nephropathy), pre-TX HLA antibodies (Ab) by Luminex (Lum) and CDC neg 5/7/2003 Kidney Tx (cadaver male donor, 53 years). Crossmatch (XM) by CDC and Flow Cytometry (FC) neg. Patient treated with Daclizumab+TAC+MMF+Pred PosTX monitoring on the 1st, 3rd and 6th months: Ab by Luminex and CDC-neg; XM with donor frozen cells-neg. 13/12/04 biopsy-29 glomeruli, with vascular lesion, malignant nephrosclerosis, with acute RJ cri teria or polioma virus infection. 15/10/05 Rejection The patient returns to dialysis with TAC+Pred. 10/2/06 and 30/3/2006 Ab by Lum and CDC neg; XM with donor frozen cells-neg. 6/6/06 Transplantectomy, Patient refers abdominal pain, haematuria and severe hypertension, maintains Pred. 6/7/06 Ab by Lum class Ipositive PRA (CDC) 78% XM with donor frozen cellspositive (T cells) Donor HLA-A1,2;B8,40;DR13,15 Recipient HLA A2;B44,57;DR13,15 Mismatches A1, B8, B40 Ab identification anti-A1 and anti-B40 Methods. PRA was performed by CDC/45 cells panel. Anti-HLA class I and II Ab screening and the specificities were performed by Lum (Labscreen mixed and PRA, One Lambda) and CDC. The XM was performed by CDC and FC (FACSCalibur). Conclusion. The existence of pos-TX DSA may be hidden by the "sponge effect" of the transplanted organ. The circulating Ab are induced by the removal of the organ itself and/or by the immunosuppression stop. This may be relevant in the case of a retransplant patient.

42. CLULAS MESENQUIMALES PARA REGENERACION DE CARTILAGO: ARTRITIS REUMATOIDE Y OSTEOCONDRITIS DISECANTE. Martinez Lorenzo MJ1,5, Desportes Bielsa P2,5, Alegre Aguarn E2,5, Royo Caas M5, Castiella T3, Garca Alvarez F4,5, Larrad Mur L2,5. 1Banco de Sangre y Tejidos de Aragn. 2Servicio de Inmunologa. Hospital Clnico Universitario Lozano Blesa. 3Servicio de Anatoma Patolgica-HCU. 4Servicio de Traumatologa-HCU. 5Instituto Aragons Ciencias de la Salud. Introduccin. Las clulas mesenquimales (MSC) constituyen un modelo muy til en aplicaciones clnicas para un gran nmero de enfermedades, tanto en terapia regenerativa como en terapia gnica (Deans et al, 2000). Adems de la mdula sea y el cordn umbilical, otra fuente alternativa de MSC es el tejido adiposo. El potencial diferenciador de estas clulas ha sido confirmada por diversos grupos (Zuk et al 2001). En este trabajo se aislaron y caracterizaron las MSC obtenidas de grasa de tres especies diferentes y se analiz su capacidad de diferenciacin y regeneracin de cartlago. Materiales y Mtodos. Se obtuvieron muestras de tejido adiposo de 5 ovejas, 5 conejos y 5 humanos. Las clulas procedentes del tejido adiposo se obtuvieron mediante digestin mecnica y enzimtica y fueron separadas por centrifugacin. En el caso de clulas procedentes del lquido sinovial, stas se obtuvieron por centrifugacin. El cultivo de las clulas se realiz en un medio de expansin y se mantuvo a 37C en atmsfera hmeda con 5% de CO2. Para el estu-

41. POSTTRANSPLANTECTOMY HLA DONOR SPECIFIC ANTIBODIES: CASE REPORT. Mendes C1, Osrio E1, Sinde Monteiro M1, Teixeira J1, Castro Henriques A2, Alves H1. 1Centro de Histocompatibilidade do Norte, Porto, Portugal. 2Hospital Geral de Sto.Antnio, Servio de Nefrologia, Porto, Portugal. Introduction. HLA Donor specific antibodies(DSA) may appear in patients submitted to a kidney transplant(KTx).This often ends in humoral rejection(RJ) and organ loss. Several studies indicate that occasionally DSA only appear after transplantectomy Case report. Patient with rejection and DSA, not detected in peripheral blood until transplantectomy

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dio fenotpico las clulas se incubaron con anticuerpos monoclonales especficos. La diferenciacin celular hacia condrocitos se realiz en un medio de diferenciacin y las muestras se analizaron tras realizar cortes del tejido embebido en parafina y tincin con eosinahematoxilina. Resultados. Las clulas obtenidas se adheran fcilmente al plstico y tenan una morfologa fibroblstica Para comprobar que no haba contaminacin con adipositos se analiz el marcador CD36, el cula fue negativo en ms del 95% de la poblacin analizada. Ms del 90% de las clulas mesenquimales obtenidas fueron negativas para CD31 y CD45, marcadores de la lnea hematopoytica y endotelial, respectivamente. Menos de un 5% de las clulas expresaron CD34. El porcentaje de clulas que expresaban CD54 oscil entre un 30 y un 80%. La expresin de CD49d oscil entre un 10 y un 80%, siendo menor la expresin en las clulas obtenidas de la grasa de conejo. La expresin de CD105 fue baja (10-25%) para c onejo y oveja. Sin embargo, dicha expresin supero el 90% en clulas obtenidas de grasa humana . Fueron positivas para CD13, CD44, CD59 y CD166. Los resultados obtenidos en los estudios histopatolgicos indicaron que tanto las clulas mesenquimales obtenidas de tejido adiposo de oveja como de conejo tenan capacidad para diferenciar hacia condrocitos, mientras que el anlisis realizado en clulas mesenquimales obtenidas de grasa humana indicaron una peor diferenciacin hacia dicho linaje. Sin embargo, actualmente se estn realizando estudios con otros medios de diferenciacin , que parecen dar mejores resultados anatomo-patolgicos en cuanto al grado de diferenciacin celular hacia condrocitos.

Paciente (m post-Tx) 1 2 3 4 5 6 7

Biopsia N muestras Ab anti-GSTT1 Tincin Diagnstico previas con fecha biopsia (score) C4d histolgico ab anti-GSTT1 21 85 12 58 24 21 32 3 5 0 1 2 1 0 Neg nd >320 >320 nd 1/160 1/320 0 1+ 3+ 3+ 1+ 3+ 4+ HAIdn HAIdn HAIdn HAIdn HAIdn HAIdn HAIdn

Conclusin. La presencia de depsitos C4d en pacientes con ab anti-GSTT1 refuerza la hiptesis de que la HAIdn es una forma particular de rechazo mediado por anticuerpos en pacientes con la incompatibilidad gentica GSTT1.

44. IMPORTANCIA RELATIVA DE LA COMPATIBILIDAD HLA A NIVEL ALELICO EN EL TRASPLANTE DE SANGRE DE CORDON UMBILICAL EN ADULTOS. Planelles D1, Cantero S2, Solves P3, Moscard F2, Rodrguez M1, Granell R1, Gmez I1, Alba E1, Jarque D1, Vila E1, Laguarda E1, Puig N1, Montoro J1, Sanz G2. 1Unidad de Histocompatibilidad, Centro de Transfusin de la Comunidad Valenciana. 2Unidad de Trasplante de Mdula, Hospital La Fe, Valencia. 3Banco de Cordon Umbilical, Centro de Transfusin de la Comunidad Valenciana. El xito del trasplante de progenitores hematopoyticos parece depender en gran medida de la compatibilidad HLA a nivel allico en los loci A, B, C y DRB1. En los ltimos aos, el trasplante de sangre de cordn umbilical (TSCU) ha cobrado importancia debido a las ventajas que ofrece sobre el trasplante de mdula o sangre perifric a; entre stas, la ms baja incidencia de enfermedad injerto contra husped (ICH), lo que permite realizar el trasplante con menor restriccin de compatibilidad HLA. Sin embargo, se desconoce el impacto diferencial de las disparidades HLA entre donante y receptor (clase I vs II single locus vs multiloci) en la evolucin de este tipo de trasplante, principalmente en adultos. El objetivo de este trabajo ha sido evaluar el impacto del nmero y clase de disparidades HLA, en uno o ms loci, en la evolucin de pacientes adultos sometidos a TSCU. La METODOLOGIA seguida para el tipaje HLA fue por alta resolucin (PCR-SSP, SSO) para los loci A, B, C, DRB1, DQB1 y DPB1. Para el anlisis del impacto de disparidades multiloci se evaluaron las combinaciones de loci: A+B+DRB1, A+B+C+DRB1, A+B+C+DRB1+DQB1 y A+B+C+DRB1+DQB1+DPB1. Todos los anlisis se realizaron considerando las disparidades a nivel allico y genrico y tanto en direccin ICH como HCI (husped contra injerto). RESULTADOS: El grado de compatibilidad HLA considerando HLA-A y B a nivel genrico y DRB1 a nivel allico, fue 6/6 en el 5% de los casos, 5/6 en el 35% y 4/6 en el 60%. El anlisis multivariante indic que slo la presencia de disparidad a nivel genrico en el locus HLA-A en direccin HCI se relacion con el prendimiento mieloide. En conclusin, los resultados obtenidos indican que el grado de compatibilidad HLA en el TSCU en adultos no parece ser tan decisivo como en nios. Por tanto, el tipaje HLA de alta resolucin para los loci A, B, C, DRB1, DQB1 y DPB1 no parece esencial en las bsquedas de unidades de cordn para pacientes adultos con enfermedades hematolgicas malignas.

43. ES LA HEPATITIS AUTOINMUNE DE NOVO UNA FORMA DE RECHAZO HUMORAL EN EL TRASPLANTE HEPTICO? Aguilera I, Sousa JM, Wichmann I, Gaviln F, Bernardos A, NezRoldn A. HH UU Vrgen del Rocio. La hepatitis autoinmune de novo (HAIdn) es una complicacin del Tx heptico que ha generado una cierta controversia desde que se describi en 1998. Si bien es cierto que las alteraciones morfolgicas en biopsia heptica son similares a las de la HAI clsica, se trata de una respuesta inmune frente al aloinjerto. Si a esto le sumamos la presencia de ab anti-GSTT1 debido a incompatibilidad gentica en el gen de la glutation S-transferasa T1 (GSTT1) entre donante+ y receptor nulo, la hiptesis ms directa es la del rechazo humoral. Objetivo. Comprobar la presencia de depsitos C4d (considerado marcador de rechazo humoral) en biopsias hepticas de siete pacientes diagnosticados de HAIdn que presentaban anticuerpos anti-GSTT1 especficos de donante. Material y Mtodos. Biopsias obtenidas entre los 12-85 meses post-Tx con diagnstico de HAIdn fueron utilizadas para detectar depsitos C4d con el ab policlonal anti-C4d (Biomdica, Viena). El grado de tincin C4d se valor de forma semicuantitativa: 0, ninguna; 1+, dbil; 2+, moderada; 3+, fuerte (Troxell, 2006). Los ab antiGSTT1 fueron estudiados por WB y ELISA con la protena recombinante humana. Resultados. Seis pacientes presentaron depsitos C4d+ en el estroma de la zona portal y uno fue C4d- con muestra de suero negativa para los ab anti-GSTT1 tras un ao en tratamiento. En los pacientes 2 y 5 que tambin estaban en tratamiento con esteroides antes de la biopsia, tambin se observ disminucin de los C4d+ aunque el titulo de ab cercano a la biopsia no pudo ser comprobado.

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45. SOPORTE INMUNOLGICO EN EL DIAGNSTICO DE RECHAZO AGUDO EN TRASPLANTE CARDIACO. Blanco Garca RM1, Lpez lvarez MR2, Pascual Figal DA3, Garrido Bravo I3, Botella C1, Salgado Cecilia MG1, Muro M2, Garca Alonso AM2, lvarez Lpez MR2, Minguela A2. 1Servicio de Inmunologa. 2Servicio de Inmunologa CIBERehd. 3Servicio de Cardiologa. Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca. Introduccin. El diagnstico de rechazo agudo (RA) en transplante cardiaco se basa en la sospecha clnica y/o en la presencia de infiltrados inflamatorios en la biopsia endomiocrdica. Sin embargo, ambas formas de diagnstico presentan limitaciones y conllevan un aumento de la inmunosupresin no exento de complicaciones. En los ltimos aos, nuestro grupo ha utilizado con xito marcadores inmunolgicos, como la expresin de CD28 HLA en clulas de sangre perifrica (SP) para la monitorizacin del rechazo en el seguimiento de trasplantes cardiacos. Objetivos y mtodos. Se pretende establecer si dichos marcadores son tiles en pacientes que no puedan esperar al diagnstico histolgico. Se estudian 51 trasplantes cardiacos, c lasificados en: sinRA (NRA), con RA-Bipsico/Clnico (RA-BC, n=15), con RA-Bipsico-solo (RA-BS, n=8), con RA-Clnico-solo (RA-CS, n=4). En estos pacientes se estudi por citometra de flujo la expresin de CD28 en linfocitos CD4+ y CD8+ y de HLA clase-I en linfocitos totales, en el pre-trasplante y 1, 2, 3, 4, 6 y 12 meses post-trasplante. Resultados. La expresin de CD28 en linfocitos CD4+ y CD8+ y de HLA en linfocitos totales, fue superior (p<0.05) en pacientes con RA-BC y RA-BS que en NRA. Sin embargo, en los pacientes con RACS la expresin de dichas molculas fue similar a la de los del grupo NRA. Al estudiar estos parmetros en los das en los que se realizaron los diagnsticos de RA, se comprob que la expresin de CD28 y HLA era superior, y se incrementaron ms, respecto al pre-trasplante, en pacientes con RA (RA-BC y BS) que en los que slo se basaron en criterios clnic os (RA-CS). Conclusin. El estudio de la expresin de CD28 sobre linfocitos CD4+ y CD8+, y de HLA en linfocitos totales, podra ser de ayuda para la correcta aplicacin del tratamiento antirrechazo, en pacientes en los que bajo sospecha clnica, no se disponga de los datos histolgicos.

te. Las cifr as absolutas (clulas/l) de linfocitos CD4+, CD4+CD25high, CD4+CD25-/lowCTLA-4cit+ (no-nTr) y CD4+CD25highCTLA-4cit+ y la expresin de CD62L y CD28 en dichas subpoblaciones, se han estimado mediante citometra de flujo. Los pacientes se clasificaron en dos grupos: rechazo agudo (RA, n=23) y no rechazo agudo (NRA, n=107). Resultados. Ambos grupos partieron de cifras pretrasplante similares de linfocitos CD4+ y CD4+CD25high. Sin embargo, las clulas no-nTr y CD4+CD25highCTLA-4cit+ presentaron cifras pretrasplante superiores en el grupo RA. En el post-trasplante, ambos subtipos de clulas CTLA-4cit+ (nTr y no-nTr) decrecieron en el grupo RA. Por el contrario, en el grupo NRA, que partan de cifras basales menores, las clulas nTr se incrementaron en el post-trasplante, con cifras mximas al ao de evolucin. En estos pacientes, las clulas CD4+ no-nTr CTLA4cit+ mantuvieron sus valores constantes. La expresin de CD62L en los diferentes subtipos de clulas no mostr diferencias entre los pacientes, a excepcin de los primeros 15 das post-trasplante, donde clulas T CD4+ de fenotipo activado (probablemente alorreactivas) CD25/lowCTLA-4cit+CD62L- se incrementaron en RA. Conclusiones. Los pacientes con mejor aceptaci n temprana del injerto heptico presentaron cifras de c lulas nTr CD4+CD25highCTLA-4cit+ ms elevadas al ao de evolucin, por lo que estas clulas podran estar favoreciendo su aceptacin a largo plazo.

47. ESTUDIO DE LA DINMICA DE RECONSTITUCIN DE LINFOCITOS T CD4+CD25+ EN TRASPLANTADOS CARDACOS TRATADOS CON 2 DOSIS DE DACLIZUMAB. Lanio Amador N, Sarmiento Marchese E, Gallego Lpez A, Navarro J, Fernndez-Yaez J, Palomo J, Fernndez-Cruz E, Carbone Campoverde J. Departamentos Inmunologa y Cardiologa. HGU Gregorio Maran. Madrid. Introduccin. El daclizumab es un anticuerpo monoclonal humanizado, que bloquea especfica y antagnicamente la subunidad alfa (CD25) del receptor de alta afinidad de la IL2. Su utilizacin como tratamiento inductor en el trasplante cardaco se basa en su capacidad transitoria de inhibir la expansin clonal de los linfocitos T activados. Objetivos: Evaluar el efecto del daclizumab sobre la subpoblacin CD4/CD25+ en pacientes sometidos a trasplante cardaco (TC). Determinar las posibles difer encias en la dinmica de reconstitucin inmunolgica y su relevancia clnica. Mtodos: Estudio prospectivo 27 pacientes TC (edad=5611; 21H/6M). Induccin: 2-dosis daclizumab, 1 mg/kg IV (da 0 y 14); mantenimiento: tacrolimus (n=26) o ciclosporina (n=1), mofetil micofenolato y prednisona. Determinaciones seriadas de subpoblaciones T CD4/CD25+, CD4/CD25high y CD4/CD38+DR+; Pre-TC, 7d, 30d, 90d y 180d. Citometra de flujo en sangre perifrica (FACSCalibur). Resultados. Dos dosis de daclizumab son suficientes para mantener los niveles de CD4/CD25+ prcticamente indetectables hasta los 90d, mientras que los niveles de CD4/CD38+DR+ permanecen estables. El patrn de reconstitucin de CD25 es gradual y con diferencias entre pacientes. Al estratificar en base al % CD4/CD25+ a los 90d (G1<11%<G2<43%<G3) se observa una tendencia de asociacin entre G2 y ausencia de infeccin (Chi-cuadrado p=0,1). La comparacin de medias indica que los pacientes con rechazo tenan menores porcentajes de CD4/CD25+ a los 30d (0,11% vs 0,60%, p=0,05), mientras que no se observan diferencias entre infectados y no infectados.

46. SOPORTE INMUNOLGICO EN EL DIAGNSTICO DE CLULAS REGULADORAS NATURALES CD4+CD25highCTLA-4cit+ EN TRASPLANTE HEPTICO. Salgado Cecilia MG1, Lpez Alvrez MR2, Blanco Garca RM1, Legaz Prez I2, Botella C1, Lucas Aroca D1, Martinez Snchez MV1, Miras M3, lvrez Lpez MR. 1Servicio de Inmunologa. 2Centro de Investigacin Biomdica en Red de Enfermedades Hepticas y Digestivas (CIBERehd). 3Servicio de Medicina Digestiva. Centro de Investigacin Biomdica en Red de Enfermedades Hepticas y Digestivas (CIBERehd). Hospital U. Virgen de la Arrixaca. Introduccin. Las clulas reguladoras naturales CD4+CD25high (nTr) son decisivas en el mantenimiento de la homeostasis en las diferentes respuestas del sistema inmune, incluida la respuesta alognica. Aunque no est claro el papel que juegan en trasplante heptico (TH). Objetivo y Metodologa. Evaluar el papel que juegan las nTr en la aceptacin de injertos hepticos. Se estudiaron las nTr en sangre perifrica de 130 receptores de TH, en 780 muestras correspondientes a los das 0 (pretrasplante), 7, 15, un mes, tres meses y un ao post-trasplan-

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Conclusiones. La expresin gradual de CD25 posterior al tratamiento con daclizumab, refleja un efecto inmunomodulador, adems de bloqueador, que no afecta la expresin de marcadores de activacin de los linfocitos T CD4. As mismo, los distintos patrones de reconstitucin sugieren diferenci as entre pacientes, lo que podra tener relevancia clnica en la deteccin anticipada de aquellos con mayor riesgo de sufrir eventos infecciosos o de rechazo.

48. AUSENCIA DE ASOCIACIN DE LOS POLIMORFISMOS GNICOS DE LAS CITOQUINAS CON EL SNDROME DE LA BRONQUIOLITIS OBLITERANTE Y EL RECHAZO AGUDO EN TRANSPLANTE PULMONAR. Toro Ruiz A, Borro Mate JM, Snchez Mozo MP, de la Torre Bravos M, Rey Garca C, Alonso Blanco C. Complejo Hospitalario Juan Canalejo. Introduccin. La principal causa de prdida del injerto pulmonar es el desarrollo del sndrome de la bronquiolitis obliterante (BOS), un proceso al que se han asociado diversos factores de riesgo inmunolgicos como la incompatibilidad HLA, los anticuerpos anti-HLA, y la presencia de c iertos polimorfismos genticos de citoquinas. Objetivo. Determinar si existe alguna correlacin entre los polimorfismos genticos de una serie de citoquinas y la presencia de rechazo agudo y/o el desarrollo de BOS en los pacientes transplantados de pulmn. Pacientes y mtodos. El estudio comprende 93 transplantes pulmonares realizados en el CHU Juan Canalejo de 1999 a 2004, con al menos un ao de seguimiento. La presencia de episodios de rechazo agudo fue detectada en un 43% de los pacientes (AR+), mientras que un 39% de los pacientes haban desarrollado BOS en el momento del estudio. El genotipaje de las citoquinas se realiz utilizando el kit comercial (One-Lambda Inc., CA), que permite detectar polimorfismos de cinco citoquinas (IL-10, IFN-g, TGF-b1, TNF-a y IL-6). El anlisis estadstico se realiz mediante test de chi-cuadrado y Fisher, estableciendo el nivel de significacin en p<0.05. Resultados. Al comparar los distintos grupos de estudio, encontramos una serie de diferencias en las frecuencias genotpicas, allicas y de los fenotipos secretores de la citoquinas. As, el fenotipo alto secretor de la IL-10 est aumentado en los pacientes BOS+ respecto a los pacientes BOS- (33% vs. 19%), mientras que el fenotipo alto secretor del TNF- a se encontraba presente en el 34% de los pacientes AR+ y nicamente en el 21% de los pacientes AR-. Sin embargo, ninguna de estas diferencias alcanzaba significacin estadstica (p>0.05). Conclusin. Nuestros resultados muestran que la presencia de los diferentes polimorfismos genticos de las citoquinas estudiadas no tiene un efecto directo en la presencia de episodios de rechazo agudo o el desarrollo de BOS en nuestra poblacin.

Objetivo. Evaluar la presencia de Ac anti-HLA clase I y clase II tras el TC y su patrn evolutivo. Material y mtodos: Estudio longitudinal de 59 pacientes con TC (79,7% varones, edad media 49,7+/-11,1 aos). Se evalu el suero pre y post-TC a 1, 3, 6 y 12 meses para los Ac anti-HLA clase I y clase II mediante Flow-PRA. Se cuantific para cada determinacin la positividad en 1, 2, 3 y 4 segn fuese < 10%, 10-25%, 25-75% y 75-100%. Los datos clnicos evaluados fueron rechazo cardiaco, f uncin ventricular y supervivencia. Resultados. Se detectaron Ac anti-HLA I en algn momento postTC en el 37,3% y HLA II en el 10,1%. El porcentaje de deteccin de Ac anti-HLA I a 1, 3, 6 y 12 meses fue de 17,3%, 20,9%, 16,7% y 18,2%. El grado de positividad (de 1 a 4) fue de 55,6%, 22,2%, 11,1% y 11,1 para 1 mes; 77,8% y 22,2% (grado 1 y 2) para 3 meses; 55,6%, 22,2% y 22,2% (grado 1, 2 y 3) para 6 meses; 75%, 12,5% y 12,5% (grado 1, 2 y 3) para 12 meses. El porcentaje de deteccin de Ac anti-HLA II a 1, 3, 6 y 12 meses fue de 5,8%, 4,5%, 5,8% y 2,3%. El grado de positividad (de 1 a 3) fue de 33,3%, 33,3% y 33,3% para 1 mes; 100% (grado 3) para 3 meses; 33,3% y 66,7% (grado 2 y 3) para 6 meses; 100% (grado 3) para 12 meses. No hubo correlacin entre la deteccin/intensidad de Ac anti-HLA clase I y c lase II y rechazo cardiaco. La supervivencia a 12 meses fue del 100% y todos los pacientes tuvieron una funcin ventricular normal, con una media de FEVI del 66,9 8,3%. Conclusiones. Los Ac anti-HLA clase I y clase II estn presentes en un 37,3% y 10,1% de los pacientes en el primer ao tras el TC. En la mayora de los casos, la deteccin es inferior a un 10% y el significado clnico de la presencia es incierto. Se necesitan estudios con mayor nmero de pacientes y seguimiento para valorar la utilidad de estas determinaciones en el seguimiento a largo plazo post trasplante.

50. INFLUENCIA DE LA COMPATIBILIDAD HLA EN LA EVOLUCIN DEL TRASPLANTE ALOGNICO DE PROGENITORES HEMATOPOYTICOS. Marin Rubio LA, Alcoceba M, Balanzategui A, Sarasquete ME, Chilln MC, Santamaria C, Corral R, Garca-Sanz R, San Miguel J, Gonzalez M. Servicio de Hematologa, Hospital Universitario de Salamanca. Introduccin. El transplante alognico de progenitores hematopoyticos (TAPH) es un procedimiento teraputico potencialmente curativo para un amplio grupo de enfermedades hematolgicas. El xito del transplante est condicionado por el grado de compatibilidad HLA entre receptor y donante. Sin embargo, aproximadamente 1/3 de los pacientes tienen un familiar HLA compatible. Objetivo. Investigar la influenci a del grado de identidad HLA y la evolucin de pacientes que han recibido un transplante alognico de progenitores hematopoyticos. Pacientes: Se incluyeron en el estudio 270 pacientes adultos consecutivos diagnosticados de hematopata maligna sometidos a un TAPH en un nico centro. Las caractersticas de la serie fueron: mediana de edad: 47 (15-70); Varn/Mujer: 153/117; Disparidad de sexo: 48%. Diagnstico: 68 Leucemia mieloblstica aguda, 38 Linfoma no Hodgkin, 31 Leucemia linfoblstica aguda, 31 Leucemia mieloide crnica, 31 Mieloma mltiple, 31 Sndrome mielodisplsico, 19 Leucemia linftic a crnic a (LLC), 11 Linfoma de Hodgkin (LH), 6 Sndrome mieloproliferativo, 1 LLC+LH, 3 Otros; Rgimen de acondicionamiento: 158 RIC/112 convencional; SP/MO: 235/35. La mediana de seguimiento fue de 52 meses (2-162). Mtodos: Tras la extraccin del ADN genmico se realiz el tipaje HLA segn el estndar de la European Federation of Immunogenetics: tipaje de baja resolucin para HLA-A, -B y DRB1 mediante PCR-rSSO para aquellos

49. LA EVOLUCIN DEL NIVEL DE ANTICUERPOS ANTI-HLA POR FLOW -PRA EN EL PRIMER AO POST-TRASPLANTE CARDIACO Y SU SIGNIFICADO CLNICO. Domenech Garca N, Crespo Leiro M, Moscoso Galn I, Pani Agua Martin MJ, Naya Leira C, Grille Cancela Z, Estevez Cid F, Castro Beiras A. Complejo Hospitalario Juan Canalejo. Introduccin. La deteccin de anticuerpos (Ac) anti-HLA clase I y clase II es variable en los pacientes con trasplante cardiaco (TC). El significado de la intensidad de deteccin y momento de aparicin de dichos anticuerpos no es bien conocido.

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transplantes con donante familiar, y tipaje de alta resolucin de HLAA, -B, -C y DRB1 para los donantes no emparentados. El anlisis estadstico se realiz mediante lostest O2 y t de Student. Se aplic el anlisis del log-rank para comparar diferencias entre curvas de supervivencia mediante SPSS 15.0 Software. De acuerdo al status del HLA, los transplantes se clasificaron en tres grupos: i) TAPH con donante emparentado HLA idntico (6/6 identidades); ii) TAPH con donante no emparentado HLA idntico (8/8 identidades) y iii) TAPH con disparidad en HLA (6-7/8 identidades). Resultados. Comparando los dos grupos de pacientes que recibieron transplante de un donante HLA idntico, se observ que la supervivencia del grupo de trasplantes con donante emparentado era semejante a la de los del grupo de no emparentados (49% vs 45%, p>0.05). Sin embargo, aquellos pacientes que recibieron un transplante con al menos una disparidad HLA mostraron una peor supervivencia que aquellos que recibieron un transplante con identidad HLA completa (38% vs 49%, p=0.022). Conclusin. El transplante de progenitores hematopoyticos proveniente de un donante no emparentado HLA idntico tiene una evolucin similar que en aquellos cuyo donante es emparentado HLA idntico.

52. EMPLEO PROFILCTICO DE RITUXIMAB EN EL TRASPLANTE RENAL DE PACIENTES CON LES Y RIESGO INMUNOLOGICO. Bernal MJ1, Garca T2, Martnez de Saavedra M1, Mazuecos A2, Nieto A1, Brieva JA1, Rivero M2, Rodriguez C1. 1Servicio de Inmunologa. 2Servicio de Nefrologa. Hospital Universitario Puerta del Mar. Cdiz. Objetivo. Rituximab se ha empleado en el tratamiento de enfermedades autoinmunes y en la profilaxis del rechazo humoral en trasplante (Tx). Se presenta la evolucin de 3 pacientes con LES y alto riesgo inmunolgico que recibieron un Tx renal y fueron pretratados con Rituximab. Pacientes. Tres mujeres de 36, 39 y 47 aos. La nefropata lpica fue la causa de la insuficienci a renal crnica. Las pacientes presentaron manifestaciones clnicas severas y brotes de actividad durante su estancia en dilisis, tenan ttulos altos de autoAc, historia de PRA positivos poliespecficos y pruebas cruzadas donante-receptor positivas previas. Mtodos. Se realizaron pruebas cruzadas mediante citotoxicidad celular con DTT, anlisis de Ac HLA donante-especficos mediante tecnologa luminex y monitorizacin del tratamiento con Rituximab (cuantificacin de inmunoglobulinas (Ig) sricas, autoAc (ANA, DNAds, ENA, fosfolpidos) y poblaciones linfocitarias B. Resultados. Tras 23, 20 y 5 meses de seguimiento, la evolucin de la funcin renal ha sido muy buena en las 3 pacientes. No han sufrido episodios de rec hazo agudo ni manifestaciones sistmicas de LES. Rituximab fue bien tolerado. Rituximab indujo deplecin total de linfocitos B en las 3 pacientes, que se mantuvo durante 18 y 9 meses en 2 pacientes. En la tercera paciente persiste la deplecin de linfocitos B tras 5 meses de seguimiento. El nivel de autoAc descendi en las 3 pacientes tras el tratamiento y, en las 2 pacientes que han inic iado la reconstitucin de los linfocitos B, los autoAc han iniciado un ligero ascenso. La reconstitucin se inic i a expensas de linfocitos B naive (CD27-) y, posteriormente, de linfocitos B memoria (CD27+). El nivel de Ig sricas se ha mantenido dentro de la normalidad y no se han detectado Ac. HLA donante-especficos. Conclusiones. Rituximab puede ser de utilidad como tratamiento profilctico en Tx renal de pacientes con LES activos y alto riesgo inmunolgico humoral de prdida del injerto.

51. PREVALENCIA DE ANTICUERPOS ANTI-LINFOCITOS T NO ANTI HLA DE CLASE I EN SUEROS DE PACIENTES EN LISTA DE ESPERA DE TRASPLANTE REANAL. de las Fuentes BD, lvarez A, Caro Oleas JL, Nez Roldn A, Gonzlez Escribano MF. Servicio de Inmunologa. Hospital Universitario Virgen del Roco. Introduccin. La prueba cruzada positiva frente a linfocitos T de un donante es una contraindicacin absoluta para el trasplante renal. Esta prueba cruzada positiva constituye en la mayora de los casos un reflejo de la presencia de anticuerpos dirigidos frente a molculas HLA de clase I del donante en el suero del paciente. Sin embargo, en determinados casos los anticuerpos dirigidos frente a linfocitos T pueden reconocer otras molculas que sean irrelevantes para el trasplante en la superficie de estas clulas. Objetivo. Determinar el porcentaje de sueros con anticuerpos frente a linfocitos T no dirigidos frente a molculas HLA de clase I en la lista de espera de trasplante renal. Material y mtodos. Se incluyeron 318 sueros rec ibidos en el laboratorio de forma consecutiva en el ltimo trimestre de 2007 obtenidos de pacientes en lista de espera para trasplante renal. Estos sueros fueron estudiados en paralelo mediante citotoxicidad dependiente de complemento (CDC) frente a un panel de linfocitos T obtenidos de 40 donantes diferentes y citometra con microesferas recubiertas de molculas HLA (Luminex). Resultados. En el 97.5% de los casos (310 sueros) ambas tcnicas fueron concordantes, en el resto de los sueros (n=8) se encontraron discordancias. Entre las discordancias, en el 50% de los casos (4 de 8), el Luminex result positivo y la CDC negativa y en el 50% restante encontramos un resultado negativo para Luminex y positivo para CDC. En estos 4 sueros se investig la presencia de anticuerpos anti-HLA de clase IgM, resultando todos negativos. Por tanto, la frecuencia de sueros que presenta anticuerpos fr ente a linfocitos T no dirigidos frente a molculas HLA de clase I es del 1.3% (4/318) en nuestra lista de espera. Conclusin. El porcentaje de sueros que presentan anticuerpos no dirigidos frente a molculas HLA que pueden dar lugar a una prueba cruzada positiva frente a linfocitos T es bajo.

SESIN 4: INMUNOLOGA TUMORAL - I Moderadores: Dr. Francisco Ruiz-Cabello (Granada), Dr. Ignacio Melero (Navarra) 53. NUEVAS APROXIMACIONES EN INMUNOTERAPIA ANTITUMORAL: UNIN DE INTERFERON-GAMMA A NANOPARTCULAS MAGNTICAS. Mejas Laguna R1, Costo R2, G. Roca A2, Arias CF1, Veintemillas-Verdaguer S2, Gonzlez Carreo T2, del Puerto Morales M2, Serna CJ2, Maes S1, Barber DF1. 1Centro Nacional de Biotecnologa. 2Instituto de Ciencia de Materiales de Madrid. La unin de citoquinas a nanopartculas magnticas ha sido desarrollada como un mtodo novedoso de liberacin local de drogas antitumorales. Hemos estudiado la unin y liberacin de Interferon-gamma (IFN-&#947;) murino en nanopartculas magnticas sintetizadas mediante tres mtodos distintos (coprecipitacin, descomposicin en medio orgnico y laser-pirlisis) y modificadas en su superficie c on

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diferentes molculas para alcanzar una carga superficial negativa a pH 7 y permitir la interacc in con el IFN-&#947;, sin perder estabilidad. Hemos incubado las dispersiones magnticas con IFN-&#947; y hemos estudiados cules son las condiciones ptimas de interaccin entre esta citoquina y las partculas, as como su capacidad de liberacin a distinto pH y en funcin del tiempo. Las partculas sintetizadas mediante descomposicin en medio orgnico y modificadas con cido dimercaptosuccnico presentaron la mayor capacidad de unin/liberacin. La unin a estas nanopartculas de IFN-&#947; u otras biomolculas permitira concentrar stas en lugares especficos de accin para el tratamiento del cncer u otras enfermedades.

54. EL INMUNOMODULADOR PSK POSEE ACTIVIDAD CITOTXICA IN VITRO FRENTE A LNEAS CELULARES TUMORALES. Berruguilla Prez E1, Romero Garca I1, Garrido C1, Linares I1, Collado A1, Algarra I2, Garrido F1, Garca-Lora AM1. 1Hospital Universitario Virgen de las Nieves. Granada. 2Departamento de Ciencias de la Salud. Universidad de Jan. PSK (protein bound polisaccharide) deriva de la cepa CM.101 del hongo Coriolus versicolor y ha mostrado actividad antitumoral in vitro e in vivo en modelos tumorales humanos y modelos experimentales. Varios ensayos clnicos han mostrado que PSK posee un gran potencial en la terapia adyuvante contra el cncer, pr esentando resultados positivos frente a tumores de diferente tipo: gstrico, esofgico, colorrectal, mama y pulmn. Estas propiedades antitumorales de PSK se le han atribuido a su efecto inmunomodulador, principalmente debido a la proliferacin y activacin de clulas NK. En este estudio hemos analizado el efecto citotxico directo sobre lneas celulares tumorales. Diferentes lneas celulares tumorales, derivadas de distintos tipos de tumores, fueron tratadas con PSK, midindose su tasa de proliferacin mediante la incorpor acin de BrdU y relizndose contaje celular con azul trypan. El anlisis del ciclo celular se realiz mediante la incorporacin de BrdU y marcaje con 7-AAD. Se evalu la apoptosis mediante un ensayo de anexina V. La expresin de caspasa 3 activa se analiz mediante inmunofluorescencia y citometra de flujo. Los resultados mostraron que PSK inhibi in vitro el crecimiento de diferentes lneas tumorales, disminuyendo su tasa de proliferacin. La inhibicin de la proliferacin vari desde un 22% a un 84%. El anlisis del ciclo celular mostr una acumulacin de las clulas en la fase G0/G1 y un fuerte descenso del nmero de clulas en la fase S. La expresin de Anexina V en clulas tumorales tratadas con PSK muestra una induccin de la apoptosis. La expresin de caspasa 3 se increment en algunas de las lneas estudiadas. Estos resultados indican que PSK tiene un efecto citotxico directo in vitro sobre clulas tumorales, lo que puede sumarse a su accin inmunomoduladora sobre las clulas NK.

clulas plasmticas (CP) presentes en la mdula sea (MO), coexistiendo en proporciones variables CP normales y CP tumorales. El MGUS es considerado como un estadio premaligno que progresa, en la mayora de los casos, hasta la fase maligna de la enfermedad (mieloma mltiple). Objetivos. Estudio de la proliferacin de las CP tanto tumorales como normales presentes en pacientes con MGUS. Relacin de la proliferacin con los mecanismos de apoptosis de las CP. Mtodos. Aspirados de MO de individuos sanos y diagnosticados de MGUS. Cultivos de CP para ensayos de proliferacin (incorporacin de BrdU). Deteccin de apoptosis espontnea e inducida por anticuerpos aCD95 mediante ensayos de anexina. Las poblaciones de CP as como el resto de antgenos estudiados se detectaron mediante citometra de flujo. Resultados. Las CP normales de la MO de enfermos con MGUS muestran una capacidad proliferativa superior a las CP tumorales con las que coexisten (1.2% vs. 0.4%). Sin embargo, tanto el porcentaje como la intensidad media de florescencia (IMF) de la protena Bcl-2 f ueron mayores en las CP tumorales de enfermos de MGUS; por el contrario, la expresin de la protena CD95 fueron mayores en CP normales de estos mismos enfermos, tanto en trminos porcentuales como de IMF. En consonancia con estos hallazgos, las CP normales mostraron una apoptosis espontnea superior a la observada en las CP clonales y fueron discretamente sensibles a la muerte inducida por el anticuerpo aCD95 (c lon CH11), mientras que las CP tumorales no lo fueron. Conclusiones. La proliferacin disminuida de las CP tumorales en el MGUS se ve compensada con una mayor supervivencia de las mismas. Ambos mecanismos mantienen la poblacin clonal controlada y en coexistencia c on las CP normales en esta primera fase de la enfermedad.

56. POLIMORFISMOS DE IL-10 Y EVOLUCIN DESFAVORABLE DE PACIENTES CON HEPATOTOXICIDAD IDIOSINCRSICA A FARMACOS (DILI). Senz-Lpez P1, Pachkoria K2, Lucena MI2, Crespo E3, Borraz Y2, Ruiz-Cabello F1, Andrade RJ4 . 1Servicio de Inmunologa, H. Virgen de las Nieves, Granada. 2Servicio de Farmacologa Clnica, 4Unidad de Hepatologa, H. Universitario Virgen de la Victoria, Facultad de Medicina, Mlaga. 3Departamento de Farmacologa, Universidad de Granada. El balance entre citocinas inmunorreguladoras (IL-4, IL-10) y proinflamatorias (TNF-) podra jugar un papel fundamental en la modulacin de la respuesta del sistema inmune innato al efecto txico de los frmacos en el hgado siendo determinante en la aparicin final de lesin. Nuestro objetivo fue determinar la influencia de los polimorfismos del gen promotor de IL-10, IL-4 y TNF- en el desarrollo de hepatotoxicidad idiosincrsica y de sus caractersticas clnicas. Mtodos. Se determin la frecuencia de tres polimorfismos localizados en el gen promotor de la IL-10 (-1082 (G/A), -819 (C/T), -592 (C/A), IL-4 (-590 C/T)) Y TNF (308 (G/A)) en 140 pacientes de DILI y 268 controles mediante ensayo de discriminacin allica TaqMan 5. Resultados. Se analizaron 140 pacientes. La edad media fue de 51 aos (13-82 aos) sin diferencias en la distribucin por sexos. Las frecuencias alelicas, genotpicas para la IL-10, IL-4 y TNF no mostraron diferencias significativas entre los pacientes con DILI y los controles. Los pacientes con las variantes polimrficas para la IL-4, TNF- y aquellos con alelos salvajes no mostraron diferencias con respecto al tipo

55. BALANCE ENTRE PROLIFERACIN Y APOPTOSIS EN CLULAS PLASMTICAS NORMALES Y TUMORALES EN ENFERMOS CON GAMMAPATA MONOCLONAL DE SIGNIFICADO INCIERTO. Martnez Viambres E, Garca Trujillo JA, Alcal Pea MI, Rodrguez Martn E, Coll Mart J, Roldn Santiago E. Hospital Ramn y Cajal. Madrid. Introduccin. La gammapata monoclonal de significado incierto (MGUS) es una neoplasia caracterizada por la expansin clonal de las

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de dao, presentacin clnica y evolucin del dao heptico. El anlisis del genotipo de la IL-10 (-1082) demostr la existencia de un desarrollo ms temprano de la hepatotoxicidad en el caso de mujeres con el genotipo bajo productor de IL-10, (p<0.03). El haplotipo bajo productor de IL-10 fue mas prevalerte en los pacientes DILI con ausencia de eosinofilia [Pc=0.004, OR= 5.29, 95% CI 2.04-13.67] y se asoci a un recuento mas bajo de eosinofilos en sangre perifrica (p<0.0002) comparado con el resto de haplotipos de IL-10. Los pacientes (10) que presentaron una evolucin mas desfavorable (fallo heptico fulminante, transplante heptico o muerte o dao grave con ictericia y actividad protrombina < 50%) exhiban un haplotipo bajo productor de IL10 y ausencia de eosinofilia. De la revisin de los 591 casos de hepatotoxicidad incluidos en el Registro Espaol en 36 casos (6%) tuvieron una evolucin desfavorable y ninguno de ellos present eosinofilia. Conclusiones. Los polimorfismos de la IL-10, IL-4 y TNF no parecen estar asociados a la susceptibilidad de desarrollar hepatotoxicidad en pacientes espaoles. La presencia del haplotipo bajo productor de la IL-10 podra favorecer una evolucin grave del dao heptico no inmunoalergico y junto con la ausencia de eosinofilia perifrica ser marcadores de evolucin desfavorable.

4) La actividad inhibidora mediada por CD33 es ms potente cuando se utiliza el mAb HIM3-4 que con WM53. Nuestros resultados indican que CD33m se expresa probablemente en la membrana de las clulas CD33+ y que puede ser reconocido por los anticuerpos HIM3-4 y H-110. El reconocimiento de CD33 por los mAb HIM3-4 tras el tratamiento con sialidasa sugiere que esta molcula podra estar asoci ada en cis (enmascarada) en la membrana de linfocitos T activados. La utilidad de HIM3-4 podra ser la de discernir entre los estados de enmascaramiento o desenmascaramiento de CD33 en estas clulas y su mayor efecto inhibidor podra aportar una mejora en la inmunoterapia actual de la leucemia mieloide aguda.

58. DIFERENTES LNEAS CELULARES DE MELANOMA HUMANO PRESENTAN ALTERACIONES EN EL FENOTIPO HLA TRAS SU CRECIMIENTO EN RATONES INMUNODEFICIENTES. Garrido C1, Berruguilla Prez E1, Linares Dickler I1, Romero Garca I1, Casares C1, Stefanski J1, Algarra I2, Collado A1, Garrido Torres-Puchol F1, Garca Lora AM1. 1Hospital Universitario Virgen de las Nieves. 2Departamento de Ciencias de la Salud. Universidad. Los ratones inmunodeficientes son normalmente utilizados para el crecimiento de lneas de clulas tumorales humanas y para el anlisis in vivo de terapias antitumorales. Estudios previos de nuestro grupo mostraron que el fenotipo HLA de la lnea celular de melanoma Ando-2 cambio tras su crecimiento en ratones inmunodeficientes. La lnea Ando-2 expresa slo un haplotipo HLA en la superficie celular, tras el crecimiento en ratones nude se produce una prdida total de expresin de molculas HLA de clase I. Los resultados son similares tras su crecimiento en ratones SCID-Bei ge. En este estudio hemos analizado este fenmeno en otras lneas celulares humanas de melanoma. Se han analizado tres lneas celulares de melanoma humano: FM93.2, E-179 y E-195. Los ratones nude fueron inyectados con 5 x 106 clulas, y cuando los tumores alcanzaron un dimetro de 10 mm, fueron extirpados y adaptados a cultivo celular. La expresin en superficie de molculas HLA de clase I fue estudiada mediante inmunofluorescencia indir ecta y ci tometra de flujo. El fenotipo HLA de clase I de las lneas celulares de melanoma antes del crecimiento en ratones fue: FM93.2 tena una prdida en la expresin de locus B, tanto E-195 como E-179 presentaban prdida de un haplotipo. Tras el crecimiento en ratones nude: E-179 presenta una prdida total de expresin del locus B y disminuci n en el locus A; E-195 presento una prdida completa en la expresin en superficie de molculas HLA de clase I, siendo irrecuperable tras inducc in con interfer n. En el caso de la lnea de melanoma FM93.2 no se encontr ningn cambio. Estos resultados muestran que de las cuatro lneas celulares de melanoma inyectadas en ratones nude, tres sufrieron cambios en la expresin de HLA de clase 1. Podemos as concluir que las alteraciones en la expresin de molculas HLA de clase I en lneas de melanoma despus del crecimiento en ratones nude es un fenmeno frecuente y reproducible.

57. MAPEO DE LAS ISOFORMAS CD33M Y CD33m CON UN PANEL COMERCIAL DE ANTICUERPOS MONOCLONALES ANTI-CD33. POSIBLE U TILIDAD DIAGNSTICA Y TERAPUTICA EN LEUCEMIAS. Hernndez-Caselles T, Prez-Oliva AB, Martnez-Esparza M, Corral-San Miguel R, Garca-Pearrubia P. Dpto. de Bioqumica y Biologa Molecular (B) e Inmunologa, Universidad de Murcia. CD33 (siglec-3) es un receptor de membrana que se expresa en numerosos tipos celulares de origen hematopoytico, de utilidad diagnstica y terapetica en varios tipos de leucemia. A pesar de la importancia derivada de su aplicacin clnica, hasta la fecha, este receptor permanece poco estudiado en comparacin con otros miembros de la familia como son CD22 (siglec-2) o la sialoadhesina (siglec-1), de manera que se desconocen muchas de sus caractersticas bioqumicas y funcionales. CD33 ha sido identificado como un receptor potencialmente inhibidor al poseer un dominio ITIM en su cola citoplsmica y reclutar las fosfatasas SHP1 y 2 cuando dicho dominio se encuentra fosforilado. Nosotros hemos descrito previamente que, en todas las poblaciones celulares que expresan CD33, tambin se expresa otra isoforma, al menos a nivel de mRNA, que llamamos CD33m, generada por splicing alternativo, isoforma que se caracteriza por la ausencia del dominio Ig extracelular de tipo C2 de CD33. En el presente trabajo hemos explorado la capacidad de diversos anticuerpos comerciales anti-CD33 utilizando clulas 293T transfectadas y diferentes lneas celulares para detectar la presencia de CD33m como protena de membrana y su papel en las clulas hematopoyticas. En el presente trabajo mostramos que: 1) Los mAb comerciales WM53, WM54, 4D3, P67.6 y My9 reconocen diferentes eptopos localizados en el dominio ms externo (dominio V) de CD33. 2) El mAb HIM3-4 es el nico que reconoce un eptopo localizado en el dominio C2. A su vez, este Ab es el nico que no marca clulas T activadas CD33+ que s se marcan con los dems mAb. HIM34 reconoce CD33 en aquellas clulas T activadas que han sido tratadas con sialidasa. 3) Los Ab H-110 detectan una isoforma de menor tamao expresada en membrana que probablemente es la isoforma menor CD33m.

59. LA CITOTOXICIDAD CELULAR MEDIADA POR RITUXIMAB CONTRA CELULAS B DE LLC ES POTENCIADA POR LA IL15. Moga E1, lvarez E1, Cant E2, Vidal S2, Juarez C2, Sierra J1, Briones J1. 1Servicio de Hematologa Clnica. 2Servicio de Inmunologa. Hospital de la Santa Creu i Sant Pau. Barcelona. Introduccin. Las leucemias linfocticas crnicas (LLCs) de clulas B tratadas con rituximab muestran un porcentaje bajo de respues-

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tas, debido en parte a la baja expresin de CD20. La citotoxicidad dependiente de anticuerpos (ADCC) es uno de los principales mecanismos de accin del rituximab. El receptor activador FcRIIIa, ampliamente expresado en clulas NK, juega un papel importante en la ADCC que media el rituximab. La IL-15 acta a diferentes niveles de la respuesta inmune al activar y expandir las clulas NK. Hemos estudiado el efecto de la IL-15 potenciando la citotoxicidad celular contra clulas B de LLCs que media el rituximab. Material y mtodos. La ADCC se analiz mediante estudios de liberacin de 51Cr utilizando clulas mononucleares de sangre perifrica (PBMC) obtenidas a partir de un gradiente de centrifugacin de buffy coats de 10 voluntarios sanos. Las clulas se cultivaron durante 24 horas en presencia de IL-15 (rhIL15; 10 ng/ml). Clulas mononucleares de 10 pacientes diagnosticados de LLC-B (> 90% clulas tumorales) fueron utilizadas como diana. Las clulas de LLC-B fueron incubadas en presencia de rituximab (10 g/ml) o IgG1 humana como control (10 g/ml) durante 45 minutos a temperatura ambiente. Las clulas diana y efectoras se incubaron a diferentes ratios desde 40:3 a 10:3, durante 4 horas a 37C. El polimorfismo presente en el aminocido 158 del receptor activador FcRIIIa fue analizado en las clulas efectoras de los donantes sanos mediante PCR alelo-especfica y digestin enzimtica. El IFN- se cuantific en el sobrenadante de cultivos de clulas efectoras activadas mediante ELISA (pg/ml). Resultados. La citotoxicidad natural mostr un porcentaje de lisis bajo al mayor ratio (2.7% 1.7% lisis, media SEM de 10 experimentos independientes), alcanzando un porcentaje mximo del 10% en un experimento. En presencia de rituximab, las PBMCs de los 10 donantes mostraron tambin bajos niveles de ADCC (13.4% 2.5% lisis, media SEM). Sin embargo, cuando las clulas efectoras se activaban con IL-15, el porcentaje de lisis de clulas B de LLCs observado aument significativamente (33.2% 4.9% vs. 13.4% 2.5%, IL15 + rituximab vs. rituximab) (p<0.0001). No se observ ninguna relacin entre genotipo del FcRIIIa y porcentaje de lisis. La produccin de IFN- por las clulas efectoras activadas con IL-15 fue mayor que el de clulas no activadas (1228.4 420.5 vs 217.5 65.4 pg/ml, respectivamente; p=0.03). Conclusin. Las PBMCs son clulas efectoras con baja capacidad de matar clulas B de LLCs en presencia de rituximab. Las PBMCs activadas con IL-15 potencian la ADCC que media el rituximab contra estas clulas. Estos datos tienen implicaciones clnicas en el tratamiento de las LLC-B, ya que su utilizacin como adyuvante en combinacin con el rituximab podra aumentar su efecto teraputico.

ciencias primaras (IDP) con dficit de produccin de anticuerpos. Desde 1981 se utiliza la va IV con la obtencin de niveles permanentes superiores a 600 mg/dl. La terapia por va subcutnea (GGSC) supone una eficacia similar, niveles ms estables y evita valores de IgG elevados despus de la administracin y sus efectos adversos secundarios. La posibilidad de autoadministracin domiciliaria mejora, adems, la calidad de vida de los pacientes y su dependencia del hospital. Mtodos. Se recogen los datos demogrficos, clnicos y analticos de los pacientes que han recibido GGSC en nuestro centro desde noviembre de 2006. Resultados. Diez pacientes peditricos (4M/6H) entre 6 y 18 aos (mediana 14.5) afectos de IDCV que reciban tratamiento peridico con GGIV, con una mediana de peso de 55.5 Kg. Las dosis administradas han sido de 100-200 mg/Kg/semana. Se han mantenido cifras correctas de IgG plasmtica (> 685 mg/dl) sin complicaciones infecciosas durante este periodo. Los efectos secundarios locales han sido frec uentes pero leves y autolimitados. Ausencia de reac ciones adversas sistmicas. La valoracin por parte de los pacientes de esta nueva modalidad teraputica ha sido favorable. Conclusiones. La terapia con GGSC es una alternativa vlida para pacientes peditric os con IDP, suponiendo adems una reducci n de costes sanitarios a medio plazo. Los valores de IgG plasmtica y la eficacia clnica son similares a la administracin por va IV.

61. INCREMENTO DE LOS NIVELES DE PGE2 EN LAS VAS AREAS DE PACIENTES CON BRONQUITIS EOSINOFLICA. Sastre B1, Fernndez-Nieto MM1, Lpez E1, Gmez C1, del lamo C1, Sastre J1, Quirce S2, del Pozo V1. 1Fundacin Jimnez-Daz Capio y Ciberes. 2Hospital Universitario La Paz y Ciberes. Introduccin. La bronquitis eosinoflica (BE), cuyo sntoma principal es la tos crnica se caracteriza, al igual que el asma, por presentar eosinofilia en el esputo pero, a diferencia de los pacientes asmticos, los pacientes con bronquitis eosinoflica no poseen obstruccin variable al flujo areo ni hiperreactividad de las vas areas, aunque actualmente el tratamiento de ambas patologas es similar. Objetivo. Evaluar si las caractersticas diferenciales en las vas areas de los pacientes de estas dos patologas podra ser causado por un disbalance en la produccin de mediadores lipdicos broncoconstrictores (cisteinil-leucotrienos:LTC4) y broncoprotectores (prostaglandina E2:PGE2). Mtodos. Evaluamos los niveles de citocinas, mediadores proinflamatorios y concentracin de eicosanoides en muestras de esputo de 13 sujetos con bronquitis eosinoflica, 13 sujetos con asma y 11 individuos control. Los niveles de expresin de ARN-m de las citocinas se midieron por qRT-PCR; PGE2 Y LTC4 fueron evaluados mediante enzimo-inmunoensayo. Resultados. A nivel celular, no existen diferencias estadsticamente significativas entre el porcentaje de eosinfilos de esputo entre los pacientes asmticos (7,95%) y los pacientes con bronquitis eosinoflica (15,29%). Los niveles de ARN-m de diversas citocinas (IL-5, 10, 13, 4, 2, IFN- y TGF-) fueron similares entre los pacientes de ambas patologas. Tampoco se encontraron diferencias en citocinas proinflamatorias como IL-8, IL-1 y TNF-. Sin embargo, encontramos diferencias estadsticamente significativas entre ambas patologas al evaluar los niveles de mediadores lipdicos en el sobrenadante del esputo inducido. As, los niveles de PGE2 estaban incrementados en los pacientes

SESIN 5: INMUNODEFICIENCIAS: ALERGIA Y COMPLEMENTO Moderadores: Dra . Nria Matamoros (Palma de Mallorca), Dra. Margarita Lpez-Trascasa (Madrid) 60. TRATAMIENTO CON GAMMAGLOBULINA SUBCUTANEA EN PACIENTES PEDIATRICOS CON INMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMN. Espaol Boren T1, Martin Nalda A2, Alvarez A2, Figueras C2, Soler Palacin P2. 1Unidad de Inmunologa. H. Vall dHebron. Barcelona. 2Unidad de Infecciosas e Inmunodeficiencias Peditricas. H. Vall dHebron. Barcelona. Antecedentes y objetivos. El tratamiento con gammaglobulina inespecfica constituye el tratamiento estndar para las inmunodefi-

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con BE (838.3612 pg/ml) con respecto a los asmticos (7.542.14 pg/ml) y los individuos sanos (41.3 pg/ml). Conclusin. Estos datos sugieren que las diferencias funcionales de las vas areas de los pacientes con BE y asma podran deberse a diferencias en la produccin de PGE2.

62. CONCENTRACIN DE APRIL (TNFSF13A) EN SUERO DE PACIENTES CON DFICIT DE IGA (DIGA). Fernndez P1, Detkova D1, Rodrigo MJ1, Espaol T1, Caragol I1, de Gracia J2, Alvarez A2, Hernndez Gonzlez M1. 1Inmunologa. 2Neumologa. Hospital Universitari Vall d'Hebron. Barcelona. Los individuos con DIgA (1/700), actualmente de etiologa desconocida, son habitualmente asintomticos pero algunos sufren un mayor nmero de infecciones y desarr ollan enfermedades autoinmunes y alrgicas. La protena APRIL que se expresa en clulas presentadoras de antgeno pertenece a la familia del TNF y acta como ligando de TACI y BCMA. Estudios en modelos murinos APRIL-/- han demostrado un dficit de IgA. Tambin se han descrito niveles elevados de APRIL en enfermedad autoinmune.El objetivo de este estudio ha sido determinar la concentracin de APRIL en pacientes con DIgA con el fin de observar si hay una posible asociacin entre APRIL y la base molecular del DIgA. Los niveles sricos de APRIL se determinaron mediante un ELISA comercial (BenderMedSystems) en tres grupos de individuos: 65 donantes sanos (DS); 83 con IDVC y 54 con DIgA con edades medias de 43, 35 y 39 aos, respectivamente. El anlisis estadstico se realiz mediante los tests de K-S,UMann-W,Kruskal-W. Se obtuvo un lmite de deteccin=0,78 ng/ml y una imprecisin intra e interensayo de 4,37% y 6,84%, respectivamente. Se obtuvieron diferencias signific ativas (P<0,05) en las medianas de concentraciones de APRIL entre el grupo DS (2,67 ng/ml), pacientes DIgA (9,45 ng/ml) y IDVC (31,38 ng/ml). En el grupo de DIgA no se observ una asociacin (p>0,05) entre los fenotipos clnicos: sin infecciones (n=14; 2,7 ng/ml), con infecciones leves (n=16; 8,8 ng/ml), moderadas (n=9: 2,07ng/ml), graves (n=10; 3,09 ng/ml) y los niveles de APRIL. Tampoco se observ ninguna asociacin entre los niveles de APRIL en el grupo de DIgA entre los paciente con patologa autoinmune (AI) (n=16; 3,9ng/ml) y sin AI (n=33; 2,8 ng/ml).En este estudio se demuestra que los pacientes con DIgA,presentan unos valores sricos de APRIL significativamente ms elevados que los hallados en la poblacin sana y menores a los hallados en la poblacin con IDVC.Para conocer la etiologa de este hallazgo es necesario realizar ms estudios en este sentido.

diopatas congnitas. Se han evaluado varios parmetros inmunolgicos durante los primeros tres aos de vida de los pacientes: cuantificacin de las poblaciones y subpoblaciones linfocitarias, respuesta linfoproliferativa por estimulacin in vitro con mitgenos, cuantificacin de inmunoglobulinas e IL-7 y determinacin de TRECs (T-cell receptor excision circles). Tras este estudio observamos que la timectoma neonatal produce linfopenia mantenida en el tiempo, afectando especialmente a los linfocitos T CD4+. Adic ionalmente, los TRECs disminuyen de forma muy signifi cativa y los niveles de IL-7 en plasma aumentan. Adems encontramos una correlacin estadsticamente signific ativa entre la disminucin de los nmeros absolutos de linfocitos T CD4+ y el aumento de la IL-7. En conclusin, durante el periodo de estudio, los pacientes timectomizados no sufrieron mayor nmero de infecc iones que las padecidas por nios sanos. Sin embargo, se ha podido constatar que la timectoma en neonatos provoca una disminucin significativa de los niveles de linfocitos T y TRECs, que es consistente con el cese de la timopoyesis. Esto podra provocar un compromiso de la funcin inmune en los pacientes que necesiten un timo activo en la edad adulta.

64. DIAGNSTICO MOLECULAR EN UN NUEVO CASO DE ENFERMEDAD GRANULOMATOSA CRNICA LIGADA AL SEXO. Martnez-Martnez L1, Gonzlez-Santesteban CA1, Benaiges-Martnez C1, Badell I2, de la Calle-Martn O1. 1Hospital de la Santa Creu i Sant Pau. 2Hospital de la Santa Creu i Sant Pau (Pediatra). La Enfermedad Granulomatosa Crnica (CGD) se caracteriza por infecciones severas recurrentes debidas a un defecto en la cadena respiratoria implicada en la destruccin de bacterias y hongos fagocitados por clulas mieloides (NADPH oxidasa). Este complejo enzimtico est formado por 5 subunidades, una de las cuales, denominada gp91phox, est codificada en el cromosoma X. Presentamos el caso de un nio de 2 aos, tercer hijo de padres no consanguneos. Exista el antecedente de un hermano muerto en el ao 2002 a los 15 meses de edad como consecuencia de una colitis ulcerosa, que se complic con una sepsis y que deriv en un sndrome hematofagoctico que result letal. El paciente desarroll durante el primer mes de vida una enfermedad inflamatoria intestinal. A los 10 meses sufri una osteomielitis aguda causada por Serratia y al ao una endocarditis bacteriana. La determinacin de la capacidad oxidativa de los granulocitos demostr que los neutrfilos del paciente eran incapaces de realizar esta funcin, mientras que en su madre slo un 80% lo hacan normalmente. Se estableci el diagnstico de Enfermedad Granulomatosa Crnica. Ante la sospecha de una herencia ligada al X, se estudi la protena gp91phox. El estudio mediante citometra de flujo mostraba una alteracin en la expresin de dicha protena en el paciente; mientras que en la madre haba una poblacin que la expresaba correctamente y otra que no, en un porcentaje similar al obtenido en la prueba funcional (80%/20%). El anlisis de gp91phox mediante western blot corrobor la ausencia de la protena en el paciente. En el estudio del cDNA del gen CYBB se encontr una mutacin en el nucletido 175 (C>T; Cys58Arg), que est reportado que se correlaci ona con una ausencia de la protena. La madre era portadora de dicha alteracin. El anlisis de CYBB en el hermano fallecido a partir de una muestra de la autopsia, revel la presencia de la mutacin Cys58Arg, establecindose el diagnstico de CGD.

63. ANLISIS LONGITUDINAL DE LA FUNCIN INMUNE DURANTE LOS TRES PRIMEROS AOS DE VIDA EN NEO NATOS TIMECTOMIZADOS POR CARDIOPATAS CONGNITAS. Mancebo Sierra E1, Clemente J2, Snchez JI3, Ruiz Contreras J2, de Pablos P1, Cortezn SA1, Paz Artal E1, Allende Martnez LM1. 1Servicio de Inmunologa. 2Unidad De Inmunodeficiencias. 3Unidad de Cuidados Intensivos. Hospital Universitario 12 de Octubre. Madrid. El propsito de este estudio es evaluar los efectos de la timectoma neonatal en el desarrollo del sistema inmune. Hemos seleccionado un grupo de 23 individuos que han sido timectomizados en sus primeros das de vida (<30 das), durante una operacin para corregir car-

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65. ANLISIS DE MUTACIONES EN TNFRSF13B EN PACIENTES CON INMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMN. Gisel Del Pozo Rodrguez N1, Lpez R1, Cruz Garca M2, Nez C1, Fernndez-Arquero M1, Ferreira A2, Gmez de la Concha E1, Fontn G2. 1Servicio de Inmunologa Clnica. Hospital Clnico San Carlos. 2Servicio de Inmunologa Clnica. Hospital La Paz. Madrid. La inmunodeficiencia variable comn (IDVC) se caracteriza por hipogammaglobulinemia, infecciones bacterianas recurrentes, y algunos pacientes presentan enfermedades inflamatorias, autoinmunes y granulomatosas. Su etiopatogenia no est an bien definida. Se han descrito recientemente mutaciones del gen TNFRSF13B, que codifica TACI (transmembrane activator and CAML interactor), y que se postula afectan al cambio de isotipo en linfocitos B. El objetivo de nuestro estudio es analizar en pacientes espaoles con IDVC la presencia de tres mutaciones en TNFRSF13B y valorar su implicacin en las caractersticas clnicas de dichos pacientes. Para ello incluimos 61 enfermos con IDVC (47,5% mujeres; edad media de inicio 15 aos) que fueron genotipados con sondas TaqMan para las mutaciones R202H, A181E y C104R. Encontramos una prevalencia de mutaciones de 6,3% (4/61). Cuatro enfermos (6,3%) presentaron la mutacin en C104R, frente al 2,5% observado en 568 controles sanos y al 2,1% observado en 282 enfermos con dfici t de IgA. Un portador de dicha mutacin tambin present en heterozigosis la mutacin en A181E. Para estos dos polimorfismos no encontramos ningn enfermo con mutacin en homozigosis. No observamos individuos con mutaciones en R202H. Los cuatro enfermos portadores de mutaciones eran mujeres, con edad media de inic io de 25 aos y edad media de diagnstico de 30 aos. Todos presentaron patologas infecciosas (respiratorias y urinarias). Uno de ellos presentaba psoriasis y PTI, bronquiectasias y VHC. Un paciente present linfoma tipo MALT, esplenomegalia, hepatitis y cirrosis. El paciente portador de doble mutacin presentaba esplenomegalia. Ninguno de los pacientes con mutaciones tena historia familiar de IDVC ni dficit de IgA. Dado el bajo tamao muestral proponemos la necesidad de realizar estudios multicntricos para pr ofundizar el estudio genotipo/fenotipo de esta enfermedad.

cia de los tratamientos TARGA sobre la distribucin y funcin de las clulas CD8 HIV-especfi cas carec e de datos suficientes. Con el objetivo de evaluar las posibles influencias de los tratamientos antirretrovirales (TARGA) sobre los linfocitos T CD8 VIH-especficos, nuestro grupo ha analizado la distribucin de las subpoblaciones CD8+ VIHespecficos y su perfil funcional medido como capacidad de expresin de INF-&#947;, TNF-&#945; y perfor ina tanto en enfermos VIH-1+ tratados como no tratados. Nuestros resultados muestran como, a pesar de existir igual distribucin de clulas CD8+ VIH-especficas en cuanto a la expresin de CCR7 y CD45RA, la capacidad secretora de IFN&#947; y perforina en enfermos tratados fue significativamente menor que en los pacientes que nunca recibieron TARGA. Este hecho demuestra un posible deterioro de la funcionalidad CD8 VIH-especfic os en pacientes tratados, evidenciada por un perfil menos efector (CD45RA+) de las clulas secretoras. Adems, nuestros estudios en la distribucin de subtipos CD8 positivos, evidencian la expansin de una supoblacin HLA-G+ reguladora en enfermos VIH-1 positivos y que fue ms evidente en pacientes bajo TARGA. Esta nueva subpoblacin CD8+HLA-G+ ha sido ya descrita por otros autores en procesos inflamatorios y podra tener una significacin fundamental en la patogenia de la infeccin por el VIH-1.

67. ESTUDIO CUANTITATIVO DE LA EXPRESIN DE VARIANTES DE SPLICING DE C1 INHIBIDOR EN PACIENTES DE ANGIOEDEMA HEREDITARIO. Mena de la Cruz MR, LpezLera A, Garrido S, Fontan G, Lpez-Trascasa M. Hospital Universitario La Paz. Madrid. El C1 inhibidor es la esterasa que controla la activacin de C1 en el inicio de la va clsica del sistema del complemento y es un importante regulador de los sistemas de contacto, la generacin de cininas, la coagulacin y la fibrinolisis. Las alteraciones moleculares en el gen de C1 inhibidor (ID:X54486, C1-Inh) producen la enfermedad autosmica dominante denominada Angioedema Hereditario (AEH), c aracterizada por ni veles cuantitativa o cualitativamente inferiores al 50% (AEH Tipo I o AEH Tipo II, respectivamente) de C1-Inh. El objetivo del presente trabajo es comprender el patrn de expresin de mRNA de C1-Inh total en sangre perifrica en pacientes de AEH. El estudio se realiz por RT-PCR a tiempo real en una serie de 34 pacientes y 13 c ontroles sanos de la poblacin espaola. El valor medio de expresin de mRNA de C1-Inh en los pacientes AEH tipo I (12.60%) y AEH Tipo II (20.22%) result significativamente inferior al de los controles. En estudios previos, hemos observado que el patrn de expresin de mRNA total de C1-Inh en sangre perifrica presenta, de forma constitutiva, dos trnscritos diferentes: completo y sin exn 3. Se realiz un estudio por RT-PCR a tiempo real que permiti cuantificar la expresin de los dos trnscritos y el ratio entre ambos en 31 pacientes (23 AEH Tipo I y 8 AEH Tipo II) y 17 controles sanos. El anlisis de los ratios revela tres grupos diferenciados correspondientes a pacientes AEH Tipo I (0.52), pacientes AEH Tipo II (1.90) y grupo control (1.12). Los resultados obtenidos en la expresin de mRNA total de C1Inh en sangre perifrica sugieren una transinhibicin del alelo sano por parte del alelo mutado. El estudio de la ratio de los trnscritos revela correlacin entre este cociente y los niveles de protena en cada grupo de pacientes (AEH Tipo I y AEH Tipo II), lo que sugiere una regulacin de la expresin a nivel de la traduccin o la transcripcin por parte de la protena o el mRNA alterados.

66. EVIDENCIAS DEL DETERIORO FUNCIONAL DE CLULAS T CD8+ HIV ESPECFICAS EN ENFERMOS VIH-1 POSITIVOS TRATADOS CON TARGA Y DE LA EXISTENCIA DE UNA POBLACIN REGULADORA CD8+HLA-G+. Lozano Reina JM, Garca Jurado G, Fras M, Luque Moruno J, Gonzlez Fernndez R, Ki Ndeln Jaquotot KM, Rivero A, Pea Martnez J. Hospital Universitario Reina Sofa. En la infeccin por VIH-1, una respuesta CD8 especfica adecuada ha sido correlacionada con un mejor control de la infeccin en enfermos lentos progresores (LTNP). Adems, en modelos con simios, la retirada de las clulas CD8+ del torrente sanguneo elev de manera significativa la carga viral en plasma. Se han relatado defectos en cuanto a la funcin citotxica y secretora de las clulas CD8+ de enfermos con peor evolucin de la enfermedad. Paralelamente, varios autores demuestran que algunas protenas vricas seran c apaces de reducir la expresin de molculas HLA-I, fundamentales para el reconocimiento de las clulas infectadas por los linfocitos CD8. A pesar de que las causas por las cuales los linfocitos CD8 positivos permanecen daados en la infeccin VIH-1 han sido extensamente estudiadas, la influen-

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68. LINFOCITOS INTRAEPITELIALES (LIES) EN EL DIAGNSTICO DE ALERGIAS ALIMENTARIAS FRENTE A ENFERMEDAD CELACA. De Andrs A, Mirete S, Marn N, Camarero C, Roy G. Hospital Ramn y Cajal de Madrid. La enteropata por Alergia alimentaria puede cursar con una clnica inespecfica, de difcil filiacin que a veces dificulta un diagnstico diferencial; de hecho, no es infrecuente encontrar pacientes con alergias alimentarias en los que se realiza una biopsia duodenal con la sospecha de enteropata celaca. Est descrito que la enteropata celaca (EC) tiene una distribucin fenotpica especfica de las sub-poblaciones linfoides del epitelio intestinal proximal (Linfograma LIEs)1. Objetivo. Validar la especificidad del Linfograma LIEs para el diagnstico de la EC, en el grupo de los pacientes con alergias alimentarias. Metodologa. Se han analizado los LIEs por citometra de flujo, en un total de 43 biopsias de duodeno de pacientes con alergias alimentarias, demostradas clnica (mejora con la supresin del alergeno) y/o analticamente (IgE especfica positiva frente al alergeno/s). Los pacientes se dividieron en 2 grupos, tomando como referencia los hallazgos anatomopatolgicos: 14 con lesiones histolgicas sugerentes de enteropata celaca (A = atrofia) y 29 con biopsia sin alteraciones (NA = no atrofia). Resultados:

69. DEGENERACIN NEOPLSICA EN UN PACIENTE CON SNDROME DEL LINFOCITO DESNUDO TIPO I DEBIDO A UNA NUEVA MUTACIN EN TAP-2. Gonzlez C1, Martnez L1, Agust M1, Espaa A2, de la Calle O1. 1Servicio Inmunologa, Hospital Sant Pau. 2Departamento de Dermatologa e Inmunologa, Universidad Clnica de Navarra. Se describe el caso de una mujer de 40 aos que padece ulceras en la pierna derecha desde la infancia. La lesin fue expandindose hasta cubrir toda la superfici e de la pierna y el pie. La biopsia revel una inflamacin granulomatosa necrotizante con afectacin de la dermis y la hipodermis (necrobiosis lipoidic a). Desde la adolescencia la paciente comenz a tener episodios de infecciones bacterianas recurrentes del tracto respiratorio, que finalmente evolucionaron a bronquiectasias. El cuadro respiratorio y las lesiones crnicas granulomatosas de la piel llevaron a la sospecha de BLS I. El estudio de la expresin de las molculas HLA de clase I mostr una disminucin muy marcada. En el tipaje molecular se observ que la paciente era homocigota para todos los loci HLA. El anlisis de los genes TAP mostr que la secuencia del cDNA de TAP1 era correcta y coincida con el alelo ms frecuente (TAP 1A). La regin codificante de TAP2 corresponda a la variante 2A, excepto por el cambio de un nucletido en el exn 3. Se confirm la presencia de la mutacin mediante la secuenciacin del exn 3 de TAP2 a partir de DNA genmico de la paciente y sus familiares. La paciente tiene un cambio en homocigosis de C a T en el nucletido 628, no descrito anteriormente, que introduce un codn stop prematuro. Su madre y sus hijas eran heterocigotas. La lesin ulcerada en la pierna de la paciente evolucion hacia un carcinoma epidermoide de elevada agresividad que produjo metstasis en hgado, pulmn y huesos, y finalmente a la muerte de la paciente.

Porcentaje con respecto al total de LIEs Porcentaje con respecto al total de enterocitos

70. CAMBIO DE FENOTIPO DE SCID A SNDROME DE OMENN TRAS UN TRASPLANTE HEMATOPOYTICO EN UN PACIENTE CON MUTACIONES EN RAG1. Gonzlez C1, Martnez L1, Benaiges C1, Badell I2, Nogus N3, de la Calle O1. 1Servicio Inmunologa, Hospital Sant Pau. 2Servicio de Pediatra, Hospital Sant Pau. 3Banco de Sangre y Tejidos. El sndrome de Omenn (OS) es una forma de inmunodeficiencia severa combinada (SCID) que se caracteriza por eritrodermia, hepatoesplenomegalia, linfoadenopatas, eosinofilia e hiper IgE, adems de las infecciones graves propias del SCID. Se observa una ausencia de linfoci tos B y un nmero normal o incluso elevado de linfocitos T oligoclonales, y en la mayora de los casos se ha asociado a mutaciones hipomrficas en RAG. Se presenta el caso de un nio de origen marroqu, hijo de padres consanguneos, que debuta con eritrodermia e infecciones severas a partir de los dos meses de edad. Los resultados de laboratorio muestran una falta total de linfocitos B, y una funcin defec tuosa de linfocitos T (anrgicos). El inmunofenotipo LT+/LB- es compatible con OS, aunque algunas manifestaciones no aparecen en el paciente (eosinofilia, hiper IgE). El anlisis molecular de los genes Rag permiti identificar una delecin en homocigosis de la timidina 631 del gen Rag1 (del631T), que comporta la aparicin de un codn stop prematuro por desplazamiento del patrn de lectura. El uso de un codn alternativo de inicio de la traduccin permitira explicar una actividad residual de las protenas RAG y la presencia de linfocitos T. Los padres del paciente son portadores de la delecin, as como 3 de los 5 hermanos. Se realiz un trasplante de mdula sea (TMO) de uno

Conclusiones. En la muestra analizada, todos los pacientes con atrofia de la mucosa intestinal han sido diagnosticados de EC, con un fenotipo de LIEs caracterstico; en los pacientes sin atrofia, no se modifican las poblaciones que nos afectan para el diagnstico fenotpico de la EC.
Atrofia (n = 14) LIEs TCR i-NK Media ES Media ES Media ES 21.7 1.5 29.5 4 2.3 0.6 No atrofia (n = 29) LIEs TCR i-NK Media ES Media ES Media ES 7.8 0.8 10 1.5 26.4 3.2

1 Camarero et al. Intraepithelial lymphocytes and Celiac disease: permanent changes in CD3-/CD7+ and T cell receptor gamma-delta subsets studied by flow cytometry. Acta Paediatr 2000; 89: 285-290.

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de sus hermanos (compatible en 9/10 antgenos HLA) con una evolucin inicial muy favorable (rpida recuperacin de las cifras de leucocitos y una implantacin total de linfocitos del donante). Un ao despus del TMO comenzaron a observarse una serie de cambios progresivos: reaparici n de los linfocitos B del receptor, aumento en las cifras de IgE, y disminucin pr ogresiva del nmero absoluto de linfocitos B. El paciente present una sepsis (hemocultivo + para Bacillus sp) y comenz a padecer un cuadro de OS. Rpidamente el cuadro se complic con fallo multiorgnico y el paciente finalmente falleci.

71. CANLISIS DE LOS RECEPTORES NK EN PACIENTES VIH1+ CON INTERRUPCIN PROGRAMADA DEL TARGA. Lozano Reina JM1, Fras Casas M1, Garca Jurado G1, Luque Moruno J1, Gonzlez Fernndez R1, Soriano N2, Leal M2, Pea Martnez J1. 1Hospital Universitario Reina Sofa. 2Hospital Universitario Virgen del Roco. Sevilla. Desde hace ya ms de una dcada, la nica forma efectiva de controlar la replicacin viral en la infeccin por el VIH-1, ha sido el tratamiento anti-retroviral de gran actividad (TARGA). Sin embargo, dicho tratamiento presenta consabidas limitaciones, como la imposibilidad de controlar los reservorios del virus, la aparicin de resistenci as a muchos de los frmacos que lo componen y la presentacin de toxicidades cuando el tratamiento es mantenido durante largos periodos. Para reducir estos efectos clnicos se ha propuesto la interrupci n estructurada del tratamiento (IET). Adems, algunos autores han apuntado a la posibilidad de que estas interrupciones puedan aumentar la respuesta celular inmune especfica frente al virus. Sin embargo, existe controversia sobre la eficacia del IET en el manejo prolongado de pacientes en fase crnica y si el IET mejora la calidad de vida de dichos pacientes. Numerosos trabajos sealan que una interrupcin del tratamiento conlleva un pago inmunolgico, principalmente de clulas CD8+, que se ve compensado por la reduccin de fenmenos de resistencia y toxicidad. La respuesta CD8 especfica ha sido la ms estudiada en las cohortes de interrupcin, pero pocos o ningn dato existen sobre la repercusin, de esta prctica clnica, sobre las clulas NK, a pesar de la importancia de estas clulas en controlar la replicacin viral. Nuestro objetivo ha sido el estudio del perfil fenotpico y funcional de las subpoblaciones NK en una cohorte de pacientes incorporados en un programa de interrupcin programada del TARGA. Los criterios de inclusin de los pacientes (n=11) fueron los siguientes: CV<50c/mm3, CD4+>500c/mm3 al menos durante los ltimos 12 meses y un recuento nadir de CD4+>250c/mm3. El estudio se ha llevado a cabo mediante citometra de flujo, usando un FACScalibur (Becton Dic kinson) y el anlisis de las muestras se realiz mediante el software Cell Quest Pro (Becton Dickinson). Tambin se medieron los niveles de secrecin de TGF- y IFN- mediante ELISA. Nuestros resultados indican un descenso de la frecuencia de NK en todos los enfermos que iniciaron la interrupcin del tratamiento, descenso que se mantuvo 6 meses despus del reinicio del mismo. Interesantemente, este descenso fue mas acentuado entre la poblacin NK ms citotxica (CD56dim). En cuanto al perfil funcional, los niveles de ILT-2 y NKp46 se vieron incrementados durante la fase de interrupcin en todas las subpoblaciones NK. No se observaron cambios reseables con respecto a los otros receptores reguladores de la citotoxicidad estudiados, KIR2DL1, KIR2DL4, KIR2DL2, KIR2DS4, NKG2A o NKG2C. Sin embargo se observaron correlaciones positivas y negativas entre la carga viral y los niveles de expresin de algunos de estos NKRs. Por ltimo obser-

vamos aumentos significativos de TGF- despus de la IET y que se mantuvo elevado cuando el TARGA fue reintroducido un ao despus. Por el contrario, los niveles de IFN- estuvieron descendidos durante la fase de interrupcin. En conclusin, la IET descendi los niveles de NK, principalmente la subpoblacin ms citotxica, y aunque se ve modificado ligeramente el perfil funcional de las clulas NK, la IET no parece que modifique signific ativamente el perfil funci onal de estas clulas. An es necesario un mayor nmero de estudios para conocer el verdadero impacto de la interrupcin del tratamiento (IET) sobre la respuesta innata de los pacientes infectados por VIH-1 que ayude a entender si una suspensin de la terapia contra VIH por cortos periodos de tiempo mejora la capacidad del sistema inmunolgico a controlar la infeccin.

72. INFLUENCIA DE HLA-DRB1 Y -DQB1 EN SUSCEPTIBILIDAD A ASPERGILOSIS BRONCOPULMONAR EN PACIENTES CON FIBROSIS QUISTICA. Salgado G1, Snchez-Solis M2, Campillo JA1, Botella C1, Mondejar P2, Lpez M1, Alemany JM1, Garcia-Alonso A1, Alvarez-Lpez MR1, Muro M1. 1Servicio Inmunologa. 2Servicio de Pediatra. Hospital Universitario Virgen Arrixaca. La Aspergilosis Bronco-Pulmonar Alrgica (ABPA) es una hipersensibilidad pulmonar que afecta a pacientes con fibrosis qustic a (FQ) y pacientes asmticos (AS). Algunos alelos HLA-DRB1 han sido asociados con una cierta susceptibilidad a ABPA mientras que la asociacin con alelos HLA-DQ1 no est claramente establecida. Nuestro propsito fue estudiar la asociacin de HLA clase II con ABPA-FQ y determinar su papel en la susceptibilidad o proteccin frente a la enfermedad. En este estudio se incluyeron pacientes con ABPA-FQ, AS y controles. Los DNA fueron obtenidos automticamente con el extractor de DNA Maxwell 16 (Promega, WI). Los genotipajes en HLA-DRB1 y DQ1 fueron realizados por Luminex mediante el mtodo PCR-SSO (One Lamba CA). La alta resolucin se realiz mediante PCR-SSP. El anlisis estadstico se realiz con el programa SSPS. Los alelos HLA-DRB1*1501 y DRB1*1104 mostraron una mayor frecuencia en pacientes con ABPAFQ respecto al grupo control, corroborando los datos publicados por Cauchan et al. Por otra parte, el anlisis de los haplotipos revela que casi todos los pacientes con ABPA-FQ que carecen de DRB1*1501 y DRB1*1104 llevan los alelos DRB1*04 y/o DRB1*0701. En la regin DQB1, la frecuencia de los alelos HLA-DQB1*0602, -DQB1*0301, -DQB1*0202 y -DQB1*0302 fue incrementanda estos pacientes ABPA-FQ, mientras que la frecuencia de HLA-DQB1*0201 se encontr disminuida. En conclusin, estos datos corroboran los estudios previos que demuestran que existe una correlacin entre los alelos DRB1*1501, DRB1*1104, DRB1*04 y DRB1*0701 y la susceptibilidad a ABPA-FQ y el alelo HLADQB1*0201 podra ser un alelo de resistencia.

73. DEFICIENTE ACTIVACIN Y PROLIFERACIN DE LINFOCITOS B EN INMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMUN (IVC) A TRAVS DE RECEPTORES TOLL LIKE (TLR). Escobar D, Pons J, Alorda J, Martnez N, Matamoros N, Ferrer J. 1Servicio Inmunologa. Hospital Son Dureta. Introduccin. La IVC es una inmunodeficiencia humoral caracterizada por infecciones sinopulmonares recurrentes causadas por bacterias encapsuladas (S. pneumoniae y H. influenzae). Se han descrito algunas mutaciones genticas en pacientes con IVC, pero en la mayora

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sigue sin identific arse el defecto molecular subyacente que conduce a un bloqueo en la maduracin de los linfocitos B a clulas plasmticas y de memoria. Los TLR desempean un papel clave activacin y/o maduracin de algunas clulas del sistema inmune. En humanos la expresin de TLR-9 est restringida a clulas B y clulas dendrticas plasmocitoides. La activacin de TLR-9 con ADN bacteriano interviene en la produccin de anticuerpos por los linfocitos B. Objetivos. Evaluar la respuesta de los linfocitos B de un grupo de pacientes con IVC estimulndolos con ligandos de TLR9 y extractos bacterianos de S. pneumoniae y H. influenzae. Material y mtodos. En 14 pacientes con IVC y 14 controles sanos se estimularon linfocitos de sangre perifrica con ODN (0,6 ug/ml), extractos de S. pneumoniae o H. influenzae en presencia o ausencia de anti-IgM (5 ug/ml). Se evaluaron mediante citometra de flujo, en la poblacin B, la expresin de CD86 en membrana y el ndice de proliferacin previo marcaje con carboxifluorescena a los 3 y 4 das, respectivamente. Resultados. En los linfocitos B de los pacientes con IVC la expresin de CD86 fue significativamente inferior a la de los controles cuando las clulas se estimularon con ODN, extractos de S. pneumoniae y H. influenzae asociados a anti-IgM. La proliferacin de los linfocitos B de los pacientes con IVC fue tambin inferior a la de los controles al estimular con extractos de S. pneumoniae y H. influenzae asociados a anti-IgM. Conclusin. Los linfocitos B de los pacientes con IVC no responden ptimamente a la estimulacin a travs de TLR lo que podra explicar la falta de maduracin, generacin de clulas B de memoria y produccin de anticuerpos de los mismos.

vamos diferencias en la expresin de CD80, CD86, DR, CD40 ni en la produccin de otras ILs estudiadas con ninguno de los estmulos utilizados. Conclusin. La mayor produccin de TNFa frente a SLTA podra estar directamente relacionada con la mayor expresin de TLR2 en los monocitos de los pacientes. La expresin de TLR4 es igual en pacientes y controles; alteraciones en CD14 y/o MD2 (coreceptores de TLR4) podran explicar el aumento de produccin de TNFa en respuesta a LPS. En respuesta a la estimulacin bacteriana, los monocitos de pacientes y controles producen ILs y expresan molculas coestimuladoras de forma equivalente.

75. ANLISIS DE MECANISMOS DIFERENCIALES DE SENSIBILIZACIN Y TOLERANCIA EN LA RESPUESTA AL POLEN DE OLIVO. Chacrtegui M1, Florido F2, Quiralte J3, LLanes E1, Delgado J4, Miranda A5, del lamo C1, Palomino P1, Lahoz C1, Crdaba B1. 1Fundacin Jimnez Daz-CAPIO-CIBERES. 2Departamento de Alergia, Hospital Universitario San Cecilio, Granada. 3Unidad de Alergia, Complejo Hospitalario de Jan, Jan. 4Servicio de Alergia. Policlnico, Sevilla. 5Servicio de Alergia, Hospital Civil, Mlaga. Objetivos. Buscar mecanismos diferenciales (tanto a nivel celular como humoral) entre tolerancia natural e induci da frente al polen del olivo, analizando sujetos sensibilizados y no sensibilizados, en condic iones de baja y alta exposicin ambiental. Metodologa. Poblacin: 148 sujetos, 84 del periodo de polinizacin (mxima exposicin) y 64 fuera del mismo (mnimos niveles de polen), distribuidos en 5 grupos: I. Tolerantes (No alrgicos, n=32), II. Asintomticos subclnicos (n=17), III. Atpicos (no al olivo, n=35), IV. Alrgicos al olivo (n=37) y V. Alrgicos al olivo tratados (n=27). Tras exploracin clnica, consentimiento informado y pruebas cutneas, se extrajeron 3 alcuotas de sangre para suero, plasma y PBMCs (mediante gradiente de densidad). En el suero se determinaron los niveles de anticuerpos IgE total e IgE, IgG4 e IgA especficos al polen del olivo, por CAP (Phadia-Pharmacia) y con los PBMCs, la proliferacin celular frente al extracto de olivo, as cmo a pptidos de Ole e 1 (antgeno mayoritario) mediante incorporacin de TH3 (5 das de cultivo) y los niveles de citocinas solubles (IL-2, IL-4, IL-5, IL-10, TNF-a, IFN-g e IL-13, mediante citometra de flujo y TGF-b por ELISA) tras 24 horas de estimulacin. Resultados. 1. Respuesta humoral: El Grupo II (subclnicos) presenta los mayores niveles de IgE total pero muy bajos de IgE especfica, y el Grupo V (alrgicos tratados) los mayores niveles de IgG4 e IgA especfic a. Los mayores niveles de IgE especfica los presentaron tanto el Grupo IV (alrgicos a olivo) como el Grupo V. Los niveles de IgE e IgG4 especfica fueron mayores en el periodo de menor exposicin, excepto en los subclnicos. 2. Respuesta celular: Observamos la mayor respuesta proliferativa frente al extracto de olivo en el Grupo IV y el pptido inmunodominante de Ole e 1 (10+12+13) slo indujo proliferacin en este Grupo. La determinacin de citocinas solubles no aport un perfil discriminatorio entre grupos, aunque s diferencias reseables. Conclusiones. En general, se observa una mayor respuesta (humoral y celular) en el periodo de menor exposicin antignica (quiz por ser sujetos de reas con una dosis extremadamente alta de antgeno) y, aunque an no tenemos un fenotipo diferencial entre respuesta-no respuesta, s hay diferencias destacables que sugieren la implicacin de mecanismos reguladores.

74. LA FUNCIN DE RECEPTORES TOLL-LIKE (TLR) EST CONSERVADA EN MONOCITOS DE PACIENTES CON INMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMN (IVC). Escobar D, Pons J, Iglesias J, Matamoros N, Ferrer J. 1Servicio Inmunologa. Hospital Son Dureta. Introduccin. La IVC se caracteriza por hipogammaglobulinemia e infecciones respiratorias de repeticin, causadas fundamentalmente por S. pneumoniae y H. influenzae. Se han descrito mutaciones en ICOS, TACI y CD19 en algunos pacientes pero el defecto molecular subyacente es desconocido. Publicaciones recientes apuntan a deficiencias en la maduracin y funcin de las clulas dendrticas obtenidas in vitro a partir de monocitos de sangre perifrica en los pacientes con IVC. Objetivos. Evaluar la funcionalidad los TLR del sistema inmunitario innato en monocitos de sangre perifrica de pacientes con IVC. Metodologa. En 14 pacientes con IVC y 14 controles, se estudi, mediante citometra de flujo, la expresin basal de TLR2 y TLR4 y la induccin de molculas coestimuladoras (CD80, CD86, DR y CD40) en monocitos de sangre perifrica, as como la produccin de interleucinas (ILs) (TNFa, IL1b, IL6, IL8 e IL10) mediante CBA o ELISA. Para la estimulacin se utilizaron ligandos de TLR (SLTA, Zymosan y LPS) y extractos de S. pneumoniae y H. influenzae. Resultados. La expresin basal de TLR2, pero no de TLR4, fue mayor en monocitos de pacientes con IVC que en los controles. La estimulacin con ligandos de TLR2 (SLTA) y TLR4 (LPS) indujo mayor produccin de TNFa en pacientes con IVC que en controles. No obser-

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76. LINFOADENOPATA NO-MALIGNA E INFECCIN PERSISTENTE POR EBV. Martn JL1, Diguez MA1, Surez Leiva P2, Meln S2, Oa M2, Miones L3, Ramos E3, Soler P4, Espaol T5, Tricas L1. 1Inmunonologa. Hospital Universitario Central de Asturias. 2Microbiologa. Hospital Universitario Central de Asturias. 3Pediatra. Hospital Universitario Central de Asturias. 4Pediatra. Hospital Valle de Hebrn. Barcelona. 5Inmunologa. Hospital Valle de Hebrn. Barcelona. El paciente es un nio de 6 aos. Su madre presenta un dficit selectivo de IgA. Tiene una hermana sana. No hay consanguinidad familiar ni otros antecedentes familiares de inmunodeficiencia. Desde los 2 aos de edad presenta adenopatas recurrentes cada 3- 6 meses laterocervicales y submaxilares con fiebre, leucocitosis y neutrofi lia. A la edad de 4 aos, se abscesifica la adenopata cervical que espontneamente drena. En el scanner de cuerpo entero no haba esplenomegalia ni adenopatas internas. La funcin heptica es normal. A la edad de 5 aos las adenopatas se generalizan y extienden a regin cervical, axilar,inguinal y popltea. No presenta adenopatias internas, pero aparece esplenomegalia. La biopsia mostraba cambios reactivos y exclua un proceso linfoproliferativo. El estudio virolgico muestra anticuerpos IgM e IgG anti-CMV y elevados ttulos de IgM anti-EBV-VCA que han permanecido durante toda la evolucin del cuadro clnico, ttulos ms bajos de IgG anti-EBV-VCA, anticuerpos anti- EBV-EA negativos y anticuerpos moderadamente positivos anti-EBV-EBNA. Intermitentes picos de viremias EBV-DNA y CMV-DNA en sangre perifric a que tambin permanecen durante toda la evolucin. El paciente no ha presentado otras infecciones excepto la persistente activacin del EBV y espordicas infecc iones intercurr entes por CMV. El estudio inmunolgico muestra: disgammaglobulinemia (IgG = 5.5 g/L , IgA < 0.07 g/L e IgM = 3.97 g/L, que se ha incrementado hasta 10.5 g/L en los 2 ltimos aos. Persistente disminucin de linfocitos B = 3% y de la ratio CD4/CD8 c on incremento de linfocitos T CD8 que expresan HLA-DR, SAP y un marcado inc remento de la expresin de perforina. Los linfocitos NK estn moderadamente incrementados en sangre perifrica y la actividad NK frente a clulas K-562 es normal. El estudio gentico no encontr mutaciones en el gen SH2D1A ni en el gen XIAP. Tampoco presenta caractersticas inmunolgicas de ALPS, el porcentaje de linfocitos TCRab+CD3+CD4-CD8- y la expresin de CD95 es normal y no tiene alteraciones autoinmunes. El paciente fue diagnosticado de infecc in persistente por EBV y sndrome XLP-like. Ha recibido tratamiento con Gammaglobulina IV, antivirales y Rituximab. El tratamiento con Rituximab produjo una mejora clnica y analtica completa. Desaparecieron las adenopatas y los parmetros inmunolgicos se normalizaron: Ig M= 0.78 g/L, Linfocitos T CD8 no expresaban HLA-DR, el ttulo de anticuerpos IgM anti EBV-_VCA disminuy a valores muy bajos. Pero 9 meses despus de recibir la ltima dosis de Rituximab reaparece el cuadro clnico inicial y las mismas alteraciones inmunoanalticas.

macin y acelera la disociacin de la C3 convertasa de la va alternativa del complemento. Recientemente se ha descrito la existencia de anticuerpos anti-factor H en pacientes con diagnstico de Sndrome Hemoltico Urmico atpico (SHUa). Se dise un ELISA para valorar la presencia de anticuerpos anti-factor H, para lo cual se sembr la placa con factor H purificado. Se aadieron diluciones decrecientes de muestras de suero de pacientes y de controles, junto con una curva de calibracin, dejndose incubar toda la noche a 4 C. Como anticuerpo secundario se utiliz suero de cabra anti-IgG humana marcada con peroxidasa. La placa se revel utilizando ABTS como sustrato de la peroxidasa. La presencia de anticuerpos anti-factor H se analiz en los sueros de 113 pacientes con diagnstico de Sndrome Urmico Hemoltico atpico, de los cuales 62 eran adultos y 67 nios; se detectaron anticuerpos anti-factor H en 4 casos, todos nios. En uno de los casos se realiz seguimiento de los niveles de anticuerpos durante el tratamiento con plasmafresis. En tres de los casos se encontr deficiencia completa de las protenas relacionadas con factor H CFHR1 y CFHR3. La determinacin y cuantificacin de anticuerpos anti-factor H permite identificar un subgrupo de pacientes con SHUa de origen autoinmune. Este ensayo es una herramienta de screening que permite la pronta identificacin de estos pacientes y el inicio rpido del tratamiento mediante plasmafresis, as como valorar la evolucin y la respuesta al tratamiento inmunosupresor en los enfermos.

78. ASOCIACIN DE PERFILES FENOTPICOS DE LINFOCITOS T CON COMPLICACIONES CLNICAS EN PACIENTES CON INMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMN (IDVC). Lanio Amador N, Sarmiento Marchese E, Gallego Lpez A, FernndezCruz E, Carbone Campoverde J. HGU Gregorio Maran. Madrid. Introduccin. En la IDVC se han descrito perfiles celulares anormales de linfocitos B y T. Sin embargo, continan sin esclarecerse las bases moleculares de la patologa y los defectos funcionales asociados a un mayor riesgo de complicaciones clnicas. Su conocimiento permitira una corr ecta clasificac in y mejor manejo del sndrome. Objetivo. Identificacin de nuevos marcadores celulares asociados a complicaciones frecuentes de la IDVC y su posible asociacin con anteriores clasificaciones propuestas (Piqueras 2003[a]). Mtodos. Estudio transversal de 21 pacientes con IDVC (edad=4717, 12M/9H) y 21 controles sanos (CS, edad=4611, 7M/14H). Se analizaron subpoblaciones celulares en sangre total por citometra de flujo (FACSCalibur) usando varias combinaciones de los marcadores CD3, CD4, CD8, CD19, CD56, CD16, CD27, IgM, IgD, CD45RA, CCR7, CD38, HLA-DR y CD25. Estudio realizado antes de infusin con GGIV y sin complicacin infecciosa o autoinmune activa reciente. Resultados. En comparacin con CS se observ &#8593;% CD19/CD27-, CD4/RA-, CD8/CCR7-, CD4 o CD8/DR+CD38+; &#8595;% CD19/CD27+IgM-IgD-, CD4/CD25+ y CD4/CD25high. Grupos MB0-MB1-MB2 similar a otras series(a). Al estratificar las variables segn media2SD de CS, se demostr asociacin significativa entre enfermedad autoinmune y &#8593;%CD8/CD38+ (Prueba Fisher, p=0,031), clnica infecciosa recurrente y &#8593; %CD8/DR+ (p=0,05), e hiperplasia linfoide y &#8593; %CD4/RA(p=0,026).

77. DETERMINACION DE ANTICUERPOS ANTI-FACTOR H EN SINDROME HEMOLITICO UREMICO ATIPICO. Soto Crdenas C1, Alonso MM1, Abarrategui C2, Rodrguez de Crdoba S3, Snchez-Corral P2, Lpez Trascasa M1. 1Unidad de Inmunologa. 2Unidad de Investigacin. Hospital La Paz. 3Centro de Investigaciones Biolgicas. CSIC. El factor H es una protena plasmtica que acta como cofactor para el factor I, una enzima inactivadora de C3b; tambin inhibe la for-

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Conclusiones. El perfil de maduracin/activacin de linfocitos T podra ser de utilidad para clasificar pacientes con IDVC. Su asociacin c on distintas complicaciones clnicas es similar a la descrita por otros grupos en base al perfil madurativo de linfocitos B, con la ventaja tcnica aadida de contar para el anlisis con poblaciones celulares cuantitativamente superiores (CD4 y CD8). La combinacin de ambos perfiles (con confirmacin longitudinal) podra aadir precisin a los sistemas de clasificacin propuestos en la actualidad.

80. REMISION DE LARGA DURACION DE LINFOMA NO HODGKIN EN INMUNODEFICIENCIA VARIABLE COMUN TRAS USO DE RITUXIMAB-CHOP. Carbone J1, Prez-Fernndez R2, Sarmiento E1, Angus B3, Rodrguez-Molina J1, Lanio N1, Flores E2. 1Servicio de Inmunologa. Hospital Gregorio Maraon. 2Servicio de Oncologa. Hospital Gregorio Maran. Madrid. 3Newcastle upon Tyne NHS Foundation Trust, Newcastle. La quimioterapia con R-CHOP (rituximab, ciclofosfamida, vincristina, adriamicina y prednisona) es un tratamiento aceptado para pacientes con linfoma B difuso de clulas grandes (LBDCG). Sin embargo, pueden surgir dudas a la hora de indicar CHOP para tratar un linfoma si el paciente tiene una deficiencia primaria de anticuerpos e infeccin recurrente. Presentamos un caso de IDVC complicada con LBDCG tratado con R-CHOP. Datos clnicos: Varn de 20 aos. Diabetes insulino-dependiente a los 13 aos. Un episodio de sepsis por SAMS con amputacin de miembro inferior. 3 neumonas entre los 17 y 19 aos. En el ltimo episodio de neumona se document pan-hipogammaglobulinemia (IgG 149, IgA 9, IgM <4 mg/dl); dficit de formacin de anticuerpos; clulas B CD19+ 9% (252/mm3). Se estableci el diagnstico de IDVC e inici GGIV a dosis sustitutiva. El curso clnico se complic 1 ao despus con la aparicin de un LBDCG, estado III-B con afectacin masiva ganglionar perifrica, mediastnica y retroperitoneal. El diagnstico se confirm mediante IH de una adenopata perifrica (CD20+ CD79a+ BCL6+ CD10+ BCL2+; ciclina D1CD23- CD5-; tasa de proliferacin celular ki67: 80%; hibridacin in situ para EBV). El paciente fue sometido a 8 ciclos de tratamiento con rituximab (375 mg/m2 IV), ciclofosfamida (750 mg/m2 IV), adriamicina (50 mg/m2 IV), vincristina (1.4 mg/m2 IV) y prednisona/metilprednisolona. Antes de cada ciclo de tratamiento se administr GGIV a dosis de 400 mg/kg con la finalidad de mantener niveles de IgG por encima de 400 mg/dl. No se presentaron complicaciones infecciosas. Despus del 6 ciclo de tratamiento se evidenci una disminucin significativa de la hiperplasia linfoide. Tres aos despus de la ltima dosis de R-CHOP no haba evidencia de actividad del linfoma. El inmunofenotipo de SP 3a post-rituximab es: CD19+/CD27+I gD-IgM: 9.8%; CD4+/RA-: 74%; CD8+/CCR7-: 90.6%; CD4+/CD38+DR+: 10,4%. Conclusin. En el caso presentado de IDVC complicada con linfoma, el tratamiento con R-CHOP fue eficaz y bien tolerado.

79. CLULAS REGULADORAS CD4+CD25+ ESPECIFICAS DE ALERGENO EN PACIENTES ALRGICOS A ARTEMISIA VULGARIS. Martnez Snchez MV1, Salgado Cecilia MG1, Lpez lvarez MR2, Muro Amador M2, Campillo Marquina JA2, Garca Alonso AM2, lvarez Lpez MR2, Pagn Alemn J3, Minguela Puras A2. 1Hospital Universitario Virgen Arrixaca. Servicio de Inmunologa. 2Hospital U. Virgen Arrixaca. Servicio de Inmunologa. Centro de Investigacin Biomdica en Red de Enfermedades Hepticas y Digestivas (CIBERehd). 3Hospital Universitario Virgen Arrixaca. Servicio de Alergia. Introduccin. Las clulas reguladoras naturales CD4+CD25+ (nTr) juegan un papel importante en el control de las diferentes facetas del sistema inmunitario, incluidas las respuestas de hipersensibilidad tipoI. Numerosos trabajo han puesto de manifiesto que es posible detectar clulas nTr alergeno especficas en pacientes sensibilizados a diferentes sustancias. Por otro lado, nuestro grupo ha descrito que existe una clara asociacin del genotipo DRB1*01-DQB1*0501 con el asma alrgico a Artemisia vulgaris. Objetivo y mtodos. El presente trabajo analiza si existen diferencias de cantidad, c alidad o funcionalidad de clulas nTr entre pacientes alrgicos y controles sanos, a la vez que estudia, si la presencia del genotipo DRB1*01-DQB1*0501 puede afectar la funcin de dichas clulas. Para ello, se han fenotipado por citometra de multiflourescencia las nTr en 6 pacientes alrgicos a Artemisia vulgaris y 6 controles sanos. Con mtodos inmunomagnticos (Dynal y Miltenyi) se han purificado clulas nTr y clulas efectoras CD25-/low, y hemos ensayado su capacidad para suprimir respuestas alergeno especficas in vitro. Resultados. Las cifras (en porcentajes y en n de clulas/l) de nTr CD4+CD25highCD127dim no muestran diferencias entre los pacientes alergicos y los controles sanos. As mismo, atendiendo a la expresin de las molculas CD29, CD49d, CD62L, CXCR3, CCR4, CCR5 y CRTh2 tampoco se han podido describir diferenc ias fenotpicas aprec iables. Por otro lado, la capacidad para suprimir la respuesta proliferativa a extractos de Artemisia vulgaris de las clulas nTr es similar en los pacientes y controles (55% de supresin a un ratio 1:1). Sin embargo, este efecto es mucho mejor apreciable en pacientes y controles DRB1*01-DQB1*0501, que son los que muestran las mayores respuestas frente al alergeno, a diferencia de los que tienen otro genotipo HLA que apenas responden al extracto antignico. Conclusin. En principio no se detectan diferencias en el nmero, el fenotipo, o la capacidad de suprimir respuestas especficas de las clulas nTr entre personas alrgicas a Artemisia vulgaris y los controles sanos. En la actualidad se est estudiando si, al menos, existen diferencias en la capacidad de las nTr para suprimir la secrecin de factores solubles por las clulas alergeno especficas (los datos se presentarn en el poster).

81. REGISTRO ESPAOL DE INMUNODEFICIENCIAS PRIMARIAS (REDIP) ONLINE 2005-2008. Escobar Oblitas D, MartnezPomar N, Mil J, Cambra A, Matamoros N. Servicio de Inmunologa. Hospital Son Dureta. Introduccin. Con objeto de facilitar el acceso y anlisis, el Registro espaol de inmunodeficiencias primarias inicia, en el ao 2005, su versin online (http://web.hsd.es/redip) Objetivo. Presentar los datos epidemiolgicos de las inmunodeficiencias primarias (I DPs) registrados, dar a c onocer el REDIP online y fomentar la participacin de los facultativos. Metodologa. La base de datos ha sido desarrollada con un acceso limitado a la informacin bsica para el pblico y un acceso exclusivo a la base de datos para los usuarios previamente registrados. Resultados. El nmero de casos registrados hasta marzo de 2008 es 721. El porcentaje de casos registrados por comunidades autnomas

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es: 46% Madrid, 24% Andaluca, 11% Islas Baleares, 7% Catalua, 3% Extremadura, 3% Murcia, 3% Aragn y 2% Comunidad Valenciana. La distribucin por grandes grupos de diagnstico: deficiencias predominantemente de anticuerpos 73%, deficiencias del sistema del complemento 9%, sndromes de inmunodeficiencia bien definidos 9%, defectos congnitos del nmero o funcin del sistema fagocitario 3%, inmunodeficiencias combinadas 2%, enfermedades con disregulacin inmunolgica 2% y otras inmunodeficienc ias primarias 2%. Las IDPs con mayor nmero de casos por diagnstico son: deficienc ia selectiva de IgA (300), inmunodeficiencia variable comn (140) y la deficiencia de C1 inhibidor (54). Conclusiones. Con el REDIP online se ha conseguido mayor difusin del conocimiento de las IDPs en nuestro pas, ofrec iendo una informacin bsica para el pblico e informacin especfica sobre demografa, caractersticas clnicas y tratamientos de las IDPs. El REDIP online agiliza y favorece la participacin de los facultativos lo que contribuye a la consolidacin del Registro Espaol de Inmunodeficiencias Primarias.

83. PSEUDO-BEHCET ASOCIADO A LINFOPENIA SEVERA, AUTOINMUNIDAD E INFECCIONES. Botella Martnez C1, Campillo JA1, Poza-Cisneros G2, Salgado-Cecilia G1, Muro M1, Garca-Calatayud MC1, Martnez-Garca P1, Minguela-Puras A1, Alvarez-Lpez MR1, Garca-Alonso AM1. 1Servicio de Inmunologa. 2Servicio De Medicina Interna. Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca. Paciente de 53 aos HLA B-51 negativa, HIV negativa y sin antecedentes de ETS, que desde 2003 presenta aftosis urogenital recidivante. En 1992 se le diagnostic epilepsia del lbulo temporal relacionada con esclerosis mesial del lbulo temporal. Actualmente sigue tratamiento anticomicial con buen control de sus crisis y sin objetivarse cambios leucocitarios. En 11/2005 presento en brazo izquierdo parestesias, fenmeno de Raynaud, edema y sudoracin de mano izquierda que desapareci al retirar reloj con aro de nquel. En 06/2005, tras una tuberculosis miliar diagnosticada 3 meses antes, nos fue remitida para estudio inmunolgico. Recibi tratamiento tuberculosttico 1 ao con buena evolucin clnica. El estudio inmunolgico revel un dficit de IgG4 (1 mg/dl), y dficit parc ial de IgG2 (98 mg/dl), IgA (56 mg/dl) e IgM (50 mg/dl), anticuerpos antinucleares 1/320 homogneo, anti-nucleolares 1/80, anti-clulas parietales gstricas 1/640 con anti Factor intrnseco negativo. Por otra parte, se observ una importante linfopenia 559 linfocitos/uL con 70% de clulas T, 39,6 T CD4+, 31% T CD8+, 2.3 clulas B, 18% clulas NK. Normal expresin de CD45RA, CD45RO, CD25 o DR y algo aumentada la poblacin T TCRalfa-beta+CD4-CD8-. En cultivos tras estimular linfocitos con ConA, anti-CD3 y anti-CD3+antiCD28 la respuesta proliferativa fue normal pero estaba disminuida con PHA e IL-2 (30%) Permanentemente se detectan en suero ttulos altos de anticuerpos citotxicos frente a los antgenos HLA I de su pareja detectados por FlowPra y por cultivos de microcitotoxicidad in vitro. stos no son citotxicos los linfocitos propios y no han desaparecido tras tratamiento de IGIV a altas dosis. Ha tenido 3 embarazos, 1 aborto y no ha reci bido transfusiones. Dado que la linfopenia se va haciendo ms severa (02/2008, 332 linfocitos/uL) profundizaremos en el estudio de la patofisiologa de estos procesos con el fin de poder tratarlos ms adecuadamente para evitar consecuencias indeseables.

82. SNDROME HEMOFAGOCTICO FAMILIAR SECUNDARIO A MUTACIN EN EL GEN DE PERFORINA-1 (PRF-1). CARACTERSTICAS CLNICAS Y MOLECULARES. Martnez Pomar N1, Ferreira A2, Garca MC2, Escobar D1, Romo N3, Pons J1, Iglesias J1, Salinas JA4, Lpez Botet M3, Fontan G2, Matamoros N1. 1Servicio de Inmunologa. Hospital Son Dureta. 2Servicio de Inmunologa. Hospital La Paz. 3Unitat d'Immunologia. Universitat Pompeu Fabra. 4Servicio de Pediatra. Hospital Son Dureta. La LHH es un desorden raro, autosmico recesivo, caracterizado por proliferacin generalizada, no maligna, de histiocitos con marcada actividad hemofagoctica. Las caractersticas clnicas incluyen fiebre, hepatomegalia, citopenias y, menos frecuentemente, alteraciones del SNC. Los primeros episodios transcurren mayoritariamente durante la infancia con una evolucin fatal si no se realiza tratamiento. El 40% de los casos son debidos a mutaciones en el gen de la perforina-1 (PRF1) localizado en la regin 10q22 del cromosoma 1. La perforina-1, de 70-75 kD, es la principal protena citoltica localizada en los grnulos de los linfocitos T citotxicos y natural killer (NK). Se presenta el caso de un varn de 2 meses de edad, nacido de padres consanguneos, que ingres por fiebre de 1 semana de evolucin e hipoactividad. No antecedentes familiares. La exploracin fsica revela, esplenomegalia y hepatomegalia. En la analtica inicial destacaba plaquetopenia, anemia, alteraciones hepticas (aumento de GPT, GGT y bilirrubina), alteraciones de la coagulacin e incremento de los niveles de LDH y triglicridos. El aspirado de mdula sea (MO) present hemofagocitosis. Tratamiento: corticoides, ciclosporina, G-CSF, profilaxis antibitica, gammaglobulina endovenosa y medidas de soporte. Actualmente se encuentra en lista de espera par a TMO. El estudio molecular del gen PRF1 muestra la presencia, en homocigosis, de la mutacin p.G149S, previamente descrita. Esta mutacin no se ha observado en 50 controles sanos. Mediante citometra de flujo, no se observa expresin de perforina en clulas NK y linfocitos T CD8+CD16+ del paciente y su madre, siendo la expresin normal en el padre. El anlisis molecular de los padres revela que ambos son heterocigotos para la mutacin. Est en curso la determinacin de la actividad citotxica de las clulas NK del paciente y progenitores, as como, la deteccin de perforina, mediante tcnica de western blot, en clulas de la madre y del paciente.

84. UN CASO DE AGAMMAGLOBULINEMIA LIGADA A X COMPLICADO CON UNA AMILOIDOIS SISTMICA TIPO AA DE EVOLUCION FATAL. Lucas Aroca D1, Campillo JA1, Garca-Rodriguez MC2, Garca-Estn J3, Rodrigo-Agudo JL4, LopezSolbes R5, Lopez-Hernndez R1, Bernal-Ramos A1, Alvarez-Lpez MR1, Garca-Alonso AM1. 1Servicio de I nmunologa. Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca. 2Servicio de I nmunologa. Hospital Universitario La Paz, Madrid. 3Servicio de Medici na Interna. Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca. 4Servicio de Medicina Digestiva Hospital Universitario Viregn de la Arrixaca. 5Servicio De Nefrologa Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca. Paciente nacido en 1980 que a los 2 aos fue diagnosticado por nosotros de Agammaglobulinemia con una IgG 25 mg/dl, IgM 10 mg/dl e IgA ausente y antecedentes clnicos de bronconeumona bilateral masiva, sepsis por Pseudomonas, infeccin urinaria E. Coli., otitis y bronquitis recurrentes. Diagnosticado en 2000 de Agammaglobu-

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linemia ligada al sexo (XLA) con una mutacin nonsense en el exn 12 del gen de la BTK (mutacin c.1215C>A, cambio de aminocido p.Y361X, dominio SH2). En 1997 intervenido de bocio amiloide descartndose amiloidosis sistmica. Hasta 2004 asisti peridicamente Inmunologa del Hospital La Paz para control de tratamiento de IgG endovenosa, antibiticos y fisioterapia respiratoria. En el 2006 ingres en nuestro hospital por diarrea prolongada, dolor abdominal, malabsorcin y malnutricin protico-calrica por amiloidosis tipo AA o secundaria que afectaba a rin e intestino delgado observndose lceras con depsitos amiloides, aislndose en heces Clostridium difficile y Giardi a lamblia. En 2007 entr en hemodilisis. Nos fue enviado en Noviembre de 2007 y observamos que haba mantenido bajas tasas de IgG srica (386 mg/dl 08/2006, 414 mg/dl 07/2005) y ajustamos tratamiento. En ese momento present 483 mg/dl IgG srica (no en el valle), ligera leucocitosis neutroflica. Las poblaciones de clulas T y NK eran normales y apenas haba linfocitos B (< 0,7%). El cociente CD4/CD8 era 1.39, la poblacin T CD3+8+57+ estaba aumentada y parte de la poblacin T estaba activada. La oxidacin de los PMN estaba algo reducida. La Amiloidosis AA es una complicacin rara en la XLA y no se conoce muy bien su patognesis pero, sin descartar posibles factores genticos que influyan en su desarrollo, es evidente que las infecc iones recurr entes son el principal factor etiolgico en la mayora de los casos por lo que es necesario una sistemtica evaluacin inmunolgica y el control adecuado del tratamiento en los pacientes inmunodeficientes para prevenir infecciones.

antifngicos sistmicos, anfotericina B y ciclosporina tpicos, sin corticoides locales y sistmicos. Por persistencia de riesgo de diseminacin, actividad de rechazo y deteccin de IgG3 baja (14.7 mg/dl) se decide aadir GGIV a alta dosis (niveles de IgG: 1660-3100 mg/dl durante 3 meses). Resultado. Se observa negativizacin de cultivo. 1 ao tras la queratoplasta no hay reci diva infecciosa. Existe evidencia experimental del rol de la inmunidad humoral especfica contra antgenos fngi cos. Conclusin. El tratamiento con GGIV actuara c omo coadyuvante en la erradicacin de infecc iones fngicas invasivas y/o resistentes en pacientes inmunosuprimidos con dficits de anticuerpos.

86. ESTUDIO DE SNDROME AUTOINMUNE LINFOPROLIFERATIVO (SALP) POR CITOMETRIA DE FLUJO. Maruri N1, Luque I1, Bilbao A2, Garca JM2, Rin M1, Prada A1, Arrieta A1. 1Servicio de Pediatra. 2Unidad de Oncologa infantil e Inmunoalergia. Hospital de Cruces. Vizcaya.

85. ERRADICACION DE INFECCIONES FUNGICAS RESISTENTES EN INMUNOSUPRIMIDOS: TERAPIA COADYUVANTE CON INMUNOGLOBULINAS INTRAVENOSAS. Sarmiento E1, Acero A2, Balado P2, Pelaez T3, Fernndez-Yaez J4, FernndezCruz E1, Carbone J1. 1Servicio de Inmunologa. 2Servicio de Oftalmologa. 3Servicio de Microbiologa. 4Servicio de Cardiologa. Hospital Gregorio Maraon. Madrid. Presentamos dos casos de pacientes trasplantados que desarrollan infecciones fngicas severas. Caso 1. Aspergilosis invasiva renal y prosttica (suelen requerir reseccin quirrgica). Varn de 61 aos trasplantado cardaco. Inmunosupresin: daclizumab, micofenolato mofetil, tacrolimus y prednisona. Por discordancia CMV (D+/R-) recibi ganciclovir y GG hiperinmune anti-CMV (12 sem). Infecciones: 14d post-trasplante: bacteriemia por pseudomona aeruginosa e infeccin respiratoria por HIB y SAMR. 6m: infeccin CMV. 9m: TAC: ndulos hipodensos en prstata y riones, PAF: aspergillus fumigatus confirmados en cultivo y biopsia. Persiste sintomtico pese a voriconazol. Por hipogammaglobulinemia y disminucin de ac especficos se aade GGIV sustitutiva (300 mg/Kg/21d). Ac especficos al mes post-tranplante y tras GGIV: IgG (454 y 800-1200 mg/dl); anti-HBs (16 y 212 mU/ml); anti-polisacrido de neumococo (2.5 y 48.8 mg/dl); anti-ttanos (0.2 y 4.9 mg/dl); antiCMV (597 y 7996, respectivamente). Resultado. Desaparicin de todas las lesiones en TAC sin requerir ciruga. Caso 2. Micosis corneal unilateral por fusarium solanii multirresistente. Mujer de 27 aos. Tras 6m de tratamiento con distintos antimicrobianos acude c on perforaci n corneal requiriendo queratoplasta. Por rechazo recibe ciclosporina, corticoides tpicos y orales adems de voriconazol, pero ocurre invasin fngica agresiva del injerto. Se realiza 2 queratoplasta y recibe tratamiento tpico con distintos

Objetivo. La presentacin de un caso diagnosticado de S. Autoinmune Linfoproliferativo (OMIM 601859). Inmunodeficiencia Primaria en la que existe una alteracin en la regulacin sistema inmune. La base inmunolgica de este trastorno es un defecto en la apoptosis de los linfocitos que da lugar a una acumulacin de los mismos en el sistema inmune. Existe riesgo evolutivo de desarrollo de enfermedades autoinmunes y linfomas. Los 3 criterios diagnsticos requeridos son: 1) Clnica de linfadenopatia crnica no maligna esplenomegalia de ms de 6 meses de evolucin; 2) Porcentaje de linfocitos T / + doble negativos (DN) superior al 1%; 3) Defecto en la apoptosis celular. Pacientes y mtodos. Paciente de 13 aos en seguimiento por esplenomegalia con antecedentes de hipertrofia de adenopatas cervicales e hipergammaglobulinemia. El padre y la hermana han sido diagnosticados de esplenomegalia. Se determina el fenotipo linfocitario en el paciente, ambos padres y hermana. Se realiza estudio funcional de apoptosis en el paciente. Los linfocitos doble negativos (CD3+/+CD4CD8-) se cuantifican con anticuerpos monoclonales por citometra de flujo (CF). Para el estudio funcional de la apoptosis se cultivan los linfocitos en presencia de IL-2 y de fitohemaglutinina a dosis subptimas, la apoptosis se induce con anti-CD95 y se realiza la cuantificacin de anexina por CF. El defecto de apoptosis se analiza con el test de Kolmogoroff-Smirmoff. Resultados
Paciente Esplenomegalia LT CD4-CD8- (%) Apoptosis Ecografa 16% Defecto Hermana Exploracin 6% Pendiente Madre Ausente 1% Pendiente Padre Exploracin 6% Pendiente

Conclusiones a) El nio cumple criterios de SALP. Es probable que estn afectos la hermana y el padre. b) La presencia de esplenomegalia y/o adenopatas persistentes no malignas justifica descartar esta entidad sobre todo si existen antecedentes familiares. c) El diagnstico facilita el seguimiento de los pacientes por existir un alto riesgo de desarrollar linfomas y enfermedades autoinmunes.

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87. FAMILIA CON MUTACIN C104R EN TACI, HIPOGAMMAGLOBULINEMIA DE DIAGNSTICO TARDO Y AUTOINMUNIDAD. Bernal MJ, Martnez Pomar N, Martnez de Saavedra M, Nieto A, Matamoros N, Brieva JA, Sampalo A. Servicio de Inmunologa. H. Puerta del Mar, Cdiz. Recientemente se ha realizado el diagnstico de Inmunodeficiencia variable comun (CVID) en dos hermanas (H1 y H2) de 53 y 67 aos. Ambas acudieron a consulta por neumonas (4 y 3 episodios, respectivamente) y otras infecciones recurrentes, no graves, de vas respiratorias superiores (aprox.10 aos de evolucin). Las dos debutaron al diagnstico con hipogammaglobulinemia moderada (IgG. 399 y 488 mg/dl, respectivamente), nmero normal de linfocitos B, fenotipo MB2 y fenmenos autoinmunes asociados. En el caso ndice (H1) se detect la mutacin C104R en homocigosis en el gen que codifica la proteina TACI. En el cribado familiar se detect un sobrino de 30 aos con hipogammaglobulinemia moderada y un sobrino-nieto (18 meses) con gastroenteritis recurrentes y baja concentracin de IgA. La incidenc ia de fenmenos autoinmunes fue asimismo notable: eritema nodoso recurrente en H1, ANA+ y anticuerpos anticlulas parietales+ a ttulo elevado en H2, madre y dos hermanos varones de las pacientes con diabetes tipo I de curso severo y una hija de H1 con anticuerpos antiperoxidasa tiroidea. Se mostraran los resultados del estudio de la mutacin en TACI de toda la familia. Estos casos confirman la heterogeneidad de presentacin clnica de los defectos de TACI, con cuadros clnicos prcticamente indiferenciables del cajn de sastre de hipogammaglobulinemias primarias de etiologa no conocida que comunmente denominamos inmunodeficiencia variable comun. En esta familia llama la atencin el fenotipo atenuado y tardo de inmunodeficiencia y la acumulacin de eventos autoinmunes.

de siete poblaciones representativas de cada continente del mundo: Cubanos,Brasileos, Omans, Chinos de Hong Kong, Chinos de Singapur, Xhosa de Sur frica y San de Sur fr ica y se han comparado con poblaciones Caucasoides, Negroides y Mongoloides del resto del mundo (total de 5.734 cromosomas). Muchos patrones de sondas de oligonucletidos especficas de secuencia muestran alelos nuevos, cada uno propio de una poblacin determinada, lo que pone de manifiesto la divergencia de las frecuencias de estos genes y sus alelos en las distintas poblaciones. Se obtuvieron las frecuencias de los genes KIR en las siete poblaciones mencionadas y a partir de las distancias genticas se construyeron dendrogramas Neighbour-Joining y se elaboraron anlisis de correspondencia. As mismo, se compar la presencia o ausencia de 17 loci de KIR de este estudio con la presencia o ausencia de esos mismos loci en 56 poblaciones de todo el mundo. Tras los anlisis realizados, se observa cmo los individuos aparecen agrupados de acuerdo con un gradiente geogrfi co. Se discuten la relacin de la evolucin de frecuencias KIR con las frecuencias de los genes HLA y los mecanismos y factores evolutivos que actan sobre los genes KIR.

89. EFECTOS DEL TNF/LT Y CLULAS B EN EL PROCESO DE DIFERENCIACIN DE FDC. Muoz Fernndez R, Tirado Gonzlez I, Blanco Muoz O, de la Mata C, Leno Durn E, Ortiz Ferrn G, Abada Molina AC, Garca Olivares E. Centro de Investigacin Biomdica. Introduccin. Las clulas foliculares dendrticas (follicular dendritic cells, FDC) son un tipo celular que se localiza en los folculos linfoides de los rganos linfoides secundarios. Se encuentran en ntimo contacto con las clulas B formando clusters. El desarrollo de las FDC depende del correcto funcionamiento de los folculos, hecho que depende directamente de las interacciones clula B- FDC, as como de las seales mediadas por TNF/LT en las FDC. Objetivos. Estudio de la expresin de antgenos relacionados con la diferenciacin de FDC c omo consecuencia del tratamiento de FDC con LT/TNF(10ng/ml), as como del co-c ultivo con clulas B (Raji) de manera individual durante 72h. Metodologa. FDC fueron obtenidas de amgdalas, y cultivadas. En su fase exponencial de crecimiento se trataron con LT/TNF o fueron cocultivadas con Raji. Mediante citometra de flujo se estudi la expresin de los marcadores STRO-1 y CD34 (marcador de inmadurez) y CD14, ICAM-1 Y VCAM-1(marcadores de madurez). Resultados y conclusin. Tanto en las clulas tratadas con LT/TNF como con las cocultivadas con Raji, se produjo un descenso de CD34 y STRO-1(marcador estromal), as como un aumento ICAM-1, VCAM1 y CD14. Estos resultados parecen indicar que la diferenciacin de las FDC y por tanto que puedan llevar a cabo de forma correcta su funcin, depende de la presencia de las clulas de las clulas B y de las citoquinas LT/TNF presentes en los folculos linfoides.

SESIN 6: CLULAS B Y NK Moderadores: Dra. frica Gonzlez (Vigo), Dr. Miguel Lpez-Botet (Barcelona) 88. EVOLUCIN DE LAS FRECUENCIAS DE LOS GENES KIR DE CLULAS NATURAL KILLER EN POBLACIONES MUNDIALES. Middleton D1,2, Meenagh A1, Mosocoso J3, Arnaiz-Villena A3. 1Northern Ireland Regional Histocompatibility and Immunogenetics Laboratory, City Hospital, Belfast, Northern Ireland. 2School of Biological Sci ences, University of Ulster, Coleraine, Northern Ireland. 3Dept. Inmunologa, Universidad Complutense, Centro de Transfusin de la Comunidad de Madrid, Madrid. En los ltimos aos se han estudiado intensivamente los genes de las clulas NK (Natural Killer) KIR y su interacc in con los ligandos HLA. Es un fenmeno sin explicacin funcional la presencia o ausencia de algunos de estos genes y, en algunos casos, tambin la frecuencia de ellos y de sus alelos en distintas poblaciones. El objetivo de nuestro trabajo es ver los factores que han influido en la evolucin de las frecuencias de genes y alelos KIR en determinadas poblaciones, que pueden ayudar a comprender la funcin global y evolucin del sistema de estos receptores NK KIR. En este estudio, se ha analizado la presencia o ausencia y las frecuencias allicas de genes KIR en individuos

90. ESTUDIO DE LA ESPECIFICIDAD FUNCIONAL DE AID. Prez-Durn P, Ramiro AR. Centro de Nacional de Investigaciones Oncolgicas. La hipermutacin somtica (SHM, del ingls Somatic HyperMutation) y el cambio de isotipo (CSR, del ingls Class Switch Recombination) son los mecanismos moleculares que dan lugar a la diversificacin secundaria de anticuerpos en centros germinales. La enzi-

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ma AID (del ingls Activation Induced Deaminase) inicia la SHM y el CSR a travs de la deaminacin de citosinas en el locus de inmunoglobulinas, que desencadena la fijacin de una mutacin (SHM) o la generacin de una rotura de DNA seguida de un proceso de recombinacin (CSR). Se ha demostrado que las lesiones iniciadas por AID pueden generar translocaciones cromosmicas y que su actividad puede introducir mutaciones en diversos genes, adems de los de inmunoglobulinas. Aunque la regulacin de AID parece por tanto esencial para evitar la generacin de lesiones linfomagnicas, los mecanismos que determinan su especificidad no estn definidos. El nico requerimiento imprescindible conocido hasta la fecha para que un gen sea susceptible de ser mutado por AID es que est transcripcionalmente activo. Para tratar de esclarecer la especificidad funcional de AID hemos establecido un sistema experimental de promoter traping. Utilizamos una construccin con un casete reportero sin promotor con el que podremos cazar genes transcripcionalmente activos y monitorizar las mutaciones inducidas por AID. Esta aproximacin nos permitir 1) relacionar la actividad transcripcional de un gen con su susceptibilidad de ser diana de AID, 2) determinar el sitio de insercin de la construcci n dentro del genoma y 3) analizar las secuencias ci s reguladoras de los loci susceptibles.

dio de la funcin de DOCK10 podra ayudar a entender las actividades biolgicas de la IL4.

92. CARACTERIZACION INMUNOFENOTIPICA Y FUNCIONAL DE LOS LINFOCITOS NK EN UN PACIENTE CON LINFOCITOSIS CRONICA DE CELULAS LGL/NK, PORTADOR DEL POLIMORFISMO C77G. Gil Herrera J1, Diaz Alderete A1, Modrego Ruiz J1, Vazquez-Pieiro T2, Polo Casado A3, Fernndez-Cruz E1. 1Servicio de Inmunologa. 2Servicio de Estomatologa. 3Servicio de Medicina Interna. Hospital General Universitario "Gregorio Maran". Madrid. Introduccin. La linfocitosis crnica de clulas NK (LCCNK) se caracteriza por el aumento de las clulas NK circulantes durante ms de 6 meses y curso clnico indolente. La sustitucin de C por G en la posicin 77 del exn 4 del gen CD45 (C77G) causa procesamiento anormal del ARNm y un patrn variante de coexpresin de las isoformas CD45RA y CD45RO sobre la superficie de las clulas T de memoria circulantes. La prevalencia de C77G en nuestra poblacin sana es de un 1,1%. La descripcin de tres portadores de C77G entre pacientes diagnosticados de linfohistiocitosis hemofagoctica (HLH), podra indicar la contribucin de este polimorfismo a la patogenia de los defectos de citotoxicidad. Paciente y Mtodos. Varn de 63 aos, asintomtico con antecedentes de diabetes no insulinodependiente, focos infecciosos dentarios y un episodio de herpes zoster, estudiado en el Servicio de Inmunologa por linfocitosis documentada de dos aos de evolucin. Bioqumica, serologa viral y TAC toracoabdominal sin hallazgos. Niveles sricos de inmunoglobulinas, complemento y autoanticuerpos en rango normal. Anlisis del inmunofenotipo linfocitario por citometra de flujo de cuatro colores (Becton&Dickinson). Amplificacin del DNA genmico y anlisis del exon 4 del gen CD45 mediante secuenciacin automtica. Ensayo de citotoxicidad NK por liberacin de Cr51 de clulas K562. Resultados. El paciente presentaba un aumento del nmero de linfocitos NK circulantes (6.7 x 103 clulas/ml) con un perfil inmunofenotpico homogneo: CD2+CD7+CD8+/-CD16+/-CD122+ D158a+ perforina+granzimaB+. El patrn de coexpresin variante de las isoformas de CD45 se corresponda con el cambio C77G. Las clulas circulantes del paciente mostraron actividad citotxica NK conservada respecto a los controles sanos. Conclusiones y Discusin. Se trata de una LCCNK que requiere seguimiento clnico e inmunolgico. Se aportan por primera vez datos sobre la actividad NK en un individuo portador del polimorfismo C77G. Aunque en este paciente las alteraciones del splicing inducidas por C77G no alteran la actividad citotxica de las clulas NK, la expresin anormal de las isoformas de CD45 puede haber influido sobre otros aspectos del funcionamiento del sistema inmune contribuyendo al desarrollo y/o mantenimiento de la linfocitosis c rnica LGL/NK.

91. DOCK10, NUEVA PROTENA INDUCIBLE POR IL4. Yelo E1, Gimeno L1, Bernardo MV1, Alcaraz MJ1, Majado MJ2, lvarez MR1, Parrado A1. 1Servicio de Inmunologa. 2Servicio de Hematologa. Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca. Introduccin. La IL4 es una citoquina que interviene en el control de la proliferacin, expresin gnica y apoptosis. Adems, la IL4 prolonga la supervivencia de clulas LLC-B cultivadas in vitro. Estudiando el efecto en la expresin gnica de la IL4 en muestras de pacientes con LLC-B, identificamos una nueva protena inducible por esta citoquina: Dock10. Dock10 pertenece a una nueva familia de protenas caracterizadas por ser activadoras de las Rho-GTPasas. Dock10 presenta dos homlogos estructurales en humanos: Dock9 y Dock11. Objetivos. Estudio de la expresin tisular y subcelular de Dock10 y su induccin por I L4 en muestras sanguneas normales y patolgicas. Metodologa. La distribucin tisular de Dock10 se estudi por RTPCR y Norhern-Blotting. El anlisis de la expresin subcelular de la protena se determin mediante Western-Blotting e inmunofluorescencia. Se construyeron plsmidos con expresin inducible de Dock10 y se obtuvieron clones estables de la lnea celular K562. Para el anlisis de la apoptosis en muestras celulares de pacientes en cultivo con y sin I L4, se emple la citometra de flujo. Resultados. Se encontr que Dock10 presentaba altos niveles de expresin en linfocitos T y B. Dock11 presenta una distribucin tisular similar, mientras que Dock9 no presenta una expresin significativa en linfocitos B. Dock10 se localizaba tanto en citoplasma como en el ncleo.La expresin de Dock10 se ve inducida ante la presencia de IL4, sin embargo este efecto no ocurre en ninguno de sus homlogos. La induccin de la expresin de Dock10 por IL4 se observa en linfocitos B normales y LLC-B, no producindose en los linfocitos T ni en otros tipos de leucemias. La adicin de IL4 reduce el porcentaje de apoptosis en LLC-B, sin embargo, esto no ocurre en LLA-B. Conclusiones. DOCK10 es un nuevo factor con alta expresin en linfocitos que se induce por IL-4 especficamente en clulas B. El estu-

93. ALTERACIONES FUNCIONALES EN LAS CELULAS iNKT EN EL NVEJECIMIENTO. Gayoso I1, Peralbo E1, Pita ML1, Tarazona R2, Solana R1. 1Departamento de Inmunologa. Hospital Universitario Reina Sofa. Universidad de Crdoba. 2Departamento de Fisiologa (rea Inmunologa) Universidad de Extremadura. Cceres. Introduccin. Est ampliamente descrito que la respuesta inmune se encuentra afectada con la edad, proceso denominado inmunose-

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nescencia, que afecta a las diferentes componentes de la respuesta inmune. Recientes estudios realizados en nuestro laboratorio han incluido a las clulas invariantes NKT (iNKT) dentro de las poblaciones afectadas por el proceso de inmunosenescencia. Las clulas iNKT en humanos se caracterizan por la co-expresin del receptor NK CD161 y por la expresin de un receptor T (TCR) formado por una cadena V24JQ y una cadena V11 que reconoce antgenos glucolopdicos presentados por un MHC-I no clsico denominado CD1d. El gluolpido -Galactosil Cermida (-GalCer) esta identificado como un potente inductor de la activacin de las clulas iNKT va TCR. De acuerdo con la expresin de los marcadores CD4 y CD8 las clulas iNKT se pueden dividir en tres subpoblaciones: iNKT-CD8+, iNKT-CD4+ e iNKT-Dobles Negativas. Tras la activacin de su TCR, las clulas iNKT proliferan liberando citoquinas tipo Th1 y Th2. Las clulas iNKT actan durante la respuesta innata del sistema inmune y est demostrada su implicacin en la eliminacin de tumores y en enfermedades autoinmunes en diferentes modelos experimentales. Objetivos. Estudio ex vivo del fenotipo y funcin, secrecin de citoquinas y proliferacin, de clulas iNKT en sangre perifrica procedente de donantes jvenes y ancianos sanos. Metodologa. Se obtuvieron las PBMCs de donantes jvenes (1835 aos) y ancianos (70-95 aos) sanos. La identificacin de las iNKT se analiz mediante fluorescencia multiparamtrica. Se utilizaron AcMo anti-V24, anti-V11, CD8, CD4, y otros marcadores de diferenciacin, as como anticuerpos anti-IFN- e IL-4. Para analizar la secrecin de citoquinas las PBMCs se incubaron con PMA, Ionomicina y Brefeldina durante 6 horas La capacidad proliferativa se determin mediante el marcaje con CFSE. Las clulas marcadas con CFSE se sembraron en medio de cultivo durante 5 das con IL-2 y -GalCer. Resultados y Conclusiones. Transcurridos 5 das de cultivo in vitro de las clulas iNKT-CFSE observamos una mayor proliferacin en donantes jvenes con respecto a los ancianos. Cuando observamos la proliferacin de las diferentes subpoblaciones de iNKT vimos como las clulas CD4-NKT son las que principalmente proliferan en jvenes aunque tambin hay proliferancin de las otras dos subpoblaciones pero menor. Cuando obserbamos la proliferacin en ancianos vemos como la subpoblacin CD4-NKT es la nica que presenta cierta proliferacin aunque menor que en jvenes. Cuando analizamos la secrecin de citoquinas por las clulas NKTi tras estimularla con KRN vemos una disminucin de la secrecin de IFN- en clulas NKTi de ancianos mientras que la IL-4 no muestra diferencias significativas. Cuando estudiamos la secrecin en cada una de las subpoblaciones de NKT encontramos un descenso significativo de la secrecin de IFN- en la subpoblacin CD8-NKT y de IL4 en la subpoblacin DN-NKT. La subpoblacin CD4-NKT no presenta cambios significativos en la secrecin de ambas citoquinas. El descenso de la capacidad proliferativa de las clulas iNKT de ancianos y el descenso de produccin de IFN- y IL-4 indican que las clulas iNKT se encuentran entre las poblaciones linfocitarias afectadas por la inmunosenescencia.

zan por su capacidad para lisar gran variedad de tipos celulares transformados o infectados por virus. Las clulas NK son un componente muy importante de la respuesta innata, tanto por su funcin efectora como por su funcin reguladora, actuando como enlace con la iniciacin de la respuesta inmune adaptativa. El envejecimiento afecta el numero y funci n de clulas NK. Se han definido diferentes cambios en las clulas NK asociados a la edad como son el incremento en ancianos del porcentaje de clulas NK con fenotipo maduro (CD56dim), el descenso de la respuesta a IL-2 y a otras citoquinas o la disminucin de la expresin de CD69. Las clulas NK poseen receptores de membrana encargados de la activacin o inhibic in de su funcin citotxica. El balance entre seales activadoras e inhibitorias determina la activacin o no de la citotxicidad de las clulas NK. En este trabajo hemos analizado la variacin asociada a la edad de dichos receptores y su influencia sobre los cambios en la capacidad funcional de las clulas NK en ancianos. Para la realizacin de este estudio se tomaron las PBMCs de donantes voluntarios jvenes (18-35 aos) y ancianos (70-95 aos) sanos. Se identificaron las clulas NK por citometra de flujo y se analiz la expresin de los receptores NK activadores e inhibidores en las diferentes subpoblaciones de NK en voluntarios jvenes y ancianos sanos Los resultados demuestran que las clulas NK de ancianos poseen un descenso en la expresin del receptor NKp30 y un incremento en la expresin del receptor NKp44. El descenso de la expresin de NKp30 puede contribuir no solo al descenso en la capacidad ci totoxica natural de estas clulas asociada a la edad, sino que, dado el importante papel de este receptor en la interaccin de clulas NK con clulas dendrticas, puede influir en las alteraciones en la inic iacin de la respuesta inmune adaptativa observadas en ancianos.

95. ANLISIS DE POLIMORFISMOS GENTICOS DEL LRC (LEUKOCYTE RECEPTOR COMPLEX) EN LA ESCLEROSIS MLTIPLE. Ordez D1, Snchez AJ2, Ramil E2, Garca-Merino A2, Vilches C1. 1Inmunologa. 2Laboratorio de Neuroinmunologa. Hospital Universitario Puerta del Hierro. La Esclerosis Mltiple es una enfermedad desmielinizante, inflamatoria y neurodegenerativa que presenta distintas formas evolutivas. Aunque no se conoce su causa, la enfermedad parece ser desencadenada por factores tanto genticos como ambientales. La patogenia tiene un componente autoinmune que podra surgir tras una infecc in por virus de la familia Herpesviridae. En cuanto a su base gentica, existe una fuerte asociacin con los genes HLA (6p21, DRB1*1501). Tambin estn descritas asociaciones con regiones de otros cr omosomas, incluyendo el cromosoma 19, donde se localiza el LRC (Leukocyte Receptor Complex - 19q13.4). El LCR codifica para r eceptores que activan o inhiben diferentes subpoblaciones leucocitarias linfoides y mieloides. Estos receptores, al expresarse en clulas del Sistema Inmunolgico que contri buyen a la defensa frente a Herpesvirus, podran participar en el origen o el desarrollo de la esclerosis mltiple. Entre ellos se incluyen los Leukocyte Immunoglobulin-like Receptors (LILR, tambin conocidos como Ig-like Transcripts - ILT), los Leukocyte-Associated Ig-like Receptors (LAIR) y los Killer-cell Immunoglobulin-like Receptors (KIR), que muestran una gran variabilidad gentica individual. Presentaremos un anlisis de la posible asociacin de la forma Recurrente-Remitente de Esclerosis Mltiple, con algunos polimorfismos genticos localizados en el LRC.

94. EXPRESION DE RECEPTORES ASOCIADOS A CITOTOXICIDAD EN CELULAS NK DE ANCIANOS. Gayoso I1, Peralbo E1, Pita ML1, Snchez B2, Tarazona R2, Solana Lara R1. 1Universidad de Crdoba. 2Universidad de Extremadura. Las clulas NK son una poblacin heterognea de linfocitos definidas por un fenotipo de membrana CD3-CD56+ que se caracteri-

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96. EXPRESION DE CD148 Y CD84 EN LEUCEMIA LINFATICA CRONICA. Gaya A1, Bargay J2, Mascaro M2, Cladera A2, Garca M3, Arbos A1, Calvo J1. 1Banc de Teixits. F. Banc de Sang i Teixits de les Illes Balears. 2Servicio de Hematologa. Hospital Son Llatzer. 3Servicio Anatoma Patolgica. A pesar de tener varias caracteristicas de linfocitos B naive, las celulas de leucemia linfatica cronica (LLC) en ocasiones prersentan mutaciones en los genes de la region variable de las inmunoglobulinas (IgVH) que las definiria como linfoc itos B memoria. Especialmente relevante es que la presencia de mutaciones en IgVH se asocia a un mejor pronostico respecto a la evolucin de la enfermedad. Por otra parte, se ha descrito que los linfoci tos B "naive" y con el gen IgVH no mutado carecen de la expresin de CD148 y muestran una baja expresin de CD84, a diferencia de los linfocitos B memoria con IgVH mutado que si expresan CD148 y CD84high. Con el fin de analizar la posible correlacin entre la expresin de CD148 y CD84 con la presencia/ausencia de mutaciones en IgVH, en el presente estudio hemos caracterizado un total de 20 LLC, 9 sin mutaciones en el gen IgVH (linfocito B "naive") y 11 con mutaciones en IgVH (linfoci to B memoria).Todas las LLC analizadas mostraron un patrn de expresin de CD148 homogeneo, sin diferenc ias apreci ables entre las que tenian mutaciones en VH frente a las que mantenian la secuencia inalterada. Por otra parte, se ha comprobado que la intensidad de expresin de CD148 en las celulas leucmicas CD19+CD5+ es equivalente al de las clulas B normales de sangre periferica. Tambien en las LLC se ha comprobado que la intensidad de expresin de CD148 es mayor en los linfocitos B que en los linfocitos T, tal como habamos descrito anteriormente para linfoci tos normales de sangre periferica. Asimismo se ha estudiado la posible perdida de heterozigosidad del gen CD148 en las LLC analizadas. Los ensayos de LOH se han llevado a cabo utilizando microsatlites localizados a lo largo del segmento cromosmico 11p11-12: D11NKI02, D11S4183, D11NKI01, D11S1326, D11S1784, D11S4117 y D11S1350. Los r esultados obtenidos no muestran perdida de heterozigosidad del gen CD148 al comparar muestras de DNA normal y neoplsico. Este resultado concuerda con la expresin homogenea y de intensidad equivalente a la de celulas normales demostrada por los estudios de citometria de flujo. Respecto al CD84, el anlisis del patrn de expresin no evidencia diferencias apreci ables entre las LLC que presentan mutaciones en IgVH frente a las que mantienen el gen IgVH inalterado, ni tampoco entre las que expresan zap70 y aquellas que no lo hacen. En resumen, la expresion de CD148 y CD84 es homogenea en los linfocitos B de LLC no permitiendo distinguir el estatus naive o memoria de los mismos.

Objetivos. Estudiar las caractersticas de las estructuras linfoides presentes en la pared arterial de los AAA. Pacientes y mtodos. Se estudiaron 25 pacientes sometidos a ciruga reparadora electiva, de los que se obtuvieron muestras de aorta. Tambin se estudiaron 3 muestras de aorta sana. Se realizaron estudios inmunohistoqumicos y de inmunofluorescencia sobre las muestras de aorta y anlisis mediante microscopia confocal. Se analiz la expresin de diferentes molculas (CD3, CD20, CD68, CD38, CD31, CD21, Ki 67, cadenas ligeras y pesadas de las inmunoglobulinas) Resultados y conclusiones. Ms del 90% de las muestras mostraron signos de inflamacin crnica en. Los infiltrados inflamatorios se localizaban fundamentalmente en la adventicia y en 1/3 de las muestras se extendan a la capa media. Los infiltrados inflamatorios formaban agregados heterogneos compuestos fundamentalmente de clulas CD3+ y/o CD20+. En algunas reas, situadas generalmente en la adventicia, se identificaron estructuras linfoides complejas que remedaban rganos linfoides secundarios: I). Los linfocitos T y B estaban localizados en reas separadas. II) En un 20% de casos se encontraron centros germinales-like (CG), definidos por la presencia de clulas B IgD- y Ki67+. III) Los CG contenan una red de clulas dendrticas foliculares (CD21+). IV) En la zona externa de las estructuras linfoides se observaban abundantes clulas plasmticas (CP) (CD38+). Las CP estaban adheridas a una red prominente de capilares. V) Se observaban fenmenos de neovascularizacin en las capas media y adventicia. Este estudio muestra la formacin de tejido linfoide ectpico en la pared arterial de los AAA y apoya la etiologa inflamatoria de los AAA.

98. ANLISIS COMPARATIVO DE DIFERENTES SUBPOBLACIONES B DE MEMORIA CIRCULANTES EN INDIVIDUOS SANOS. Rodrguez Bayona B, Rodrguez C, Brieva JA. Hospital Universitario Puerta del Mar. Cdiz. Las clulas B de sangre perifrica (SP) pueden dividirse en dos grandes compartimentos atendiendo a la expresin del marcador CD27, cuya presencia se asocia a la existencia de mutaciones en los genes de las inmunoglobulinas. El compartimento CD27- comprende una subpoblacin nive mayoritaria (CD27- IgD+ ) y una subpoblacin minoritaria (CD27- IgD-) r ecientemente asociada a una funcin de memoria efectora. Dentro de las clulas B CD27+ podemos diferenciar dos subpoblaciones de memoria atendiendo a la expresin de IgD: memoria switch (CD27+ IgD-) y memoria no switch (CD27+ IgD+). El objetivo de este estudio consisti en la caracterizacin fenotpica y funcional de las distintas poblaciones B de sangre perifrica de individuos sanos. Para ello se purificaron clulas mononucleares de SP por centrifugacin en gradiente de Ficoll y se procesaron para su anlisis por citometra de flujo. Se analiz la expresin de diversas molculas de adhesin, receptores de quemoquinas, molculas de coestimulacin, receptores de muerte celular y de supervivencia. Se encontr un gradiente creci ente de expresin de CXCR3, CD95 y TACI en la direcci n naive-no switch-switch. Asimismo hallamos diferencias de expresin de distintas molculas de adhesin y de coestimulacin entre clulas naive y memoria. La mayor expresin de CD95 en clulas de memoria no se traduca en una mayor susceptibi lidad a sufrir apoptosis espontnea ni inducida por antic uerpos anti-CD95. Estos datos sugieren la

97. FORMACIN DE TEJIDO LINFOIDE ECTPICO EN LA PARED ARTERIAL DE LOS ANEURISMAS DE AORTA ABDOMINAL. Ocaa E1, Prez-Requena J2, Bohorquez JC3, Brieva JA1, Rodrguez C1. 1Servicio Inmunologa. 2Servicio Anatoma Patolgica. 3Servicio Ciruga Vascular. Hospital Universitario Puerta del Mar. Cdiz. Introduccin. Los aneurismas de aorta abdominal (AAA) son una patologa cardiovascular comn cuya rotura tiene una mortalidad global superior al 50%. Hay evidencias de la etiologa inflamatoria de los AAA y del papel patognico de los infiltrados inflamatorios.

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existencia de un gradiente madurativo entre las diferentes poblaciones de clulas B de memoria.

99. DIFERENCIAS EN LA HIPERMUTACIN SOMATICA DE LOS SEGMENTOS CDR1 Y CDR2 DE GENES IGVH DE CLULAS PLASMTICAS HUMANAS. Jimnez Gmez G, Gmez Perales JL, Ramos-Amaya AB, Medina F, Campos-Caro A, Segundo C, Gonzlez-Garcia I, Brieva JA. Servicio de Inmunologa y Unidad de Investigacin. Las clulas plasmticas (CP) , estadio final B, son las encargadas de secretar Ig. Tras la activacin de los linfocitos B en los rganos linfoides inductivos (p ej. la amgdala (A)), los genes IGVH sufren hipermutacin somtica (HS), dando lugar a Igs c on mayor afinidad. Reci entemente, nuestro laboratorio ha establecido la existencia de un gradiente mutacional en genes IGVH que se inicia en las CP tempranas de los rganos linfoides (A), progresa en la fase circulante en sangre perifrica (SP) y es mximo en CP presentes en rganos de depsito final, como la mdula sea (MO). En este trabajo se han obtenido CP humanas de A, SP y MO altamente purifi cadas usando mtodos inmuno-magnticos y "sor ting" de clulas CD38++. Se ha secuenc iado el ADNc codifi cante de los genes IGVH6 e IGVH3 procedentes de las tres poblaciones de CP (n= 574 y 737, respectivamente). Estos genes aparecen ms mutados y tienen ms mutaciones reemplazantes (R) en los CDRs que en los FRs, de acuerdo con lo previsto. La frec uencia de mutaciones tanto totales como R es mayor en CDR1 que en CDR2 en las tres poblaciones estudiadas y en las dos familias de genes. Sin embargo, la relacin R/S es inferior en CDR1, siendo en ambas regiones los valores observados de R/S infer iores a los esperados si dependiera exclusivamente del azar. Este fenmeno es especialmente acusado en CDR1, que tiene una mutabilidad inherente mucho mayor. La diferencia entre R/S esperado y observado se hace menor en la direccin A?SP?MO sobretodo en CDR2. La frecuencia del cambio de aminocidos (aa) tambin es claramente mayor en CDR1 que en CDR2 a lo largo del gradiente madurativo. Sin embargo, la frecuencia de cambio de aa no conser vativo deja de ser mayor en CDR1 que en CDR2 en MO, mostrndose un progreso selectivo de la HS quizs paralelo al aumento de la afinidad por el Ag. Estos datos revelan una presin selectiva diferencial sobre CDR1 y CDR2, sugiriendo que ambos segmentos juegan diferentes roles en el sitio de unin al Ag.

diferentes marcadores (DR, CD44, CD95 y CXCR4) mediante citometra de flujo no mostr diferencias significativas. En el estudio cuantitativo de los factores de trascripcin (FT) implicados en la diferenci acin de las CP (Pax5, Blimp-1 y Xbp-1) se encontr una mayor expresin del FT Pax5 en las CP LP CD19+. En el anlisis del numero de mutaciones somticas de los genes IgVH de las inmunoglobulinas, no se encontraron diferencias signific ativas en cuanto al numero de mutaciones (reemplazantes y silentes) ni al cociente R/S. Sin embargo, si se encontraron diferenc ias signific ativas en la utilizacin de los segmentos D y J en el reordenamiento. Tambin se analiz los cambios de aminocidos debido a mutaciones somticas en ambas poblaciones mediante el programa Clustalw (http://www.ebi.ac .uk/clustalw. Los cambios de aminocidos (Aa) se agr uparon segn el tipo de variacin en cambios no conservativo (NC) y conservativos o semiconservativos (C). En primer lugar observamos un mayor nmero de cambios de Aas en los genes IgVH de las CPLP CD19- y adems eran cambios no c onservativos. Estos cambios de Aas tenan lugar fundamentalmente en la zona FR y CDR1, no encontrndose diferencias en CDR2. El anlisis de las dos poblaciones de CP LP revela la existencia de diferencias en sus IgVH, quizs relacionadas con una diversa afinidad por el antgeno. 101.EXPRESIN DE I-100 EN LAS POBLACIONES LEUCOCITARIAS DE SANGRE PERIFRICA. Imbernn M1, Viuela JE2, Cordero OJ1. 1Departamento de Bioqumica e Bioloxa Molecular. Universidade de Santiago de Compostela. 2Departamento de Inmunoloxa. Hospital Clnico Universitario de Santiago de Compostela. Las proteasas de prolina juegan un papel muy importante en la modificacin postraduc cional de protenas o pptidos que contengan X-Pro en su extremo N-terminal. Un ejemplo de ello es CD26 (Dipeptidil peptidasa IV, DPPI V), una glicopr otena integral de membrana de tipo II que ejerce en el sistema inmunitario un importante papel regulador al menos sobre las quimiocinas. I-100 es otra glicoprotena de membrana que se incluye dentro de la familia de las N-acetilated alfa_Linked Acidic Dipeptidase debido a su similitud de secuencia con las protenas de sta familia, y por eso se le denomina tambin NAALADAasa-Like. Pero su ac tividad proteoltica la sita tambin dentro de las dipeptidil peptidase IV activity and/or structure homologous (DASH). Se ha descrito la presenci a de transcritos de I-100 en diversos tejidos, y nosotros estamos estudiamos la presencia de la protena I-100 en el sistema inmunitario. En este estudio utilizamos un anticuerpo policlonal diseado frente a una secuencia especfica de 15 aminocidos de I-100 y se analiz la distribucin de sta protena en las diferentes poblaciones de leucocitos mediante un marcaje indirecto detectado por FACS. Las poblaciones de clulas T, B, NK, monocitos y polimorfonucleares se identific aron con marcadores monoclonales especficos combinndolo con el marcaje de I-100. El estudio se repiti en leucocitos fijados con paraformaldehdo y linfocitos activados con PHA. La expresin de I-100 presenta una distribucin carac terstica y de diferente intensidad en las distintas poblaciones: slo un 11.5% de linfocitos T CD4 es consistentemente marcado, mientras un 35% de las clulas B y casi todas las NK (con valores variables dentro de sus subpoblaciones) son positivas; un 77% en monocitos y un 33% ( menos consistente) en granulocitos. Esta ausencia de expresin uniforme en la superficie de las clulas sugiere que el estudio de I-100 nos puede revelar tambin nuevas rutas reguladoras en el sistema inmunitario.

100.ANLISIS COMPARATIVO DE CLULAS PLASMTICAS CD19+ Y CD19- EN LAMINA PROPIA DE COLN HUMANO. Ocaa E, Campos-Caro A, Jimnez-Gmez G, Brieva JA. Unidad de Investigacin y Servicio de Inmunologa. Introduccin. Las clulas plasmticas (CP) se consider an la fase final de diferenci acin de los linfocitos B y son las responsables de la produccin de anticuerpos. En humanos, los rganos de alojamiento final de las CP son la mdula sea y la lamina propia ( LP) mucosa. Las CP de LP son las responsables de la respuesta inmune humoral mucosa. OBJETIVOS: Aislar y analizar fenotpic a y genticamente las dos poblaciones de CP presentes en la lmina propia de colon en humanos (CP LP CD19+ y CP LP CD19-). Resultados y conclusiones. Las dos poblaciones de CP LP fueron altamente purificadas mediante cell-sorting. El anlisis fenotpico de

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SESIN 7: INMUNOLOGIA TUMORAL - II Moderadores: Dr. Luis lvarez Vallina (Madrid) Dr. Federico Garrido (Granada) 102.PUESTA A PUNTO DE UN MTODO SENSIBLE Y ESPECFICO PARA LA CUANTIFICACIN DEL COMPONENTE MONOCLONAL EN MIELOMA. Vazquez Gonzalez AC, Villar Guimerans LM, Cardero Gonzalez E, Gonzalez Porqu P. Servicio de Inmunologia. Hospital Ramon y Cajal. Antecedentes. La cuantificacin del componente monoclonal es de suma importancia en el diagnstico y seguimiento de los pacientes con gammapata monoclonal, ya que en las clasificaciones actuales es lo que determina en que situacin se encuentra el enfermo y por tanto el tipo de tratamiento que debe seguir. En el momento actual los mtodos utilizados para la determinacin de dic ha cuantific acin tienen ci ertas limitaciones ya que no permiten averiguar con exactitud el porcentaje de la Inmunoglobulina total que corresponde al componente monoclonal presente. Adems, en aquellos pacientes en los que se observan pequeas bandas, en los casos en que esta banda monoclonal se sita en la zona beta del espectro electrofortico ( EEF ) la cuantificacin se ve muy sesgada, si slo se utiliza la densitometra directa del EEF. Objetivos. Puesta a punto de un mtodo que nos permita cuantificar de modo especfico, objetivo y reproducible el porcentaje de Inmunoglobulina monoclonal presente en suero y orina de pacientes con gammapatas monoclonales. Mtodo. A todas las muestras se les realiz un Espectro Electrofortico (EEF), cuantificacin de Inmunoglobulinas por Nefelometra y caracterizacin del pico monoclonal mediante Inmunofijacin (IFJ). Adems, se realiz, una densitometra de la IFJ para cuantific ar el pico monoclonal. Resultados. Hemos comparado la cuantificacin del pico monoclonal a partir de la densitometra del EEF, y de la densitometra de la IFJ, usada en combinacin con la cuantificacin de las Inmunoglobulinas por Nefelometra. Se ha comprobado que este ltimo mtodo es el que nos ofrece los resultados ms precisos y reproducibles, sobre todo con los picos pequeos y c on aquellos picos que se localizan en beta. Conclusiones. La Inmunofijacin Cuantitativa es un mtodo que permite una determinacin ms precisa de la cantidad de Inmunoglobulina monoclonal que tienen estos pacientes al diagnstico y durante el seguimiento, as como valoracin de la eficacia del tratamiento. El mtodo nos permite cuantificar picos pequeos que por otros mtodos no seran cuantificables y proporciona informacin sobre el porcentaje de la Inmunoglobulina que an presenta aspecto monoclonal.

103.PURIFICACION DE LA LECTINA EXTRAIDA DE LA EUPHORBIA HANDIENSIS. Guzman-Bistoni C1, Evora N1, Segui ME1, Peraza S2, Garcia-Tamayo J3, Molina J3, Frias I4, BlascoOlaetxea E1. 1Instituto Canario de Investigacin del Cncer ICIC. 2Centro Cancer Gastrointestinal San Cristobal Venezuela. 3Novapath - Maracaibo- Venezuela, 6Novapath - Maracaibo- Venezuela. 4Universidad de La Laguna. La lectinas son proteinas extraidas de plantas que tienen la caracteristica de reconocer y unirse a estructuras carbohidrato Nuestro objetivo con el presente trabajo es comprobar la utilidad de la Lectina extrai-

da del Cardn de Jandia Euphorbia handiensis, un endemismo de la Isla de Fuerteventura, en el estudio de tejido Humano normal y patolgico. Euphorbia handiensis es una especie incluida en el catlogo de especies amenazadas de Canarias, por lo que fue necesaria la autorizaci n para su recolecci n por el Gobierno de Canarias. Una vez recolectada en campo, el material vegetal se conserva en fro hasta su llegada al laboratorio, donde se congela para su posterior procesamiento. 61 bloques de parafina con tejido gstrico del Centro de Control de Cncer Gastrointestinal en San Cristobal, fueron procesados en el Laboratorio del ICIC en Fuerteventura y Novapath de Maracaibo. Aislamiento y purificacin de lectinas: A partir de muestras congeladas de plantas seleccionadas se procede a su rotura en un mortero mantenido con nitrgeno lquido a una baja temperatura <90 C. Posteriormente se homogeneiza el polvo resultante en PBS+ (PB, 200 mM NaCl, 1mM PMSF, 5mM &#946;ME, pH6,9) con ayuda de un politrn (5min x 5000 rpm, 0 C). A continuacin. El homogenado se centrifuga en volmenes de 20 ml durante 20 minutos a 15 000 x g 4C. El sobrenadante que se obtiene se cromatografa sobre un lecho de Sephadex LH20 previamente desgasificado y silanizado a fin de evitar oxidaciones e interacciones entre lectinas y residuos de la fase slida. A continuacin se precipita la fraccin no-lectina con SO4 (NH4)2 durante 1 hora en agitacin y a 40% de saturacin. Tras 12-15 horas de sedimentacin y equilibrado la muestra se centrifuga 10 minutos a 15 000 x g y se realiza una nueva precipitacin salina de la fraccin rica en lectina con SO4 (NH4)2 al 65-80% de saturacin -dependiendo del material vegetal- a4 C. Por ltimo se centrifuga de nuevo en las mismas condiciones y el precipitado se redisuelve en buffer PBS+ y se dializa en el mismo buffer (1 Litro, 2 cambios, durante 12 horas) el dializado se clarifica por centrif ugacin y puede congelarse en este punto. Cromatografa de afinidad sobre manosa y Neu5Gc. Se realiza en microcolumnas (Pierc e C.O.) sobre dos lechos en tmdem de Sepharose CL6B con Manosa acoplada a travs de brazo espaciador C8 (Sigma C.O.) y Sepharose acoplada a Neu5Gc a travs de un brazo C8 siguiendo el protocolo del fabricante. La unin se lleva a cabo a 20C, con 10 pases de la muestra por el gel, lavado y elucin con manosa en PBS+ 500mM NaCL, siguindose la absorbancia a 280 para la unin y mediante el reactivo de Bradford para la elucin. Muestras de cada paso se separan para anlisis mediante SDS-PAGE y Western blot. Se procede a la biotinizacin de las protenas eluidas Histoqumica de lectinas. Las biopsias incluidas en parafina se cortan a 3 micras de espesor y se montan sobre portaobjetos con Poly-L-Lysina. Se utiliz sistema Stepavidina-HRP (Dako) para la unin a la biotina por 10 minutos. El revelado se realiz con Diaminobenzidina (DAB). Resultados y conclusiones. La lectina extraida de la Euphorbia handiensis reconoce una estructura carbohidrato presente en las clulas de la mucosa gstrica superf icial normal, dando un patrn de expresin similar al de los antgenos relacionados con los grupos sanguneos. Es por ello que basandonos en nuestra experiencia con este tipo de marcadores pensamos que podra ser til en el estudio de los procesos neoplsico del estmago.

104.LA PROTENA VIRAL A238L INHIBE LA EXPRESIN DE COX-2 Y LA MIGRACIN EN CLULAS DE CARCINOMA DE COLON HUMANO. Sabina Villar P1, Gonzlez Granja A2, Garca Snchez E1, Nogal Pars ML1, Revilla Novella Y1. 1Centro de Biologa Molecular. 2Cancer Research UK London Research Institute. La ciclooxigenasa 2 (COX-2), est aumentada en diversos cnceres humanos afectando a la carcinognesis. Anteriormente hemos

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demostrado que la protena viral A238L inhibe la actividad de los factores de transcripcin NF-kappa B, NFAT y los coactivadores CBP/p300 en distintos tipos celulares y por tanto los genes diana se encuentran inhibidos en clulas que expresan A238L. En el presente trabajo, usando lneas celulares de carcinoma de colon humano como Caco-2 y HT29 que expresan establemente A238L, cotransfectadas con distintas construcciones reporteras de la actividad del promotor de COX-2, demostramos que la expresin del gen viral inhibe la trascripcin de COX-2 en sitios especficos de su promotor y consecuentemente la sntesis de PGE-2. Adems, la expresin de una versin constitutivamente activa de calcineurina o NFAT revierte la inhibicin mediada por A238L, implicando a esta ruta de sealizacin en el mecanismo funcional de la protena viral. Adems, utilizando ensayos de quimiotxis en placa, observamos que la presencia de A238L disminuye la migracin celular, un efec to que se revierte mediante sobreexpresin de calcineurina. Puesto que COX-2 ha sido implicada en desarrollo de metstasis tumoral, actualmente estamos analizando la expresin de marcadores de adhesin celular tales como I-CAM y V-CAM, de angiognesis como VEGF y de invasin tumoral como MMP-9, en clulas HT-29 pcDNA y HT-29 pcDNA-A238L, as como el efecto de sus respectivos sobrenadantes de cultivo sobre clulas HUVEC, para evaluar, mediante ensayos in vitro, la consecuencia de la disminucin de la expresin de COX2 mediada por A238L y su repercusin en la formacin de metstasis in vivo.

E135, FM3 y E100 encontramos niveles transcripcionales reduc idos que podran explicar parc ialmente la baja expresin. Sin embargo, en el resto de las lneas, los niveles transcripcionales fueron similares a los de los linfocitos por lo que en estos casos la baja expresin de HLA-B en superficie no sera debida a un fallo en la transcripcin.

106.PRESENCIA DE CELULAS TRONCALES NEURALES NESTINA POSITIVAS EN EL GLIOBLASTOMA MULTIFORME. Hernndez-Cillero L1, Subiza Garrido-Lestache JL2, Martnez-Martnez A3, Zimman-Mansfeld H1. 1Instituto de Neurociencias y Servicio de Neurociruga. 2Servicio de Inmunologa. 3Anatoma Patolgica. Hospital Clnico San Carlos. Madrid. Antecedentes. Las clulas troncales neurales son definidas como clulas multipotentes del sistema nervioso central capaces de dividirse indefinidamente y diferenciarse a distintos tipos de clulas especializadas, morfolgica y funcionalmente(1). Adems pueden ser expandidas en agregados celulares esfricos llamados neurosferas en medio libre de suero conteniendo EFG y FGF. Dentro de los tumores cerebrales de origen glial, el glioblastoma multiforme (GBM), es un tumor altamente maligno. Constituye el 50-60% de los tumores gliales(3), con una supervivencia media de 14 meses a pesar de los tratamientos convencionales de ciruga, r adio y quimioterapia. Objetivo. Demostrar la presencia de clulas definidas como troncales nestina positiva en el GBM. Materiales y mtodos. Se estudiaron cinco tumores cerebrales humanos diagnosticados como Glioblastoma Multiforme de acuerdo a la clasific acin de la Organizacin Mundial de la Salud, previo consentimiento de los pacientes y con protocolo aprobado por el comit tico del Hospital Clnico San Carlos. Se recogieron los tumores en fresco, procediendo a digestin enzimtica y disociacin mecnica. Se realiz cultivo primario de los tumores en medio DMEM-F12 libre de suero suplementado con hormonas(4) y factores de crecimiento epidrmico y fibroblstico. Las tumoresferas, las cuales aparecen en la primera semana de cultivo, se disgregaron y se r ealiz el estudio de contenido de nestina por inmunofluorescencia y citometra de flujo. Resultados 1. Se observ la formacin de neurosferas o tumoresferas mediante microscopio de contraste de fases. 2. Presencia de un pequeo nmero de clulas positivas para nestina con patrn citoplasmtico en los tumores estudiados. 3. El anlisis citofluoromtrico demostr hetereogeneidad morfolgica adems de un porcentaje (1-5%) de clulas teidas con antinestina. Conclusiones 1. Se demostr la existencia en el GBM de un pequeo grupo de clulas carac terizadas por su positividad a la nestina. 2. Estas clulas similares a las clulas troncales neurales pueden ser el origen o fuente de renovacin del tejido tumoral. Bibliografa
1. 2. 3. 4. Weiss S, Reynolds BA. J Neurosci 1992 y Science, 1992. Vescovi AL. Neuron 1993. Rubinstein LJ. Tumors of the Central Nervous System. Atlas AFIP, 1972. Sato GH, Bottenstein J. et al. Methods in Enzymology 1979;58.

105.ANALISIS DE NIVELES DE TRANSC RIPCION DE GENES HLA LOCUS B ESPECFICO EN LNEAS DE MELANOMA QUE PRESENTAN BAJA EXPRESIN DE LOCUS B EN SUPERFICIE. Garca Ruano AB, Romero Noguera JM, del Campo Alonso AB, Mendez Valdes R, Ruiz-Cabello Osuna F, Garrido TorresPuchol F. Hospital Universitario Virgen de las Nieves. Medimos los niveles transcripcionales especfic os para locus B en siete lneas celulares de melanoma (ESTDAB) que presentaban baja expresin de HLA-B en superfic ie medida por citometra de flujo. Para determinar los niveles trasncripcionales realizamos PCR cuantitativa en el analizador Light Cycler de Roche usando cebadores especficos y SGRB-green. Como control estudiamos los niveles transcripcionales especficos para locus B en 50 muestras de linfocitos de sangre perifrica. Todos los resultados se refirieron a niveles transcripcionales de glucosa-6-fosfatodeshidrogenasa. Para comprobar que la amplificacin era especfica para el locus B chequeamos el amplificado por electroforesis en gel de agarosa y analizamos la curva meelting. Todas las lneas estudiadas mostraban amplificacin especfica para HLA-locus B. La media de los niveles de transcripcin del locus B en las muestras de linfocitos de sangre perifrica fue 31,40 copias de mRNA de locus B/copias G6PDH (rango 9,82-109). En el caso de las lneas celulares de melanoma los niveles medios de trasncripcin fueron 5,11 copias de mRNA de locus B/copias G6PDH (rango 0,50-11,43). Los resultados para cada lnea fueron los siguientes: FM28, 0.50 locus B/GPDH; E120, 0.56 locus B/GPDH; E135, 2.14 locus B/GPDH; FM3, 6.93 locus B/GPDH; E100, 3.16 locus B/GPDH; E114, 11.43 locus B/GPDH; E125, 11.04 locus B/GPDH. Analizando estos resultados podemos decir que FM28 y E120 muestran niveles muy bajos de transcripcin de locus B lo cual puede explicar su baja expresin en superfic ie. En las lneas celulares

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107.CARACTERIZACIN INMUNOGENOTPICA DEL REORDENAMIENTO MONOCLONAL DE LA CADENA PESADA DE LA INMUNOGLOBULINA (IGH) EN UNA SERIE DE 25 PACIENTES CON LEUCEMIA LINFTICA CRNICA B (LLCB). Modrego Ruiz J, Teijeiro Martorell R, Santamara Jaramillo B, Gil Herrera J, Rodriguez-Sainz C, Fernndez-Cruz E. Hospital General Universitario Gregorio Maran. Madrid. Introduccin. En los sndromes linfoproliferativos la caracterizacin inmunogenotpica del reordenamiento monoclonal de IgH permite determinar el estado de hipermutacin somtica (HMS) y la regin VH reordenada. Ambas determinaciones tienen valor pronstico y particular inters en la LLC-B ya que esta patologa muestra gran heterogeneidad en su progresin clnica. El estado de la HMS no mutado frente al mutado y el uso de la familia VH3-21 son marcadores independientes de peor pronstico, siendo controvertida la influencia geogrfica en la frecuencia de estas caractersticas. Objetivo. Efectuar la caracterizaci n gentica del reordenamiento IgH en una serie de 25 pacientes con LLC-B atendidos en el Hospital Gregorio Maran. Mtodo. Estudiamos 25 pacientes con LLC-B cuyas muestras de sangre perifrica se recibier on consecutivamente en la seccin de Inmunogentica Molecular del hospital. Despus de extraer el DNA genmico, se amplific el DNA de IgH reordenado y se secuenci con el kit BigDye Terminator Cycle Sequencing (Applied Biosystems). El anlisis de las secuencias se hizo con el programa IMGT/V-QUEST. Resultados: De las 25 muestras procesadas conseguimos analizar 22. La mayor parte de los reordenamientos muestran un estado mutado (72.7%) con una frecuencia de mutacin media del 8.3% (rango 5.511%). Siete individuos (27.3%) presentaron un estado no mutado, 5 de ellos con identidad total respecto a la secuencia consenso. Un slo individuo present reordenada la familia VH3-21(4.5%), siendo su estado no mutado. La regin ms frecuentemente reordenada es VH3(72.8%). Conclusiones. En la mayora de los pacientes con LLC-B hemos podido determinar el estado de HMS y la familia reordenada, lo que aade valor pronstico a las estadificaciones c lsicas (RAI y BINET). La ampliacin de la serie y el seguimiento de los pacientes estudiados permitirn confirmar el valor pronstico de ambos marcadores y estudiar la frecuencia de las familias VH reordenadas en nuestra poblacin.

analizando la supervivencia de ambas poblaciones, su respuesta proliferativa y la modulacin de distintos marcadores de activacin. Las poblaciones linfoides estudiadas expresan varios de los miembros Eph/EFN, tanto receptores como ligandos, destacando una expresin incrementada de EFNA4, incluyendo una isoforma soluble, en las clulas B leucmicas, as como un incremento signific ativo en la proporcin de linfocitos T que expresan EphA4 en los ganglios de pacientes LLC, por lo que EphA4 y EFNA4 podran funcionar como pareja receptor-ligando en la interaccin T-B. La adicin de EphA4 EFNA4 recombinantes solubles a co-cultivos T-B, lo cual debera interferir en la interaccin normal de EphA4/EFNA4, result en una mayor respuesta proliferativa de los linfocitos T as como en una mayor supervivencia de los linfocitos B leucmicos fr ente a la situacin control, en ausencia de protenas recombinantes solubles. Nuestros resultados sugieren que la interaccin T-B en la LLC est mediada, en parte, por EphA4/EFNA4 modulando la respuesta proliferativa T y la supervivencia de las clulas B leucmicas.

109.INFLUENCIA DEL POLIMORFISMO 1082 A>G DE L-10 EN LA EVOLUCIN DEL CARCINOMA RENAL DE CLULAS CLARAS. Senz-Lpez Garrocha P, Romero JM, Carretero R, Czar JM, Tallada M, Garrido F, Ruiz-Cabello F. Hospital Universitario Virgen de las Nieves. La IL-10 es una citoquina inmunosupresora que podra favorecer el escape tumoral a la inmunovigilancia. Sin embargo existen evidencias de una interaccin compleja de esta citoquina en el microambiente tumoral de tal manera que podra desarrollar tambin efectos antitumorales. Por este motivo, los estudios de polimorfismos genticos de IL10 en relacin al cncer estn sujetos a controversia. El polimorfismo IL10-1082A>G (rs1800896) se ha descrito como el ms importante en poblacin espaola y se ha relacionado el alelo G a alta produccin de IL-10. En el presente estudio se ha determinado este polimorfismo en 127 pacientes y se ha analizado su influencia sobre varios parmetros relacionados con la evolucin: dimetro tumoral, grado nuclear, adenopatas, trombosis maligna, metstasis, estado tumoral y riesgo UKLA. Nuestro estudio revel en primer lugar, que no hubo una asociacin directa de ninguno de los polimorfismos o haplotipos de IL10 estudiados en relacin al riesgo de cncer renal. Sin embargo hemos observado que un mayor heterocigosidad AG en la posicin -1082 del gen (que determinara niveles intermedios de produccin de la citoquina) se asocian a un dimetro tumoral mayor de 7 cm (OR=4,41; p=0,001), a la aparicin de adenopatas (OR=1,79; p=0,006) y a un estado tumoral avanzado (OR=14; p=0,002). Nuestros resultados pueden ser interpretados en el contexto de la compleja interaccin de IL10 en el microambiente tumoral, con efectos tanto sobre las clulas tumorales, sobre el infiltrado inflamatorio, y sobre la vascularizacin, y donde esta citoquina puede desarrollar a la vez efectos pro- y antitumorales.

108.ESTUDIO DEL PAPEL DE Eph Y EFN EN LA INTERACCIN T-B EN LA LEUCEMIA LINFTICA CRNICA. de Garcillan Goyoaga B1, Trinidad lvarez EV1, Ballesteros Andres M2, Zapata Gonzlez A1, Alonso Colmenar LM1. 1Universidad Complutense de Madrid. 2Hospital General Universitario Gregorio Maran. Madrid. Distintas evidencias han puesto de manifiesto un papel crtico de la interaccin T-B en leucemia linftica crnica (LLC) , caracterizada por una acumulacin progresiva de linfocitos B CD19+CD5+, y donde la familia de receptores tirosinaquinasa Eph y sus ligandos, ephrin (EFN), i mplicada en procesos de adhesin/repulsin celular en otros sistemas, podra jugar un papel clave en dichas interacciones. Hemos caracterizado la expresin de Eph/EFN en linfocitos T y B sanos y de pacientes LLC, mediante RT-PCR y citometra de flujo (FACS), as como mediante inmunofluorescencia en ganglios reactivos sanos y de pacientes LLC. Adems, hemos estudiado in vitro el efecto de la adicin de protenas recombinantes Eph EFN a co-cultivos de linfocitos T y B sanos y de pacientes LLC estimulados via CD3 y CD28,

110. ESTUDIO DE POLIMORFISMOS DE LOS GENES RANTES, IL-1, MCP-1 Y TNF- EN PACIENTES DE CANCER DE PRSTATA. Saenz-Lpez P1, Carretero R1, Romero JM1, Cantn J1, Czar JM2, Tallada M2, Garrido F1, Ruiz-Cabello F1. 1Servicio de Anlisis Clnicos y de 2Urologa. Hospital Virgen de las Nieves de Granada. Introduccin. La inflamacin ha sido implicada como factor etiolgico de varios canceres en humanos, incluido el cncer de prstata. Las

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variantes allicas de los genes involucrados en las vas de la inflamacin son candidatos lgicos para la determinacin gentica del riesgo de padecer cncer de prstata. El propsito de este estudio fue por tanto, analizar la asociacin entre polimorfismos de un solo nucletido (SNPs) de citoquinas proinflamatorias en la predisposicin al cncer de prostata. Material y mtodos. Hemos realizado un anlisis gentico analizando los polimorfismos de las citoquinas: TNF--308 A/G (rs1800629), RANTES-403 G/A (rs 2107538), IL-1-889 C/T (rs 1800587), y MCP-1 2518 G/A (rs1024611). El estudio se realizo con 296 pacientes espaoles con cncer de prstata y 216 personas sanas espaolas. Resultados y conclusiones. Pacientes con cncer de prstata se asocian significativamente al genotipo TNF- GA+AA (OR, 1,697;95% CI, 1.089-2,644) y al genotipo RANTES GA+AA (OR,1,610;95% CI, 1,088-2382 ). El alelo A de TNF- y RANTES influye en la susceptibilidad de padecer cncer de prstata. No se descubri ningn efecto episttico entre combinaciones de diferentes polimorfismos. Por ultimo no se observ una asociacin entre riesgo de desarrollo de cncer de prstata y los polimorfismos de IL-1 y MCP-1. Nuestros resultados favorecen la hiptesis de que variaciones en algunos genes que regulan la inflamacin y la respuesta innata pueden ser importantes en el desarrollo del cncer de prstata.

111. ANALISIS DE CADENAS LIGERAS LIBRES EN SUERO PARA LA VALORACION DE LOS FILTROS DE GRANDES POROS EN EL PERIODO INICIAL DEL MIELOMA MULTIPLE CON DAO RENAL AGUDO. Muoz Alcon H1, Jimnez Cobaleda MJ1, Garca de Burgos M1, Hernandez A1, Rodrguez R1, Hernndez J2, Queizan JA2, Heras M3, Snchez R3, Fernndez-Reyes MJ3. 1Anlisis Clnicos. 2Hematologa. 3Nefrologa. Hospital General de Segovia. Se analizaron las cadenas ligeras libres CLL en el suero de un paciente, diagnosticado de mieloma mltiple IgG-K con eliminacion urinaria de grandes cantidades de K libre e insuficiencia renal aguda, antes , durante y despues de una hemodilisis con fi ltro GAMBRO HEO 1100. El analizador utilizado es un Immage 800 y reactivos especficos para CLL de la casa the binding site. El paciente fu tratado farmacolgic amente desde su diagnstico con dexametasona y con bortezomib y dexametasona a partir del dia +7. Se observ que los niveles de K libre descesdieron a partir de la tercera hora y hasta el final de la hemodilisis (6 horas). La hemodialisis se realiz durante varios dias analizndose las CLL en suero pre y post dilisis, observndose que los niveles previos eran muy elevados descendiendo en porcentajes de hasta el 80% tras el filtrado. A partir del dia 14 de tratamiento farmacolgico, los niveles de K libre predilisis comenzaron a mejorar, descendiendo tras la dilisis en la misma proporcin que en dias anteriores. El dia 20 el paciente pidi el alta voluntaria; an as se ha comprobado la eficacia del fi ltro para la disminucion de CLL y la necesidad de mantener este tipo de hemodilisis hasta el control de la masa tumoral del mieloma mltiple.

nstica de esta enfermedad radica en la necesidad de disponer de una gran cantidad de muestra patolgica para realizar las pruebas necesari as, ya sea por citometra de flujo o por diagnstico molecular clsico. En este trabajo describimos una tcnica utilizada en nuestro laboratorio que no slo permite la realizacin de un diagnstico de seguridad con una cantidad limitada de clulas leucmicas sino que posibilita el seguimiento tras el tratamiento y la determinacin de enfermedad residual en un enfermo. Por otra parte, la heterogeneidad en el comportamiento clnico de pacientes con LLC dificulta a los clnicos identificar con precisin los pacientes que se puedan beneficiar de estrategias teraputicas tempranas y agresivas y adems poder ofrecer a los pacientes informacin relevante del pronstico de su enfermedad. Dada la eficacia potencial de las nuevas terapias y la voluntad de tratar pacientes en el momento ptimo, es cada vez ms importante desarrollar tcnicas lo suficientemente sensibles para identificar los pacientes con peor pronstico. Los estudios ms recientes en esta enfermedad sugieren que realmente englobara dos enfermedades diferentes con diferente curso clnico e implicaciones pronsticas que pueden distinguirse fundamentalmente mediante la secuencia del reordenamiento monoclonal VDJ. La tcnica de secuenciacin de reordenamientos VDJ del gen de cadenas pesadas de inmunoglobulinas es compleja y no est al alcance de muchos centros. En el presente trabajo describimos la puesta a punto y los resultados de la secuenciacin de aquellas muestras con reordenamientos monoclonales diagnosticados en nuestro laboratorio.

112. SECUENCIACIN DE LA REGIN VARIABLE DEL GEN DE LAS CADENAS PESADAS DE INMUNOGLOBULINA EN PACIENTES CON LEUCEMIA LINFOIDE CRNICA. Calvo Benito FJ1, Arbs Magriny A1, Corbillo Colom C1, Vercher Agust FJ2, Balanzat Muoz J2, Gay Puig A1. 1Fundaci Banc de Sang i Teixits de les Illes Balears. 2Servei dHematologia. Hospital Can Misses. Eivissa. La Leucemia Linfoide Crnica (LLC) de clulas B es la forma ms frecuente de leucemia en nuestro entorno. La principal dificultad diagnstica de esta enfermedad radica en la necesidad de disponer de una gran cantidad de muestra patolgica para realizar las pruebas necesari as, ya sea por citometra de flujo o por diagnstico molecular clsico. En este trabajo describimos una tcnica utilizada en nuestro laboratorio que no slo permite la realizacin de un diagnstico de seguridad con una cantidad limitada de clulas leucmicas sino que posibilita el seguimiento tras el tratamiento y la determinacin de enfermedad residual en un enfermo. Por otra parte, la heterogeneidad en el comportamiento clnico de pacientes con LLC dificulta a los clnicos identificar con precisin los pacientes que se puedan beneficiar de estrategias teraputicas tempranas y agresivas y adems poder ofrecer a los pacientes informacin relevante del pronstico de su enfermedad. Dada la eficacia potencial de las nuevas terapias y la voluntad de tratar pacientes en el momento ptimo, es cada vez ms importante desarrollar tcnicas lo suficientemente sensibles para identificar los pacientes con peor pronstico. Los estudios ms recientes en esta enfermedad sugieren que realmente englobara dos enfermedades diferentes con diferente curso clnico e implicaciones pronsticas que pueden distinguirse fundamentalmente mediante la secuencia del reordenamiento monoclonal VDJ. La tcnica de secuenciacin de reordenamientos VDJ del gen de cadenas pesadas de inmunoglobulinas es compleja y no est

112. SECUENCIACIN DE LA REGIN VARIABLE DEL GEN DE LAS CADENAS PESADAS DE INMUNOGLOBULINA EN PACIENTES CON LEUCEMIA LINFOIDE CRNICA. Calvo Benito FJ1, Arbs Magriny A1, Corbillo Colom C1, Vercher Agust FJ2, Balanzat Muoz J2, Gay Puig A1. 1Fundaci Banc de Sang i Teixits de les Illes Balears. 2Servei dHematologia. Hospital Can Misses. Eivissa. La Leucemia Linfoide Crnica (LLC) de clulas B es la forma ms frecuente de leucemia en nuestro entorno. La principal dificultad diag-

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al alcance de muchos centros. En el presente trabajo describimos la puesta a punto y los resultados de la secuenciacin de aquellas muestras con reordenamientos monoclonales diagnosticados en nuestro laboratorio.

113. IgM MONOCLONAL CON CAPACIDAD CITOFLICA EN LINFOMA LINFOPLASMOCTICO. Rodrguez-Martn E, Alcal I, Gonzlez-Porqu P, Martnez-Viambres E, Neil Hermenegildo Y, Coll J, Roldn E. Servicio de Inmunologa. El linfoma linfoplasmoctico se caracteriza por la presencia de clulas clonales en diferentes estadios madurativos (linfocitos, infoplasmocitos y clulas plasmticas) en proporciones muy variables, dependiendo del enfermo. La poblacin tumoral presenta expresin leucmica en la mayora de los pacientes, detectndose en sangre perif rica ( SP) y mdula sea (MO), llevando asociada una paraprotena IgM circ ulante. Por otro lado, la citofilia es una propiedad de la regin Fc de las inmunoglobulinas (Igs) que consiste en la capacidad que presenta la Ig para unirse a las clulas a travs de sus receptores para Fc. El caso clnico que se presenta es el de un varn de 75 aos con sndrome constitucional acompaado de vmitos, tos y expectoracin. Se realizaron estudios de citometra de flujo en muestras de PAAF, SP, aspirado de MO y lquido pleural. En todas las muestras, excepto en el lquido pleural, se detect la presencia de dos poblaciones tumorales de clulas B, diferencindose dos estadios madurativos: linfocitos B y linfoplasmocitos. Ambas poblaciones presentaron diferencias en su fenotipo, siendo kappa de superficie +. La inmunofijaci n en suero y en lquido pleural detect la presencia de un pico monoclonal IgM kappa. Asimismo, el estudio inmunofenotpico realizado en lquido pleural mostr la alta capacidad citoflica de la Ig clonal, detectndose su presencia unida a linfocitos T en ausencia de poblacin tumoral linfoide B tras tratamiento. La preincubacin de la muestra con EDTA, DTT y a 37C no fue capaz de revertir la unin de la Ig a las clulas T. Adems, la incubacin de los linfocitos T de un individuo sano con el plasma o el lquido pleural del paciente condujo a la unin de la IgM kappa a la membrana de estas clulas. Estos datos concluyen que la Ig monoclonal de algunos enfermos puede tener una gran capacidad citoflica en su unin a diferentes tipos celulares y que tal capacidad puede llevar a errores en el clculo del porcentaje de clulas tumorales.

de prstata pueden comportarse como una enfermedad en progresin. Entre los indicadores de recurrencia y progresin estn los niveles sricos de PSA y su tiempo de duplicacin. El grado de expresin y prdida de glicosilacin de mucinas de membrana como MUC-1 tambin repercute en la actividad biolgica de los adenocarcinomas. El objetivo de este estudio es valorar la expresin del epitopo de A10 en tumores de prstata y su relaci n con la inmunoreactividad de los anticuerpos I gM as como con los niveles sricos de PSA. Resultados. Mediante citometria de flujo hemos observado que los niveles de reactividad de IgM del suero de individuos sanos frente a las lneas de tumor de prstata humanas, DU145 y PC3, se relacionan con la expresin del epitopo A10 en carbohidrato de tumor de Ehrlich (ELISA) (p=.001). Por otra parte hemos observado un mayor grado de expresin de A10 en Hiperplasias Benignas de prstata en comparacin con Adenocarc inomas de prstata (p=.01) as como tambin entre tumores de bajo grado histolgico de Gleason en comparacin con tumores de alto grado (p=.001). Los valores sricos de PSA al momento del diagnostico histolgico aparecen incrementados en Adenocarcinomas de prstata de alto grado histolgico en comparacin con los de bajo grado y con Hiperplasias Benignas de prstata, con y sin PIN (p=.001 y .003, respectivamente). Adems cuanto mayores son los niveles de PSA al diagnostico histolgico menores son los niveles de expresin de A10. Por otra parte los Adenocarcinomas de prstata que expresan altos niveles de A10 al momento del diagnstico histolgico responden mejor a los tratamientos convencionales (Bloqueo Andrognico Completo, Prostatectoma Radical, Radioterapia) que los que son A10 negativos o muestran una dbil expresin de A10 (p=.041) segn niveles de recidiva de PSA despus del tratamiento. En conclusin el grado de expresin del epitopo A10 se relaciona con el comportamiento biolgico de los tumores de prstata humanos y con la inmunoreactividad de los anticuerpos de IgM.

115. CUANTIFICACIN DEL COMPONENTE MONOCLONAL EN MIELOMA MLTIPLE MEDIANTE ELUCIN DEL PRODUCTO DE INMUNOSUSTRACCIN. Gmez-Rial J, Hermenegildo IN, Gonzlez-Porqu P, Villar Guimerans LM. Hospital Ramn y Cajal. Madrid. Introduccin. La cuantificacin del componente monoclonal se ha convertido en un objetivo importante para el seguimiento de los pacientes con Mieloma Mltiple. Las tcnicas convencionales de electroforesis en geles de Agarosa (EGA) y cuantificacin nefelometrica presentan problemas para la separacin de la fraccin policlonal de la monoclonal. Una tcnica de Electroforesis Capilar, la Inmunosustraccin, permite la caracterizacin de paraprotenas mediante incubacin del suero con bolas de agarosa que llevan unidos anticuerpos especficos frente a las cadenas pesadas y ligeras de las Inmunoglobulinas Objetivo. Puesta a punto de un mtodo para la cuantificacin del componente monoclonal en el mieloma mltiple utilizando la tecnologa de inmunosustraccin (Beckman-Coulter). Mtodo. Tras la incubacin del suero del paciente con las bolas de agarosa correspondientes, se someti esta a varios lavados en suero salino, y se eluy la inmunoglobulina inmunosustrada mediante incubacin en un tampn cido bsico segn el tipo de cadena pesada, y posterior neutralizacin. La fraccin eluda, se separ mediante elec-

114.CORRELACION ENTRE EL COMPORTAMIENTO BIOLOGICO DE TUMORES DE PROSTATA Y LA EXPRESION DE UN EPITOPO DE CARBOHIDRATO EN MUC-1 RECONOCIDO POR EL AcMo A10 Y SU RELACION CON ANTICUERPOS DE IgM. Molt L, Garca-Lpez Asenjo JA, Fuentes M, Cillero L, Hernndez S, Moreno J, Campanario F, Arroyo M, Subiza JL. Departamentos de Anlisis Clnicos, Medicina Preventiva, Anatoma Patolgica, Urologa y Inmunologa. Hospital Clnico San Carlos. Madrid. Introduccin. A10 es un anticuerpo monoclonal de tipo IgM que define un epitopo carbohidrato en MUC-1 y que esta presente en adenocarcinomas epiteliales humanos. Estudios previos han descrito la presencia de anticuer pos naturales frente a este epitopo de carbohidrato. Dependiendo de su arquitectura histolgica y del perfil molecular adquirido durante su desarrollo los adenocarcinomas

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troforesis capilar y se analiz mediante el software de Beckman-Coulter. El resultado final se expresa como el porcentaje de inmunoglobulina que corresponde al componente monoclonal con respecto a la inmunoglobulina total. Resultado. Se han analizado mediante este mtodo una serie de pacientes con Mieloma Mltiple, a los cuales se ha realizado la cuantificacin del pico monoclonal mediante nefelometra/AGE y mediante inmunosustraccin. Los resultados obtenidos muestran una mayor sensibilidad y especificidad de este mtodo cuando se le compara con los que estn actualmente en uso as como una alta reproducibilidad. Conclusiones. Se ha puesto a punto un mtodo sensible y reproducible para la cuantificacin del componente monoclonal en mieloma mltiple mediante la elucin y posterior separacin de la inmunoglobulina que se une a la matriz slida durante la inmunosustraccin.

117. LAS MOLCULAS HLA DE CLASE I PRESENTAN UN RITMO CIRCARDIANO DE EXPRESIN EN CELULAS TUMORALES Y EN LINFOCITOS TRANSFORMADOS. Stefanski J, Linares Dickler I, Romero Garca I, Maleno I, Berruguilla Prez E, Garrido Torrres-Puchol F, Garca Lora AM. Hospital Universitario Virgen de las Nieves. Diferentes procesos fisiolgicos presentan una regulacin circadiana, con ciclos que se repiten aproximadamente cada 24 horas. En mamferos este ritmo circadiano es controlado por el ncleo supraquiasmtico. Numerosos estudios han mostrado que las propias clulas perifricas, clulas inmortalizadas y clulas en cultivo presentan un reloj circardiano independiente. Estos ciclos circadianos estn controlados principalmente por las familias de genes Clock, Period y Cry ptocrom. Dentro de la clula, se han descrito muchos genes que presentan una expresin circadiana, regulada por los genes mencionados anteriormente. En este estudio hemos analizado si la expresin en superficie de molculas HLA de clase I presentan una expresin circadiana en lneas clulas tumorales y en linfocitos transformados con el virus de Epstein-Barr. Las clulas en cultivo fueron sincronizadas mediante un shock de suero, y la expresin en superficie de molculas HLA de clase I fue medida cada 6 h, por inmunofluorescencia indirecta y lectura por citometra de flujo. Se han utilizado una lnea celular de melanoma y una lnea de linfocitos transformados con EBV. Una vez sincronizadas las clulas en cultivo, los resultados mostraron que la expresin de molculas HLA de clase I presenta un ritmo circadiano tanto en clulas tumorales como en los linfocitos transformados. La expresin disminuye durante las primeras 12 h despus de la sincronizacin; a continuacin, aumenta alcanzando un mximo a las 24 a 30 h, para finalmente decaer a las 36 h. Podemos decir que el ciclo empieza a las 12 h y termina a las 36 h, teniendo un ritmo circadi ano de aproximadamente 24 h.. Los resultados obtenidos muestran que la expresin de molculas HLA de clase I en estos dos casos de lneas celulares en cultivo presenta un ritmo circadiano, abriendo la posibilidad de que en la expresin de molculas HLA de clase I desempee un papel importante los genes que regulan el ritmo circ adiano a nivel celular.

116. CORRELACIN INVERSA ENTRE LA EXPRESIN DE MOLCULAS MHC DE CLASE I Y EL CRECIMIENTO IN VIVO EN DOS SISTEMAS TUMORALES. Romero I, Berruguilla E, Garrido C, Linares I, Casares C, Stefanski J, Algarra I, Collado A, Garrido F, Garca-Lora AM. Servicio de Anlisis Clnicos, Hospital Universitario Virgen de las Nieves, Granada. Departamento de Ciencias de la Salud, Universidad de Jan. Se ha desarrollado un modelo tumoral murino, B9, compuesto por diferentes metstasis espontneas derivadas de un mismo clon tumoral, que presentan diferentes fenotipos MHC de clase I: MN con un fenotipo positivo; MPA con un fenotipo MHC de clase I negativo, recuperable con IFN-; y MPB con fenotipo negativo para MHC de clase I, e irrecuperable para la molcula L con IFN-. Tambin, hemos desarrollado un sistema tumoral humano, Ando-2, compuesto por: una lnea celular de melanoma humano, con perdida de un haplotipo HLA; otra lnea celular obtenida despus del crecimiento en ratones nude, Ando-2nude, con perdida total de expresin de molculas MHC de clase I; y una tercera, obtenida por la transfeccin estable del gen HLA-A2 en la lnea celular Ando-2, Ando-2-A2. Se ha comparado el crecimiento in vivo de estas lneas celulares en ratones inmunocompetentes en uno de los sistemas y en ratones nude en los dos sistemas. Las clulas fueron inyectadas subcutneamente en la pata y el crecimiento local del tumor fue controlado tres veces en semana. En el sistema B9, las tres lneas mostraron en ratones inmunocompetentes una correlacin inversa entre el crecimiento del tumor y la expresin de H-2 de clase I: La lnea MPB present un crecimiento ms rpido comparado con la lnea MPA, mientras que la lnea MN que comenz creciendo, finalmente fue rechazada. En ratones nude las tres lneas presentaron crecimiento local, con el siguiente orden: MPB>MPA>MN. En el sistema tumoral Ando-2, en ratones nude, tambin se encontr una correlacin inversa entre el crecimiento y la expresin de HLA de clase I: Ando-2nude presento un mayor crecimiento y es la mas oncognica; la lnea celular Ando-2 creci ms lentamente; y por ltimo, la lnea Ando-2-A2, consigui crecer al principio pero finalmente el tumor fue rechazado. En estos dos sistemas tumorales, se ha encontrado una correlacin inversa entre el crecimiento in vivo y la expresin de molculas MHC de clase I en clulas tumorales.

118. COMPARACIN DE 2 ENSAYOS PARA LA DETERMINACIN DE CADENAS LIGERAS LIBRES EN SUERO EN PACIENTES CON GAMMAPATA MONOCLONAL. Morandeira F1, Soriano A1, Quandt E1, Castro P1, Ruiz E1, Oriol A2, Pujol R1, Herrero MJ1. 1Servicio de Inmunologia (LIRAD-BST). 2Servicio de Hematologia ICO del Hospital Universitari Germans Trias i Pujol UAB. Badalona. Introduccin. En las gammapatas monoclonales se ha descrito una sobreproduccin de cadenas ligeras libres kappa () o lambda (), que en muchos casos resulta en una alteracin de la ratio / normal en suero. Estudios previos han demostrado que el valor de esta ratio es de utilidad en el diagnstico, monitorizacin y evaluacin del pronstico (evolucin a malignidad) de estas patologas. Objetivo. Comparar la sensibilidad de dos sistemas de determinacin de la ratio / en suero y su correlacin con la clnica en pacientes con gammapata monoclonal. Pacientes y mtodos. Se analizaron 47 muestras de suero pertenecientes a pacientes con banda monoclonal detectada por inmunofija-

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cin. Se dosificaron las cadenas y libres mediante nefelmetro utilizando reactivos de 2 proveedores (P1 y P2): uno validado para uso en suero (P1) y otro para orina adaptado a medicin en suero (P2), y se calcul la ratio / de cada suero. Resultados. De los 47 sueros analizados, 16 (34%) dieron una ratio / alterada (intervalo de referencia: 0.26-1.65) con los reactivos del P1 y 9 (19%) con los del P2, todos ellos detectados tambin con los reactivos del P1. Los 7 (15%) sueros con resultado discrepante entre P1 y P2 correspondan a positivos reales (3 a mieloma mltiple (MM) de inmunoglobulina intacta, 2 a MM de cadena ligera y 2 a gammapata monoclonal de significado incierto). Conclusiones. Los reactivos del P1 tienen ms sensibilidad para la deteccin de ratios / alteradas que los del P2. Es importante utilizar la tcnica ms sensible de que se disponga para un mejor diagnstico y seguimiento de estos pacientes.

Conclusiones. El nivel basal de los linfocitos CD8CD25 y su evolucin con el tratamiento antiretroviral podra ser un parmetro inmunolgico til para distinguir los pacientes que, con unos CD4 inferior es a 100 clulas /ml y una carga viral mayor de 4-5 Log, van a presentar un sndrome de reconstitucin inmune con el inicio de la terapia anti-retroviral.

120.POLIMORFISMOS EN GENES DE CITOQUINAS IMPLICADAS EN INFLAMACIN NO ESTN ASOCIADOS CON EL RIESGO DE SUFRIR SEPSIS. Guzmn Fulgencio M1, Sirgo Gonzalez G2, Castillo Rama M1, Bernardo Gonzlez I1, Mancebo Sierra E1, Romo Pasamar E1, Prez V1, Paz Artal E1, Morales Prez P1. 1Hospital Universitario 12 de Octubre, Madrid. 2Departamento de Cuidados Intensivos. Hospital Universitario Joan XXIII, Tarragona. La sepsis es una patologa que se define como la respuesta inflamatoria sistmica a la infecci n. El objetivo de este estudio es valorar si los polimorfismos de genes implicados en inflamacin como los situados en las regiones promotoras de los genes de las citoquinas proinflamatoria TNF-a (-308G>A) y anti-inflamatoria IL-10 (-592C>A), incrementan el riesgo de sufrir sepsis. El estudio se ha realizado con 107 pacientes spticos que proceden de la unidad de cuidados intensivos Unidad de Cuidados Intensivos del Hospital 12 de Octubre (Madrid, Espaa) y el Hospital Joan XXIII (Tarragona, Espaa) y 107 controles. Los distintos genotipos han sido determinados empleando la reaccin en cadena de la polimerasa seguida del anlisis por fragmentos de restriccin a partir de ADN extrado de sangre perifrica. Los resultados obtenidos fueron comparados por el test estadstico de Chi-cuadrado aplicando la correccin de Yates . El anlisis estadstico revel la falta de diferenci as signific ativas en las frecuencias gnicas de los polimorfismos estudiados comparados con controles tanto en el polimorfismo del gen TNF-a (p= 0,99) , como en el polimorfismo en el gen IL-10 (p=0,47). Podemos concluir entonces que los polimorfismos estudiados no estan asociados con el riesgo a sufrir sepsis.

SESIN 8: INMUNIDAD E INFECCIN Moderadores: Dr. Francisco Lozano (Barcelona), Dra. Margarita Bofill (Barcelona) 119. LOS NIVELES BASALES DE LINFOCITOS CD8+CD25+ PUEDEN SER UN MARCADOR PREDICTIVO DE SINDROME DE RECONSTITUCION INMUNE TRAS TARGA. Garca Delgado R1, Cianchetta Sivori M1, Raso Torres S1, Gorgolas-Hernndez de Mora M2, Goyenechea A2, Fernndez-Guerrero M2. 1Inmunologa. 2Infecciosas. Fundacin Jimnez Daz-CAPIO. Objetivos. En los pacientes VIH+ que inician terapia antiretroviral de alta eficacia se puede observar una disminucin de la carga viral junto con un aumento de los linfocitos CD4 y en algunos pacientes esta reconstitucin inmunolgica lleva a una importante reaccin inflamatoria o a un deterioro clnico producido por el incremento sbito de su respuesta inmune (Sndrome de Reconstitucin Inmunolgica). El objetivo de este trabajo es encontrar un parmetro inmunolgico que pueda predecir este comportamiento. Pacientes y Mtodos. Se han evaluado 55 pacientes VIH+ naive de tratamiento o sin tratamiento antiretroviral el ao anterior al estudio, con linfocitos CD4 < de 100 cels/ul y una carga viral de VIH1 >4,5 Log. En ellos se han estudiado por citometra de flujo los linfocitos naive y de memoria y marc adores de activacin basalmente y durante los 6 meses siguientes al comienzo de terapia anti-retroviral. Resultados. En los 5 pacientes que presentaron RSI del aumento de los linfocitos CD4 a los seis meses de tratamiento anti-retroviral fue 8 veces superior al valor basal, mientas que en los que no presentaron SRI fue de 4 veces su valor basal a 6 meses de tratamiento, siendo el descenso de la carga viral VIH-1 de un 90% con respecto a su valor basal frente al 70% en los pacientes sin SRI. La elevacin de estos linfocitos CD4 en ambos tipos de pacientes es siempre debida al aumento de los linfocitos CD4CD45RO (memoria). Cuando se analizaron los marcadores de activacin de los linfocitos CD4 y CD8 (CD38, HLA-DR, CD25) se encontr una diferencia significativa entre los niveles basales de linfocitos CD8CD25 entre los pacientes que presentan SRI y los que no (SRI 17 32% vs pacientes sin SRI 4 6.8% p= 0.07) c on una disminucin marcada a lo largo del tratamiento de los linfocitos CD8CD25 en los pacientes que presentan SRI.

121.EL POLIMORFISMO INSERCIN/DELECIN EN EL GEN DE LA ENZIMA CONVERTIDORA DE ANGIOTENSINA (ACE) EST ASOCIADOS CON EL RIESGO DE SUFRIR SEPSIS. Guzmn Fulgencio M1, Sirgo Gonzalez G2, Castillo Rama M1, Bernardo Gonzalez I1, Mancebo Sierra E1, Romo Pasamar E1, Prez Aradas V1, Paz Artal E1, Morales Prez P1. 1Servicio Inmunologa. Hospital Universitario 12 Octubre. 2Unidad de Cuidados Intensivos. Hospital Universitario Joan XXIII, Tarragona. La sepsis es una patologa que se define como la respuesta inflamatoria sistmica a la infeccin. El objetivo de este estudio es evaluar si el polimorfismo Inserci n /Delecin en el intron 16 del gen de la Enzima Convertidora de Angiotensina (ACE) incrementa o no el riesgo de sufrir sepsis. El estudio se ha realizado con 100 pacientes spticos que proceden de la unidad de cuidados intensivos de dos hospitales universitarios y 107 controles. Los distintos genotipos han sido determinados mediante la reaccin en cadena de la polimerasa (PCR) y electroforesis en gel de acrilamida. Los resultados obtenidos fueron comparados por el test estadstico de Chi-cuadrado aplicando la correccin de Yates. Los resultados mostraron el genotipo DD en 51 pacientes (51%), el genotipo ID en 31 (31%) y el genotipo II in 18 (18%). Los pacientes spticos mostraban una mayor frecuencia del genotipo DD

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comparados con controles (51% vs 35,5% p =0,035) y del alelo D comparado con el alelo I (66,5 vs 49,1% p =0,02). Podemos concluir, por tanto, que el alelo D de este gen est asociado con el riesgo de sufrir sepsis.

mecanismo dependiente de unin a glicosaminoglicanos. Por el contrario, HRSV es incapaz de infectar ni linfocitos CD4+ ni CD8+. En linfocitos B, la infeccin por HRSV aumenta la expresin de molculas de MHC de clase II pero no MHC de clase I induciendo adems la expresin del marcador de activacin CD86.

122.SUPRESSION OF INFLAMMATORY RESPONSES BY LABDANE-TYPE DITERPENOIDS. Hortelano Blanco S1, de las Heras B2, Lpez R1, Giron N2, Traves PG3, Rodriguez B4, Bosc L3. 1Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC), Madrid. 2Departamento de Farmacologa Facultad de Farmacia, Universidad Complutense, Madrid. 3Instituto de Investigaciones Biomdicas Alberto Sols CSIC-UAM), Madrid. 4Instituto de Qumica Orgnica (CSIC), Juan de la Cierva, Madrid. Diterpenoids are natural products which have been reported to possess a variety of biological properties, including antimicrobial, antiviral, inmunomodulating and anti-inflammatory activities. As part of an intensive program of research into the biological activities of terpenoids, a ser ies of 11 labdane-type diterpenoids (1-11) with various patterns of substitution were tested for potential anti-inflammatory activity. Of these compounds, 4 and 11 were selected to evaluate their influence on targets relevant to the regulation of the inflammatory response in order to investigate the mechanism of action of this class of compounds. These diterpenoids reduced the production of nitric oxide, prostaglandin E2, and tumor necrosis factor-alpha in LPS-activated RAW 264.7 macrophages, with IC50 in the range 1-10 microM. Inhibition of these inflammatory mediators was related to inhibition of the expression of nitric oxide synthase-2 (NOS-2) and cyclooxygenase-2 (COX-2) at the transcriptional level, as determined by western-blot and RT-PCR. Examination of the effects of these diterpenoids on nuclear factor kappaB (NF-kB) signaling showed that both compounds inhibit the phosphorylation of IkBalpha and IkBbeta, preventing their degradation and the nuclear translocation of the NF-kB p65 subunit. Inhibition of IKK ac tivity was also observed. These derivatives displayed significant anti-inflammatory activity in vivo, suppressing mouse ear edema induced by 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA) and inhibiting myeloperoxidase activity, an index of neutrophil infiltration. The anti-inflammatory effects of these labdane diterpenoids, together with their low cell toxicity, suggest potential therapeutic applications in the regulation of the inflammatory response.

124.INTERACCIN DEL VIRUS DE LA FIEBRE AFTOSA (VFA) CON CLULAS DENDRTICAS (DCs): PAPEL DE LA INTERLEUQUINA-10 (IL-10) EN LA INDUCCIN DE UN ESTADO DE INMUNOSUPRESIN TEMPRANA DURANTE LA INFECCIN POR VFA EN EL CERDO. Rodrguez Calvo MT1, Daz San Segundo F2, Sevilla Hidalgo N1. 1Centro de Investigacin en Sanidad Animal (CISA-INIA). 2Plum Island Animal Disease Center. Las clulas dendrticas (DCs) constituyen un elemento crtico en la activacin de una respuesta inmune eficaz. En el caso del virus de la fiebre aftosa (VFA), causante de una de las enfermedades ms importantes en sanidad animal desde el punto de vista econmico, la interaccin virus-DC y su influencia en la induccin de una respuesta inmune frente a virus es poco conocida. En nuestro laboratorio se ha descrito que el virus de la fiebre aftosa (VFA) serotipo C es capaz de infectar linfocitos in vivo, originando la aparicin de linfopenia y deplecin linfoide. Asimismo, los linfocitos son incapaces de responder frente a una estimulacin con mitgeno, lo que indica que los animales se encuentran inmunosuprimidos en el pico de viremia (J. Virol. (2006) 80: 2369). En el presente trabajo hemos estudiado el papel de las DCs en esta inmunosupresin. Para ello, DCs fueron diferenciadas a partir de monocitos perifricos (PBMCs) obtenidos de cerdos infectados con VFA en presencia de GM-CSF e IL-4. Estas clulas pierden su capacidad de madurar y presentar antgenos a clulas T en un ensayo de alorreactividad. Asimismo, cuando DCs diferenciadas a partir de PBMCs de cerdos nave fueron infectadas in vitro con VFA se observ que eran incapaces de activar una respuesta T especfica de antgeno. Estos cultivos de DCs expuestas al virus producen interleuquina-10 ( IL-10) y , lo que es ms interesante, los sobrenadantes de estos cultivos aadidos a DCs nave inducen un estado de inactivacin de clulas T en cocultivos DCs-clulas T. Adems, sueros procedentes de cerdos infectados con VFA muestran altos niveles de IL-10 a tiempos tempranos post-infeccin. Estos datos sugieren que la IL-10 estara produciendo la inhibicin de una respuesta timo dependiente (TD) durante el pico de viremia, lo que favorecera la activacin de una respuesta timo independiente (TI) y la consiguiente produccin de anticuerpos capaces de eliminar el virus. Actualmente se estn realizando experimentos para evaluar esta posibilidad.

123.EL VIRUS RESPIRATORIO SINCITIAL HUMANO INFECTA E INDUCE MARCADORES DE ACTIVACIN EN LINFOCITOS B MURINOS. Rico MA1, Trento A2, Ramos M3, Johnstone C3, del Val M3, Melero JA3, Lpez D1. 1Unidad de Proteomica. 2Unidad de Biologa Viral. 3Unidad de Inmunologa Viral. Centro Nacional de Microbiologa. ISCIII. El virus Respiratorio Sincitial Humano (HRSV) es la causa ms frecuente de infecciones respiratorias severas en nios. Aunque las clulas epiteliales de los conductos respiratorios son la principal diana de infeccin por parte de HRSV, se ha descrito que este virus puede tambin infectar clulas presentadoras profesionales como macrfagos y clulas dendrticas. En dichas clulas la infecc in conlleva la expresin de marcadores de maduracin. El presente estudio, demuestra que linfocitos B (B220+) pr ovenientes de bazo de ratn son susceptibles a la infeccin in vitro por parte de HRSV, probablemente por un

125.NUEVOS VECTORES VACUNALES DE PSEUDO PARTICULAS VIRALES DE CALICIVIRUS. Crisci E1, Almanza H2, Mena I2, Gmez-Casado E3, Crdoba L1, Fraile L1, Brcena J2, Montoya M1. 1Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), UAB-IRTA, Campus de la Universitat Autnoma de Barcelona. 2Centro de Investigacin en Sanidad Animal (CISA-INIA), Valdeolmos, Madrid. 3Dpto. Biotecnologa, INIA, Madrid. La protena de la cpsida (VP60) del virus de la enfermedad hemorrgica del conejo (RHDV) es capaz de formar pseudo partculas virales (VLPs) cuando se expresa en baculovirus (Brcena et el, 2004). Las VLPs representan un tipo particularmente efectivo de vacunas de subu-

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nidad, puesto que mimetizan la estructura general de las partculas virales, no contienen material gentico infeccioso y resultan muy inmungenas incluso en ausencia de adyuvantes. Adems trabajos recientes subrayan el potencial inmunomodulador que pueden jugar las VLPs en su interaccin con las clulas dendrticas (CDs), y su capaci dad para inducir una respuesta inmune frente a eptopos heterlogos. El objetivo del estudio ha sido evaluar las interacciones in vitro entre nuevas VLPs quimricas con las CDs murinas y su posible papel como vectores vacunales in vivo. Se han construido VLPs quimricas de RHDV conteniendo el eptopo antignico de OVA insertado en dos localizaciones diferentes de la protena VP60: en el extremo N-terminal (2GS-3OVA2) o en un bucle expuesto (306GS-3OVA2). Como control negativo se emplearon VLPs de RHDV sin inserciones. Las diferentes VLPs se incubaron con CDs murinas derivadas de medula sea y se analiz la presentacin antignica a un hibridoma especfic o que reconoce el pptido antignico SIINFEKL presentado por MHC de clase I. De las diferentes VLPs la ms inmungena result ser la que inclua el pptido antignico en la posicin amino terminal (VLP-2GS3OVA2), con un reconocimiento dependiente de dosis. Se est estudiando si esta presentacin antignica es dependiente de los interferones de tipo I. La capacidad de inmunognica de estas construcciones in vivo se ha estudiado en ratones hembras C57BL/6 inoculados con diferentes dosis de VLPs (8 y 40 g) tras lo cual se desafi con el virus vaccinia que expresa OVA. En resumen, la utilizacin de estos vectores vacunales recombinantes supone una nueva estrategia segura para inducir inmunidad protectora.

niveles de IL-6) era menor en el grupo tratado con el inmunomodulador. Sin embargo, no se han observado diferencias signifi cativas en la respuesta inmune adquirida. El desarrollo de una estrategia vacunal ms eficaz frente a este virus es un gran reto cientfic o y, mientras no exista una vacuna eficaz, el uso de este inmunomodulador incrementa la respuesta inmune contra PRRSV.

127.RESPUESTA ESPECFICA DE CLULAS T CD4+ Y CD8+ FRENTE AL VHC EN PACIENTES CON HEPATITIS CRNICA C CON Y SIN INFECCIN POR VIH. Ralln NI, Lpez M, Garca-Samaniego J, Soriano V, Romero M, Moreno A, Labarga P, Garca-Gasc P, Benito JM. Servicios de Hepatologa y Enfermedades Infecciosas. Hospital Carlos III. CIBEREHD. Madrid. Introduccin. La respuesta celular frente a VHC es dbil en la mayora de pacientes con hepatitis crnica C (HCC). Esta respuesta puede ser an menor en pacientes coinfectados por VIH. En este estudio se examina el perfil funcional de las clulas T especficas frente al VHC en pacientes con HCC con y sin infeccin por VIH. Mtodos. Se midi la respuesta especfica de clulas T CD4+ y CD8+ en 30 pacientes con HCC sin tratamiento previo. 10 eran monoinfectados por VHC y 20 coinfectados VIH/VHC. El perfil de produccin de citoquinas (IFN-, IL-2 y TNF-) en respuesta a 324 pptidos solapantes de cinco protenas del VHC (E2, p7, NS3, NS5a, NS5b) se analiz mediante citometra de flujo de 5 colores. Resultados. La mayora de pacientes (>80%) en ambos grupos present respuesta detectable CD4+ CD8+ frente a las protenas del VHC. Los niveles de respuesta total CD4+ y CD8+ fueron tambin similares en ambos grupos. El perfil de citoquinas producidas por clulas T CD4+ y CD8+ especficas estuvo dominado por TNF- en ambos grupos. Sin embargo, la contribucin de las clulas TNF-+ a la respuesta CD4+ frente a NS3 y NS5a fue significativamente mayor en los pacientes VHC+/VIH+ que en los VHC+/VIH-, mientras que la contribucin de las clulas IL2+ a la respuesta CD4+ fue ms alta en los pacientes VHC+/VIH- que en los VHC+/VIH+ (p=ns). En pacientes con genotipo 1 se observ una asociacin entre la contribucin de las clulas que producen nicamente TNF- a la respuesta CD4+ frente a la protena NS5a y la carga viral del VHC (r=0.86, p=0.01). Conclusiones. El perfil funcional de las clulas T frente al VHC se limita a una sola funcin dominada por TNF-. La capacidad de las clulas CD4+ para producir IL2 frente al VHC est disminuida en pacientes coi-nfectados por VIH. El nivel ms elevado de contribucin de las clulas que producen nicamente TNF- a la respuesta CD4+ en pacientes coinfectados, podra explicar el peor control de la replicacin del VHC en estos pacientes.

126.INMUNOMODULACION EN CERDOS VACUNADOS CON VACUNA VIVA MODIFICADA DEL VIRUS DEL SINDROME REPRODUCTOR Y RESPIRATORIO PORCINO (PRRSV). Crisci E, Fraile L, Gimeno M, Diaz I, Mateu E, Montoya M. Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), UAB-IRTA, Campus de la Universitat Autnoma de Barcelona, Barcelona. El objetivo de este estudio es evaluar si la administracin de un inmunomodulador, cuyo ingrediente principal es el beta-sitosterol, mejora la respuesta inmune en cerdos de engorde a los que se vacuna con una vacuna viva modificada del virus del sndrome reproductor y respir atorio porci no (MLV PRRS). Esta molcula y su glicsido tiene actividad inmunomoduladora en animales incrementando la actividad Th1. Se utilizaron 24 cerdos distribuidos en 4 grupos experimentales (NP/NV, NP/V, P/NV y P/V). 12 animals recibieron immunomodulador (P) con el alimento durante 8 semanas. A las 13 semanas de edad, 12 animales se vacunaron con MLV PRRS (V) o con suero fisiolgico (NV). Se obtuvieron clulas mononucleares (PMBC), se determinaron las subpoblaciones celulares por citometra de flujo y se estimularon con PHA a diferentes concentraciones. No se observ ninguna modificacin en las subpoblaciones celulares de PBMC estudiadas salvo un incremento significativo en las clulas dendrticas plasmacitoides en el grupo experimental NP/V. Sin embargo, se observ una disminucin en la respuesta proliferativa por PHA en el grupo experimental NP/V durante los dos primeros das post-vacunacin. Este efecto se reverta si se utilizaba inmunomodulador en los animales. No se han observado diferencias significativas en la viremia de PRRS y en el ttulo de anticuerpos neutralizantes entre los grupos experimentales. Por otra parte los niveles de IL-6 es ms bajo a los 33 das post-administracin en el grupo P/V. Los datos obtenidos indican que el tratamiento mejora la respuesta innata y que el dao tisular (como

128.ANLISIS DEL POLIMORFISMO DEL PTPN22 EN LA EVOLUCIN DE LA INFECCIN POR VIRUS DE LA HEPATITIS C. Montes Cano MA1, Garca-Lozano JR1, Caro-Oleas JL1, Romero-Gmez M2, Martn J3, Aguilar-Reina J4, Nez-Roldn A1, Gonzlez-Escribano MF1. 1Servicio de Inmunologa. HU Virgen del Roco. Sevilla. 2Servicio de Digestivo de Hospital Universitario de Valme. Sevilla. 3Instituto de Parasitologa y Biomedicina "Lpez Neyra". Granada. 4Seccin de Hepatologa del Hospital Universitario Virgen del Roco. Introduccin. La evolucin de la infeccin por virus de la hepatitis C (HCV) presenta grandes diferencias entre los pacientes que podr-

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an estar influenciadas por factores genticos del husped. El gen PTPN22 codifica una protena intracelular que interviene en la regulacin de la activacin de las clulas T, NK, y neutrfilos y que se ha relacionado con la susceptibilidad a enfermedades autoinmunes e infecciosas. Objetivos. Analizar la posible asociacin del SNP C1858T del gen PTPN22 en el desarrollo de hepatitis crnica, en la evolucin de la misma y en la respuesta al tratamiento en pacientes con infeccin VHC. Pacientes y Mtodos: Se incluyeron 353 pacientes de los cuales 69 eran aclaramientos virales espontneos (AVE) y 284 pacientes con infeccin crnica (IC). Los pacientes con infeccin crnica se estratificaron segn el ndice de Scheuer de fibrosis en F0-F2 (n=202) y F3-F4 (n=82), y segn su respuesta al tratamiento en individuos con respuesta sostenida (SR, n=105) y sin respuesta sostenida (NSR, n=110). El genotipado del SNP C1858T rs2476601 se realiz utilizando sondas TaqMan. Los resultados se analizaron utilizando la chi cuadrado. Se consideraron significativos valores de p<0.05 y con tendencia valores de p entre 0.25 y 0.05. Resultados. No se encontraron diferencias signific ativas en la distribucin de frecuencias del polimorfismo analizado entre el grupo de pacientes con AVE (92.5% CC, 7.5% CT+TT) y el grupo de pacientes con IC (87.5% CC, 12.5% CT+TT, p=0.6). Tampoco se encontraron diferencias significativas entre los grupos de pacientes en estadio F0-F2 y F3-F4 (88.5% CC y 11.5% CT+TT vs. 85.2% CC y 14.8% CT+TT respectivamente, p=0.5). Por ltimo no se encontraron diferencias entre el grupo RS y el NRS (85.7 CC y 14.3% CT+TT vs. 88.2% y 11.8% respectivamente, p=0.6). Conclusin. El polimorfismo C1858T del gen PTPN22 no parece jugar un papel ni en la susceptibilidad a la infeccin ni en la evolucin de la enfermedad por este virus.

deraron significativos valores de p<0.05 y con tendencia valores de p entre 0.25 y 0.05. Resultados. No se encontraron diferencias significativas en la distribucin de frecuencias del polimorfismo analizado entre los pacientes con AVE (87.7% CC, 12.3% CG+GG) y los pacientes con IC (84.1% CC, 15.8% CG+GG, p=0.5) ni entre los grupos F0-F2 y F3-F4 (82.7% CC y 17.3% CG+GG vs. 87.8% CC y 12.2% CG+GG respectivamente, p=0.3). Al comparar el grupo RS y el NRS se encontr una tendencia hacia una mayor frecuencia de individuos Arg/Arg en el grupo NRS (79.2 CC y 20.8% CG+GG en el grupo RS vs. 86.7% y 13.3% en el grupo NRS, p=0.12). Conclusin. No se puede descartar cierta influencia del polimorfismo Arg25Pro del gen TGF-beta1 en la respuesta al tratamiento antiviral en la infeccin por HCV.

130.LA PROTEINA LISOSOMAL LIMP-2 PERTENECE A LOS COMPONENTES DEL SISTEMA INMUNE INNATO LIGADO A RAB5A FRENTE A LISTERIA MONOCYTOGENES. Fernndez Prieto L, Madrazo Toca F, Gmez Lpez MT, del Cerro Vadillo E, Carrasco Marin E, Alvarez Dominguez C. Hospital Universitario Marqus de Valdecilla-IFIMA La inmunidad innata frente a Listeria monocytogenes depende de la degradacin bacteriana dentro de los fagosomas. Describimos el papel de la protena de membrana lisosomal, Limp-2/lgp85/CD36like, como componente de los mecanismos bactericidas no oxidativos de las clulas hospedadoras de este patgeno. La accin de Limp2 est ligada a la activacin de Rab5a y se restringe al ambiente fagosomal. Limp-2 ejerce su accin listericida controlando las interaciones con los endosomas tardos-lisosomas que transforman el lumen y la membrana fagosomal que contienen a este patgeno. Sin embargo, la accin de Limp-2 no se restringe solo a clulas permisivas para el crecimiento de este patgeno, sino tambin a los macrofagos y a la respuesta innata global, lo cul se observa por un incremento 10 veces ms alto en la tasa bacteriana de los bazos de ratones defic ientes geneticamente en Limp-2. Estos resultados forman parte de la estrategia intracellular de este patgeno para evitar la degradacin lisosomal.

129.POLIMORFISMO DEL CODN 25 DEL GEN TGF-BETA-11 EN LA EVOLUCIN DE LA INFECCIN POR VIRUS DE LA HEPATITIS C. Montes-Cano MA1, Garca-Lozano JR1, Dvila B1, Romero M2, Aguilar-Reina J3, Nez-Roldn A1, Gonzlez-Escribano MF1. 1Servicio de Inmunologa. HU Virgen del Roco. Sevilla. 2Servicio de Digestivo de Hospital Universitario. Sevilla. 3Seccin de Hepatologa. HU Virgen del Roco. Sevilla. Introduccin. La evolucin de la infeccin por virus de la hepatitis C (HCV) presenta grandes diferencias entre los pacientes que podran estar influenciadas por factores genticos del husped. El polimorfismo Arg25Pro en el gen TGF-beta-1 podra relacionarse con diferencias en los niveles de la citocina, de manera que los individuos Arg/Arg presentaran niveles mas elevados de la misma que podran relacionarse con una peor r espuesta antiviral. Objetivos. Analizar la posible asociacin del polimorfismo Arg25Pro del gen TGF-beta-1 en el desarrollo de hepatitis crnica, en la evolucin de la misma y en la respuesta al tratamiento en pacientes con infeccin por VHC. Pacientes y Mtodos. Se incluyeron 353 pacientes de los cuales 69 eran aclaramientos virales espontneos (AVE) y 284 pacientes con infeccin crnica (IC). Los pacientes con infeccin crnica se estratificaron segn el ndice de Scheuer de fibrosis en F0-F2 (n=202) y F3-F4 (n=82), y segn su respuesta a la terapia antiviral en individuos con respuesta sostenida (SR, n=135) y sin respuesta sostenida (NSR, n=113). El genotipado se realiz mediante PCR-RFLP con el enzima de restriccin FseI. El anlisis se realiz utilizando la chi cuadrado. Se consi-

131.AFRICAN SWINE FEVER VIRUS A238L PROTEIN BLOCKS THE HOST CELL ANTIVIRAL INFLAMMATORY RESPONSE THROUGH A DIRECT INHIBITION ON PKC-THETA-MEDIATED P300 TRANSACTIVATION. Gonzlez Granja A2, Garca Snchez E1, Sabina Villar P1, Lpez Carrascosa A1, Fresno Escudero M1, Revilla Novella Y1. 1Centro de Biologa Molecular. 2Cncer Research UK London Research Institute. During a viral infection, reprogramming of the host cell gene expression pattern is required, to establish an adequate antiviral response. The transcriptional coactivators p300 and CBP play a central role in this regulation by promoting the assembly of transcription enhancer complexes to specific promoters of immune and proinflammatory genes. Here we show that the protein A238L encoded by African swine fever virus counteracts the host cell inflammatory response through the control of p300 transactivation. By using DNA-protein pull-down assays with biotinilated DNA specific probes, we demonstrate that A238L inhibits the expression of

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the enzyme COX-2 and the cytokines TNF-alpha and IL-2 by preventing the recruitment of p300 to the enhanceosome formed on their promoters. Furthermore, we report that A238L inhibits the activity mediated by a GAL4-p300 reporter construction of the amino terminal TAD of p300 during the viral infec tion, and that the amino terminal CH1 regulatory region of p300 is essential in the A238L-mediated inhibition of the inflammatory response. Importantly, through specific mutagenesis analysis, we found that the residue serine 384 of p300 is required for the viral protein to accomplish its inhibitory function and that PKC-theta completely reverted this inhibition, thus showing that this signaling pathway is interfered by A238L during the viral infection. These findings shed new light on how viruses alter the host cell antiviral gene expression pattern through the blockade of the p300 activity, which represents a new and sophisticated viral mechanism to evade the inflammatory and immune defensive responses.

sentan menor incremento en comparacin con los leves, lo que obliga a cuestionar su funcionalismo en cuanto a la respuesta rpida a Ag TI-2.

133.VACUNA COMBINADA DNA/MVA FRENTE AL VIRUS DE LA LENGUA AZUL: EVALUACIN DE LA RESPUESTA INMUNE PROTECTORA EN UN MODELO DE RATN. Calvo Pinilla E, Sevilla N, Ortego J. CISA-INIA. El virus de la lengua azul (BTV) causa una enfermedad infec ciosa, transmitida por mosquitos Culicoides, que afecta a rumiantes y est ampliamente distribuida por todo el mundo. Las vacunas atenuadas e inactivadas empleadas hasta el momento no son del todo eficaces ni seguras. Las vacunas DNA y los vectores vacunales basados en poxvirus son una buena estrategia para inducir proteccin frente a otras enfermedades. El objetivo de este trabajo es el desarrollo de una vacuna marcadora recombinante basada en DNA y virus vaccinia recombinante cepa Ankara (MVA) que sea segura y efectiva, permitiendo diferenciar entre animales vacunados e infectados. Los segmentos genmicos 2 y 6 del virus BTV-4/Menorca, que codifican las protenas de la cpsida exterior VP2 y VP5 respectivamente, se amplific aron mediante RT-PCR y fueron clonados en el vector de expresin pcDNA3, bajo el control del promotor de citomegalovirus humano (CMV), y en el plsmido de transferencia del virus vaccinia pSC11. Se generaron virus MVA recombinantes mediante recombinacin homloga en el locus de la timidina quinasa y se purif icaron mediante seleccin por el gen marcador LacZ. En ambos vectores se observ un alto nivel de expresin de las protenas VP2 y VP5 mediante inmunoprecipitacin y se detect mRNA mediante RT-PCR. El anlisis de la respuesta inmune despus de la vacunacin con DNAs desnudos y rMVAs expresando estas protenas se evalu en ratones C57BL/6. Los ratones fueron inoculados con una primera dosis de pcDNA3-VP2/VP5 y una segunda dosis de rMVAs-VP2/VP5 detectndose altos ttulos de anticuerpos neutralizantes frente a BTV-4 (log VNT=2). Estos ttulos se mantuvieron al menos 100 das despus de la inmunizacin. La inducc in de la respuesta T producida en estos ratones vacunados est siendo analizada. Estos datos indican que la vacunacin combinada DNA-MVA puede ser muy til para inducir inmunidad protectora frente al virus BTV, evitando los problemas inherentes a las vacunas vivas atenuadas.

132.RESPUESTA VACUNAL A S. PNEUMONIAE EN PACIENTES CON DIFERENTE GRADO DE TRAUMATISMO ESPLENICO. Troya-Diaz J1, Oller-Sales B1, Martnez-Arconada MJ2, Pacha MA1, Rodrigo MJ3, Roca J4, Rodrguez N1, Fernndez-Llamazares J1, Pujol-Borrell R2, Martnez-Caceres E2. 1Servicio de Ciruga General y Digestiva. Hospital Universitario Germans Trias i Pujol. UAB. Badalona. 2Servicio de Inmunologia (LIRAD-BST). Hospital Universitario Germans Trias i Pujol. UAB. Badalona. 3Seccin Inmunologa. Hospital General Vall d Hebrn. UAB: Barcelona. 4Servicio de Epidemiologia. Hospital Universitario Germans Trias i Pujol. UAB. Badalona. Desde que en 1952 se estableci la relacin clnica entre esplenectoma y riesgo de sepsis, se ha introducido una actitud teraputica ms conservadora ante el traumatismo esplnico (TE), incluso en bazos con desvascularizacin y destruccin tisular importante. Se desconoce el grado de afectacin de su funcin inmunolgica. Objetivo: Cuantific ar la funcin esplnica en un grupo de pacientes con diferente grado de TE y en relacin al tratamiento recibido: conservador no quirrgico, exretico total o autotrasplante Metodologa: 1) Anamnesis (infecciones); 2) Hematolgico: pits y corpsculos HowellJoly; 3) Estudio isotpico dinmico; 4) Inmunolgico: poblaciones linfocitarias y respuesta vacunal a S. pneumoniae (IgG e IgM) y H influenzae (IgG). Anlisis estadstico test no paramtricos Kruskal Wallis y Willcoxon (SAS9.1.3). SE si P<0,05 Resultados: se han analizado 41 pacientes con TE distribuidos segn la presencia de tejido esplnico en: A) trat. conservador (n=26); B) autotrasplante (n=5); C) esplenectomaesplenosis (n=10). No se han encontrado diferencias dentro del grupo A independientemente del grado de lesin (leve: IIII, severo: IV-V) . Comparando el grupo A con pacientes intervenidos (grupos B, C), se ha detectado incremento del % de pits (P<.0001) y corpsculos (P=0.0002), y descenso en % CD3+ (P= 0.0005), CD4+ (P=0.0006), % y MFI de CD19+CD54+ (P= 0.0019 y P= 0.0166)), as como del % de clulas CD19+IgMhighIgDlow implicada en la respuesta T-independiente (TI) (P=0.0036) en los grupos intervenidos. Estas diferencias se mantienen cuando se comparan los tres grupos por separado, si bien el grupo B (autotrasplante) es ms similar al grupo A. Todos los pacientes han respondido a H. Influenzae y han presentado respuestas IgG valorables a S. pneumoniae, aunque con incremento menor en los pacientes intervenidos (B,C). La respuesta anti-S. pneumoniae IgM se ve mermada en los pacientes del grupo C. As mismo, en el grupo A los traumatismos graves (IV-V) pre-

134.NUEVOS VECTORES VACUNALES CONTRA LA INFLUENZA BASADOS EN EL VIRUS DE LA PSEUDORRABIA PORCINA. Gmez-Casado E1, Mena I2, Crisci E3, Fraile L3, Crdoba L3, Brcena J2, Montoya M3. CISA-INI. La enfermedad de Aujeszky (EA) o pseudorrabia (PR) est causada por un alfaherpesvirus porcino tipo 1 (PRV). El PRV se usa con xito como vacuna contra la propia EA y frente a otros patgenos virales porcinos. Utilizando el modelo murino, se ha estudiado el comportamiento de nuevos vectores PRV con clulas dendrticas (CDs) in vitro, y su papel como vectores vacunales in vivo contra el virus de la influenza murina. Se han generado dos virus recombinantes (PRVr) defectivos (gE-/gI-/TK-) expresando uno de ellos la protena M2 del virus de la gripe murina en fusin a la protena GFP (PRV-M2-GFP), y el otro virus con la fusin de la protena modelo OVA a EGFP (PRV-OVAGFP). Los PRVr se incubaron in vitro con CDs murinas derivadas de medula sea y se analiz la presentacin antignica mediante un hibri-

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doma especfico que reconoc e el pptido antignico de OVA (SIINFEKL) presentado por MHC de clase I. Las CDs infectadas a una multiplicidad de infeccin de 1,5 con el PRV-OVA-GFP eran capaces de presentar el pptido antignico en superficie. La capacidad inmunognica de estas construcciones se ha estudiado in vivo en ratones BALB/C que se infectaron con diferentes dosis (10exp4 y 10exp5 pfu/ratn), tras la cuales se desafi con el virus PR8 de la influenza. Mediante Elispot, se evalu la produccin de clulas productoras de IFN&#947; estimuladas con PR8 y PRV, y se utilizaron pentmeros especficos MHCI-HYLSTQSAL (pptido GFP) para la deteccin de clulas CD8+ especficas. La respuesta ms potente se detect con la inmunizacin de PRV a una dosis de 10exp4 pfu/ratn con 2 inmunizaciones. El anlisis de las clulas CD8+ y pentmeros+ por citometra de flujo ha confirmado la capacidad de estos vectores para inducir clulas CD8+ especficas contra el antgeno exgeno. En resumen, la utilizacin de estos vectores vacunales recombinantes supone una nueva estrategia para intentar inducir una inmunidad protectora frente al virus de la influenza.

136.ASOCIACIN ENTRE LOS POLIMORFISMOS FUNCIONALES -403 G/A Y -28 C/G DE RANTES (CCL5) Y TUBERCULOSIS EN CANTABRIA. Snchez-Castan M, Baquero Meja I, Snchez-Velasco P, Ausn Ortega F, Leyva-Cobin F, Gonzalo Ocejo-Vinyals J. Hospital Universitario Marqus de Valdecilla. Introduccin. Las quimiocinas juegan un papel fundamental en el reclutamiento de leucocitos durante la formacin de los granulomas en la infeccin tuberculosa. Apenas existen estudios que relacionen polimorfismos funcionales de quimiocinas con susceptibilidad o resistencia a la infeccin por Mycobaterium tuberculosis. El objetivo de este estudio ha consistido en analizar si dos polimorfismos del promotor de RANTES (-403 G/A y -28 C/G) se asocian a la infec cin tuberculosa en Cantabria. Materiales y Mtodos. Para el estudio del polimorfismo RANTES -403 G/A se estudiaron 69 pacientes con tuberculosis pulmonar activa (VIH negativos) y 70 donantes de sangre sanos. El estudio del polimorfismo RANTES -28 G/A se realiz en 77 pacientes con tuberculosis pulmonar activa (VIH negativos) y en 56 donantes de sangre sanos. Se utiliz la tcnica de PCR-RFLP. Los productos de PCR fueron digeridos con Mae III para el polimorfismo -403 G/A y Mnl I para el -28 G/C. El anlisis de los fragmentos se realiz mediante electroforesis en gel de agarosa. Resultados. Nueve pacientes con tuberculosis eran homocigotos para el polimorfismo -403 G/A frente a ninguno en el grupo control (p = 0.0014), 19 eran heteroci gotos frente a 7 controles (p = 0.0093) y 41 presentaban un genotipo salvaje frente a 63 en el grupo control (p < 0.0001). En el caso del polimorfismo -28 G/C, 6 pacientes eran homocigotos (ninguno entre los controles, p = 0.039), 14 pacientes eran heterozigotos (1 en el grupo control, p = 0.004). En el grupo control, 55 presentaban un genotipo salvaje frente a 57 pacientes con tuberculosis (p = 0.0001). Conclusin. La diferenc ia estadsticamente significativa en la prevalencia de ambos polimorfismos sugiere la existencia de una asociacin entre estos y susceptibilidad a la tuberculosis. Son necesarios estudios ms amplios para confirmar esta asociacin entre variaciones funcionales en el promotor de RANTES y tuberculosis pulmonar activa.

135.VARIANTES EN EL GEN DE LA LECTINA DE UNIN A MANOSA (MBL) Y SU ASOCIACIN CON TUBERCULOSIS EN CANTABRIA. Lavn-Alconero L, Snchez-Velasco P, Villegas N, Ausn F, Leyva-Cobin F, Gonzalo Ocejo-Vinyals J. Hospital Universitario Marqus de Valdecilla. Introduccin. La lectina de unin a manosa (mannose binding lectin, MBL) es una protena srica que funciona principalmente como opsonina, unindose a patgenos y activando el complemento a travs de la va de las lectinas. Se han descrito tres variantes estructurales en el exn 1 que resultan en una funcionalidad disminuida de la MBL y tres polimorfismos en el promotor de la regin 5 no traducida del gen, que afectan a la expresin de la protena. Se han identific ado 7 haplotipos diferentes, derivados de estas variantes, los cuales dan lugar a 28 diplotipos diferentes. Se han comunicado resultados contradictorios sobre la asociacin de ciertos diplotipos y susceptibilidad o resistencia a tuberculosis en diferentes poblaciones. El objetivo de este trabajo ha sido comprobar si en nuestra poblacin, existe alguna asociaci n entre las variantes genticas de MBL y tuberculosis pulmonar activa Materiales y Mtodos. Se analizaron las diferentes variaciones estructurales y polimorfismos del gen MBL2 mediante la tcnica de PCR e hibridacin r eversa en tira (INNO-LiPA MBL2, Innogenetics) en 107 pacientes con tuberculosis pulmonar activa (VIH negativos) y en 294 donantes de sangre sanos. Resultados. No hubo diferencias en la frecuencia de los diferentes alelos ni haplotipos del gen MBL entre controles sanos y pacientes con tuberculosis. salvo en el caso del alelo D y del haplotipo HYPD (2,34% en tuberculosos vs 6,97% en controles, p < 0.01). Respecto a los diplotipos, slo HYPD/HYPA result ser ms frecuente en controles que en tuberculosos (4.1% vs 0%). Conclusin. Se han publicado resultados contradictorios sobre la asociacin entre las diferentes variantes genticas de MBL y la tuberculosis. Los resultados obtenidos en este estudio no aportan evidencias convincentes de asociacin entre las difer entes variantes genticas de MBL y la tuberculosis pulmonar activa a pesar de las diferencias encontradas. Probablemente la conjuncin con otros factores genticos sea lo que determine la susceptibilidad o resistencia a la infeccin tuberculosa.

137.VACUNAS DNA CONTRA EL VIRUS DE LA FIEBRE DEL VALLE DEL RIFT: ESTUDIOS DE PROTECCIN EN RATONES TRANSGNICOS IFNAR -/-. Martin Folgar R, Lorenzo G, Hevia E, Brun A. Centro de Investigacin en Sanidad Animal (CISAINIA). El virus de la Fiebre del Valle del Rift (RVFV) es un bunyavirus que afecta a animales y al hombre, pudiendo ocasionar en este hospedador los sntomas clsicos de una fiebre hemorrgica. En la actualidad existen diferentes tipos de vacunas para esta enfermedad, tanto vacunas inactivadas como atenuadas, sin embargo debido a los problemas que stas generan, ya sea por su carcter teratognico o bien por la necesidad de varias dosis debido a su baja inmumogenicidad, sera necesario generar nuevas vacunas ms efectivas y mejor toleradas como las vacunas basadas en inmunizacin con DNA. Objetivos. El objetivo de nuestro trabajo se ha basado en el estudio de la capacidad de proteccin de construcciones DNA que incluyen secuencias de las glicoprotenas G2/G1 y la Nucleoprotena del virus, mediante la inmunizacin de ratones IFNAR -/- susceptibles a la infeccin con la

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cepa atenuada MP12, as como su relacin con la respuesta humoral generada tras la inmunizacin. Inmunizacin y desafo: Los ratones recibieron 2 dosis con 100g de DNA va im. Se analiz la presencia de anticuerpos neutralizantes en los sueros pre y post desafo y se recogier on muestras de diferentes rganos con el objeto de detectar viremia. Resultados: Hemos obtenido proteccin total con las construcciones pCMV-G2/G1 y proteccin parcial con pCMV-N y la combinacin pCMV-G2/G1 + pCMV-N. Mientras que en los animales inmunizados con pCMV-G2/G1 se pudo establecer una correlacin entre proteccin y presencia de anticuerpos neutralizantes especficos de las glicoprotenas virales, en el resto de animales dicha correlacin no se pudo establecer sugiriendo que otros mecanismos inmunolgicos podran estar implicados en proteccin. Conclusiones: Los resultados obtenidos demuestran la capacidad inmunognica de las construcciones DNA generadas y su capacidad para conferir proteccin en el modelo de ratn utilizado.

138.ANALYSIS OF THE NK CELL-MEDIATED RESPONSE TO HUMAN CYTOMEGALOVIRUS-INFECTED MYELOID DENDRITIC CELLS. Magri G1, Saez A1, Romo N1, Angulo A2, LopezBotet M1. 1AUniversitat pompeu Fabra (DCEXS). 2Institut d'Investigacions Biomdiques August Pi I Sunyer. Human cytomegalovirus (HCMV) is a prototypic betaherpesvirus that infects cell types including fibroblasts, epithelial, smooth muscle, endothelial and hematopoietic cells. In healthy immunocompetent individuals HCMV persists as a subclinical, lifelong latent infection and myeloid dendritic cell (DC) progenitors are considered to be a main HCMV reservoir. In the present study we have set up an experimental system to analyse the NK cell response against HCMV-infected myeloid dendritic cells (mDC) derived from monocytes. To this end, peripheral blood mononuclear cells (PBMC) and purif ied NK cell populations obtained from HCMV-seronegative donors were co-cultured with autologous mDC infected with the TB40/E HCMV strain; the NK cell phenotype and function were subsequently analysed. Expression of HLA class I antigens was downregulated in infected mDC that were detected by immunofluorescence staining with an anti IE1 mAb. NK cells specifically reacted to HCMV-infected mDC as shown by IFN gamma secretion and upregulation of the surface espression of CD69 and CD25 and NKp30 molecules. No response was detected when NK cells were co-c ultured with mock-infected mDC or cells treated with UV-inactivated virus. Studies using a panel of blocking mAbs are in progress to assess the participation of triggering NK cell receptors in this process.

el abanico de los diferentes mtodos de inmunodeteccin utilizados actualmente en la prctica clnica, c omo el MEIA (Inmunoensayo por micropartcula) y el CMIA (Inmunoensayo Magntico Quimio-luminiscente), y supone la posibilidad de disear nuevas tcnicas ms rpidas, sensibles, con menor cantidad de muestra y a un menor coste que las tcnicas tradicionales. Objetivo. Desarrollo de una nueva tcnica electroqumica de deteccin del antgeno de superficie de hepatitis B (HBsAg), basada en el uso de anticuerpos conjugados con nanopartculas de oro (AuNPs), que actan como marca electroactiva, y de micropartc ulas paramagnticas (MPs) que actan como soporte de las reacciones inmunolgicas. La deteccin electroqumic a de las AuNPs se lleva a cabo de manera direc ta, sin necesidad de oxidacin pr evia mediante agentes qumicos. Metodologa. La protena recombinante de antgeno HBsAg fue unida covalentemente a la superfic ie de las MPs (tosylactivated). Estas MPs fueron incubadas con diferentes concentraciones de anticuerpo monoclonal (AcMo) de ratn (IgG) anti-HBsAg. A continuac in, se incubaron las MPs con anticuerpos policlonales de cabra anti-IgG de ratn, previamente conjugados a AuNPs de 15 nm de dimetro. Despus de cada incubacin, el exceso de reactivos fue separado de las MPs usando un electroimn. Las AuNPs fueron detectadas electroqumicamente, siendo proporcional la seal electroqumica a la cantidad de IgG anti-HBsAg presente en la muestra. Resultados. Los resultados muestran que este mtodo permite la deteccin de anticuerpos especficos de hepatitis B en muestras. El nivel de deteccin fue de 1,6 ng/ml de AcMo de ratn antiHBsAg, inferi or al obtenido por la tcnica de ELISA ( 4 ng/ml). Actualmente estamos probando muestras de sueros de ratones inmunizados con HBsAg y de donantes vacunados, y los resultados preliminares indican la validez del mtodo con muestras reales. Conclusin. Los biosensores electroqumicos basados en el uso de AuNPs como marca pueden ser aplicados con xito para la determinacin de anticuerpos especficos del antgeno HBsAg. Este ensayo podra ser automatizado y extendido a otros Ags en el futuro, y optimizado para la medicin de Ags en pequeas cantidades de muestra.

140.POLIMORFISMO DE LOS GENES TGF-1 E IL-6 EN PACIENTES DE BRUCELOSIS. Bravo MJ1, Lavado Valenzuela R1, de Dios Colmenero J2, Alonso A1, Caballero A1. 1Servicio de Inmunologa y 2Servicio de Enfermedades Infecciosas, Hospital Universitario Carlos Haya, Mlaga. Introduccin. Los polimorfismos genticos que afectan a los niveles de produccin de determinadas citoquinas son determinantes de riesgo, severidad y/o proteccin para algunas enfermedades infecciosas. Se han identificado dos polimorfismos en el gen del factor de crecimiento (TGF)-1, en la posiciones +869 y +915, que producen variaciones en los codones 10 (Leu por Pro) y 25 (Arg por Pro). stos se asocian a diferentes niveles de produccin de TGF-1. Por otra parte, se ha descrito un polimorfismo en el promotor del gen de la IL-6 en la posicin -174 (G/C), que se ha asociado con diversas enfermedades. Objetivo. Evaluar la asociacin entre los polimorfismos del T+869C y G+915C en el exn 1 del gen del TGF-1 y del promotor -174 (G/C) del gen de la IL-6 y la susceptibilidad a la brucelosis.

139.BIOSENSOR ELECTROQUMICO PARA LA INMUNODETECCIN DE ANTICUERPOS ESPECFICOS FRENTE AL ANTGENO DE SUPERFICIE DEL VIRUS DE HEPATITIS B (HBSAG). Daz B1, Snchez-Espinel C1, Ambrosi A2, de la Escosura A2, Merkoi A2, Faro J1,3, Gonzlez-Fernndez A1. 1Grupo de Inmunologa. Edificio Ciencias Experimentales. Universidad de Vigo. 2Grupo de Nanobioelectrnica y Biosensores. Institut Catal de Nanotecnologia. Campus UAB. Bellaterra. Barcelona. 3Instituto Gulbenkian de Cincia, Oeiras, Portugal. Introduccin. El campo de la nanotecnologa y el desarrollo de biosensores basados en mtodos de deteccin electroqumicos ampla

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Mtodos. Hemos tipado 82 pacientes de brucelosis y 102 controles sanos de la misma rea geogrfica para los polimorfimos en los codones 10 y 25 del gen del TGF-1, y el del promotor de la IL-6 en la posicin -174 por mtodos basados en PCR-SSP. Resultados. El genotipo T/T G/G del gen del TGF-1 se encontr aumentado en pacientes cuando fue comparado con controles (49% vs. 32%) P=0.02; OR = 1.99 (1.05-3.80), y la frecuencia del genotipo T/C G/G fue menos frecuente en los pacientes que en el grupo control (32% vs. 49%) P=0.01; OR=0.48 (0.25-0.92). El genotipo CC del codn 10 se encontraba aumentado en pacientes que presentaban formas focales de la enfermedad comparados con los que no desarrollaban formas focales (19% vs. 4%), P=0.03; OR=0.19 (0.02-1.10). No se encontraron diferencias de las variantes de la IL-6 entre pacientes y controles. Conclusiones. Estos resultados sugieren que el polimorfismo del gen del TGF-1 podra estar involucrado en la susceptibilidad frente a la brucelosis y en el desarrollo de formas focales en un grupo de pacientes del sur de Espaa, aunque seran necesarios estudios posteriores para confirmar este hallazgo.

ces no slo de detectar la presencia de oligos sintticos, sino tambin de responder a los mismos. Esto apoya el posible papel de los hepatocitos como clulas que participan en la respuesta del sistema inmunitario natural o innato. Financiado con proyectos de: ISCIII (PI060006) y Fundacin Sneca (CARM) (03112/PI/05).

142.IMPACTO DE LA TERAPIA ANTIRRETROVIRAL (ART) SOBRE LOS RESERVORIOS DE CARGA PROVIRAL DNA HIV-1 EN CLULAS MONONUCLEARES DE SANGRE PERIFRICA (PBMCS)DE PACIENTES HIV-1+ Y SU ASOCIACIN CON LA CARGA VIRAL RNA HIV-1 . Rodrguez-Sinz C, Valor L, Modrego J, Fernndez-Cruz E. Hospital General Universitario Gregorio Maran. Madrid. Objetivos. Estudiar los cambios que experimenta la carga proviral DNA HIV-1 (CpV) de pacientes VIH-1+ durante la ART y explorar el valor adicional de este marcador virolgico. Mtodo. Se analizaron 75 pacientes HIV-1+, asintomticos, naive para ART, enrolados en el estudio STIR-2102, doble ciego aleatorizado, diseado para evaluar la reconstitucin inmunolgica. Se evalu la carga viral RNA HIV-1 (CV) trimestralmente durante los 36 meses (M36) del ensayo o hasta el momento en que se produce una CV>5.000 copias/mL (fracaso virolgico, FV). Hemos realizado un estudio retrospectivo de cuantificacin de la CpV en PBMCs mediante PCR a tiempo real y de las correlaciones entre CpV y CV, en los pacientes que alcanzaron M36 (Grupo A) y en los que tuvieron un FV (Grupo B; seguimiento medio 14.8 meses 9.1), antes del inicio de ART (pre-ART), seis semanas despus de iniciar ART (post-ART) y al final del estudio (M36 o el tiempo del FV). Resultados. La Tabla incluye las CpV [ media (SD) copias/106 PBMCs] y las CV [media (SD) copias/mL]. Se muestra la significac in estadstica para la comparacin de medias de datos pareados (respecto a la basal pre-ART). Los resultados de correlacin muestran el coeficiente r de Pearson. Pre-ART Post-ART Fin de Estudio Grupo A Grupo B (N=35) (N=40) CpV 1960 (3789) 1519 (2727) 324 (204) 1314(3034) p=0.115 p=0.013* p=0.067 CV 37518(53270) 817 2236) 553 (987) 18021(23360) p=0.000** p=0.000** p=0.001** Corre. r=0.391 r=0.244 r=0.250 r=0.213 CpV-CV p=0.001** p=0.035* p=0.208 p=0.242 Conclusiones. 1. La ART impacta significativamente sobre los reservorios de CpV en los individuos que controlan la viremia durante los 36 meses (Grupo A). 2. Existe una correlacin positiva significativa entre CpV y CV pre-ART y seis semanas post-ART. Estas correlaciones no se mantienen tras un periodo largo en ART. 3. La CpV podra ser til como un marcador viral complementario que evoluciona independientemente de la CV en pacientes VIH1+.

141.ACTIVACIN DE LAS MAP KINASAS EN HEPATOCITOS MURINOS TIB-73 POR OLIGONUCLETIDOS SINTTICOS. Martn-Orozco E, Chicano A, Ruz-Alcaraz AJ, Lizana A, Martnez-Esparza M, Hernndez-Caselles T, Garca-Penarrubia P. Universidad de Murcia. Objetivos. En este trabajo nos planteamos realizar un estudio prospectivo de la expresin de TLR9 y TLR4 en una lnea de hepatocitos murinos denominada TIB-73 y compararlo con otra lnea de clulas macrofgicas conocida como J774, mediante las tcnicas de microscopa confocal y Western blot. Adicionalmente nos planteamos estudiar el papel que podran desempear las MAP kinasas ERK 1/2 y p38 en la sealizacin intracelular inducida por la estimulacin con oligonucletidos con secuencias CpG y no-CpG y estructura de tipo fosfodiester o fosforotioato. Resultados. Los hepatocitos TIB-73 expresan las protenas TLR9 y TLR4. La estimulacin con oligos CpG y no-CpG activa las vas de sealizacin mediadas por ERK 1/2 tanto en los hepatocitos TIB73, como en los macrfagos J774. Como era de esperar, los oligos anlogos de tipo fosforotioato con secuencias CpG y no-CpG inducen niveles mayores de fosforilacin de ERK1/2 en clulas TIB-73, superiores incluso a las inducidas en clulas J774 bajo las mismas condiciones, y tambin un nivel menor de activacin de p38. La fosforilacin de ERK 1/2 inducida por oligonucletidos sintticos es dependiente de la dosis, y alcanza un nivel mximo a 100 mg/ml. El pretratamiento de los hepatocitos con un inhibidor de ERK 1/2 increment la fosforilacin de p38. Discusin y Conclusiones. Los hepatocitos TIB-73 expresan de modo constitutivo TLR9 y TLR4 y responden a la estimulacin con oligos sintticos mediante una intensa fosforilacin de ERK1/2 y una moderada fosforilacin de p38, de una manera independiente de la existencia de motivos CpG. Cuando se bloquea ERK 1/2 por medio de un inhibidor especfico, utilizan como va alternativa la mediada por p38. Nuestros resultados demuestran que la respuesta de los hepatocitos TIB-73 a la estimulacin con oligonucletidos (generacin de perxidos intracelulares, nitritos y actividad antibacteriana) desc rita previamente por nuestro grupo, est mediada por las MAPKs ERK1/2 y p38. Por lo tanto, estos resultados indican que los hepatocitos son capa-

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SESIN 9: CLULAS DENDRTICAS Moderadores: Dr. ngel Corb (Madrid), Dr. Francisco Borrs (Barcelona) 143.LOS TRANSCRITOS DE LAS ISOFORMAS HLA-G1, G2, G5, G6 Y G7 SE EXPRESAN EN CLULAS DENDRTICAS DE SANGRE DE CORDN UMBILICAL. Martnez Laso J1, Roman A1,3, Herraiz MA2, Rodriguez M1, Head J1,3, Gutierrez-Solar B1, Vidart J2. 1Unidad de Inmunoterapia Celular. Centro Nacional de Microbiologa. Instituto de Salud Carlos III. 2Servicio de Ginecologa y Obstetricia. Hospital Clnico de San Carlos. 3Servicio de Microbiologa. Hospital Clnico San Carlos. En trabajos previos de nuestro grupo se encontr expresin de HLAG de superficie e intracelular en clulas dendrticas procedentes de cordn umbilical. En el presente trabajo, se han aislado las clulas dendrticas mieloides (MDC) y plasmocitoides (PDC) para detectar los diferentes transcri tos de HLA-G. Se encontraron los transcritos de G1 y G5 en siete de las diez MDC estudiadas mientras que en las otras tres slo se encontr G1. Sin embargo, se encontraron G1 y G5 en tres de las nueve muestras de PDC analizadas. Las otras seis mostraban nicamente el subtipo G1. Estos resultados sealan las diferencias entre las subpoblaciones de clulas dendrticas y pueden reflejar distinta funcionalidad de HLA-G en los dos tipos de DC. Es posible que la isoforma soluble HLA-G5 desempee un papel ms importante en MDC que en PDC. HLA-G1 y HLA-G5 parecen ser las dos isoformas principales en las poblaciones celulares estudiadas. Adems, se encontraron HLAG2 y G6 en tres de las nueve PDC y un G7 en una de las diez MDC estudiadas. La deteccin de varias isoformas de HLA-G, especialmente de las solubles, podra ser fundamental en el transplante disminuyendo la probabilidad del rechazo del injerto. Las isoformas cortas de HLAG (HLA-G2, G6 y G7) producidas intracelularmente podran ser secuestradas en el retculo endoplasmtico, no alcanzando la superficie. Estas isoformas podran tener una nica funcin de apoyo a la expresin de HLA-E y a la modulacin de su interaccin con el receptor CD94/NKG2. Los datos obtenidos difieren de los encontrados en sus equivalentes en sangre perifrica de adulto, donde slo se encontraron estas isoformas en clulas dendrticas derivadas de CD34+. La expresin de HLA-G en clulas dendrticas de cordn umbilical puede tener una funcin inmunoreguladora con respecto a las clulas NK y T e inmunosupresora con respecto a la relacin inmune entre el feto y la madre.

Objetivos: a) Valorar la tasa de incorporacin de dextrano-FITC y latex beads por parte de las clulas dendrticas realizando la incubacin a diferentes tiempos. b) Valorar la influencia que ejercen el tamao y la concentracin de las partculas sobre la tasa de incorporacin de las clulas dendrticas. Materiales y mtodos. Los experimentos se realizaron con clulas dendrticas obtenidas a partir de monocitos CD14+ aislados de sangre perifrica. Para ello, los monocitos fueron cultivados durante 7 das en presencia de GM-CSF e IL-4. En el primer experimento estas clulas fueron cocultivadas con varias concentraciones de dextrano y latex beads durante diferentes tiempos de incubacin (2, 6 y 24 horas). La tasa de incorporacin de partculas fue medida por fluorescencia con citometra de flujo. Posteriormente, las clulas dendrticas se incubaron con nanopartculas aminadas (130 nm y 250 nm) y carboxiladas (130 nm y 250 nm) en la membrana. La incorporacin de partculas fue tambin observada por medio de microscopa electrnica. Resultados. Se observ mediante citometra de flujo que la tasa de incorporacin de partc ulas por las clulas dendrticas vari en funcin de la conc entracin de stas en el cultivo y del tiempo de incubacin, siendo la tasa de incorporacin hasta tres veces mayor en un perodo de incubacin de 24 horas respecto al de 2 horas. Los datos de incorporacin obtenidos fueron ratificados mediante microscopa electrnica y microscopa confocal.

145.EL TRATAMIENTO DE MONOCITOS CON IFN GENERA CLULAS PRESENTADORAS DE ANTGENO INSENSIBLES A LA INHIBICIN DE LA EXPRESIN DE MHC-II POR ATORVASTATINA. Lpez P1, Prado C1, de Paz B1, Gutirrez C1,2, Surez A1. 1rea de Inmunologa, Departamento de Biologa Funcional, Universidad de Oviedo. 2Servicio de Inmunologa, Hospital Universitario Central de Asturias. El IFN es una citocina inmunoestimuladora implicada en el desarrollo de autoinmunidad y en la patognesis del lupus eritematoso sistmico. Por otra parte, se ha sugerido la utilizacin de estatinas en el tratamiento de estas enfermedades ya que, adems de regular la sntesis de colesterol, poseen efectos inmunosupresores, que incluyen la inhibicin de la expresin de MHC-II inducida por IFN. En este trabajo nos propusimos evaluar el papel del IFN en la generacin de clulas presentadoras de Ag funcionales y determinar el posible efecto de la presencia de atorvastatina durante este proceso. Para ello comparamos las caractersticas morfolgicas y fenotpicas de las clulas obtenidas tras el tratamiento de monocitos con IFN con las clulas dendrticas generadas de forma clsica (IL-4+GM-CSF). La actividad funcional se evalu mediante anlisis de la captacin de Ag e induccin de respuestas proliferativas en linfocitos T. Encontramos que tras 3 das de cultivo con IFN los monocitos se diferenciaban a clulas con morfologa y fenotipo similar al de clulas dendrticas maduras (CD86high, CD1alow, MHC-IIhigh y CD14low). Adems estas clulas eran capaces de captar antgenos e inducir respuestas en linfocitos T autlogos de forma similar a las clulas dendrticas clsicas. Cuando estas clulas fueron generadas en presencia de atorvastatina, sorprendentemente, no encontramos una disminucin de la expresin de HLA-DR, aunque s se reduca significativamente su habilidad para inducir respuestas en linfocitos T. De hecho la atorvastatina, incluso en eleva-

144.INCORPORACION DE PARTICULAS POR CELULAS DENDRITICAS. Marcos Campos I1, Asin Pardo L2, Saez Gutirrez B1, Godino J1, Goya G2, Ibarra R2, Tres A1. 1Servicio de Oncologa. Hospital Clinico Lozano Blesa. 2Instituto de Nanociencia de Aragn. Introduccin. Las clulas dendrticas son las clulas presentadoras de antgenos ms importantes del sistema inmunolgico, desempeando un papel clave en el inicio de la respuesta inmune adaptativa. Una de las principales caractersticas de estas clulas es la capacidad para incorporar diversos tipos de antgenos. Estudios recientes han demostrado el potencial de estas clulas para incorporar diferentes tipos de partculas. La incorporac in de estas partculas por las clulas dendrticas permitir a utilizar estas clulas para vehicular posibles frmacos que y ser visualizadas mediante tcnicas como resonancia magntica o tcnicas de imagen.

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das concentraciones, no era capaz de disminuir la expresin de HLADR inducida por IFN, al contrario de lo que ocurre con el IFN. Estos resultados confirman en efecto inmunoestimulador del IFN, promoviendo la generacin de clulas presentadoras de Ag y apoyan la aplicacin clnica de las estatinas como moduladores de las respuestas autoinmunes en pacientes con altos niveles patolgicos o farmacolgicos de IFN.

146.POLIMERIZACIN DE LA ACTINA EN CLULAS FOLICULARES DENTRTICAS TRATADAS CON CITOQUINAS. Muoz Fernndez R, Leno Durn E, de la Mata C, Blanco Muoz O, Tirado Gonzlez I, Ortiz Ferrn G, Abada Molina AC, Garca Olivares E. Centro de Investigacin Biomdica. Introduccin. Las clulas foliculares dendrticas (follicular dendritic cells, FDC) son un tipo celular que se localizan en los folculos linfoides de los rganos linfoides secundarios. Almacenan durante largos periodos de tiempo, antgenos con estructura nativa en su superficie celular, y proporcionan una fuente continua de estimulacin para las clulas B especficas, c ontribuyendo a la diferenciaci n y mantenimiento las clulas B memoria. Las FDC estn relacionadas con el precursor de clulas madre mesenquimales (MSC). Por otro lado, tambin estn relacionadas con los miofibroblastos debido a la expresin de alfa-SM-actina (marcador de miofibroblastos), hecho que le confiere la capacidad contrctil a estas clulas. Objetivos. Estudio de la polimerizacin de la actina (formacin de fibras de estrs) en FDC tratadas con diferentes citoquinas. Metodologa. Cultivo de FDC en gel de colgeno y tratamiento de 24 horas con diferentes citoquinas (IL-2, IL10, IFN gamma, TNF alfa y LT), posteriormente a travs de inmunofluorescencia, se observ la localizacin de la actina. La polimerizacin se determin por inmunofluorescencia y citometra de flujo. Resultados y conclusiones. Se observ por inmunofluorescencia las fibras de actina y mediante citometra de flujo se vio una mayor polimerizacin de actina. Lo que indica un estimulo de las FDC frente a la presencia de citoquinas.

Materiales y mtodos. Las muestras de decidua a trmino fueron pr ocesadas y tratadas mediante gradiente de Ficoll-Histopaque. Las clulas dendrticas fueron estudiadas mediante citometra de flujo en base a la expresin de DC-SIGN (marcador c aracterstico de las DC inmaduras, iDC). Mediante doble marcaje se pudo observar la expresin de los antgenos CD11c, CD14, CD25, CD40, CD45, CD68, HLADR, CD56, CD123. Resultados. Hemos podido observar la existencia de una poblacin DC-SIGN+ (marcador de iDC), indicando una poblacin principal de iDC, confirmada por la baja expresin del marcador CD83 (marcador de mDC). El doble marcaje mostr que las clulas DC-SIGN+ expresaban CD11c, CD14, CD25, CD40, CD56, CD68, CD123 y CD45. Estos datos indicaban que ests iDC eran clulas de origen mieloide (CD11c+) y plamocitoides (CD123+) que podran coexistir en la decidua a trmino, en distintas etapas de diferenciacin (CD14/DC-SIGN), activadas y en distintos estados de maduracin debido a la baja coexpresin de HLA-DR, datos que fueron confirmados por la co-expresin de CD25 y CD40. El marcaje CD56 nos indicar a la existencia de complejos NK-DC. Conclusiones. Las DC de decidua a trmino se encuentran en un estado inmaduro, en distintas etapas de diferenciacin/maduracin, activadas y formando complejos con las clulas NK deciduales.

148.COORDINACIN ENTRE LAS CLULAS DENDRTICAS CONVENCIONALES Y PLASMACITOIDES EN LA GENERACIN DE LA RESPUESTA INMUNE. Prez-Cabezas B1, Naranjo-Gmez M1, Fernndez MA2, Snchez-Pla A3, Nez F4, PujolBorrell R1, Borrs Serres FE1. 1Laboratorio de Inmunobiologia para la Investigacin y las Aplicaciones Diagnsticas (LIRAD). Banco de Sangre y Tejidos (BST). Instituto de Investigacin Germans Trias i Pujol, Universitat Autnoma de Barcelona (UAB), Badalona (Barcelona). 2Unidad de Citometra, Instituto de Investigacin Germans Trias i Pujol, Badalona (Barcelona). 3Departamento de Estadstica, Universidad de Barcelona. 4Unidad Cientificotcnica de Soporte (UCTS), Instituto de Investigacin Hospital Vall d'Hebron, Barcelona. Las clulas dendrticas (DC) son las responsables del inicio de la respuesta inmune. Las DC se dividen en dos subtipos mayoritarios, DC convencionales (cDC) y DC plasmacitoides (pDC). Cada subtipo lleva a cabo determinadas funciones, como son la captura y presentacin de antgenos y la secrecin de interf erones tipo I respectivamente. Sin embargo, diversas evidencias obtenidas en nuestro (Naranjo-Gmez, 2005) y otros laboratorios (Lou, 2007) apuntan a la posibilidad de un sinergismo entre ambas subpoblaciones en la induccin de una potente respuesta inmunitaria. En este sentido, nuestros resultados muestran que las cDC maduras inducen a su vez la maduracin de las pDC, capacitndolas para estimular la proliferacin de linfocitos T naive. Nuestro estudio intenta determinar los perfiles de expresin gnica (Af fymetrix) de las pDC capacitadas por las cDC y establecer si existe alguna diferencia en funcin del estmulo madurativo recibido por la cDC. Para ello se obtienen, mediante separacin celular por citometra de flujo, las subpoblaciones de DC. Tras la estimulacin de las cDC por los diferentes estmulos seleccionados (LPS, R-848, clulas apoptticas, clulas necrticas, CD40L), se procede al co-cultivo pDC/cDC. Los dos subtipos celulares se separan nuevamente tras el co-cultivo, obtenindose una poblacin pDC pura para el anlisis del perfil de expresin gnica especfico. En algunos experimentos, la capacitacin

147.FENOTIPO ANTIGNICO DE LAS CLULAS DENDRTICAS DE DECIDUA HUMANA A TRMINO. Tirado Gonzlez I, Leno E, Muoz-Fernndez R, de Lamata Espinosa C, Blanco O, OrtizFerrn G, Abada-Molina AC, Olivares EG. Centro de Investigacin Biomdica. Introduccin. La decidua a trmino es considerada como un lugar de privilegio inmunolgico en la que tiene lugar la proteccin del feto semi-alognico del sistema inmune materno durante 9 meses, mediante mecanismos de tolerancia e inmuno-actiacin. Una de las APC (antigen presenting cells) ms importantes son las clulas dendrticas (DC), consideradas como centinelas del sistema inmune. Estas DC han sido descritas como clulas de origen mieloide CD11c+. Sus caractersticas funcionales dependen de su estado de diferenciacin, siendo las DC inmaduras (iDC) las que capturan el antgeno en los tejidos comenzando con el proceso de migracin, y las DC maduras (mDC) las que en los rganos linfoides dan lugar a la presentacin antignica. Objetivo. El objetivo del presente trabajo es determinar el fenotipo antignico de las DC de decidua a trmino.

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se pone de manifiesto por la induccin de molculas de coestimulacin en las pDC capacitadas por cDC activadas. Los resultados de los anlisis de microarrays permitirn definir el perfil de las pDC capacitadas por las cDC, y contribuirn a enunciar posibles hiptesis en cuanto al papel y/o la implicacin de cada suptipo de DC en el desarrollo de la respuesta inmune.
1. 2. Naranjo-Gmez M. Am J Transplant. 2005;5(12): 2838-48. Lou Y. J Immunol. 2007, 178:1534-1541.

149.ORGANIZACION PODOSOMAL Y MOTILIDAD DE CELULAS DENDRITICAS Y OSTEOCLASTOS. Anton Gutirrez IM1, Ban-Rodrguez I1, Chou H-C2, Jones GE2, Calle Y2. 1Centro Nacional de Biotecnologa, Madrid. 2Randall Division of Cell and Molecular Biophysics. La homeostasis del sistema inmune depende en gran medida del trfico leucocitario r egulado. Las clulas de origen mieloide como las clulas dendrticas (CDs) y los osteoclastos (OCs) forman unas estructuras de adhesion y migracin caracter sticas denominadas podosomas que estn constitudas por dos regiones: el centro y el anillo perifri co. La regin central est enriquecida en actina y en protenas implicadas en la regulacin de la polimerizacin de los microfilamentos como la GTPasa Cdc42, WASP (Wiskott-Aldrich Syndrome Protein) y el complejo nucleador de actina Arp 2/3. El anillo perifrico contiene protenas relacionadas con adhesion como integrinas, vinculina y paxilina. Nosotros hemos descrito la presencia de WIP (WASP Interacting Protein) en la region central de los podosomas de las CDs y de los OCs y hemos analizado mediante tcnicas bioqumicas y de imagen la participacin de WIP en la organizacin y funcin de los podosomas. Utilizando clulas mieloides derivadas de ratones deficientes en WIP hemos observado que la ausencia de WIP reduce drsticamente la capacidad de las CDs y de los OCs para formar podosomas, que en CDs WIP-/- son reemplazados por contactos focales donde se recluta la integrina &#946;1. El reciclaje de estas estructuras de adhesion es ms lento que el de los podosomas lo que confieren una enorme estabilidad a las adhesiones celulares y disminuye la motilidad celular. Adems, WIP modula la polarizacin celular y es insustituible como transportador de WASP a las regiones de membrana donde se inicia la polimerizacin de actina para generar los podosomas. Utilizando vectores lentivirales que permiten la expresin de WIP-eGFP en CDs WIP-/- hemos recuperado la formacin de podosomas y estamos estudiando la contribucin a este proceso de los diferentes dominios de WIP.

la respuesta inmunitaria frente a distintos productos bacterianos. La car acterizaci n fenotpica de esta poblacin ha revelado la importancia de CD16 como marcador del destino y funcin de estas clulas dentro del complejo sistema de diferenciacin mieloide. Sin embargo, su distribucin no se encuentra caracterizada en estos pacientes. Objetivo. Caracterizar fenotpicamente la poblacin celular mieloide responsable de la respuesta innata en pacientes con cirrosis y ascitis. Pacientes y Mtodos. Muestras de cuatro pacientes con cirrosis y ascitis no neutroctica con cultivo negativo fueron incluidos en este estudio piloto. Ninguno de los pacientes incluidos estaba en tratamiento con norfloxacino. Se obtuvo una muestra de LA y su poblacin celular fue caracterizada mediante un panel de anticuerpos monoclonales de superficie marcados con fluorescencia (BD Biosciences, San Jos, CA) y analizada por citometra de flujo en un Epics Xl (Beckman-Coulter, Fullerton, CA). Resultados. Esta poblacin monocito/macrfago podemos diferenci arla en clulas CD16low y CD16high mostrando los siguientes porcentajes de expresin para CD16low: CD14 (86.747.56), CD33 (85.8813.72), CD64 (93.309.72), CD11b (77.788.00), CD11c (77.8411.84), CD80 (79.1720.81), CD86 (92.9110.77), CD40 (84.9913.27), DR (93.4110.60), CD119 (93.3310.38); y para CD16high: CD14 (13.267.56), CD33 (14.0613.78), CD64 (6.719.71), CD11b (21.369.08), CD11c (22.1611.88), CD80 (20.8320.81), CD86 (7.0910.77), CD40 (15.0113.27), DR (6.5910.60), CD119 (6.6710.38). La poblacin CD16high aumenta significativamente para todos los marcadores estudiados, excepto CD11b y CD11c, cuando las muestras son diferenciadas de acuerdo con la presencia de DNA bacteriano. Conclusin. La expresin elevada de CD16 identifica una subpoblacin minoritaria de monocitos en el lquido asctico de pacientes con cirr osis y ascitis. La presencia de ADN bacteriano induce un aumento de esta poblacin, posiblemente, como consecuencia de un mayor requerimiento de transicin a clulas dendrticas.

151.UPTAKE OF SOLUBLE ANTIGEN IS REDUCED BY NUCLEIC ACIDS IN THE ABSENCE OF DENDRITIC CELL ACTIVATION. Tirapu Fernndez de la Cuesta I, Diebold S. 1Guy's Hospital - King's college London. Dendritic cells (DC) are key players in the initiation and modulation of adaptive immune responses due to their ability to acquire and present antigen and stimulate T cells. For the induction of effector Tcell functions, antigen must be presented by activated dendritic cells. Upon activation dc transiently increase their endocytic activity and subsequently cease to take up antigen. In this study, we have compared uptake of antigen by DC in the presence of different TLR ligands, which are potent inducers of DC activation. Surprisingly, we have found no reduction on antigen uptake when DC were stimulated with LPS and only a marginal reduction when CPG was used. By contrast, the viral DSRNA analogue polyi:c, a tlr3 ligand, led to a reduction in uptake of soluble antigen by DC. This effect was seen both for in vitro generated bone marrow-derived dc and for splenic DC. The reduction in antigen uptake was dose dependent and also took place in the absence of DC activation. The same phenomenon was observed for polyribonucleotides, such as polyg or polyi, which inhibit the uptake of soluble antigen by blocking scavenger-receptor mediated endocytosis. Thus, polyi:c reduces endocytosis of soluble antigens independent of dc activation by blocking scavenger receptor mediated uptake, while it does

150.ANLISIS INMUNOFENOTPICO PRELIMINAR DE LA POBLACIN CELULAR MIELOIDE DEL LQUIDO ASCTICO DE PACIENTES CON CIRROSIS Y ASCITIS. Guarinos RF1,2, Hernndez-Caselles T3, Martn-Orozco E3, Martnez-Esparza M3, Zapater P1,2, Ruiz-Alcaraz AJ3, Dongo MN1, Prez-Mateo M1, Garca-Pearrubia P3, Such J1,2. 1Unidad Heptica, Hospital General Universitario, Alicante. 2CIBERehd, Instituto de Salud Carlos III, Madrid. 3 epartamento de Bioqumica, Biologa Molecular e Inmunologa B, Universidad de Murcia. Introduccin. La poblacin monocito/macrfago del lquido asctico de pacientes con ci rrosis y asc itis juega un papel fundamental en

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not affect pinocytosis. These results should be taken into consideration when loading DC wi th antigen in the presence of polyi:c.

SESIN 10: CLULAS T Moderadores: Dr. Manel Juan (Barcelona), Dra. M Luisa Toribio (Madrid) 152.POTENCIACIN POR AGENTES INHIBIDORES DE HISTONA DEACETILASAS DE LA APOPTOSIS MEDIADA POR TRAIL EN CLULAS T LEUCMICAS. Morales Camino JC, Ruiz Magaa MJ, Carranza Domnguez D, Ruiz Ruiz MC. Instituto de Biopatologa y Medicina Regenerativa. TRAIL (TNF-related apoptosis inducing ligand) es un ligando de muerte con actividad selectiva sobre clulas transformadas. Se han propuesto diversas estrategias combinadas capaces de vencer la resistencia que presentan algunos tumores a la apoptosis mediada por TRAIL, entre ellas los inhibidores de histona deacetilasas (HDACi), enzimas implicadas en la reorganizacin de la estructura del ADN en las distintas fases del ciclo celular. En este trabajo se ha estudiado el efecto de diferentes HDACi, pertenecientes a distintas familias estructurales, en la inducci n de apoptosis por TRAIL en lneas de clulas T leucmicas y en clulas T normales, mediante tincin del ADN con yoduro de propidio y determinacin de activacin de caspasas. Adems, se ha analizado la regulacin por HDACi de los factores implicados en la ruta de sealizacin de TRAIL en ambos tipos celulares mediante RT-PCR y Western Blot. Observamos que todos los HDACi utilizados potencian la apoptosis mediada por TRAIL en clulas T leucmicas, pero no en T normales, aumentando todas las seales intracelulares de la ruta de induccin de apoptosis por TRAIL, desde la activacin de la caspasa-8 apical. Dic ha potenciacin puede explicarse por el descenso en la expresin de la protena anti-apopttica FLIP y el incremento en los niveles del receptor pro-apopttico TRAIL-R2 que tiene lugar en las clulas T leucmicas en respuesta al tratamiento con HDACi. Por el contrario, la regulacin de dichas protenas no se observa en clulas T normales.

154.REGULACIN DE NFAT POR LA ACTIVIDAD POLI-ADPRIBOSA POLIMERASA EN LOS LINFOCITOS T. Valdor Alonso R1, Schreiber V2, Saenz L1, Aguado E4, Garca-Cozar F4, Ramrez P1, Parrilla P1, Ylamos J4. 1Hospital Universitario Vir gen de la Arrixaca, Murcia. 2CNRS. Estrasburgo. Francia. 3Hospital Universitario Virgen de la Arrixaca, Murcia. 4Hospital Puerto Real, Cadiz. 5IMIMHospital del Mar, Barcelona. NFAT representa una familia de factores de transcripc in que juegan un papel central en la funcionalidad de los linfocitos T. Hasta el momento, se ha descrito que los procesos de activacin de NFAT que tienen lugar tras la estimulacin de los linfocitos T, tales como su translocacin desde el citoplasma al ncleo, su capacidad de unin a las regiones consenso del ADN y su actividad transcripcional, estn mediados en gran parte por su estado de fosforilac in. En este trabajo, aportamos la primera evidencia de un nuevo mecanismo de modificacin post-transduccional que regula a NFAT, la poli-ADP-ribosilacin. Nuestros datos han puesto de manifiesto que tanto NFATc1 como NFATc2 son poli-ADP-ribosilados por PARP-1. De igual forma hemos demostrado una interacc in fsica de PARP-1, a travs de sus dominios A y D, con NFATc1 y con NFATc2. En este trabajo tambin hemos puesto de manifiesto que la estimulacin de los linfocitos T con PMA ms ionomicina induce la activacin de PARP en ausencia aparente de dao en el ADN, monitorizado por la ausencia de fosforilacin de la histona H2AX en los linfocitos T en respuesta a dicha estimulacin. La formacin de poli-ADP-ribosa en los linfocitos T durante su estimulacin modula la activacin de NFAT, puesto que la inhibicin de PARP utilizando diferentes inhibidor es farmacolgicos produce un incremento de la actividad transcripcional dependiente de NFAT y un retraso en el exporte nuclear de este factor de transcripcin. En conjunto nuestros datos indican que PARP-1 y las reacci ones de poli-ADP-ri bosilacin repr esentan un nuevo mecanismo de regulacin de NFAT a nivel nuclear, sugiriendo un uso potencial de la actividad PARP como una nueva diana teraputica en la modulacin de NFAT y, por consiguiente, en la modulacin de la respuesta inmune.

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155.CLULAS DECIDUALES ESTROMALES HUMANAS PROTEGEN DE LA MUERTE A LOS LINFOCITOS. Leno Durn E, de la Mata Espinosa C, Ortiz Ferron G, Tirado Gonzlez I, Muoz Fernndez R, Blanco O, Abadia Molina AC, Garca Olivares E. Centro de Investigaciones Biomdicas. Introduccin. Las clulas deciduales estromales (DSC), pueden secretar numerosos factores incluyendo prolactina, insulin-like growth factor binding protein 1, tissue factor, VEGF, IL-11 e IL-15, que pueden favorecer la supervivencia de los linfocitos. Se ha observado que DSC forman complejos con linfocitos y los podran proteger de la muerte. Objetivos. Determinar la proteccin que ejercen las DSC frente a la muerte celular de linfocitos y los mecanismos implicados. Metodologa. Las DSC se obtuvieron de decidua normal del primer trimestre de embarazo, los linfocitos de sangre perifrica ( PBL) se obtuvieron de voluntarios sanos. Los linfoci tos se pusieron en gradiente de ficoll-histopaque y se cultivaron a diferentes proporci ones en diferentes condiciones, DSC en placa de 6 poci llos, en cmara Traswell, y con sobrenadante procedente del cultivo de las DSC. Se tuvieron en cocultivo 24 48 horas. La muerte celular fue medida por citometra de flujo por marcaje del ADN con ioduro de propidio. Resultados y conclusiones. Se ha podido observar que al cocultivar DSC con linfocitos, disminuye la muerte celular de los linfocitos cocultivados con DSC con respecto al cultivo de linfocitos solos. El mismo resultado lo hemos obtenido al cultivar los linfocitos con DSC, separando los dos tipos celulares en cmara Transwell, con el fin de que no haya contacto entre dichas clulas, o con sobrenadante procedente de cultivos de DSC. En los tres tipos de condiciones de cultivos observamos una disminucin de muerte celular, por lo tanto pensamos que las DSC liberan al medio determinados factores protegen de la muerte celular a los linfocitos.

Resultados. En la poblacin de LT CD4+CCR5+ de pacientes con EM se observ una menor susceptibilidad para la apoptosis que en CS (p<0.05) a las 24 horas de la induc cin de la apoptosis mediante anticuerpos anti-Fas. La poblacin de LT CD4+CCR5+ tiene mayor susceptibilidad para la apoptosis mediada por Fas comparado con el resto de subpoblaciones de LT estudiadas. Conclusiones. Los resultados de este estudio sugieren un carc ter diferenc ial del proceso de muerte celular inducida por activacin en la subpoblacin de LT CD4+CCR5+ de pacientes con EM.

157.VALORACIN Y OPTIMIZACIN DE UN MODELO DE ARTRITIS EN CONEJO INDUCIDA POR OVOALBMINA (OVA). Alegre Aguarn E2,5, Garca-Alvarez F3,5, Desportes Bielsa P2,5, Martinez Lostao L4, Anel Bernal A4, Larrad Mur L2,5, Martnez Lorenzo MJ1,5. 1Banco de Sangre y Tejidos de Aragn. 2Servicio de Inmunologa. Hospital Clnico Universitario Lozano Blesa. 3Servicio de Traumatologa-Hospital Clnico Universitario Lozano Blesa. 4Departamento Bioqumica y Biologa Molecular y Celular Univ. Zaragoza. 5Instituto Aragons Ciencias de la Salud. La artritis reumatoide (AR) es una enfermedad crnica inflamatoria carac terizada por una intensa activacin inmune y una gran variedad de manifestaciones sistmicas. El proceso inflamatorio gua a la destruccin del cart lago y hueso. Aunque el proceso inflamatorio no se conoce muy bien, el gran nmero de clulas T infiltradas en la membrana sinovial y la produccin local de citoquinas deri vadas de clulas T sugiere que las clulas T tienen un papel importante en la respuesta autoinmune de pacientes con artritis reumatoide. Adems, se han descrito defectos en la apoptosis de los linfocitos T infiltrantes en la sinovia que podran generar una hiperplasia c on la consiguiente invasin de la articulacin. Recientemente nuestro grupo describi que los linfocitos infiltrados en la sinovia de pacientes con ar tritis reumatoide eran sensibles a APO2Lrecombinante. Con el fin de avanzar en esta posible terapia, nos propusimos optimizar un modelo experimental de artritis induci da por antgeno, utilizando conejos de raza neozelands e inyeccin de ovoalbmina (OVA). Para ello, se realiz una inyec cin a da 0 con ovoalbmina utilizando como adyuvante Freund completo. La segunda inyeccin subcutnea se realiz a da 14 (protocolo A y B) a da 21 (Protocolo C). Una vez sensibilizados se realiz, a da 19 (Protocolo B), 21 (Protocolo A) y 26-31 (protocolo C) una inyeccin intraarticular en la extremidad trasera derecha. La extremidad trasera izquierda de cada animal sirvi como control interno del experimento, inyectando intraarticularmente solucin salina. Durante los 7 das posteriores se cuantificaron diferentes parmetros para analizar el grado de la patologa inducida. Tras la inyeccin intraarticular se evalu diariamente el dimetro de cada articulacin y el peso corporal. Tras el sacrifi cio, se extrajo tejido de la articulacin para realizar estudios anatomopatolgicos mediante tinciones de cortes parafinados. Adems, se realizaron determinaciones en suero de factor reumatoide, protena C reactiva e inmunoglobulinas A, G y M. De los tres protocolos utilizados, el que do mejores resultados en cuanto a inflamacin, aumento de factor reumatoide y estudios de anatoma patolgica fue el protocolo C. Actualmente, estamos utilizando este modelo para continuar con nuestros estudios sobre el efecto de APO2L recombinante como posible tratamiento en la artritis reumatoide. Financiacin: PI061217.

156.ESTUDIO DE SUSCEPTIBILIDAD PARA LA APOPTOSIS EN LAS POBLACIONES DE LINFOCITOS T CD4+CCR5+/- Y CD4+CXCR3+/- EN LA ESCLEROSIS MLTIPLE. Juli Arteaga E, Tllez Lara N, Tur Gmez C, Montalban Gairn X, Comabella Lpez M. Institut de Recerca- Hospital Vall d'Hebron. Barcelona. Introduccin. Los receptores de quimiocinas CCR5/CXCR3 intervienen en la migracin leucocitaria a travs de la barrera hematoenceflica. Uno de los mecanismos implicados en el mantenimiento de la tolerancia i nmunolgica es la muerte celular apoptsica de linfocitos T (LT) activados auto-reactivos. Un defecto en la eliminacin de clulas potencialmente patognicas, como los LT CCR5+ y CXCR3+, conduci ra a una persistencia anormal de estas clulas en sangre perifrica. Objetivo. Estudiar la resistencia/susceptibilidad para la apoptosis en LT CCR5+ y CXCR3+ de pacientes con esclerosis mltiple (EM). Mtodos. En el estudio se incluyeron 15 controles sanos (CS) y 41 pacientes con EM [17 con EM primariamente progresiva (EMPP), 12 con EM remitente-recurrente (EMRR) sin tratamiento, y 12 con EMRR tratados con interfern-beta (IFNb)]. La susceptibilidad para la apoptosis en LT CD4+ CCR5+/- y CXCR3+/- activados, se determin por citometra de flujo mediante Annexina V a las 6 y 24 horas y DiOC6 (3-3 -dihexyloxacarboyanine iodide) a las 24 horas de la induccin de la apoptosis mediante anticuerpos anti-Fas o TNFa (factor de necrosis tumoral-alfa).

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158.BMPs Y PROTENAS HEDGEHOG PARTICIPAN EN EL MANTENIMIENTO DE LOS PROGENITORES INTRATMICOS CD34+. Hidalgo Lumbreras L1, Martnez VG1, Valencia J1, Vzquez M1, Zapata AG2, Sacedn R1, Hernndez-Lpez C1, Varas A1, Vicente A1. 1Facultad Medicina. 2Facultad Biologa. Universidad Complutense. Madrid. Introduccin. Las Protenas Morfogenticas seas (BMPs) y las Protenas Hedgehog (Hh) son dos familias de protenas de secrecin muy conservadas que participan en la determinacin del patrn general de desarrollo del embrin y en organognesis, y tambin controlan procesos de supervivencia, prolif eracin y diferenci acin celular. En el timo de ratn se ha descrito la implicacin de estas dos familias de protenas en diversos puntos de la diferenc iacin T. Objetivos. Analizar el papel de estas protenas en el timo humano. Metodologa. Las muestras de timo humano se obtuvieron de nios (3 meses-5 aos) sometidos a ciruga car diaca correctora. La expresin de los componentes de la va BMP se analiz por citometra de flujo, inmunofluorescenci a y RT-PCR. Los estudios funcionales se realizaron con cultivos en suspensin y con cultivos orgnicos de lbulos tmicos fetales de ratones SCID reconstituidos con precursores tmicos humanos CD34+ purificados. Resultados. En el timo humano las clulas epiteliales producen BMPs y los precursores linfo-hematopoyticos CD34+ expresan los receptores para estos morfgenos y toda la maquinaria implicada en la transduccin de la seal. La estimulacin de la va BMP en progenitores intratmicos CD34+ inhibe su diferenciacin hacia timocitos CD4+CD8+, reduce su expansin inducida por IL-7 y promueve su supervivencia. Estos efec tos son similares a los inducidos por la va de sealizacin Hh. El estudio de los efectos de la adicin conjunta de Noggin, antagonista de BMPs, y de Sonic Hh, as como de la modulacin de los receptores para estos factores, demuestra que BMP media al menos parte de los efectos de Hh en los precursores CD34+. Conclusiones. BMP y Hh participan conjuntamente en el mantenimiento de la poblacin de precursor es intratmicos CD34+.

Hemos mostrado previamente que en CD3e de ratn se produce un procesamiento proteoltico de la corta secuencia ac dica N-terminal de la cadena, generndose especies moleculares que pueden ser discriminadas mediante electroforesis bidi mensional (IEF-SDS PAGE) e inmunoblot. Se conoce la secuencia de CD3e de 22 especies distintas, en las que la regin N-terminal es altamente variable en longitud y secuencia, pero conserva siempre una alta proporcin de residuos ci dos. La mayora de las cadenas de CD3e, incluyendo las cadenas de CD3e humanas, carecen de motivos de glicosilacin, por lo que su pI se corresponde con el de su secuencia de aminacidos. El anlisis bidimensional de precipi tados de CD3 de clulas Jurkat y de linfoblastos T normales confirma la generacin de isoformas de CD3e con pI c oincidente con una prdida de aminocidos N-terminales cargados negativamente. Lo mismo ocurre en c adenas de CD3e de ratn expresadas en clulas T humanas, lo que sugiere que es un proceso generalizado. Por tanto, y como ocur re en el ratn, la abundancia relativa de isoformas CD3e en clulas T humanas podra modular la interacci n de CD3 con el TCR y el umbral de activacin de los linfoci tos, regulando la funcionalidad del complejo.

160.INTERACCIONES MOLECULARES DE ICOS (INDUCIBLE COSTIMULATOR, CD278): ESTUDIO PROTE MICO Y FUNCIONAL. Saez de Guinoa J1, Zafra MP1, Seren Bernardone I1, Portols P2, Rojo JM1. 1Centro de Investigaciones Biolgicas, C.S.I.C. 2Centro Nacional de Microbiologa, I.S. Carlos III. ICOS es una molcula coestimuladora de linfocitos T que interviene en el desarrollo de respuestas inmunitarias eficaces y tambin en el desarrollo de inmunopatologas. Presenta homologa de secuencia y funcional con CD28, pero solamente es expresada en niveles altos en clulas T activadas. Por ello, cabe preguntarse hasta qu punto las diferencias en el efecto de ICOS y CD28 en la respuesta de los linfocitos T son debidas a su distinto patrn de expresin, o bien son determinantes las diferentes molculas capaces de asociarse a su regin citoplsmica. Empleando como modelo una lnea de linfocitos T CD4+ de ratn que expresa altos niveles de ICOS, hemos abordado varios aspectos funcionales de ICOS: En primer lugar, se ha r ealizado un estudio de las molculas que pueden asociarse a la regin citoplasmica de ICOS en funcin de la fosforilacin o no del residuo de Tyr que forma parte del motivo YMxM presente tanto en ICOS como en CD28. Se ha empleando un sistema de pull down con pptidos sintticos de ICOS, fosfori lados o no, unidos a una mariz slida que se incuban con lisados celulares. El anlisis protemico de los polipptidos precipitados muestra que la secuencia fosfor ilada de ICOS asocia selectivamente subunidades reguladoras y catalticas de fosfatidil inositol 3-quinasa (PI3-K). El estudio protemico ha permitido comprobar adems que, en contra de anlisis anteriores empleando ensayos de triple hbrido, ICOS une diversos tipos de subunidades reguladoras de PI3-K (p85a, p85b, p53a). Sin embargo, solamente se ha identificado un tipo de subunidad cataltica (p110a) asociado a estas subunidades, y no otras subunidades catalticas, como p110b y p110d, tambin expresadas en clulas T y susceptibles de unirse a las subunidades reguladoras detectadas. Con esta base, se ha estudiado el papel de ligandos de ICOS en el citoesqueleto de actina y en la redistribucin de balsas lipdicas, as como el efecto de inhibidores especficos de PI3-K en estos fenmenos.

159.DIVERSIDAD DE ISOFORMAS DE CD3e EN CLULAS T HUMANAS: PAPEL DE LA SECUENCIA N-TERMINAL. Rojo JM1, Feito MJ1,2, Bello R1, Ojeda G3, Portols P3. 1Centro de Investigaciones Biolgicas, C.S.I .C. 2Departamento de Bioqumica y Biologa Molecular I, Facultad de Ciencias Qumicas, U.C.M, 3Centro Nacional de Microbiologa, I.S. CARLOS III. Las cadenas CD3e carac terizan el linaje de linfocitos T, siendo necesari as para el ensamblaje y la expresin en la membrana citoplasmtica del complejo TCR/CD3, as como para la transmisin de las seales producidas por la unin de ligandos al receptor TCR/CD3. Durante la ontogenia de los linfocitos T se producen procesos selectivos positivos y negativos en los que intervienen pptidos antignicos propios. Par a evitar procesos autoinmunes, las seales del receptor para antgeno han de modularse en funci n de estos distintos estados, para lo que se han propuesto diversos mecanismos de cambio cuantitativo o cualitativo tanto en los ligandos, como en la estructura de los complejos TCR/CD3, o en las casc adas sealizadoras activadas por los ligandos.

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161. LAS CLULAS DECIDUALES ESTROMALES HUMANAS PROTEGEN DE LA CITOTOXICIDAD A LOS LINFOCITOS T Y SON RESITENTE A LA APOPTOSIS MEDIADA POR RECEPTORES DE MUERTE. Leno E, Morales J, Blanco O, de la Mata Espinosa C, Ortiz-Ferron G, Tirado I, Muoz-Fernandez R, Garcia Olivares E, Maricarmen Ruiz-Ruiz M. Centro de Investigacin Biomdica. Introduccin. El embarazo y el aborto espontneo son procesos fisiolgicos que estn asociados a diversos mecanismos inmunolgicos. En estas actividades inmunolgicas participa la decidua que es el tejido materno que est en contacto intimo con el trofoblasto. En la decidua se encuentran las clulas deciduales estromales (DSC), que participan en la inmunorregulacin materno-fetal. La apoptosis juega un papel fundamental en el embarazo, la expresin de FasL por parte del trofoblasto induce apoptosis a los leucocitos deciduales Fas+, regulando por tanto su supervivencia y favoreciendo el embarazo Objetivo. Investigar la capacidad de las DSC de inducir apoptosis a los linfocitos T. Metodologa empleada. Las DSC fueron obtenidas de decidua de aborto voluntario y cultivadas en Optimen. Las clulas Jurkat fueron mantenidas en RPMI 10% FBS. Las DSC colocadas en cmara Transwell fueron cocultivadas con Jurkat, El porc entaje de clulas en apoptosis se determin por ci tometra de flujo mediante el ciclo celular (Sub-G1). Tambin observamos la apoptosis de las Jurkat por microscopia de fluorescencia a travs de DAPI. Resultados y conclusiones. Las clulas deciduales estromales (DSC) expresan FasL, aunque no solo no indujeron apoptosis a los linfocitos T Jurkat, sino por el contrario protegieron a estas clulas de la muerte mediada por el anti-Fas. Tambin se observ estos efectos protectores cuando las Jurkat fueron tratadas con TRAIL. Por otro lado al colocar las DSC y J urkat en cmara Transwell observamos que es esta proteccin segua mantenindose, lo que demostraba que el efecto protector estaba mediado por factores solubles. Por otra parte, aunque las DSC expresan Fas y receptores de TRAIL, fueron resi stente a la induccin de apoptosis por anti-Fas y TRAIL. Estos resultados confirman la participaci n de las DSC en los fenmenos de apoptosis; fenmenos claves en el desarrollo normal o patolgico del embarazo.

En este trabajo evaluamos la actividad de la quimioquina CCL21, expresada como protena de fusin con la protena verde fluorescente GFP (CCL21-GFP), y su actividad quimiotctic a sobre diferentes subpoblaciones de clulas T. Para ello hemos clonado la quimioquina en el plsmido CT-GFP Topo y generado transfectantes estables en clulas CHO. En ensayos de migracin realizados sobre diferentes poblaciones de clulas mononucleares sanguneas, la quimioquina recombinante CCL21-GFP, obtenida de los sobrenadantes de las clulas transfectadas, presenta actividad quimiotctic a, sobre todo para la poblacin celular CD4+2E3+, que contiene las clulas T nave, que expresan el mRNA que codifi ca para el rec eptor CCR7. Estos resultados abren un camino para el anlisis de la expresin difer encial de receptores de quimioquinas en las diferentes subpoblaciones de clulas del sistema inmune porcino.

163.CONTRIBUCIN DE CD3GAMMA A LA SEALIZACIN VA TCR/CD3. Busto EM1, Rein J1, Regueiro JR1, Rossi NE1, Domnguez O2, Lombarda L2, Recio MJ1. 1Inmunologa. Facultad de Medicina. Universidad Complutense, Madrid. 2CNIO. Centro Nacional de Investigaciones Oncolgicas, Madrid. El receptor del linfocito T es un complejo multimrico integrado por diferentes cadenas, en las cuales las cadenas variables TCR (TCR y TCR) son las encargadas del reconocimiento antignico, mientras que las cadenas invariantes CD3 (CD3, CD3, CD3 y CD3) son responsables del ensamblaje y expresin del complejo TCR/CD3, as como de las sealizacin intracelular. La participacin de cada una de las cadenas en el proceso de sealizacin sigue siendo tema de discusin, as como las bateras de genes inducidos en cada caso. Con objeto de acotar la contribucin y conexiones de CD3 en la sealizacin del TCR/CD3 nos hemos propuesto estudiar en clulas deficientes de CD3 transformadas con Herpesvirus saimiri, eventos de sealizacin tempranos (fosforilacin de los intermediarios de sealizacin) y tardos (induccin de genes mediante microarrays). Los resultados preliminares sugieren que los linfocitos T de los individuos deficientes de CD3 (-/-) estimulados a distintos intervalos de tiempo con anticuerpos anti-CD3 (UCHT1) no presentan diferencias en la fosforilacin de la protena ZAP70 mediante citometra de flujo ni en la cintica de activacin de protenas de la ruta de sealizacin de las MAP Kinasas (ERK, p38 y JNK) mediante western blot en comparacin con individuos control (+/+). Sin embargo, los resultados de induccin de genes sugieren un perfil de expresin distinto en linfocitos +/+ frente a /. En base a estos resultados, podemos concluir que los linfocitos sin CD3 emiten con normalidad seales tempranas a travs de las rutas analizadas, pero deben existir diferencias en otras rutas que expliquen las disparidades distales.

162.ACTIVIDAD BIOLGICA DE LA QUIMIOQUINA PORCINA CCL21 FUSIONADA A GFP. Moreno Rivera S, lvarez Vega B, Revilla Calvo C, Domnguez Juncal J, Ezquerra Martnez A, Alonso Moreno F. INIA (Instituto Nacional de Investigacin y Tecnologa Agraria y Alimentaria). Las quimioquinas juegan un papel fundamental en el desarrollo de la respuesta inmune, regulando la migracin de las diferentes subpoblaciones de leucocitos a sus rganos diana. En el caso de las clulas dendrticas, no solo dirigen la migracin de las mismas a los lugares de entrada de antgeno sino que adems pueden regular su maduracin. En humano, rata y ratn se han descrito mltiples patrones de expresin de receptores de quimioquinas en distintas poblaciones celulares del sistema inmune, los cuales presentan diferenc ias fenotpicas y funcionales. En el modelo porcino, debido a la falta de reactivos especficos, no existen datos de la expresin de receptores de quimioquinas en las subpoblaciones de leucocitos. Es por tanto necesario generar los reacti vos que nos permitan analizar el patrn de expresin de dichos receptores en las diferentes poblaciones celulares del sistema inmune porcino y tratar de establecer su funcionalidad.

164.PAPEL DE CD38 EN LA RESPUESTA ANTGENO-ESPECFICA DE LOS LINFOCITOS T. Muoz Fernndez P1, Mittelbrunn M2, de la Fuente H3, Prez Martnez M3, Garca Prez A1, Zubiaur Marcos M1,4, Snchez Madrid F2,3, Sancho Lpez J1. 1Instituto de Parasitologa y Biomedicina. Consejo Superior de Investigaciones Cientficas. 2Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares. 3Hospital de la Princesa. 4Instituto de Salud Carlos III. CD38 es una glicoprotena transmembrana de tipo II altamente expresada en clulas T activadas. Aunque se conocen funciones como

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sealizacin intracelular, adhesin, prolif eracin, apoptosis, producci n de citocinas y f osforilacin de protenas, an no est claro el papel de CD38 en la sealizacin mediada por el complejo TCR/CD3. Para tratar de dilucidarlo se han realizado experimentos de sobre-expresin de CD38 mediante la transfeccin del cDNA que codifi ca CD38 fusionado al de la protena de fluorescencia verde (GFP) en clulas T Jurkat o bien inhibiendo su expresin mediante la transfeccin de RNA de interferencia especfico para CD38 (siRNA CD38). Para medir cambios en la concentracin de calcio intracelular [Ca2+]i, las clulas Jurkat transfectadas fueron pre-incubadas con el indic ador Fura-2, lavadas y estimuladas con clulas Raji previamente pre-pulsadas o no con el superantgeno SEE, que actan como clulas presentadoras de antgeno (APC). La produccin de citocinas se midi por ELISAs especficos para IL-2 o IFN-gamma (Diaclone) o simultneamente para 10 citocinas (IL-1&#61538;, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-10, I L-12 (p70), I L-13, IFN-gamma and TNF-alpha) por un sistema multiplex (Bio-Plex, BioRad). La fosforilacin de LAT, Erk y PKC-theta fue determinada por Western-blot con anticuerpos fosfoespecf icos (Cell Signaling Technology). La sobre-expresin de CD38 en linfocitos T incrementaba los niveles de [Ca2+]i y la producc in de IL-2 mediados por el TCR, mientras que la inhibicin de la expresin de CD38 induca el efecto contrario. Efec tos similares a los producidos por siRNA CD38 fueron obtenidos mediante el bloqueo de CD38 con los anticuerpos monoclonales anti-CD38 HB136 o IB6, considerados como no agonistas. Estos resultados indican que CD38 tiene un papel inmunomodulador en la respuesta funcional del linfocito T antgeno-especfica.

El potencial de reconstitucin in vivo de progenitores hematolinfoides humanos es absolutamente dependiente de la interaccin de la molcula de adhesin CD44 con su ligando. La sealizacin por Notch1 mantiene la expresin de CD44 a niveles altos, permitiendo la retencin especfica de los progenitores hematolinfoides humanos en la BM.

166.FLOW CYTOMETRY CHARACTERIZATION OF EALT (EYEASSOCIATED LYMPHOID TISSUE) CELLS OBTAINED BY BRUSH CYTOLOGY. Martnez Osorio H1, Lpez-Garca A1, Quintana R1, Gutirrez San Jos E2, Fernndez-Martnez I1, Calonge M1, Diebold Y1, Corell A1,2. 1,2Ocular surface group - I OBA, University of Valladolid. 2,1Immunology section, University of Valladolid, Valladolid.

165.INFLUENCIA DE LA SEALIZACIN POR NOTCH1 SOBRE EL POTENCIAL DE RECONSTITUCIN HEMATOLINFOIDE IN VIVO DE PROGENITORES INTRATMICOS HUMANOS. Garca-Peydr M, Toribio ML. Centro de Biologa Molecular Severo Ochoa. El abordaje de los mecanismos que regulan la colonizacin de la mdula sea (BM) por clulas troncales hematopoyticas y la migracin de progenitores y clulas maduras a rganos perifricos, incluido el timo, requier e el empleo de modelos in vivo. Dado el papel esencial de la sealizacin por Notch en la especificaci n del linaje T, hemos abordado la contribucin de la sealizacin por Notch1 al proceso de colonizacin intratmica, as como el impacto de la sealizacin de Notch1 sobre la dinmica de rec onstitucin hematopoytica in vivo de progenitores hematolinfoides humanos. Para ello se han realizado transferencias in vivo de progenitores hematolinfoides de timo humano modificados genticamente por transduccin r etroviral en ratones deficientes para la recombinasa RAG-2 y la cadena gamma comn de receptores de citoquinas (RAG-2-/&#61543;c-/-). Los resultados obtenidos demuestran que los progenitores intratmicos humanos son capaces de colonizar el timo de ratones RAG-2-/- &#61543;c-/- y r econstituir eficientemente (>90%) el compartimento de linfocitos T humanos, recapitulando los diferentes estadios madurativos T. Dic ha reconstituci n es transitoria y se r estringe exclusivamente al timo. La sobre-expresin de una forma constitutivamente activa de Notch1: i) no afec ta a la reconstitucin tmica, aunque impide la transicin al estadio SP; induce: ii) la repoblacin efi ciente (>95%), pero transitoria, de la mdula sea, y iii) la dif erenciac in extratmica en la BM de clulas DP, aunque no altera la capacidad intrnseca de migracin a la BM de los progenitores humanos.

Purpose. To characterize by f low cytometry human conjunctival (epithelial and intra-epithelial lymphoid) cells recovered by brush cytology (BC). Methods. BC was performed in conjunctivas of 20 healthy donors. Cells were detached by shaking the brush in supplemented DMEM/F12 medium. To characterize recovered cells, 4 flow cytometry assays were done in each sample in order to: 1) establish their lineage (An anti-c ytokeratin7-FITC MoAb was used as epithelial marker and an anti-CD45-PC7 MoAb for lymphoid cells); 2) analyze the cell-cyc le (IP); 3) assess the apoptotic stage (Annexin V vs PI); and 4) study the lymphocyte subsets by their cor responding CD markers. Two-tailed Students t test was performed for statistical analysis. Results. 14 x 104 0.9 cells were recovered. CK-7+ c ells represented the 67.8 1.6% in tarsal BCs and the 65.7 2.5% of bulbar BCs. Bulbar cells showed higher density of CK7 than tarsal epithelium. CD45+ cells were the 3.8 0.4% of the tarsal cells and the 2.8 0.3% of the bulbar cells. Regarding the DNA content, tarsal epithelial cells had higher proliferative index (S phase) than bulbar conjunctival cells (3.5 0.3% vs. 2 0.2%). Although the % of viable, apoptotic and dead cells showed no signific ant differenc es between tarsal and bulbar BCs, we observed two different populations: 22.8% ( 1.6) of c ells were smaller, less complex and had good viability (77.9 3.4%) ; 76.4% ( 1. 6) of cells were larger, more complex and showed poor viability (21.3 2.2% ). The Lymphocyte subsets showed a predominant T cell population but were difficult to assess due to the low numbers of obtained cells. Conclusions. In healthy subjects, conjunctival cell populations recovered by BC are not purely epithelial, as there are a few CD45+ cells (mainly T cells), not previously described. Besides, the differences observed in cell size, viability and proliferative capacity of rec overed epithelial cells may help in long-term cultures for regenerative purposes.

167.DIFERENTES EFECTOS DE LA INHIBICIN DE FOSFODIESTERASA 4 Y FOSFODIESTERASA 7. Gonzlez Garca C, Bravo B, Gmez S, Hernndez J, Ballester S. Instituto de Salud Carlos III. Los niveles de AMPc en la clula estn regulados por la adenilato ciclasa a nivel de sntesis, y por las fosfodiesterasas, a nivel de degradacin. Variaciones en los niveles de este nucletido cclico pueden

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estar implicados en procesos de inflamacin. Este segundo mensajero se une a PKA (protena kinasa A), que fosfori la el factor de transcripci n CREB (cyclic AMP response binding proteins). Los inhibidores de PDE4, una de las PDE mayoritarias de linfoc itos T, son los ms ampliamente caracterizados hasta el momento; sin embargo, presentan efectos secundarios que han llevado a la bsqueda de otros inhibidores de PDE que minimicen estos efectos negativos. Otra de las PDE expresadas por linfocitos es la PDE7, por lo que se piensa en ella como una posible alternativa para el control de procesos inflamatorios. Nosotros hemos querido analizar comparativamente los efectos de la inhibici n de cada una de estas PDE, para lo que hemos usado Rolipram y BRL 50481, como inhibidores espec ficos de PDE4 y PDE7, respectivamente; o una combinacin de ambos. En linfocitos T, la proliferac in se ve afectada de manera similar por la inhibicin de cada una de estas fosfodiesterasas; aunque la inhibici n de PDE7 presenta un mayor efecto pro-apopttico. Los niveles de AMPc intracelular son ms sensibles a la inhibicin de PDE4, indic ando una mayor implicacin de sta en el control de dichos niveles en linfocitos T. Estos datos tambin corr elacionan con los obtenidos para los ensayos de actividad transcripci onal del factor CREB, los cuales muestran mayor ac tivacin de este factor mediada por Rolipram. Adems, la utilizacin simultnea de Rolipram y BRL 50481 no produce ningn efecto sinrgi co en cuanto a la activacin de CREB. Sin embargo, los ensayos transcripc ionales realizados en astrocitos, de importante implicacin en algunos procesos inflamatorios en sistema nervioso central, muestran que en este tipo celular ambos inhibidores cooperan en la actividad de CREB.

so de reactivos fue separado de las MPs usando un electroimn. Las AuNPs fueron detectadas electroqumicamente, siendo proporcional la seal electroqumica a la cantidad del analito problema en la muestra. Los niveles de INF-gamma fueron analizados comparando con un test de ELISA sndwich convencional (kit BD optiEIA). Resultados. Los resultados muestran que este mtodo permite la deteccin de interfern gamma en muestras, dando resultados comparables al ELISA, con un nivel de deteccin de 6 pg/ml. Sin embargo, consideramos que esta tcnica podra ser optimizada tanto en el uso de menor volumen de muestra como en el lmite de sensibilidad (v.g., usando mtodos catalticos). Conclusin. Los biosensores electroqumicos basados en el uso de AuNPs como marca pueden ser aplicados con xito para la determinacin de citocinas como el INF-gamma humano.

169.PAPEL DE LA PROSTAGLANDINA F2 ALPHA EN LA REGULACIN DE GENES IMPLICADOS EN LA ACTIVACIN DEL LINFOCITO T. Cacheiro C, Iiguez MA. Centro de Biologa Molecular Severo Ochoa (UAM). Introduccin. Las prostaglandinas (PGs) son productos del metabolismo del cido araquidnico originados por la accin de diversos enzimas tales como las ciclooxigenasas (COX-1 y COX-2) y las prostaglandin sintasas. Las PGs ejercen su accin a travs de receptores de siete dominios transmembrana acoplados a protenas G (GPCRs) especficos para cada una de ellas. En el caso de la PGF2, su interaccin con el receptor FP (acoplado a una protena Gq) produce un incremento en los niveles de calcio intracelular, requisito indispensable para la activacin ptima del factor de transcripcin NFAT (esencial en la activacin del linfocito T). En este sentido, nuestros resultados sugieren la implicacin de la sealizacin a travs de receptores acoplados a protenas Gq, tales como el FP, en la activacin de NFAT y en la induccin de la expresin de genes dependientes de dicho factor de transcripcin (COX-2, IL-2, TNF-, etc). Objetivos. Estudio del posible papel que desempea la PGF2 en la regulacin de genes implicados en la activacin del linfocito T. Para la consecucin de este objetivo, se han realizado estudios en clulas T Jurkat, analizando las vas de sealizacin implicadas en la induccin transcripcional de estos genes por estmulos como el TPA, diversos prostanoides, etc. Con el fin de determinar la implicacin de determinadas vas de sealizacin intracelular en respuesta a los diversos estmulos, se han usado inhibidores farmacolgicos. Las variaciones de la expresin y de la actividad de COX-2 y de prostaglandin sintasas en clulas T se han medido mediante RT-PCR, Western, ELISA, etc. Resultados. Los resultados indican que esta prostaglandina, a travs de la unin a su receptor FP, induce la traslocacin de NFAT al ncleo incrementando de esta manera la transcripcin de genes mediada por NFAT en clulas T.

168.INMUNODETECCIN ELECTROQUMICA DE INTERFERN GAMMA HUMANO MEDIANTE EL USO DE NANOPARTCULAS DE ORO Y MICROPARTCULAS MAGNTICAS. Snchez-Espinel C1, Ambrosi A2, de la Escosura A2, Daz B1, Garet ME1, Merkoi A2, Faro J1,3, Gonzlez-Fernndez A1. 1Grupo de Inmunologa. Edificio Ciencias Experimentales. Universidad de Vigo. 2Grupo de Nanobioelectrnica y Biosensores. Institut Catal de Nanotecnologia. Campus UAB. Bellaterra. Barcelona. 3Instituto Gulbenkian de Ciencia, Oeiras, Portugal. Introduccin. El uso de nanopartculas, principalmente nanopartculas de oro (AuNPs), conjugadas con protenas, permite pensar en el diseo de tcnicas ms rpidas y sensibles, que requieran menor cantidad de muestra y que supongan un menor coste que las tcnicas de inmunodeteccin tradicionales. As, mtodos como el ELISA y la citometra de flujo, pueden ser sustituidos por biosensores electroqumicos basados en AuNPs como marca. Objetivo. Nuestro grupo ha comparado la tcnica de ELISA para la determinacin de interf ern gamma humano (INF-gamma), con un nuevo mtodo electroqumico basado en el uso de AuNPs conjugadas con anticuerpos, como marca electroactiva, y mic ropartculas paramagnticas (MPs) como soporte de las reacciones inmunolgicas. La deteccin electroqumic a de las AuNPs se lleva a cabo de manera directa, sin necesidad de oxidacin previa mediante agentes qumicos. Metodologa. Se uni un anticuerpo monoclonal anti-INF-gamma a MPs recubiertas con estreptavidina y, posterior mente, stas fueron incubadas con distintas concentraci ones de INF-gamma humano. A continuacin, se incub con la disoluci n de anticuerpo monoclonal anti-INF-gamma que previamente haba sido conjugado con AuNPs de 15 nm de dimetro&#61472; Despus de cada incubac in, el exce-

170.CAPACIDAD PROLIFERATIVA DE LINFOCITOS CD4 NAVE CD31+ Y CD31- DE SANGRE PERIFERICA EN HUMANOS. Ruiz Hernandez R1, de Haro J2, Clotet B1, Bofill M1. 1Fundacin irsiCaixaHospital Germans Trias i Pujol. 2Hospital Municipal de Badalona. Introduccin. La homeostasis de los linfocitos T CD4+ CD45RA+ depende en parte de la entrada a la circulacin peri fric a de los lin-

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focitos procedentes del timo (linfocitos emigrantes tmicos recientes, ETR) y del mantenimiento del nmero de stos por proliferaciones homeostticas (independiente de antgeno). Estas dos poblaciones de clulas CD4 pueden identificarse respectivamente por la presencia o ausencia de CD31. Objetivos. Evaluar el impacto de las citocinas homeostticas IL2, IL-17 e IL-15 sobre la capacidad proliferativa de las poblaciones CD4/CD45RA+ CD31+ y CD4/CD45RA+ CD31-procedentes de sangre perifrica. Mtodos. Las poblaciones de linfocitos CD4 CD45RA+ de sangre perifrica humana se aislaron por seleccin negativa con el uso de esferas magnticas (StemCell Technologies, Barcelona, Spain). Las subpoblaciones CD31+ y CD31- se aislaron mediante un cell sorter. Las clulas se cultivaron en presencia de medio, de las interleuquinas homeostticas IL-2, IL-7 e IL-15, PHA, ambas durante 3 5 das. La capacidad proliferativa de estas poblaciones se evalu mediante incorporacin de timidina tritiada; Los niveles de activacin CD25, y los marcadores de Nave y de memoria, CD45RA y CD45RO, se midieron mediante citometria de flujo. Resultados. Ninguna de las dos subpoblaciones de clulas CD4 naive prolifer en presencia de medio o de citocinas. Si n embargo la poblacin CD31+ prolifer en presencia de PHA, mientras que la poblacin CD31- no responde a dicho estmulo a menos que se hallaran presentes en los cultivos IL-2, IL-7 o IL-15 en cuyo c aso la capacidad prolifer ativa de sta poblacin fue parec ida a la de la poblacin CD31 positiva. Conclusiones. Las interleuquinas homeostticas podran jugar un papel el mantenimiento del nivel de linfocitos CD4 Nave en humanos.

fidelidad de la seleccin tmica, a travs del control de la intensidad de las seales generadas por el TCR. Sin embargo, este caso continua en abierto a la espera del anlisis de ms modelos de TCR transgnicos que permitan la elucidacin de los mecanismos moleculares subyacentes a este papel de CD3gamma durante la seleccin tmica.

172.EFECTO DIFERENCIAL DE LA FALTA PRE-TMICA Y POSTTMICA DE CD3 GAMMA. Rein J, Recio MJ, Busto E, Fernndez-Malav E, Regueiro JR. Universidad Complutense Madrid. Introduccin. Los linfocitos naturales deficientes de CD3 gamma, a diferencia de los mutantes de Jurkat, expresan mucho TCR/CD3. Pensamos que esto es debido a que los mutantes de Jurkat fueron selecci onados para no expresar TCR/CD3 y tienen, de hec ho, mutaciones adicionales, ya que se cr ea que la falta de cualquier cadena CD3 impeda la expresin del resto del complejo. Sin embargo, es posible que los linfocitos naturales deficientes de CD3gamma, que carecen de CD3gamma antes de la maduracin, alcancen la periferi a muy seleccionados y por tanto sean poco representativos bioqumicamente. Objetivos. En este trabajo nos propusimos evaluar el efecto que tiene la ausencia de CD3gamma en linfocitos post-tmic os. Para ello silenciamos la expresin de CD3gamma empleando un pool de oligos siRNA especfic os (Dharmacon). Metodologa. Los linfocitos T Jurkat fueron electroporados c on un pool de oligos siRNA especfi cos. La expresin del complejo TCR/CD3 se monitoriz por ci tometra de flujo al cabo de 24 horas post-tratamiento, con diferentes anticuerpos monoclonales (SK7; BMA031).Para evaluar el grado de interferencia a nivel de la protena CD3gamma se realizaron tinciones intracelulares con el antisuero anti-CD3gamma (TG5). Resultados. Las clulas tratadas con siRNA para CD3gamma muestran un grado de inhibicin del 70% (a nivel intracelular c on TG5) que se corresponde con una bajada de expresin del complejo TCR/CD3 con BMA031 (70%) pero no con SK7 (11%). Conclusiones. Nuestros datos indican que existen difer encias de expresin entre la prdida de CD3gamma antes y despus de pasar por el timo. Por lo tanto, la baja expresin del TCR/CD3 en linfocitos naturales defici entes de CD3gamma se debe ms a un proceso de seleccin tmica que a un efecto bioqumico.

171.PAPEL DE LA CADENA CD3 GAMMA DEL COMPLEJO TCR EN LA SELECCIN TMICA: UN CASO CERRADO? Fernndez-Malav E, Rein J, Regueiro JR. Universidad Complutense Madrid. Los procesos de seleccin positiva y negativa de las clulas T del linaje alfa/beta en el timo dependen de seales mediadas por el complejo TCR/CD3. Sin embargo, la contribucin especfica de las cadenas CD3 en estos procesos, en particular de CD3gamma y CD3delta que derivan de un gen ancestral comn, sigue siendo materia de debate. Con el objetivo de identificar funciones especficas de CD3gamma en la seleccin tmica, hemos generado y analizado una lnea de ratones carentes de CD3gamma que expresa el TCR transgnico HY. Este TCR reconoce un pptido especfico de machos en el contexto de MHC de clase I H-2Db. La expresin del TCR HY resulta en la seleccin positiva de clulas CD8+ en las hembras y la seleccin negativa de estas mismas clulas en los machos, permitiendo as el anlisis simultneo de la seleccin positiva y negativa in vivo. Los resultados obtenidos indican que el TCR HY carente de CD3gamma es capaz de seleccionar tanto positiva como negativamente a las clulas CD8+ TCR HY+, pero con una eficiencia baja. Por otro lado, la falta de CD3gamma resulta en una alteracin en la decisin de linaje, reflejada en la aparicin de clulas CD4+ TCR HY+ en los ratones CD3gamma-deficientes. Adems, estas alteraciones se asocian con una reduc cin generalizada en la intensidad de la sealizacin va TCR. En conclusin, nuestro estudio sugiere que CD3gamma est implicada de una forma especfica en la regulacin fina de la eficiencia y

173.LA CARGA DE ANTGENOS DE CD1 DEPENDE DE UNIONES ENTRE LOS DOMINIOS REGULADAS POR EL PH. Relloso M1, 4, Cheng T-Y1, Roura-Mir C1, Porcelli SA2, Wilson IA3, Moody DB1. 1Division of Rheumatology, Immunology and Allergy, Brigham and Women's Hospital and Harvard Medical School, Boston, MA, USA. 2Department of Microbiology and Immunology, Albert Einstein College of Medicine, Bronx, NY, USA. 3Skaggs Institute for Chemical Biology, The Scripps Research Institute, La Jolla, CA, USA. 4Dpt. Microbiologa, Facultad De Farmacia, Universidad Complutense Madrid. La familia CD1 est constituida por molculas presentadoras de antgeno no polimrfic as que presentan lpidos y glicolpidos a clulas T. Las molculas CD1 se clasifican por su secuencia en dos grupos:

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el grupo 1 incluye las molculas de CD1a, CD1b, CD1c y el grupo 2 CD1d. Actualmente tenemos informacin sobre la localizacin intracelular, estruc tura, y antgenos que presentan algunas de las molculas de CD1, pero no se conoce como los lpidos son capaces de atravesar la estrecha entrada que da acceso al sitio de unin de antgeno y como son capaces de colocarse dentro de ella para que puedan ser reconocidos por clulas T a travs de los TCR. Esta cuestin es incluso ms importante en el caso de CD1b que tiene una entrada a la hendidura muy estrecha (15 ) comparada con la de MHC I (25 ). Adems CD1b es capaz de alojar lpidos de cadena de hasta 80 carbonos que requieren, para su carga, encontrar las molculas de CD1b en los endosomas tardos donde el pH es cido. Por eso hipotetizamos que el pH cido podra cambiar la conf ormacin de algunas partes de la molcula de CD1b que favoreciera la carga de los antgenos. Para identificar reas de la molcula de CD1b que pudieran ser elsticas elaboramos modelos de dinmica molecular. Despus, mutamos los aminocidos c idos de esas reas. Escogimos estos aminocidos por que a pH neutro tienen carga negativa y producen interac ciones salinas con aminocidos bsicos y a pH cido las cargas se neutralizan y las interacciones salinas desaparecen. De esta manera nuestros mutantes deberan mimetizar los cambios conformacionales produci dos por el pH en los lisosomas. Del resultado del anlisis de estas mutaciones identific amos que los mutantes en D60 y E62 mejoran la activacin de las clulas T por antgenos largos y la unin de los antgenos a las molculas de CD1b. Por otro lado, tambin demostramos que las mutaciones tambin afectan a la capacidad de las molculas de CD1b de retener a los antgenos. Por lo tanto, concluimos que los aminocidos D60 y E62 que hacen interacciones con K55 y R168 respectivamente en CD1b controlan la carga y retencin de los antgenos lipdicos de CD1b.

Realizamos un estudio caso-c ontrol con 301 enfermos y 646 controles sanos, de la Comunidad de Madrid. En ambas cohortes se analizaron 2 SNPs en el gen CAPSL (rs1445898 y rs1010601) y 3 en el gen IL7R (rs6891932, rs987106 y rs3194051). El genotipado se realiz por sondas TaqMan mediante Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, USA). Las diferencias en frecuencias allicas y genotpicas fueron comparados mediante el estadstico Chi-cuadrado y las asociaciones fueron medidas con la odds ratio (OR) (Epi Info v. 6.02, CDC, USA). En el anlisis de nuestra cohorte encontramos que el genotipo homocigoto mutante del polimorfismo CAPSL-rs1445898 estaba significativamente disminuido en enfermos frente a controles (OR=0.65; p=0.023). El efecto protector fue ms significativo en el grupo de pacientes con debut temprano de la enfermedad frente a los de debut tardo (OR=0.33; p=0.004) y frente a controles (OR=0.31; p=0.0004). En este mismo grupo de enfermos el genotipo homocigoto mutante del polimorfismo IL7R-rs6891932 present tambin un efecto protector frente a pacientes con debut tardo (OR=0.21, p=0.03) y frente a controles (OR=0.24, p=0.03). Replicamos la proteccin por los polimorfismos de CAPSLrs1445898 y de IL7R-rs6891932 encontrada en otras poblaciones caucsicas. Describimos por primera vez que este efecto protector se encuentra especficamente en pacientes de T1D con debut temprano de la enfermedad.

175.CONTRIBUCIN DE UN POLIMORFISMO EN EL GEN STAT4 A LA SUSCEPTIBILIDAD A LA DIABETES TIPO 1. Santiago JL1, Espino L1, Martinez A1, de la Calle H2, Fernandez-Arquero M1, Figueredo MA1, de la Concha EG1, Urcelay E1. 1Hospital Clnico San Carlos. 2Hospital Ramn y Cajal. El gen STAT4 (signal transducer and activator of transciption 4) codifica un factor de transcripcin involucrado en las rutas de sealizacin de diversas citocinas (IL-12, IL-15, IL-23) y en la diferenciacin de clulas Th1 y Th17. Recientemente se ha publicado la asociacin con artritis reumatoide (AR) y con lupus eritematoso sistmico (LES) de un polimorfismo de un solo nucletido (SNP) localizado en este gen. Nuestro objetivo fue analizar el papel de este SNP (rs7574865) en otra enfermedad autoinmune como es la T1D en poblacin espaola. Realizamos un estudio caso-control con 311 enfermos y 716 controles sanos, de la Comunidad de Madrid. La edad de debut varia entre 1 y 55 aos (media: 17.3 10.0 y mediana: 15 aos) siendo todos ellos insulinodependientes en el momento del estudio. El SNP del gen STAT4 (rs7574865) se genotip mediante sondas TaqMan que se analizaron en ABI 7900HT Fast Real-Time PCR System (Applied Biosystems, Foster City, CA, USA). Las diferenc ias en frecuencias allicas y genotpicas fueron c omparadas por el estadstico Chi-cuadrado y las asociaciones fueron medidas con la odds ratio (OR) con un intervalo de confianza del 95% (Epi Info v. 6.02, CDC, Atlanta, USA). El polimorfismo del gen STAT4 analizado (rs7574865) cumple las condiciones del equilibrio de Hardy-Weinberg en nuestra poblacin control. La frecuencia de alelo minoritario (alelo T) fue signific ativamente mayor en enfermos que en controles [OR=1.36 (1.07-1.71); p=0.008]. Cuando estratific amos nuestro grupo de pacientes por edad de debut de la enfermedad y por sexo, no encontramos diferencias significativas en ninguno de los grupos.

SESIN 11: AUTOINMUNIDAD - II Moderadores: Dra. M Rosa Juli (Palma de Mallorca) Dra. Carmen Gelp (Barcelona) 174.ASOCIACIN DE POLIMORFISMOS DE LOS GENES CAPSL E IL7R CON DIABETES TIPO 1 EN POBLACIN ESPAOLA. Santiago JL1, Martinez A1, Espino L1, de la Calle H2, Fernandez-Arquero M1, Figueredo MA1, de la Concha EG1, Urcelay E1. 1Hospital Clnico San Carlos. 2Hospital Ramn y Cajal. Madrid. La predisposicin gentica a la diabetes tipo 1 (T1D) es debida fundamentalmente al Complejo Principal de Histocompatibilidad (MHC). Sin embargo, se han descrito una serie de genes asociados a la T1D localizados fuera de esta regin. En la regin cromosmica 5p13 se ha encontrado asociado un bloque que incluye los genes CAPSL (calcyphosine-like) situado e IL7R (receptor de la IL-7 o CD127) que se encuentra en el mismo bloque de ligamiento que CAPSL. Nuestro objetivo fue replicar la asociacin descrita con anterioridad en otras poblaciones caucsicas.

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Describimos por primera vez la asociacin del polimorfismo del gen STAT4 previamente asociado a AR y LES con un incremento en la susceptibilidad a sufrir T1D con independencia de la edad de debut de la enfermedad y del sexo. Nuestros datos sugieren que el gen STAT4 interviene en el desarrollo de mltiples enfermedades autoinmunes polignicas.

176.MODULATION OF INFLAMMATORY RESPONSES BY DITERPENE ACIDS FROM HELIANTHUS ANNUUS L. Hortelano S1, Girn N2, de las Heras B2, Diaz-Viciedo R2, Mass JM2, Rodriguez B3, Villar A2. 1Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares, CNIC; Madrid. 2Departamento de Farmacologa Facultad de Farmacia, Universidad Complutense Madrid. 3Instituto de Qumica Orgnica (CSIC), Juan de la Cierva, Madrid. Fractionation of a petroleum ether extract of Helianthus annuus L. (sunflower) led to the isolation of three diterpene acids: grandiflorolic, kaurenoic and trachylobanoic acids. These compounds were studied for potential anti-inflammatory activity on the generation of inflammatory mediators in lipopolysaccharide (LPS)-activated RAW 264.7 macrophages. At non-toxic concentrations, these compounds reduced, in a concentration-dependent manner, nitric oxide (NO), prostaglandin E2 (PGE2) and tumor necrosis factor (TNF-alfa) production, as well as expression of inducible nitric oxide synthase (NOS-2) and cyclooxygenase-2 (COX-2). All diterpenoids displayed significant in vivo anti-inflammatory activity and suppressed the 12-O-tetradecanoylphorbol-13-acetate (TPA)-mouse ear edema. In addition, inhibition of myeloperoxidase (MPO) activity, an index of cellular infiltration, was observed. In summary, our results demonstrate that these diterpenoids have anti-inflammatory activity in macrophages, as indicated by inhibition of NOS-2 and COX-2 expression and activity and impaired cytokine release. The low cytoxicity of these compounds in cell culture and their effectiveness in an in vivo animal model of inflammation indicate that these substances may contribute to the anti-inflammatory activity attributed to the sunflower.

Objetivos. Evaluar la prevalencia de ttulos positivos de estos autoanticuerpos ( 1/160 de ANA y AT, y 1/10 ANCA) en pacientes con EPOC estable de la cohorte PAC-EPOC (68 9 a, FEV1 52 16% ref, FEV1/FVC 54 12%, BMI 28 5 kg/m 2, PCR, 8.2 2 mg/L, XSD). Mtodo: Se estudiaron los autoanticuerpos por inmunofluorescencia indirecta y se analizaron sus relaciones con caractersticas fenotpicas relevantes de la enfermedad como obstruccin al flujo areo, grado de enfisema, tabaquismo, inflamacin sistmica y tratamiento con corticoides inhalados. Resultados: Se hallaron ttulos patolgicos de ANA en el 34%, de AT en el 25.4%, de ANCA en el 12.5%. Los AT y ANCA presentaron una asociacin significativa con el grado de obstruccin pulmonar y el grado de enfisema (p<0.05) pero no c on los cuartiles de la PCR. Los AT estaban aumentados en exfumadores (p<0.05). El tratamiento con corticoides inhalados no influy en la frecuencia de distribucin de los autoanticuerpos estudiados. Conclusin: La prevalencia de autoanticuerpos circulantes positivos est aumentada en la EPOC. Estos resultados aportan nuevas evidencias a la hiptesis de la patogenia autoinmune de la enfermedad. Subencionado parcialmente por FIS PI020541, FIS PI052082, SEPAR2003, FUCAP-2003, Marat TV3-2004 y CIBERES.

178.LOCALIZACIN DE LAS REGIONES ANTIGNICAS DEL AUTOANTIGENO CB (macroH2A). Ferrer Villahoz B, Delgado de la Poza JF, Rodrguez-Snchez J-L, Jurez Rubio C. Hospital de la Santa Creu i Sant Pau. Barcelona. En nuestro laboratorio se describi la presencia de anticuer pos frente al antgeno CB en el suero de pacientes con distintas enfermedades autoinmunes. CB fue caracterizado como una protena de 40 kDa unida a DNA, cuya expresin vara en distintos tejidos, especialmente en la diferenciacin de clulas linfoides. Estudios realizados posteriormente han permitido identificar al antgeno como macroH2A, una protena unida a DNA con una regin N-terminal con un 65% de homologa con la Histona H2A, y una regin C terminal, el dominio macro, altamente conservado en la evolucin y que presenta caractersticas muy similares a los dominios macro descritos en otras protenas. Dado que el autoantgeno CB presenta en su estructura dos regiones c laramente diferentes se decidi abordar la localizac in de los eptopos antignicos de la molcula con el propsito de conocer si exista una localizacin preferente de dichos eptopos en alguna de las dos regiones. Se disearon una serie de digestiones de la protena con reactivos qumicos o enzimas que la cortaran en un nmero pequeo de fragmentos y para el posterior seguimiento de la antigenicidad se usaron protocolos de inmunoblot. Se escogieron el cido iodosobenzico y la trombina para la digestin, dado que en condiciones controladas rompen por un nico sitio, obteniendo slo dos fragmentos de macroH2A . As, al digerir con el cido iodosobenzoico se obtena el dominio H2A-like entero mientras que con la trombina se obtena el dominio macro completo. Slo cuando se mantena integro el dominio macro se observaba reactividad con los autoanticuerpos. En conclusin, el dominio macro de macroH2A presenta determinantes antgenicos reconocidos por los autoanticuerpos antiCB.

177.AUTO-ANTICUERPOS CIRCULANTES EN PACIENTES CON ENFERMEDAD PULMONAR OBSTRUCTIVA CRNICA. Nez B1,3, Sauleda J1,2,3, Juli MR4, Garca-Aymerich J5, Ant JM5, Gea J3,6, Mons E3,7, Gmez F3,8, Roca J3,8, Farrero E9, Agust A1,2,3. 1Servei de Neumologia, Hospital Son Dureta, Illes Balears. 2Fundaci Caubet CIMERA, Bunyola, Illes Balears. 3CIBER en Enfermedades Respiratorias. 4Servei Inmunologia, Hospital Son Dureta. 5Centro de Recerca en Epidemiologia Ambiental, IMIM, Barcelona. 6Servei de Neumologia, Hospital del Mar, Barcelona. 7Servei de Pneumologia, Hospital Germans Trias i Pujol, Badalona. 8Servei de Pneumologia, Hospital Clnic-IDIBAPS, Brcelona. 9Servei Pneumologia, Hospital De Bellvitge, Hospitalet del Llobregat. Barcelona. Introduccin. La enfermedad pulmonar obstructiva crnica (EPOC) se caracteriza por alteraciones en la respuesta inmune innata y adquirida, habindose descrito fenmenos de autoinmunidad en forma de anticuerpos antielastina y anti epitelio pulmonar. Hiptesis: Los anticuerpos circulantes antinucleares (ANA), antitejido (AT) y anticitoplasma de neutrfilos (ANCA) estn aumentados en la EPOC.

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179.ANLISIS DE LOS POLIMORFISMOS L469F Y R334W, R334Q DEL GEN CARD15 EN UVETIS IDIOPTICA. Rodrguez Prez N1, Aguinaga Barrilero A1, Gorroo Echebarra MB2, Prez Blas M1, Martn Villa JM1. 1Inmunologa, Facultad de Medicina, Universidad Complutense, Madrid. 2Servicio de Oftalmologa, Hospital Universitario "Prncipe de Asturias. Introduccin. Varios factores genticos se han implicado en la susceptibilidad a padecer uvetis. Recientemente, mutaciones en el gen CARD15 se han considerado factores de riesgo en determinadas patologas inflamatorias. En concreto, los polimorfismos R334W, R334Q y L469F, se han implicado en la susceptibilidad a padecer sndrome de Blau, patologa inflamatoria que cursa con uvetis. No hay datos, sin embargo, sobre el polimorfismo de esta regin en uvetis idiopticas, otra patologa inflamatoria. Pacientes y mtodos. Se obtuvo muestra de ADN de 110 pacientes con uvetis idioptica y 104 individuos sanos. El polimorfismo L469F de este gen se analiz mediante ensayo de genotipado. Los polimorfismos R334W y R334Q se estudiaron mediante secuenciacin directa en 42 pacientes con uvetis y 38 controles. Se amplific la regin de inters mediante PCR con los cebadores, y condiciones previamente publicadas y se secuenci en el servicio de Genmica del C.I.B. Resultados. Ninguno de los pacientes o controles presentaron los polimorfismos anteriormente mencionados. Conclusin. Los polimorfismos del gen CARD15 asociados a susceptibilidad a padecer sndrome de Blau, no parecen, por el momento, serlo en el caso de las uvetis idiopticas.

tamiento con bolos de metilprednisolona y ciclofosfamida. En la presentacin se discute el caso y las alternativas diagnsticas as como la evolucin de la enfermedad en la paciente y en el ttulo de autoanticuerpos.

181.REACTIVIDAD FRENTE A UN GRUPO SELECCIONADO DE PPTIDOS DE LA MIELINA EN PACIENTES CON ESCLEROSIS MLTIPLE REMITENTE RECURRENTE. Grau-Lpez L1,2, Naranjo M1, Ramo C2, Raich D1, Prez-Cabezas B1, Martin R3, Pujol-Borrell R1, Martnez-Caceres E1, Borras FE1. 1Servicio I nmunologa (LIRAD-BST). Hospital Universitario German Trias i Pujol, Badalona. 2Servicio Neurologa. Hospital Universitario German Trias i Pujol, UAB, Badalona. 3Institute for Neuroi mmunology and Clinical MS Research. University Medical Center Eppendorf, Hamburg. La esclerosis mltiple (EM) es una enfermedad autoinmune del SNC caracterizada por la presencia de infiltrados inflamatorios, desmielinizacin y prdida axonal. Estudios previos(1) utilizando dosis muy bajas de antgeno han permitido seleccionar un grupo de eptopos inmunodominantes de la mielina altamente discriminatorios entre pacientes con EM y controles. Como paso previo a un protocolo de tolerancia inmunolgica antgeno-especfica, en este estudio se pretende valorar la reactividad celular in vitro de un grupo de pacientes con EM, frente a la mezcla definida de 7 pptidos inmunodominantes de la mielina, as como la evolucin de esta reactividad en el tiempo. Material y mtodos. Treinte pacientes con EM remitente recurr ente (RR) sin tratamiento inmunomodulador ni corticoideo en los 3 meses previos a la extraccin de la muestra y 10 controles. Ensayos de proliferacin con PBMC de los individuos frente a la mezcla de los pptidos de la mielina: MBP 13-32, MBP 111-129, MBP 146-170, MBP 8399, MOG 1-20, MOG 35-55, PLP 139-154 a concentraciones de 2 y 10 M de cada pptido. La proliferacin de los linfocitos se determin mediante incorporacin de timidina tritiada. Se consideraron positivas las rplicas &#8805; 3SD del control negativo. Se consideraron positivos aquellos individuos con >50% de las rplicas por encima de este valor. En 16 pacientes, se realiz una segunda proliferacin a los 3 meses de la inicial. Resultados. Se detect una reacc in positiva en 21 de 30 pacientes (75%) fr ente a la mezcla de pptidos, mientras que slo 2 de 10 (20%) donantes sanos tuvo una reaccin similar. La reactividad celular observada fue dosis-dependiente (39% a 2 M frente 75% a 10 M). Aquellos pacientes con reactividad positiva (n=22) presentaban una mayor discapacidad (EDSS 2.5 vs 1.0), frecuencia de brotes (82 vs 41) y un menor tiempo de evolucin desde el ltimo brote (90.6 vs 141 meses). A los 3 meses se mantuvo la reactividad a la mezcla de pptidos en 13 pacientes de los 16 analizados. Un paciente positiviz tras sufrir un brote de la enfermedad y dos pacientes negativizaron tras iniciar tratamiento con interfern &#946;. Por tanto: a) Los pacientes con EM-RR proliferan significativamente frente a la mezcla descrita de pptidos inmunodominantes de la mielina; b) La reactividad se mantiene en el tiempo pero parece verse modificada tanto por los brotes como por el tratamiento inmunomodulador. Estos resultados sugieren que la mezcla definida de pptidos de la mielina es potencialmente utilizable en protocolos de induccin de tolerancia antgeno-especfica. Bibliografa
1. Bielekova et al. J Immunol 2004

180.UTILIDAD CLNICA DE LOS ANTICUERPOS ANTI-MPO PARA EL DIAGNSTICO DIFERENCIAL DE INSUFICIENCIA RENAL AGUDA EN PACIENTES CON ESCLERODERMIA. Franco Maside A1, Cobo Caso MA2, Romera Ruiz MI1, Barrios del Pino Y1. 1Seccin Inmunologa Hospital Universitario de Canarias. 2Servicio Nefrologa Hospital Universitario de Canarias. La esclerodermia es una enfermedad autoinmune multisistmica. Debido a que la lesin patolgica subyac ente en esta enfermedad es de origen vascular, la implicacin renal suele manifestarse de forma insidiosa con proteinuria, alteraciones del sedimento y posible impacto en la tensin arterial de estos pacientes. Sin embargo, se ha descrito ms raramente un fenmeno agudo de insuficiencia renal en pacientes con afectacin sistmica que constituye una urgencia vital. Esta presentacin de crisis renal aguda constitua, hasta el descubrimiento de los IECA, la principal causa de muerte de estos pacientes. Por otra parte, en los ltimos aos se ha enfatizado el papel primordial que tiene la determinacin precoz de autoanticuerpos asociados al sndrome agudo rin-pulmn (Ac. anti-membrana basal glomerular (MBG), mieloperoxidasa (MPO), y proteinasa3 (Pr3)) para el pronstico de los pacientes. Presentamos el caso de una paciente de 53 aos de edad, diagnosticada de Esclerodermia Sistmica desde hace seis aos, que acude al Servicio de Urgencias con deteri oro brusco de la funcin renal y tensin arteri al sistlica de 157 mmHg (previamente normotensa). Ingresa con el diagnstico de crisis r enal esclerodrmica. Sin embargo, la determinacin de Autoanticuerpos MPO, PR3 y MBG resulta positiva para Ac. antiMPO, siendo el estudio de IFI en neutrfilos humanos positivo para P-Anca. Este hallazgo resulta crucial para la indicacin de realizacin de Biopsia Renal cuyo resultado muestra GMN extracapilar tipo II I (Pauci -Inmune). Se instaura tra-

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182.INDUCIBLE NITRIC OXIDE SYNTHASE (iNOS) EXPRESSION IN AUTOIMMUNE THYROID DISORDERS (AITD). Guadalupe Figueroa Vega N1, Majano P1, Larraaga E1, Bravo JM1, Rodrguez Ramos R2, Gonzlez Amaro R1, Marazuela Azpiroz M1. 1Hospital Universitario de la Princesa. 2Universidad San Pablo CEU. Introduction. Nitric oxide (NO) is synthesized by different cell types through the action of the enzyme nitric oxide synthase (NOS). There are four isoforms of this enzyme, the neuronal, the endothelial, the mitochondrial, and the inducible (iNOS) forms. Although NO may have a relevant role in inflammation and tissue damage, its possible role in autoimmune thyroidits has not been properly explored. Aim. To study the expression of iNOS at protein and mRNA levels in human autoimmune thyroid disorders ( AITD). Methods. We evaluated the expression of iNOS in thyroid gland specimens from 10 patients with Graves disease (GD), 5 with Hashimotos thyroiditis (HT) and 10 controls by immunohistochemical and RT-PCR. Results. We found an up-regulated expression of iNOS expression in both GD and HT thyroid glands at protein and mRNA levels. iNOS expression was higher in GD compared to HT. In contrast, no iNOS expression was detected in normal thyroid tissue. iNOS was detected on thyrocytes, mainly in those localized in areas in close proximity to the inflammatory cell infiltrate. In addition, an up-regulated expression of iNOS was observed in endothelial cells and thyroid-infiltrating mononuclear cells in both GD and HT. Conclusions. The enhanced expression of iNOS in autoimmune thyroiditis suggests that the synthesis of NO may have a relevant role in the inflammatory phenomenon and tissue damage observed in this condition.

A los 60 das, el porcentaje de pacientes que mantenan la concentracin de VEGF por debajo de los valores iniciales era del 77 y 71% para RD y DMAE, respectivamente. Por otro lado, un 73% de pacientes con RD haba mejorado la AV tras 60 das post-tratamiento, mientras que en pacientes con DMAE la mejora abarcaba al 65%. Estos resultados demuestran que el tratamiento con bevacizumab mejora significativamente la agudeza visual de los pacientes (p<0,001), aunque en DMAE, el efecto positivo se ejerce en los primeros 15 das. Respecto a la posologa, la re-inyeccin de bevacizumab, en aquellos pacientes donde las concentraciones de VEGF se mantengan bajas, tendra un efecto muy limitado.

184.EXPRESIN DE METALOTIONEINAS EN CELULAS FOLICULARES TIROIDEAS EN AUTOINMUNIDAD Y NEOPLASIAS PRIMARIAS DE TIROIDES: UN MARCADOR DE STRESS TISULAR? Martnez-Arconada MJ1, Alonso N2, Armengol MP1, Soldevila B2, Sanmart A2, Pujol-Borrell R1, Martnez-Caceres E1. 1Servicio Inmunologa (LIRAD-BST). 2Servicio Endocrinologa y Nutricin. Hospital Germans Trias i Pujol. Badalona. La enfermedad autoinmunitaria tiroidea (AITD) es una enfermedad crnica resultado de una respuesta immune mantenida frente a antgenos del tiroides. Se ha postulado que en la AITD la respuesta autoimmunitaria se inicia con la generac in in situ de seales moleculares de peligro que a su vez podran ser responsables de la perpetuacin de la respuesta, dando lugar a enfermedad clnica. OBJETIVO: Analizar la expresin de un grupo de molculas (TLR-2, TLR-4, HMGB1, metalotionenas I-II (MTs)) que pudieran actuar como seales moleculares de peligro en glndulas de pacientes con AITD. MATERIAL Y METODOS: Se analiz un total de 14 glndulas de pacientes con enfermedad de Graves Basedow (GB), bocio multinodular (n=12), tiroiditis de Hashimoto (n=2), carcinoma primario tiroides (n=3) y tiroides control (n=5) por IFI con acMo anti-TLR-2, TLR-4, HMGB1, MT, HLAII, TPO, CD3, CD45, CD20. RESULTADOS: Se ha observado positividad anti MT en 9/14 glndulas de pacientes con GB y 2/3 carcinomas primarios (negativa en el resto de patologas y en los controles). La intensidad de expresin de MT en las glndulas de GB fue variable en las clulas foliculares tiroideas (TFCs), pero cabe destacar que aquellas TFCs que expresaban MT no expresaban HLA-II y viceversa. En ningn caso se observ expresin de MT y HLA-II en la misma clula. El patrn de expresin de MT en la enfermedad de GB sugiere que estas molculas podran estar implicadas en la resolucin del proceso inflamatorio y proteccin del tejido tiroideo en la AITD.

183.EL FACTOR DE CRECIMIENTO VEGF COMO MARCADOR DEL TRATAMIENTO CON BEVACIZUMAB EN PACIENTES CON RETINOPATA DIABTICA Y DMAE. Lucena Soto JM1, Sagrario Fustero T2, Ruiz Lapuente C2, Wichmann Schlipf I1, Nez Roldn A1. 1Servicio de Inmunologa del Hospital Universitario Virgen del Roco. Sevilla. 2Servicio de Oftalmologa del Hospital Universitario Virgen del Roco. Sevilla. La retinopata diabtica (RT) y la degeneracin macular asociada a la edad (DMAE) son enfermedades oculares que se caracterizan por el desarrollo patolgico de neovasos en la retina. VEGF es un factor proangiognico cuya sobreexpresin en la retina se asocia al desarrollo de ambas patologas. Actualmente, se han desarrollado diversos tratamientos anti-VEGF. Uno de ellos, bevacizumad, administrado en el vtreo, est siendo utilizado como tratamiento off-label. A pesar de que numerosos estudios han demostrado su eficacia, no hay un consenso con respecto a la posologa. Con el objetivo de utilizar la concentracin intraocular de VEGF como marcador de la eficacia del tratamiento, hemos realizado un estudio prospectivo en 15 pacientes con RT y 31 con DMAE de la evolucin de la agudeza visual (AV) y la concentracin en el humor acuoso de VEGF a los 0, 15 y 60 das del tratamiento. Los resultados fueron los siguientes:
AV (logMAR) 15 das 60 das 18,73 7,18 23,07 7,26 VEGF (pg/ml) 15 das 60 das 52 11 163 58

185.IMPLICATION OF LIVER X RECEPTORS (LXRs) IN THE RESOLUTION OF INFLAMMATION AND AUTOIMMUNITY. Alonso Gonzlez N1, Beceiro Casas S1, Dniz Fleitas JM1, Ramirez CM1, Gallardo Campos G1, Lpez Blanco F1, Ruiz de Galarreta CM1, Andujar M2, Castrillo Viguera A1. 1Universidad de Las Palmas de Gran Canaria. 2Hospital Materno-Insular. Las Palmas de Gran Canaria. The Liver X Receptors (LXRs) are members of the nuclear receptor superfamily of transcription factors that play central roles in the transcriptional control of lipid metabolism and inflammation. Activation of LXRs promotes the expression of genes involved in cholesterol homeostasis and inhibits the expression of inflamatory genes. LXR sig-

0 das RD DMAE 15,03 4,25

0 das 337 101

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nalling is important for the innate immune response against intracellular bacteria. Thus, the study of LXR function in macrophages is unraveling previously unrecognized links between innate immunity and lipid metabolism. Chronic inflammation and disregulation of the immune mechanisms are currently underlying many human diseases. Whi le essential to combat pathogens, macrophage-derived cytokines are also injurious to normal cells and tissues. If unchecked at the resolution of immune responses, production of cytokines leads to chronic inflammation and autoimmunity. For example, systemic lupus erythematosus (SLE) is a chronic inflammatory disease with unknown etiology in which the immune system turns its defenses upon self-elements such as chromatin. SLE is characterized by lymphocyte expansions, hypergammaglobulinemia and renal damage. Nephritis is caused by deposition of DNA-specific autoantibody complexes, activation of the complement cascade and subsequent infiltration of T cells and macrophages that amplify the local inflammatory response that results in eventual renal failure. Here we describe that mice lacking LXRs manifest an age-dependent breakdown in self-tolerance and develop autoantibodies and autoimmune glomerulonephritis. W e will also discuss the potential implications of LXR-dependent pathways in the protection against autoimmune disease and the potential mechanisms involved. Our results demonstrate that LXRs are important players in the protection against autoimmune disease and suggest that pharmacological activation of LXR could be a therapeutic alternative to ameliorate inflammatory disregulation in autoimmune disease.

Conclusions. To our knowledge this is the first report where Th17 lymphocytes have been studied in AITD. These cells could have a role in the chronic inflammatory context and the regulatory T cell dysfunction of AITD.

187.VALORACIN DE LA TCNICA ANA AtheNA Multi-Lyte PARA LA DETECCIN DE ANTICUERPOS ANTINUCLEARES. Vlagea F, Alvarez Doforno R, Marcos Gutierrez MJ, Marco Castro E, Lozano Doncel M, Fontan G. Servicio de Inmunologa. Hospital La Paz. Madrid. Introduccin. La deteccin de anticuerpos antinucleares (ANA) es fundamental para el diagnostico y/ clasificacin de las enfermedades autoinmunes sistmicas. Objetivo. 1) Valorar una tcnica multiparamtrica ANA MultiLyte AtheNA para detectar los anticuerpos antinucleares y compararla con tcnicas convencionales. 2) Optimizar su utilizacin como tcnica de cr ibaje en el laboratorio de autoinmunidad. Materiales y mtodos. Para la deteccin de ANA se emple la IFI sobre portas de triple tejido de rata y clulas HEp-2 (Euroimmun, Lbeck). Para determinar la especifi cidad de los anticuerpos se emple como tcnica mltiparamtrica IMD (INNO-LIA ANA Update, Innogenetics) y para la cuantificacin de Ac anti dsDNA el sistema UniCAP (Pharmacia). La tecnologa AtheNA detecta ANA e identifica a la vez nueve autoanticuerpos (SS/A, SS/B, Sm, RNP, Jo-1, Scl-70, dsDNA, Centrmero, e Histonas). Se ensayaron 600 sueros de pacientes con diversas patologas y 53 controles. Resultados. 1) El cribaje de ANA por el Sistema AtheNA revela una muy alta concordancia con el ensayo IMD en las muestras de pacientes con patologa autoinmune sistmica. Cuando se compara con la IFI disminuye un poco y a que sta es menos sensible y a veces, es difcil interpretar los patrones, sobre todo en los casos de Ac anti Ro/SSA y Ac anti Jo-1. 2) Resultados discrepantes negativos por Athena aparecen en patologas autoinmunes sistmicas con anticuerpos a otras especificidades distintas de las nueve ensayadas. 3) Resultados discrepantes positivos por Athena se observan en algn positivo dbil, en muestras con concentraciones elevadas de IgG y alguna con patologa infecciosa. 4) Para la utilizacin del sistema Athena como tcnica de cribaje se deben usar unos protocolos de trabajo especfi cos. Conclusin. El sistema Athena es una tcnica muy til para detectar los ANA y los 9 anticuerpos ms comunes presentes en las enfermedades autoinmunes sistmicas, puede ser usada como cribaje en un laboratorio de autoinmunidad siempre y cuando se utilice con unos protocolos adecuados.

186.STUDY OF INTERACTIONS BETWEEN REGULATORY T LYMPHOCYTES AND TH17 CELLS IN AUTOIMMUNE THYROID DISORDERS (AITD). Figueroa Vega NG, Benedicto I, Snchez Madrid F, Gonzlez Amaro R, Marazuela M. Hospital Universitario de la Princesa. Introduction. Natural regulatory T lymphocytes (nTreg) are cells specialized in modulating immune responses a key event in limiting pathological autoimmunity. Several cytokines play a key role on both Treg differentiation and function. On the contrary, T-helper Th17 cells are a novel T-cell subset that produce interleukin 17, have a highly inflammatory role recruiting immune cells to peripheraltissues, and are probably related to some autoimmune diseases. The cytokine transforming growth factor (TGF)-f has a critical role in the differentiation of both Treg and Th17 populations. We have recently reported a dysfunction in Treg cells in patients with autoimmune thyroid disorders ( AITD). Aim. To study the role of different pro-inflammatory cytokines (IL-6, IL-15, IL-17, IL-21 and IL-22) on both the regulatory T cell dysfunction and the Th17 differentiation in AITD. Design. Case-comparative study ex vivo and in vitro of biological specimens from patients with AITD and controls. Results: We found increased serum levels of proinflammatory cytokines IL-15 and IL-6 in patients with AITD when were compared with healthy subjects. Furthermore, we detected an increase in Th17 population in vitro differentiation when stimulated with phorbol myristate acid plus ionomicine, mainly in TH patients. In addition, we observed expression of IL-17 and IL-22 in thyroid biopsiesfrom AITD patients. Moreover, we detected by PCR, increased RNAm levels of IL-17, IL22, and RORfxt transcription factor in HT and GD patients when compared with healthy subjects. Finally, these Th17 cells were able synthesize pro-inflammatory cytokines (IL-17 and IL-22).

188.SIGNIFICADO DE Ac ANTI SLA Y Ac ANTI Ro52 EN PACIENTES CON PATOLOGA AUTOINMUNE. Alvarez Doforno R, Alba Domnguez M, Lozano Doncel M, Salcedo Moreno C, Fontan G. Servicio de Inmunologa. Hospital La Paz. Madrid. Introduccin. Los autoanticuerpos dirigidos al antgeno Ro52 se encuentran en una variedad de enfermedades autoinmunes sistmicas, aunque su significado clnico no se conoce. Los Ac anti SLA son altamente especficos para la hepatitis autoinmune aunque slo se detectan en un 10-30% de los pacientes con esa enfermedad. Recientemente se ha descrito una asociacin entre Ac anti Ro 52 y Ac anti SLA con la actividad de la hepatitis autoinmune.

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INMUNOLOGA

POSTERS

Objetivo. Comprobar la asociacin de Ac anti Ro52 y Ac anti SLA en hepatitis autoinmune. Estudiar la asociacin de Ac anti Ro52 con otros anticuerpos en patologas autoinmunes sistmicas. Materiales y mtodos. Se analizaron la presencia de Ac anti Ro52 y Ac anti SLA en 45 sueros de pacientes con hepatitis autoinmune y 600 pacientes con enfer medades autoinmunes sistmicas. Para la deteccin de Ac anti Ro52 se utiliz el inmunodot (INNO-LIA ANA Update, Innogenetics) y para Ac anti SLA se emple el inmunodot perfil heptico (Liver dot de ALPHADIA). Se recogieron los diagnsticos y parmetros bioqumicos de los pacientes que presentaban los dos anticuerpos. Resultados. Hay 11pacientes con hepatitis autoinmune que presentan Ac anti SLA (+) de ellos 7 fueron Ac anti Ro52 (+). De los 600 pacientes con patologa autoinmune 77 presentan Ac anti Ro52 (+) y en 65 se encuentran combinados con otros autoanticuerpos: SLA (4), Sm (3), RNP (9), Jo-1 (6), Scl70 (3), Ro60 (10), SSB (20), CEN B (16), rRNP (2), F-Actina (4), M2 (10). Los 4 pacientes que presentan Ac anti Ro 52 y Ac anti SLA presentan disfuncin heptica. Conclusin. Hay una fuerte asociacin entre Ac anti Ro52 y los Ac anti SLA en las hepatopatas autoinmunes. Los Ac anti Ro52 en patologas autoinmunes sistemas se encuentran asociados a otros anticuerpos, en los casos con alteracin de transaminasas es conveniente estudiar la presencia de Ac anti SLA descartando patologa heptica autoinmune.

Conclusin. Los datos reflejan la experiencia de nico centro durante ms de 8 aos de recogida de los datos clnicos y serolgicos de forma prospectiva. Segn ello, ninguno de los marcadores serolgicos, clsicamente asignados como marcadores de actividad clnica, se les puede conferir una relevancia clnica por s mismos. Por consiguiente, su utilidad vendr dada por la situacin individual de cada paciente.

190.PORCENTAJES ELEVADOS DE CELULAS CD8+DR+ SE ASOCIAN A COMPLICACIN CLINICA EN MUJERES CON SINDROME ANTIFOSFOLIPIDO (SAAF) OBSTETRICO. Carbone J1, Gallego A1, Lanio N1, Sarmiento E1, Aguaron A2, Orera M3, Fernandez-Cruz E1. 1Servicio de Inmunologa. 2Servicio de Obstetricia. 3Unidad de Gentica. Hospital Gregorio Maran. Madrid. Introduccin. Las pacientes con SAAF obsttrico pueden sufrir distintas complicaciones clnicas adems de la morbilidad obsttrica, sin que dispongamos en la actualidad de marcadores que indentifiquen el riesgo de desarrollarlas. Su conocimiento permitira programar ms finamente medidas profilcticas y teraputicas. Objetivo. Establecer si existe asociacin entre alteraciones de subpoblaciones linfocitari as T, B o NK, que se observan en el SAAF obsttrico, y la presencia de complicaci ones clnicas (isquemia/trombosis, crisis convulsivas, preclampsia/abruptio placentae). Mtodos. Estudio transversal: 36 mujeres con SAAF obsttrico, 36 con aborto rec urrente sin AAF, 36 sanas con hijos y sin abortos y 36 sanas sin antecedente de gestacin. Edad similar en todos los grupos. Subpoblaciones linfocitarias estudiadas en sangre total, mediante citometra de flujo de tres colores. Distintas combinaciones de ac. monoclonales anti: CD3, CD4, CD8, CD25, CD45RA, CCR7, CD38, HLA-DR, CD19, CD27, IgD, CD5, CD40, CD16 y CD56. Estudio realizado sin actividad reciente de las complicaciones. 13 pacientes tuvieron algunas de las complicaciones. Resultados. En relacin con distintos grupos control, las mujeres con SAAF tenan: >% de clulas T activadas (CD4+DR+, CD8+DR+); >% de clulas B-naive (CD19+CD27-IgD+) y <% de clulas NK (CD3CD56+CD16+). Se demostr asociacin significativa entre porcentajes >40% de clulas CD8+DR+ y el antecedente de trombosis (Prueba de Fisher, p=0.014); y con la presencia de cualquiera de las complicaciones descr itas (p=0.016). Niveles elevados de clulas CD8+DR+ se asociaron a ri esgo de trombosis (RH 10.2, IC95% 1.16-90.91; p= 0.03) i ndependientemente de la presencia de ttulos ms altos de ACA. Conclusiones. El estudio de marcadores de activacin de cellas T CD8+ podra ser til para identific ar el riesgo de complicaciones en mujeres con SAAF obsttrico. Se ha iniciado un estudio prospectivo de las pacientes para establecer el impacto de las alteraciones inmunofenotpicas en el curso clnico del SAAF.

189.ESTUDIO PROSPECTIVO DE MARCADORES SEROLGICOS DE ACTIVIDAD CLNICA EN UNA COHORTE AMPLIA DE PACIENTES CON LUPUS ERITEMATOSO SISTMICO. Villegas Zambrano N, Novo MJ, Martnez-Taboada V, Bolvar A, Lpez-Hoyos M. Servicios de Inmunologa y Reumatologa. Hospital Universitario Marques de Valdecilla. Santander. Introduccin. El LES es una enfermedad de curso y pronstico variable que puede presentar exacerbaciones y remisiones que precisa de un control clnico estricto, por lo que es importante conocer el grado de actividad clnica. Para ello, una de las herramientas ms utilizadas es la cuantificacin de diversos parmetros serolgicos como los anticuerpos anti-DNA nativo (DNAn) y los niveles de C3 y C4. Objetivo. Determinar la relacin entre el ndice de actividad clnica (SLEDAI) y los ttulos de Acs anti-DNAn junto a los niveles sricos de C3 y C4, de forma prospectiva. Mtodos. El estudio se realiz en 194 pacientes. Para el anlisis, se seleccionaron 98 pacientes con LES (seguidos en la consulta de reumatologa) por contarse con los datos clnicos suficientes y un seguimiento mnimo de 5 aos. Se recogieron los siguientes parmetros: SLEDAI (descontando el dato de Acs anti-DNAn y complemento), los ttulos de Acs anti-DNAn, medidos mediante EliATM dsDNA (Phadia), e inmunofluorescencia indirecta sobre C. Luciliae (CLIFT), y niveles sricos de C3 y C4 medidos mediante nefelometra. Resultados. De los 98 pacientes analizados, solo 30 (30,6%) presentaron alguna correlaci n positiva significativa con el SLEDAI, siendo el EliATM dsDNA en 7 (7,2%; p< 0.05), con CLI FT en 9 (9.18%). Respecto al complemento, se encontr correlacin negativa en 11 (11.2%) con C3 y 12 (12,3%) con C4, sin haber relacin de estos datos con el tiempo de evolucin del LES. Por otraparte cabe destacar que la mayoria de los pacientes presentan disminucin de los Acs anti-DNAn antes del brote de actividad, reflejado por el aumento del SLEDAI, aunque no es estadsticamentesignificativo.

191.ESTUDIO DEL PERFIL CELULAR PRESENTE EN LQUIDO CEFALORRAQUDEO DE LOS DISTINTOS SUBTIPOS DE ESCLEROSIS MLTIPLE. Espio Martnez M, lvarez Cermeo JC, Gonzlez Porqu P, Sdaba Argaiz MC, Gmez Rial J, Roldn Santiago E, Villar Guimerans LM. Hospital Ramn y Cajal. Madrid. Introduccin. La esclerosis mltiple (EM) es una enfermedad desmielinizante del sistema nervioso central. Se ha demostrado recien-

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temente que los linfocitos B y los anticuerpos juegan un papel importante en la patogenia de esta enfermedad. El 96% de los pacientes con EM presenta sntesis intratecal de IgG (SIG) y el 40% adems sntesis intratecal de IgM (SIM). La presencia de esta ltima constituye un marcador de mal pronstico en los pacientes con esclerosis mltiple remitente recidivante (EM-RR). Objetivo. Estudiar los perfiles linfocitarios presentes en el lquido cefalorraqudeo de una serie de 187 pacientes con esclerosis mltiple divididos segn la presencia o no de SIM y segn la forma evolutiva de la enfermedad. Metodologa. Muestras: Las muestras de LCR de pacientes con EM se centrifugaron a 1800 rpm durante 15 minutos inmediatamente despus de ser extradas. El sobrenadante (LCR) se utiliz para la deteccin de bandas oligoclonales de IgG (BOCG) e IgM (BOCM) mediante isoelectroenfoque e inmunoblotting. El pellet celular se utiliz para el anlisis de las poblaciones celulares. Se marc con anticuerpos frente a los siguientes marcadores: CD45, CD4, CD8, CD38, CD19, CD5. El anlisis de las clulas se hizo mediante citometra de flujo en un citmetro FACSCanto (Becton Dickinson). Resultados. Los pacientes con EM-RR con BOCM tienen un aumento significativo de linfocitos B CD5+ y linfocitos B activados CD38+ as como de linfocitos T CD4+ con respecto a los pacientes con EM-RR que no presentan BOCM y los pacientes con EM primaria progresiva (EMPP). Los pacientes con EMRR presentan un aumento significativo de linfocitos B CD5- con respecto a los PP. Los pacientes con EM-PP presentan un aumento significativo de linfocitos CD8+ con respecto a los pacientes con EM-RR. Conclusiones. El estudio de LCR puede contribuir a conocer los mecanismos fisiopatolgicos predominantes en los distintos tipos de EM y ayudar a la identificacin de los mismos.

Mtodos. Se analizaron mediante citometra de flujo las CDs mieloides (mCDs, BDCA1+CD19- y Lin-CD11+) y plasmacitoides (pDCs, BDCA2 y Lin-CD11-) y los niveles sricos de hormonas sexuales (estradiol, progesterona y testosterona). Resultados. En ES observamos un aumento de mCDs CD11+ (de 0,770,31 en T1 a 1,430,61 en T2 p=0,04), disminuyendo a 0,720,17 en PP. Las pDCs BDCA2 disminuyeron (0,390,24 in T1a 0,200,17 en T3, p=0,005) y persisten bajas en PP (0,200,04). En EM, ambas mCDs aumentaron durante el embarazo, ms las BDCA-1 (0,270,15 en T1 a 0,450,67 en T3) y se mantuvieron elevadas en PP (0.440.42.). Las pCDs CD11c- disminuyeron (0, 470,15 en T1 a 0,360,13 en T3, p=0,05) y suben no significativamente en PP (0,430,23). En el PP, las ES tienen las pCDs ms bajas que las EM (p=0,007). En ambas, las hormonas aumentaron significativamente durante el embarazo y descendieron en el PP. Conclusin. La gestacin es un modelo nico de tolerancia inmunolgica fisiolgica, que afecta beneficiosamente a la EM. La distintas subpoblaciones de CDs presentan patrones diferenciales en el embarazo normal y en el contexto de embarazo en la EM, que sugieren efectos inmunorreguladores especficos.

193.AUTOANTICUERPOS ANTI-PCNUA? UN NUEVO PATRN DE FLUORESCENCIA EN HEP-2 RELACIONADO CON EL CICLO CELULAR. Ontan Rodrguez J1, Rada Martnez R1, Sez Mndez L2. 1Servicio de Anlisis Clnicos. 2Servicio de Medicina Interna. Complejo Hospitalario de Albacete. El objetivo de esta comunicacin es hacer pblico el hallazgo de un patrn de fluorescencia del que no hemos encontrado ninguna referencia bibliogrfica para su discusin entre los asistentes al congreso. Metodologa. Tcnica de cribado de ANAs mediante inmunofluorescencia i ndirecta sobre portas con clulas HEp-2. Ttulo inicial 1/40. Diluci ones seriadas a 1/2 hasta 1/640, en la fotografa adjunta 1/320. Descripcin. El patrn de fluorescencia encontrado consiste en la tincin irregular de las clulas, afectando aparentemente a un antgeno de expresin variable en funcin del ciclo celular (no se tien el 2030% de las clulas) y cuya localizacin es tambin variable dando lugar a imgenes de clulas que, en la interfase, muestran patrones intermedios entre el centromrico, el moteado y el nucleolar sin tincin de nucleoplasma. Las clulas en metafase no se tien a diferencia de lo que sucede en los centromricos. Asociacin con enfermedad: la muestra analizada corresponde a un paciente varn, de 71 aos de edad, que acude a consulta externa por prdida de memoria. Historia de artralgias y artrosis. Vida activa, normal. MMSE 30 puntos Hiptesis. Poda tratarse de un antgeno de expresin variable implicado en la asociacin centrmero-nucleolo que se da durante el ciclo celular.

192.CINTICA DE LAS CLULAS DENDRTICAS Y NIVELES SRICOS DE HORMONAS SEXUALES DURANTE LA GESTACIN Y POSTPARTO EN EMBARAZADAS SANAS Y CON ESCLEROSIS MLTIPLE. Teijeiro Martorell R, de Andres C, Snchez-Ramon S, Aristimuo C, Rodrguez-Mahou M, Lpez-Nazareno N, Fernndez-Cruz E, Martnez-Gines ML. HGU Gregorio Maran. Madrid. Introduccin. Los mecanismos celulares inmunolgicos por los que disminuye la actividad de la esclerosis mltiple (EM) durante la gestacin son poco conocidos. Las clulas dendrticas (CDs) desempean un papel central en la induccin y regulacin de las respuestas inmunolgicas. Es conoc ido que las hormonas sexuales son inmunomoduladores. Objetivos. Analizar durante los 3 trimestres del embarazo (T1,T2,T3) y en el posparto (PP) la proporcin de las subpoblaciones de CDs en 20 embarazadas sanas (ES) y en 30 con EM.

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Indice de autores
A Abad C, 17 Abada Molina AC, 45, 67, 85, 105, 108 Abarrategui C, 81 Abd-El-Fatah-Khalil S, 19, 63, 64 Abos Gracia B, 43 Acero A, 25 , 84 Acevedo Calado MJ, 23, 25 Aguado E, 107 Aguaron A, 119 Aguilar Reina J, 41, 98, 99 Aguilera Garca I, 23, 25, 69 Aguinaga Barrilero A, 116 Agust A, 115 Agust M, 78 Alamillo C, 23 Alba Domnguez M, 118 Alba E, 61, 69 Albarrn F, 59 Alcal Pea MI, 28, 73 Alcaraz MJ, 86 Alcoceba M, 71 Alegre Aguarn E, 108 Alegre Aguarn E, 68 Alemany JM, 20 Alemany JM, 79 Als Daz I, 39 Alfaro Snchez D, 48 Alfonso Prez M, 34 Algarra I, 73, 74 Algarra I, 95 Algora M, 64 Allende L, 33 Allende Martnez LM, 30, 76 Almanza H, 97 Almeida Parra J, 45, 47 Alonso A, 102 Alonso rias R, 60 Alonso Blanco C, 71 Alonso C, 36 Alonso Chamorro L, 35 Alonso Colmenar LM, 92 Alonso Gonzlez N, 117 Alonso MM, 81 Alonso Moreno F, 40, 110 Alonso N, 117 Alonso Ortiz A, 39 Alonso Sardon M, 62 Alonso-rias R, 20 Alorda J, 79 Alperi M, 58 Alvarez A, 32, 72, 75, 76 lvarez Cermeo JC, 119 Alvarez Doforno R, 24, 33, 118 Alvarez Domnguez C, 40, 99 lvarez E, 74 Alvarez L, 24 lvarez Lpez MR, 70, 82 lvarez Mrquez A, 23, 25, 41 lvarez MR, 86 lvarez Vega B, 40, 110 lvarez-Cermeo JC, 48 lvarez-Lpez MR, 20, 79, 83 lvarez-Mon M, 18, 59, 60 lvarez-Vallina L, 27, 38 Alves H, 68 Ambrosi A, 102, 112 Ampudia RM, 52 Amunrriz C, 42, 65 Andrade RJ, 73 Andres Martin A, 24 Andujar M, 117 Anel Bernal A, 108 Angulo A, 102 Angus B, 82 Ant JM, 115 Anton Gutirrez IM, 106 Antn M, 107 Aramburu J, 40 Arbos A, 88 Arbs Magriny A, 93 Arias CF, 72 Arias M, 23 Arina A, 25, 26 Aristimuo C, 120 Armengol Barnils MP, 49, 50 Armengol MP, 117 Arnaiz-Villena A, 19, 63, 64, 85 Arostegui JI, 32 Arrieta A, 84 Arrieta Gutierrez A, 61 Arroyo JL, 42, 65 Arroyo M, 94 Arroyo R, 49 Asin Pardo L, 104 Ausn F, 42, 65, 101 Ausin Ortega F, 66, 101 Auxiliadora Bajo M, 44 Azpilicueta A, 26 B Badell I, 31, 76, 78 Baeza A, 25 Balado P, 25, 84 Balanzat Muoz J, 93 Balanzategui A, 47, 71 Balas Prez A, 19, 21, 28 Balderramo D, 23 Ballester S, 111 Ballesteros Andres M, 92 Ballina J, 58 Balsa Criado A, 17 Ban-Rodrguez I, 106 Baquero Meja I, 101 Barber DF, 72 Barbolla L, 63, 64 Brcena J, 97, 100 Brcena P, 47 Bargay J, 88 Barrenechea C, 34 Barrios del Pino Y, 116 Beceiro Casas S, 117 Bello R, 46, 109 Belln Heredia T, 36, 44 Belver Miguel L, 35 Benaiges-Martnez C, 76, 78 Benavides Orgaz M, 39 Benedicto I, 118 Benito A, 23 Benito Almazan MJ, 23, 98 Berga Bolaos R, 48 Berga R, 40 Bernal MJ, 34, 72, 85 Bernal-Ramos A, 83 Bernardo Gonzlez I, 62, 67, 96 Bernardo I, 67 Bernardo MV, 86 Bernardos A, N69 Berruguilla Prez E, 39, 73, 74, 95 Bertranpetit J, 30 Bilbao A, 84 Blanco FJ, 18 Blanco Garca RM, 70 Blanco Gelaz MA, 21 Blanco Muoz O, 85 Blanco O, 45, 67, 105, 108, 110 Blasco-Olaetxea E, 90 Bofill M, 112 Bohorquez JC, 88 Bolvar A, 119 Bonet Rosell L,107 Borrs FE, 52, 116 Borrs Serres FE, 105 Borraz Y, 73 Borrega P, 37 Borro Mate JM, 71 Bosch L, 22, 97 Botella Martnez C, 20, 70, 79, 83 Bravo B, 111 Bravo JM, 117 Bravo Romero MJ, 39, 102 Bravo-Mendoza C, 21 Brckalo T, 43 Brieva JA, 16, 34, 72, 85, 88, 89 Bruijns S CM, 44 Brun A, 101 Buelta L, 38, 51 Bustamante L, 19, 21, 28 Busto E, 33, 110, 113 Buxad M, 40 C Caballero Gonzlez A, 39, 102 Cabello V, 25 Cabezn Snchez A, 17 Cabrera T, 26 Cacheiro C, 112 Cacho Gutierrez J, 19 Cacho J, 63 Calle Y, 106 Calleja Antoln S, 30, 60, 67 Callejas Rubio JL, 51 Calonge M, 111 Calvo Benito FJ, 93 Calvo J, 88 Calvo Pinilla E, 100 Camacho F, 26 Camarero C, 15, 78 Cambra A, 82 Campanario F, 94 Campillo Marquina JA, 20, 79, 82, 83 Campos E, 65 Campos-Caro A, 37, 89 Cantero S, 69 Cant E, 74

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INDICE DE AUTORES

VOL. 27 SUPL. 1/ 2008

Cantn J, 92 Caete JD, 18 Capilla A, 61 Caragol I, 29, 32, 76 Carbone Campoverde J, 70, 81 Carbone J, 25, 53, 82, 84, 119 Crdaba B, 29, 80 Cardero Gonzalez E, 90 Carillo J, 47 Caro Oleas JL, 23, 25, 72, 98 Carranza Domnguez D, 33, 107 Carrascal J, 52 Carrasco Hidalgo A, 66 Carrasco JA, 57 Carrasco Marin E, 40, 99 Carretero R, 26, 92 Carrillo J, 52 Casado A, 57 Casado JF, 26 Casado JG, 36 Casanova J-L, 32 Casares C, 74, 95 Cassatela MA, 43 Castaer Alabau JL, 24 Castao J, 36 Castell M, 58 Castellote C, 58 Castiella T, 68 Castillo Rama M, 62, 67, 96 Castrillo Viguera A, 117 Castro Beiras A, 71 Castro Henriques A, 68 Castro MJ, 44, 60, 67 Castro P, 95 Castro Panete MJ, 67 Cedenilla Horcajuelo M, 43 Cejalvo Goyanes T, 48 Cnit MC, 49 Cervera C, 23 Cervera I, 64 Chacrtegui M, 29, 80 Chamorro Prez S, 40, 44 Chapgier A, 32 Chara L, 18, 59, 60 Cheng T-Y, 113 Chevarra J, 18, 59, 60 Chicano A, 103 Chilln MC, 71 Chong Espino Y, 19 Chou H-C, 106 Chow I-T, 37 Cianchetta Sivori M, 96 Cillero L, 94 Cladera A, 88 Clemente J, 76 Clemente X, 52 Closa D, 56 Clotet B, 112 Cobo Caso MA, 116 Cobo Ibez T, 17 Cobo M Cobos Dols M, 33, 39 Coll Mart J, 28, 73, 94 Collado A, 73, 74, 95 Collantes Estevez E, 57

Colobran Oriol R, 49, 50 Colombetti S, 26 Comabella M, 49, 108 Compte Grau, 27 Corbillo Colom C, 93 Cordero OJ, 89 Crdoba L, 97, 100 Corell A, 111 Corral R, 71 Corral-San Miguel R, 74 Correro F, 16 Cortes JR, 37, 51 Cortezn SA, 76 Costa C, 22 Costo R, 72 Coto E, 30 Czar JM, 39, 92 Crawford M, 19 Crespo A, 33 Crespo E, 73 Crespo Leiro M, 71 Crisci E, 42, 97, 98, 100 Cruz Garca M, 77 Cuende E, 59, 60 Cuesta Martnez A, 27 Cuesta Mateos C, 34 D Dai Z, 37 Dvila B, 99 de Andrs A, 15, 78 de Andres C, 120 de Dios Colmenero J, 102 de Garcillan Goyoaga B, 92 de Gracia J, 32, 76 de Haro J, 112 de la Calle H, 114 de la Calle Martn O, 30, 31, 76, 78 de la Concha EG, 49, 114 de la Escosura A, 102, 112 de la Fuente H, 110 de la Mata C, 67, 85, 108, 110 de la Rosa O, 36 de la Torre Bravos M, 71 de Lamata Espinosa C, 45, 105 de las Fuentes BD, 72 de las Heras B, 97, 115 de las Heras V, 49 de Pablos P, 76 de Paula Sanchez Gordo F, 66 de Paz B, 52, 58 Deishenhammer F, 49 del lamo C, 29, 75, 80 del Campo Alonso AB, 91 del Cerro Vadillo E, 40, 99 del Giudice G, 41 del Peso G, 44 del Pozo N, 30 del Pozo V, 29, 30, 75 del Puerto Morales M, 72 del Val M, 43, 97 Delgado Cervio E, 33 Delgado de la Poza JF, 115 Delgado J, 80 Delgado-Prez L, 37

Dema B, 49 Dema Jimnez B, 55 Dniz Fleitas JM, 117 Desportes Bielsa P, 68, 108 Detkova D, 32, 76 Diaz Alderete A, 86 Daz B, 102, 112 Daz D, 18, 59, 60 Diaz I, 98 Diaz MC, 24 Daz Pea R, 21 Daz San Segundo F, 97 Daz-Freitas B, 44 Daz-Pea R, 20 Daz-Rubio M, 16, 55 Diaz-Viciedo R, 115 Diebold S 106 Diebold Y, 111 Diguez MA, 81 Domenech Garca N, 71 Domnguez A, 32 Domnguez J, 40, 42, 110 Domnguez MA, 31 Domnguez O, 110 Donat E, 61 Dongo MN, 106 Dubrot J, 25 E Escalera A, 17 Escobar D, 32, 33, 79, 80, 82, 83 Esiri M, 48 Espaa A, 78 Espaol Boren T, 28, 75 Espaol T, 32, 34, 76, 81 Espejo C, 49 Espino L, 114 Espio Martnez M, 48, 119 Esteller M, 56 Estevez Cid F, 71 Evora N, 90 Ezquerra Martnez A, 40, 110 F Faner Canet MR, 47, 65 Faro J, 44, 102, 112 Farrero E, 115 Feito MJ, 109 Fenutra Aumesquet R, 107 Ferndez-Rey M, 50 Fernandes R, 44 Fernndes-Arquero M, 17 Fernndez Fresnedo G, 23 Fernndez Gutirrez B, 17 Fernndez J, 25 Fernandez M, 63 Fernndez MA, 105 Fernndez O, 17 Fernndez P, 76 Fernndez Prieto L, 40, 99 Fernndez Rey M, 51 Fernndez S, 47 Fernndez-Arquero M, 16, 30, 55, 56, 77, 114 Fernndez-Cruz E, 52, 53, 70, 81, 84, 86, 92, 103, 119, 120

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INMUNOLOGA

INDICE DE AUTORES

Fernndez-Guerrero M, 96 Fernndez-Gutirrez B, 17, 56 Fernndez-Llamazares J, 100 Fernndez-Malav E, 113 Fernndez-Martnez I, 111 Fernndez-Nieto MM, 75 Fernndez-Rey M, 41 Fernandez-Valle C, 34 Fernndez-Yaez J, 70, 84 Fernndez-Reyes M, 93 Ferrando AA, 46 Ferre S, 64 Ferreira A, 30, 77, 83 Ferrer J, 32, 79, 80 Ferrer Villahoz B, 115 Ferri A, 19, 63, 64 Fieschi C, 32 Figueras C, 75 Figueredo MA, 55, 56, 114 Figueroa Vega NG, 118 Flores E, 82 Florido F, 80 Florido Y, 32 Fogal V, 38 Fontn Casariego G, 31, 33 Fontan G, 24, 30, 31, 77, 83, 118 Fraile L, 97, 98, 100 Franch A, 58 Franco Maside A, 116 Fresno Escudero M, 99 Fras Casas M, 79 Frias I, 90 Fras M, 77 Fuentes D, 60 Fuentes M, 94 Fuster F, 23 G Gallardo Campos G, 117 Gallardo Galera JM, 65 Gallego A, 119 Gallego Lpez A, 70, 81 Gambn-Deza F, 20, 64 Gmez Gmez C, 29, 30, 75 Gamoneda E, 60 Garces P, 29 Garca Alonso AM, 70, 82 Garca Alvarez F, 68 Garca de Burgos M, 93 Garca Delgado R, 96 Garca JM, 84 Garca Jurado G, 77, 79 Garca Laorden MI, 32 Garca Lora AM, 39, 74, 95 Garca Lozano JR, 41 Garca M, 88 Garca MC, 83 Garca Montero AC, 47 Garca Olivares E, 85, 108, 110 Garca Prez A Garca Prez A, 35, 110 Garca Peydr M, 46 Garca Ruano AB, 91 Garca Snchez E, 90, 99 Garca T, 72

Garca Trujillo JA, 73 Garca Veguillas A, 35 Garcia-Alonso A, 79, 83 Garca-Alvarez F, 108 Garca-Aymerich J, 115 Garca-Calatayud MC, 83 Garca-Ceca J, 48 Garca-Cozar F, 107 Garca-Estn J, 83 Garca-Gasc P, 98 Garca-Laorden I, 32 Garca-Lpez Asenjo JA, 94 Garca-Lora AM, 73, 95 Garca-Lozano JR, 17, 98, 99 Garca-Merino A, 87 Garca-Penarrubia P, 74, 103, 106 Garca-Peydr M, 111 Garca-Rodrguez MC, 30, 83 Garca-Samaniego J, 42, 98 Garca-Snchez F, 19, 21, 28 Garca-Sanz R, 71 Garcia-Tamayo J, 90 Garca-Vallejo JJ, 44 Garet ME, 112 Garrido Bravo I, 70 Garrido C, 39, 73, 74, 95 Garrido F, 26, 73, 92, 95 Garrido P, 47 Garrido S, 31, 77 Garrido Torres-Puchol F, 39, 74, 91, 95 Gaviln F, 69 Gay Puig A, 88, 93 Gayoso I, 36, 86, 87 Gea J, 115 Gentil MA, 25 Gil Herrera J, 86, 92 Gil J, 52 Gimeno L, 86 Gimeno M, 98 Giron JA, 34 Giron N, 97, 115 Gisel del Pozo Rodrguez N, 77 Godino J, 104 Gmez de la Concha E, 16, 17, 30, 55, 56, 77 Gmez del Moral M, 43 Gmez F, 115 Gmez I, 61, 69 Gmez J, 52 Gomez Lopez MT, 40, 99 Gmez Perales JL, 89 Gmez Rial J, 119 Gomez S, 55 , 111 Gmez-Casado E, 97, 100 Gmez-Lozano N, 36 Gmez-Rial J, 94 Gngora Fernndez R, 35 Gonzlez Amaro R, 117, 118 Gonzlez C, 78 Gonzlez Carreo T, 72 Gonzlez Escribano MF, 25, 41, 72 Gonzlez Fernndez R, 57, 65, 77, 79 Gonzlez Garca C, 111 Gonzlez Garca S, 46 Gonzlez Granja A, 90, 99 Gonzlez J, 50

Gonzalez M, 71 Gonzalez Porqu P, 90, 119 Gonzlez Rodrguez S, 37 Gonzlez-Escribano MF, 17, 98, 99 Gonzlez-Fernndez A, 44, 102, 112 Gonzlez-Garcia I, 89 Gonzlez-Porqu P, 48, 94 Gonzalez-Quevedo N, 32 Gonzlez-Santesteban C, 31, 76 Gonzalo Ocejo-Vinyals J, 15, 42, 65, 101 Gorgolas-Hernndez de Mora M, 96 Gorroo Echebarra MB, 116 Goya G, 104 Goyenechea A, 96 Gozalbo Lpez B, 43 Granell R, 61 69 Grau-Lpez L, 116 Graus F, 38 Grille Cancela Z, 71 Grimbacher B, 29 Groh V, 37 Guadalupe Figueroa Vega N, 117 Guarinos RF, 106 Gure AO, 38 Gutierrez C, 52, 58, 104 Gutierrez EI, 15 Gutirrez San Jos E, 111 Gutierrez-Solar B, 64, 104 Guzmn Fulgencio M, 62, 96 Guzman-Bistoni C, 90 H Harris C, 31 Head J, 64, 104 Heras M, 93 Hermenegildo IN, 94 Hernandez A, 93 Hernndez Campo PM, 45 Hernandez Cerceo MI, 63 Hernndez Gonzlez M, 76 Hernndez J, 93, 111 Hernndez M, 29, 32 Hernndez MV, 18 Hernndez S, 94 Hernndez-Caselles T, 74, 103, 106 Hernndez-Cillero L, 91 Hernndez-Lpez C, 109 Hernndez-Lpez J, 32 Herraiz MA, 104 Herrero MJ, 95 Hervs-Stubbs S, 25, 26 Hevia E, 101 Hidalgo Lumbreras L, 109 Hortelano Blanco S, 97 Hortelano S, 115 Houston L, 47 I Ibarra R, 104 Ibn Ralln N, 42 Iglesias J, 80, 83 Iglesias M, 3, 50, 51 Imbernn M, 89 Infantes S, 43 Iiguez MA, 112

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INDICE DE AUTORES

VOL. 27 SUPL. 1/ 2008

J Jaen J, 66 James E, 47 Janda J, 26 Jara P, 24 Jarque D, 61, 69 Jimnez Cobaleda MJ, 93 Jimnez Gmez G, 89 Jimenez Gmez J, 57 Jimnez M, 43 Jimnez P, 39 Jimnez Prez E, 48 Jimnez-Gmez G, 89 Juan M, 47 Johnstone C, 97 Jones GE, 106 Joven B, 60 Jover JA, 17 Juan M, 47, 65 Juarez C, 74 Jurez Rubio C, 115 Juli A, 34 Juli Arteaga E, 108 Juli MR, 33, 115 K Kaiser BK, 37 Kalaydjieva L, 30 Ki Ndeln Jaquotot KM, 77 Kwok WW, 47 L Laban S, 44 Labarga P, 42, 98 Lage Gall E, 23 Laguarda E, 69 Lahoz C, 29, 30, 80 Lamana Domnguez A, 46 Lamas R, 33 Lanio Amador N, 70, 81 Lanio N, 82, 119 Larrad Mur L, 68, 108 Larraaga E, 117 Larrauri J, 24 Lavado Valenzuela R, 39 , 102 Lavn-Alconero L, 65, 101 Leal M, 79 Lcrevisse Q, 45 Lefranc G, 33 Legaz Prez I, 70 Leno E, 45, 67, 85, 105, 108, 110 Leon Arroyo A, 55, 62 Len MJ, 18, 59 Leon Moya V, 19, 55, 62, 63 Lvy F, 26 Leyva-Cobin F, 15, 42, 65, 66, 101 Linares Dickler I, 39, 73, 74, 95 Lz Marzn L, 44 Lizana A, 103 LLanes E, 80 Lombarda L, 110 Lpez Alvrez MR, 70, 82 Lpez Blanco F, 117 Lpez Botet M, 83 Lpez Carrascosa A, 99

Lpez Cernada ME, 29 Lpez D, 43, 97 Lpez E, 30, 75 Lpez Garca C, 49 Lpez Giral S, 34 Lpez Hoyos M, 23 Lpez Larrea C, 21, 60 Lpez Lera A, 31 Lpez M, 20, 42, 79, 98 Lpez Mejas R, 30 Lpez P, 52, 58, 104 Lpez R, 77, 97 Lpez Trascasa M, 31 Lpez Vzquez A, 21, 60 Lpez-Botet M, 43, 102 Lpez-Garca A, 111 Lpez-Hernndez R, 20, 83 Lpez-Hoyos M, 15, 119 Lpez-Larrea C, 20, 21 Lpez-Lera A, 77 Lpez-Nazareno N, 120 Lpez-Nevot MA, 17 Lpez-Rodrguez C, 40 Lopez-Solbes R, 83 Lpez-Trascasa M, 77 Lpez-Vzquez A, 20 Lorente E, 43 Lorenzo G, 101 Loza-Santamara E, 56 Lozano Doncel M, 118 Lozano F, 18, 23 Lozano Reina JM, 77, 79 Lozano Soto, 107 Lucas Aroca D, 70, 83 Lucas D, 20 Lucas Martn AM, 50 Lucena MI, 73 Lucena Soto JM, 117 Lucendo B, 44 Luengo O, 30 Luque I, 61, 84 Luque Moruno J, 77, 79 Lutz H, 31 M Madrazo Toca F, 40, 99 Magadn Momp S, 20, 64 Magadn S, 44 Magri G, 102 Majado MJ, 86 Majano P, 117 Maleno I, 26, 95 Maluenda C, 49, 55 Mancebo Sierra E, 30, 62, 76, 96 Mann HH, 37 Manzanares Martn B, 57, 65 Maes S, 72 Mez R, 22 Marazuela Azpiroz M, 117, 118 Marco Castro E, 118 Marcos Campos I, 104 Marcos Gutierrez MJ, 118 Maricarmen Ruiz-Ruiz M, 110 Marie Christensen E, 66 Marn Alberca MG, 56, 57

Marin Crespo N, 24 Marn Galln S, 52 Marn N, 15, 78 Marin Rubio LA, 71 Mrquez Ortiz AM, 16, 55 Martn F, 33 Martin Folgar R, 101 Martin Gayo E, 45, 46 Martn Ibez J, 17 Martn J, 17, 98 Martn JL, 81 Martn Martn L, 45 Martn Martn N, 35 Martin Nalda A, 75 Martin R, 116 Martn Villa JM, 116 Martn-Cfreces NB, 46 Martn-Orozco E, 103, 106 Martinez A, 114 Martnez A, 17, 49 Martnez Ara J, 31 Martnez Cabeza V, 44 Martnez Cceres E, 49, 50 Martnez de la Riva S, 40 Martnez de Saavedra M, 72, 85 Martnez Doncel A, 16, 55 Martnez L, 78 Martinez Laso J, 64, 104 Martnez Lorenzo MJ, 68 , 108 Martinez Lostao L, 108 Martnez N, 79 Martnez Naves E, 43 Martnez Osorio H, 111 Martnez Pomar N, 83, 85 Martnez Snchez F, 57 Martinez Snchez MV, 70, 82 Martnez VG, 109 Martnez Viambres E, 28, 73 Martnez-Arconada MJ, 100, 117 Martnez-Caceres E, 100, 116, 117 Martnez-Doncel A, 17, 55, 56 Martnez-Esparza M, 74, 103, 106 Martnez-Garca P, 83 Martnez-Gines ML, 120 Martnez-Martnez A, 91 Martnez-Martnez L, 31, 76 Martnez-Pomar N, 32, 33, 82 Martnez-Taboada V, 119 Martnez-Viambres E, 94 Maruri Machado N, 61 Maruri N, 84 Mascaro M, 88 Mass JM, 115 Matamoros N, 32, 33 34, 79, 80, 82, 83, 85 Mateo I, 60 Mateu E, 98 Matas JA, 60 Mazuecos A, 72 Medina F, 89 Meenagh A, 36, 85 Mejas Laguna R, 72 Melero I, 25, 26 Melero JA, 97 Melgosa M, 33 Meln S, 81

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INMUNOLOGA

INDICE DE AUTORES

Mena de la Cruz R, 31, 77 Mena I, 97, 100 Mendes C, 68 Mndez J, 44 Mendez Valdes R, 91 Mendoza JL, 16, 55 Meneu-Diaz JC, 67 Mrida E, 67 Merino J, 38 , 41, 50, 51 Merino R, 38, 41, 50, 51 Merkoi A, 102, 112 Middleton D, 36 85 Mil J, 82 Millan P, 19, 63, 63, 64 Minguela A, 20, 70 Minguela Puras A, 82, 83 Minguilln J, 40 Miones L, 81 Miranda A, 80 Miras M, 70 Mirete Bachiller S, 24 Mirete S, 15 78 Mittelbrunn M, 110 Modrego J, 103 Modrego Ruiz J, 86, 92 Moga E, 74 Molina IJ, 33, 34 Molina J, 90 Moll R, 30 Molt L, 94 Mondejar P, 79 Monserrat J, 18, 59, 60 Mons E, 115 Montalban X, 49, 108 Montes Cano MA, 98, 99 Montilla C, 55 Montoro J, 61, 69 Montoya M, 42, 97, 98, 100 Moody DB, 113 Morales J, 110 Morales Camino JC, 26, 107 Morales Cerdn JM, 67 Morales P, 67 Morales Prez P, 62, 96 Morandeira F, 95 Morel Brcena E, 36 Moreno A, 23, 98 Moreno E, 64 Moreno Elola-Olaso A, 67 Moreno J, 94 Moreno Pelayo MA, 30, 33 Moreno Rivera S, 110 Moscard F, 69 Moscoso Galn I, 71 Moscoso J, 19, 63, 64, 85 Muos-Criado S, 47 Muoz Alcon H, 93 Muoz Calleja C, 34 Muoz Fernndez P, 35, 85, 108, 110 Muoz Oliveira JJ, 48 Muoz-Fernndez R, 45, 67, 105, 110 Mur S, 18, 59, 60 Murillo O, 25, 26 Muro M, 20, 70, 79, 82, 83

N Naranjo-Gmez M, 105, 116 Navarro Blasco FJ, 56, 57 Navarro J, 70 Navasa M, 23 Naya Leira C, 71 Neil Hermenegildo Y, 94 Nevado Cestero J,67 Nieto A, 16, 34, 72, 85 Nogal Pars ML, 90 Nogus N, 78 Nos C, 49 Novo MJ, 119 Nez B, 115 Nez C, 17, 30, 49, 77 Nez F, 105 Nez Pardo de Vera C, 55 Nuez Roldan A, 17, 23, 25, 41, 69, 72, 98, 99, 117 O Ocaa E, 88, 89 Ocejo-Vinyals JG, 66 Ojeda G, 46, 109 Olivares G, 45 Olivares EG, 67, 105 Oliver A, 60 Oliver D, 52 Oller-Sales B, 100 Ontan Rodrguez J, 120 Oa M, 81 Ordez D, 87 Ordez del Valle D, 36 Orera M, 119 Orfao A, 45, 47 Oriol A, 95 Orozco G, 17, 47 Ortego Centeno N, 51 Ortego J, 100 Ortiz-Ferrn G, 45, 67, 85, 105, 108, 110 Osrio E, 68 Otero MJ, 49 P Pacha MA, 100 Pachkoria K, 73 Pagn Alemn J, 82 Palka M, 25 Palomino P, 29, 80 Palomo J, 70 Palou E, 65 Pans J, 56 Pani Agua Martin MJ, 71 Parrado A, 86 Parrilla P, 107 Pascal M, 23 Pascual Figal DA, 70 Pascual-Salcedo Pascual D, 17 Pastoriza I, 44 Pavn Castillero EJ, 35, 51 Paz Artal E, 30, 60, 62, 67, 76, 96 Pelaez T, 84 Pea Martnez J, 57, 65, 77, 79 Peralbo E, 36, 86, 87 Peraza S, 90 Perdigones Borderas MN, 16

Perdigones N, 17, 56 Prez A, 59, 60 Prez Aradas V, 96 Prez Blas M, 116 Prez Garca V, 56, 57 Prez Martnez M, 110 Prez R, 20 Prez V, 33, 62, 96 Prez-Aciego P, 60 Prez-Berezo T, 58 Prez-Cabezas B, 105, 116 Prez-Cano FJ, 58 Prez-Durn P, 85 Prez-Fernndez R, 82 Perez-G M, 37, 51 Prez-Gracia JL, 26 Prez-Mateo M, 106 Prez-Oliva AB, 74 Prez-Requena J, 88 Prez-Saborido B, 64, 67 Peris Pertusa A, 56, 57 Pini E, 46 Pinto JA, 18 Piero A, 16 Pique JM, 56 Pita ML, 36, 86, 87 Planas R, 52 Planelles D, 61 69 Poderoso Garca T, 40 Polanco I, 49, 55 Polo Casado A, 86 Pons J, 79, 80, 83 Porcelli SA, 113 Portols P, 46, 109 Postigo J, 41, 50 Poza-Cisneros G, 83 Prada Iurrategui A, 61, 84 Prado C, 52 , 58, 104 Prat Arrojo I, 66 Prieto A, 18, 59, 60 Prieto J, 23 Pruneda L, 20 Puig N, 69 Pujol Borrell R, 47, 49, 50, 52, 65, 95, 100, 105, 116, 117 Q Quandt E, 95 Queizan JA, 93 Quesada Gmez M, 57 Quintana R, 111 Quiralte J, 80 Quirce S, 75 R Rada Martnez R, 120 Raich D, 116 Ralln NI, 98 Ramil E, 87 Ramrez Bustillo E, 67 Ramirez CM, 117 Ramrez P, 107 Ramrez-Santana C, 58 Ramiro AR, 85 Ramiro Latienda S, 17 Ramiro-Puig E, 58

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INDICE DE AUTORES

VOL. 27 SUPL. 1/ 2008

Ramo C, 116 Ramos E, 81 Ramos JM, 31 Ramos M, 97 Ramos-Amaya AB, 89 Ramos-Romero S, 58 Raso Torres S, 96 Real LM, 26 Recio Hoyas MJ, 33 Recio MJ, 110, 113 Rego I, 18 Regueiro JR, 33, 110, 113 Reguera R, 19, 63, 64 Rein J, 33, 110, 113 Relloso M, 113 Revilla Calvo C, 40, 110 Revilla Novella Y, 90, 99 Rey Garca C, 71 Ribes S, 31 Ribes-Koninckx C, 61 Riccardi C, 41 Rico MA, 97 Rieva JA, 89 Rin M, 84 Rion Martinez-Gallo M, 61 Rio J, 49 Ros RM, 46 Rivas MD, 37, 51 Rivero A, 77 Rivero M, 72 Robles Valero J, 46 Roca A, 72 Roca J, 100, 115 Rodrigo L, 20, 60 Rodrigo MJ, 76, 100 Rodrigo-Agudo JL, 83 Rodriguez AB, 26 Rodrguez AI, 39 Rodriguez B, 97, 115 Rodrguez Bayona B, 16, 88 Rodrguez C, 16, 72, 88 Rodrguez Caballero MA, 47 Rodrguez Calvo MT, 97 Rodrguez de Crdoba S, 31, 81 Rodriguez F, 26, 47 Rodrguez Folgueras A, 37 Rodrguez Gallego JC, 32 Rodrguez Gutirrez JF, 16 Rodrguez L, 56 Rodrguez M, 61, 64, 69, 104 Rodrguez Martn E, 28, 73 Rodrguez N, 100 Rodriguez Pena R, 66 Rodrguez Prez N, 116 Rodrguez R, 93 Rodrguez Ramiro A, 35 Rodrguez Ramos R, 117 Rodriguez Reynoso F, 57 Rodrguez-Gallego C, 32 Rodriguez-Gutierrez JF, 34 Rodrguez-Mahou M, 52 , 120 Rodrguez-Martn E, Alcal I, 94 Rodrguez-Molina J, 82 Rodriguez-Sainz C, 92, 103 Rodrguez-Snchez J-L, 115

Roep BO, 44 Rojo JM, 46, 109 Roldn E, 28, 94 Roldn Santiago E, 73, 119 Roman A, 64, 104 Romera Ruiz MI, 116 Romero Garca I, 39, 73, 74, 95 Romero Gmez M, 98 Romero I, 95 Romero JM, 26, 92 Romero M, 42, 98, 99 Romero Noguera JM, 91 Romero Z, 33 Romo E, 60 , 67 Romo N, 102 Romo N, 83 Romo Pasamar E, 62, 96 Roque Cuellar MC, 41 Rosell A, 33 Rossi NE, 110 Roura-Mir C, 113 Roy G, 15, 78 Royo Caas M, 68 Ruiz Contreras J, 30, 76 Ruiz de Galarreta CM, 117 Ruiz E, 65, 95 Ruiz Hernandez R, 112 Ruiz JC, 23 Ruiz Lapuente C, 117 Ruiz Magaa MJ, 26, 107 Ruiz Riol M, 49, 50, 55 Ruiz Ruiz MC, 26, 107 Ruz-Alcaraz AJ, 103, 106 Ruiz-Cabello F, 26, 47, 73, 91, 92 Ruiz-Tovar M, 63, 64 Ruoslahti E, 38 S Sabater L, 38 Sabina Villar P, 90, 99 Sacedn R, 109 Sdaba Argaiz MC, 48, 119 Saenz L, 107 Senz-Lpez Garrocha P, 39, 73, 92 Saez A, 102 Saez de Guinoa J, 109 Saez Gutirrez B, 104 Sez Mndez L, 120 Sagrario Fustero T, 117 Saiz A, 38, 56 Salcedo Moreno C, 118 Salgado Cecilia MG, 70, 82 Salgado G, 20, 79 Salgado-Cecilia G, 83 Salinas JA, 83 Samino Y, 43 Sampalo A, 34, 85 San Jos Valiente B, 17 San Miguel J, 71 San Segundo D, 23 Snchez A, 18, 59, 60 Snchez AJ, 87 Snchez B, 87 Snchez Castaon M, 66 Snchez E, 17

Snchez Espinel C, 20, 64 Snchez F, 47 Snchez Garca ML, 45 Snchez JI, 76 Snchez Lpez M, 27 Snchez M, 15, 38 Snchez Madrid F, 110, 118 Snchez Mozo MP, 71 Snchez R, 93 Snchez Ruiz F, 57 Snchez Snchez B, 41 Snchez-Castan M, 101 Snchez-Corral P, 81 Snchez-Espinel C, 44, 102, 112 Snchez-Garca F, 19 Snchez-Madrid F, 46 Snchez-Martn D, 38 Snchez-Pla A, 105 Sanchez-Ramon S, 52, 120 Snchez-Solis M, 79 Snchez-Velasco P, 65, 101 Sanchs MJ, 20 Sancho Lpez J, 35, 51, 110 Sanmart A, 117 Sanmart R, 18 Santamaria C, 71 Santamara Jaramillo B, 92 Santamaria Ossorio M, 47 Santiago E, 32 Santiago JL, 114 Santiuste I, 38, 41, 50 Santos-Valle P, 27 Sanz Alcober L, 27 Sanz G, 69 Sanz L, 27 Sarasquete ME, 71 Sarmiento E, 25, 53, 82, 84, 119 Sarmiento Marchese E, 70, 81 Sarrias MR,107 Sastre B, 29, 30, 75 Sastre J, 75 Sauleda J, 115 Schreiber V, 107 Segals J, 42 Segui ME, 90 Segundo C, 89 Selgas R, 44 Sempere Ortells JM, 56, 57 Seren Bernardone I, 109 Serna CJ, 72 Serra A, 32 Serrano A, 27 Serrano Hernndez A, 67 Serrano-Vela JI, 19, 63, 64 Seto E, Lpez Soto A, 37 Sevilla Hidalgo N, 97 Sevilla N, 100 Sierra J1, Briones J, 74 Sinde Monteiro M, 68 Sirgo Gonzalez G, 96 Sirgo Rodrguez G, 62 Sloan C, 48 Solana Lara R, 87 Solana R, 36, 86 Soldevila B, 117

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INMUNOLOGA

INDICE DE AUTORES

Soler P, 29, 32, 81 Soler Palacin P, 75 Sologuren I, 32 Solves P, 69 Sommaggio R, 22 Soriano A, 95 Soriano N, 79 Soriano V, 42, 98 Soto Crdenas C, 81 Sousa JM, 69 Spies T, 37 Srivastava GK, 34 Stefanski J, 39, 74, 95 Strong R, 37 Surez A, 52, 58, 104 Surez lvarez B, 21, 60 Lpez Rodrguez C, 48 Surez B, 18, 23 Surez Casass B, 107 Surez Leiva P, 81 Suarez-Alvarez B, 21 Surez-Germ C, 58 Subiza Garrido-Lestache JL, 91 Subiza JL, 94 Such J, 106 T Tabernero MD, 47 Tallada M, 39, 92, 92 Tamayo E, 38, 41, 51 Tarazona R, 36, 86, 87 Taxonera C, 16, 55 Teijeiro Martorell R, 92, 120 Teixeira J, 68 Tllez Lara N, 108 THart BA, 44 Tirado Gonzlez I, 45, 67, 85, 105, 108, 110 Tirapu Fernndez de la Cuesta I, 106 Titulaer M, 38 Toca M, 15 Toribio ML, 45, 46, 111 Toro Ruiz A, 71

Torres B, 17 Torres S, 34 Traves PG, 97 Trento A, 97 Tres A, 104 Tricas L, 81 Trinidad lvarez EV, 92 Troya-Diaz J, 100 Tur Gmez C, 108 Turrin A, 18, 59 Tzartos J, 48 U Unciti JD, 33 Unger W, 44 Urcelay E, 16, 17, 49, 55, 56, 114 Uribe-Herranz M, 22 V Valdor Alonso R, 107 Valencia J, 109 Valor L, 103 Van Kooyk Y, 44 Van Montfrans J, 33 Varad Lpez J, 17, 56 Varade J, 16 Varas A, 109 Vargas-Alarcon G, 63 Vazquez F, 39 Vazquez Gonzalez AC, 90 Vzquez M, 109 Vazquez-Pieiro T, 86 Veintemillas-Verdaguer S, 72 Velastegui Ordoez A, 52 Vendrell M, 32 Veny M, 56 Vera Fernndez J, 107 Vercher Agust FJ, 93 Verdaguer J, 52 Verschuuren J, 38 Vicario JL, 19, 25, 27, 28 Vicente A, 109 Vidal C, 34

Vidal Castieira JR, 21, 60 Vidal S, 74 Vidal Sernndez I, 35 Vidal-Castieira JR, 20 Vidaller A, 32 Vidart J, 104 Vila E, 69 Vilches C, 36, 87 Villar A, 115 Villar Guimerans LM, 48, 90, 94, 119 Villegas Becerril E, 65 Villegas N, 42, 101 Villegas Zambrano N, 119 Viuela JE, 89 Vives-Pi M, 52 Vlagea A, 31 Vlagea F, 118 W Wichmann Schlipf I, 23, 25, 69, 117 Wilson IA, 113 Woellner C, 29 Y Yage J, 32 Yang J, 47 Yaez F, 24 Ylamos J, 107 Yelo E, 86 Yim D, 37 Z Zafra MP, 109 Zaldivar G, 34 Zamorano J, 37, 51 Zapata AG, 109 Zapata Gonzlez A, 48, 92 Zapater P, 106 Zimman-Mansfeld H, 91 Zubiaur Marcos M, 35, 51, 110 Zumaquero Martnez EC, 35

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Comunicaciones Orales
Estas comunicaciones se aaden a este documento de forma posterior a la edicin impresa. Por este motivo no se mantiene la paginacin anterior ni existen referencias en el ndice de autores.

Inmunologa Vol. 27 / Supl. 1/ Mayo 2008

SESIN 7: INMUNOLOGIA TUMORAL II Moderadores: Dr. Federico Garrido (Granada), Dr. Luis lvarez Vallina (Madrid)

Por ello podemos concluir que las clulas leucmicas son capaces alterar la expresin en superficie de los principales receptores activadores. Esta alteracin podra considerarse un mecanismo de escape tumoral, que podra emplearse como nuevo marcador pronstico de la supervivencia en pacientes con AML.

ALTERACIONES EN LA EXPRESIN DE RECEPTORES ACTIVADORES DE LA CITOTOXICIDAD DE LAS CLULAS NK EN PACIENTES CON LEUCEMIA MIELOIDE AGUDA (AML). Snchez Correa B1, Morgado S1, Bergua J2, Garca Casado J1, Gayoso I3, Solana R3, Durn E1, Tarazona Lafarga R1. 1Facultad de Veterinaria. 2Hospital San Pedro de Alcantara (Cceres). 3Facultad de Medicina (Crdoba). Las clulas Natural Killer (NK) constituyen una subpoblacin linfoide esencial en la respuesta inmune innata ya que reconocen y lisan clulas infectadas por virus y clulas neoplsicas sin necesidad de una sensibilizacin previa al antgeno. La activacin de las clulas NK es resultado de un complejo balance entre las seales de activacin e inhibicin enviadas a travs de receptores expresados en su superficie. Las seales inhibidoras son aportadas por interacciones de los receptores inhibidores con molculas de histocompatibilidad clase I (HLA-I), garantizndose as la tolerancia de las clulas NK frente a las clulas autlogas sanas. En ausencia de interacciones inhibidoras eficientes, las clulas diana son susceptibles a ser lisadas por las clulas NK gracias a la participacin de los receptores activadores. Este grupo de receptores incluye CD16, NKG2D, los NCRs (Natural Cytotoxicity Receptors):NKp46, NKp30 y NKp44; DNAM-1, 2B4 (CD244), NTB-A, CRACC (CS1) y NKp80. En el presente estudio se analiza por citometra de flujo el fenotipo de las clulas NK en pacientes con leucemias mieloide aguda (AML) en el momento del diagnstico. Los resultados muestran que existen variaciones significativas en la expresin en superficie de los receptores activadores ms importantes implicados en la eliminacin de las clulas leucmicas. As podemos observar un notable descenso en la expresin de NKp46, NKp30 y DNAM-1, mientras que NKp44, receptor inducible tras la activacin de la clula NK, incrementaba notablemente su expresin en superficie.

ANLISIS DE LA EXPRESIN Y LIBERACIN DE LIGANDOS PARA EL RECEPTOR ACTIVADOR DE LA CITOTOXICIDAD NKG2D EN LNEAS CELULARES DE MELANOMA. Morgado Garca S1, Snchez Correa B1, Garca Casado J1, Gordillo Gonzlez JJ1, Durn Flrez E2, Tarazona Lafarga R1. 1rea de Inmunologa. Dpto. Fisiologa. Facultad de Veterinaria. UEX. 2rea de Anatoma y Anatoma Patolgica Comparada. Dpto. Medicina Animal. Facultad de Veterinaria. UEX. Las clulas Natural Killer (NK) son un componente del sistema inmune innato que contribuyen a la respuesta inmune frente a tumores, puesto que son capaces de matar clulas cancerosas sin una inmunizacin previa. Su activacin depende de un balance de seales activadoras e inhibidoras transmitidas mediante receptores que se encuentran en la superficie de las NK. Uno de estos receptores activadores es el NKG2D, cuyos ligandos son MICA/B y la familia de ULBP, y el cual tambin aparece en otras clulas del sistema inmunitario. En trabajos anteriores, estudiando el papel de NKG2D en la citotoxicidad mediada por las clulas NK hemos puesto de manifiesto que la mayora de las lneas celulares de melanoma procedentes del proyecto OISTER y ESTDAB presentan en su superficie ligandos para NKG2D, demostrando que la interaccin NKG2D-NKG2DL es un mecanismo de gran importancia en el reconocimiento y posterior eliminacin de las clulas de melanoma. En el presente trabajo hemos puesto de manifiesto, mediante el anlisis por ELISA, la presencia de ligandos solubles para el receptor NKG2D en los sobrenadantes de los cultivos celulares de algunas lneas de melanoma, lo cual sugiere una posible va de inmunoescape de estas lneas de melanoma, a travs de la interaccin de estas formas solubles de los ligandos con el receptor NKG2D.

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