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Ann Biol Clin 2009 ; 67 (1) : 67-72

abc

Mesure de lhmatocrite : comparaison de la conductimtrie la microcentrifugation

Hematocrit measurement: comparison of conductimetry to microcentrifugation
M.-F. Daurs1 C. Combescure2 C. Demattei2 J.P. Cristol3
1

Laboratoire de biochimie, Hpital Saint-Eloi, Montpellier <mf-daures@chu-montpellier.fr> 2 Equipe de recherche en pidmiologie et biostatistiques EA2415, Hpital Carremeau, Nmes 3 Laboratoire de biochimie, Hpital Lapeyronie, Montpellier

Rsum. Les analyseurs des gaz du sang proposent en gnral de dterminer la valeur de lhmatocrite partir de la mesure de la conductivit sanguine. La question qui se pose est de savoir si cette valeur est fiable. Dans cette tude, les hmatocrites obtenus par conductimtrie sur 6 appareils diffrents ont t compars ceux mesurs par la mthode de rfrence qui est la microcentrifugation. Linterprtation des rsultats concernant 320 prlvements sanguins artriels, provenant dun service de ranimation DAR B, montre que la concordance entre les 2 mesures sur un mme appareil est trs bonne, en gnral > 0,95, quel que soit lappareil. La concordance entre la moyenne des 2 mesures et le gold standard est lgrement plus faible mais reste trs satisfaisante, le plus souvent comprise entre 0,8 et 0,9. Cest lanalyseur Gem Premier 3000 (IL) puis lOMNI S (Roche) qui donnent les meilleures concordances avec la centrifugation. Les coefficients de Spearman entre les valeurs moyennes des analyseurs et celles de la centrifugation sont levs lexception du Rapidpoint 405, ils sont tous statistiquement diffrents de zro (p < 0,0001). Mots cls : hmatocrite, conductimtrie, microcentrifugation Abstract. In general, blood gas analysers can also determine the value of haematocrite by measuring the bloods conductivity. The question to ask is whether this value is reliable. In this study, hematocrit obtained via conductivity from 6 different pieces of equipment were compared with those measured using the gold standard method, which is microcentrifugation. By interpreting the results of 320 arterial blood samples taken in the intensive care unit DAR B we can see that the reliability between two measurements on the same piece of equipment is very good, in general > 0.95 whatever the equipment. The reliability between the means of the two measurements and the gold standard is slightly lower but remains very satisfactory, most often between 0.8 and 0.9. The Gem Premier 3000 (IL) analyser and the Roche OMNI S gave the best reliability compared with centrifugation. The Spearman coefficients between the mean values of the analysers and those of centrifugation were high, with the exception of the Rapidpoint 405. They are all statistically different from zero (p<0.0001). Key words: hematocrit, conductimetry, microcentrifugation

Article reu le 20 octobre 2008, accept le 14 novembre 2008

doi: 10.1684/abc.2009.0299

Ce travail complte une tude de comparaison entre 6 analyseurs des gaz du sang [1] ralise en vue dun appel doffres. Tous ces appareils utilisent la conductimTirs part : M.-F. Daurs
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trie pour dterminer lhmatocrite. Contrairement aux autres paramtres analyss, lhmatocrite possde une mthode de rfrence, la microcentrifugation, facilement accessible par nimporte quel laboratoire, cest donc la seule variable qui a t teste contre sa rfrence. 67

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Le but est donc de comparer les hmatocrites mesurs sur chaque appareil des gaz du sang tests ceux obtenus par centrifugation sur un chantillon reprsentatif des patients dun service de ranimation. le mme instrument et la variabilit intermesures avec des mesures du mme prlvement sur 2 instruments diffrents. Les variables quantitatives ont t dcrites par leur moyenne, leur mdiane, leur cart type et leur tendue. Ensuite les moyennes ont t compares en utilisant un test de Wilcoxon appari compte tenu de la non normalit des variables. A titre indicatif, le coefficient de corrlation a t estim par la mthode de Spearman (d la non normalit des couples de variables) et le de ce test a t test contre la valeur nulle. La variable diffrence a t analyse dans le cas de la rptition des mesures sur le mme appareil. Le coefficient de corrlation intra classe (ICC) et le coefficient de LIN ont t estims avec les analyses rptes sur le mme appareil et ceci par appareil, puis avec les mesures sur les diffrents appareils (cest--dire sur les 4 appareils de chaque semaine). Les coefficients de LIN nont t donns avec leur intervalle de confiance quentre deux appareils. LICC et le coefficient de LIN sont quivalents, dans le cas deffet lecteur fixe le coefficient de LIN est un peu biais mais son intervalle de confiance est plus prcis [2]. Quelques diagrammes de Bland et Altman ont t proposs. Tous les tests de significativit ont eu pour seuil 5 % et les intervalles de confiance taient 95 %, les calculs ont t raliss avec les logiciels SAS et R.

Matriel et mthodes
Matriel La mesure de lhmatocrite par conductimtrie a t ralise sur six analyseurs des gaz du sang. Quatre appareils taient en comptition dans le cadre dun appel doffres : Rapidpoint 405 (Bayer), GEM Premier 3000 (Instrumentation Laboratory), i-STAT 1 (Abbott) et ABL 77 (Radiometer). Les 2 autres taient ceux prsents dans le laboratoire : i-STAT 200 (Abbott) et OMNI S (Roche). La mesure de la conductance lectrique par conductivit a t corrige par la temprature du patient, la longueur du segment liquide mesur et la conductivit relative du plasma (avec une solution talon et la mesure de Na+ et K+). La microcentrifugation a t effectue sur une centrifugeuse pour hmatocrite Biofuge R Haemo Hraeus R, la lecture a t faite laide dun abaque Jouan. Mthode analytique Ltude a dur un mois. Chaque semaine, les prlvements ont t analyss sur 4 appareils dont 3 taient toujours les mmes : i-STAT 200, OMNI S et la microcentrifugeuse. Le quatrime analyseur a t choisi par randomisation : premire semaine : Rapidpoint 405 ; deuxime semaine : GEM Premier 3000 ; troisime semaine : i-STAT 1 ; quatrime semaine : ABL 77. Sur cette priode, tous les prlvements artriels reus au laboratoire en provenance du service de ranimation DAR B ont t inclus dans ltude. Les chantillons, de volume minimal 1,3 mL, ont t pris sur seringues BD (Becton Dickinson) avec de lhparine de lithium tamponne, sature en calcium 80 UI/seringue et de contenance 3 mL. La mme seringue a t passe deux fois sur chacun des 3 analyseurs de gaz du sang en un temps infrieur ou gal 6 minutes, selon un hasard dfini par une liste de permutation de 6 chiffres. Le reste de lchantillon a t transfr sur un tube capillaire non hparin puis centrifug. Le nombre de prlvements ncessaires a t estim 80 par semaine en tenant compte de la faisabilit pratique, soit 320 pour le mois. Mthodologie statistique Les statistiques ont concern deux types de variabilit : la variabilit intramesures avec une rptition de mesures sur 68

Rsultats
Les variations des valeurs de lhmatocrite des diffrents analyseurs des gaz du sang sont donnes dans le tableau 1. Les variations des rsultats de la centrifugeuse et de la moyenne par appareil sont exposes dans le tableau 2. Lanalyse de concordance par le coefficient de LIN et lICC et leur intervalle de confiance 95 % sont prsents dans le tableau 3 pour les mesures rptes sur le mme appareil chaque semaine. Les rsultats sont consistants pour les 2 mthodes statistiques puisque les coefficients les plus levs de LIN et lICC sont obtenus pour lOMNI S la premire semaine (en prsence de i-STAT 200, et Rapid point 405), la 3e semaine (en prsence de i-STAT 200 et i-STAT 1) et la 4e semaine (en prsence de i-STAT 200 et ABL 77) et pour le GEM Premier 3000 la 2e semaine (en prsence de i-STAT 200 et OMNI S).
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 matocrite Techniques de mesure de lhe

Ces coefficients sont trs levs et excellents selon la classification de Fleiss ou de Landis et Koch. Puisquil y a quune lgre diffrence entre les deux mesures, elles ont t remplaces par leur moyenne. Lanalyse de concordance utilisant le coefficient de LIN et/ou lICC entre cette valeur et celle obtenue avec le matriel de rfrence de la semaine correspondante est prsente dans le tableau 4. nouveau, une consistance des rsultats entre la concordance de LIN et lICC est constate avec la centrifugation. Les 1re, 3e et 4e semaines, les concordances les plus leves sont celles avec lOMNI S, la 2e semaine cest avec le GEM 3000. Mais globalement, la concordance entre le GEM 3000 et lensemble des autres matriels tests est la plus leve de lordre de 0,94 (donc trs bonne selon les classifications

Tableau 2. Variations des valeurs de lhmatocrite en pourcentage pour la centrifugation C et pour les moyennes obtenues par appareil sur 2 mesures successives (1,2). n 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 320 320 320 m 33,2 29,6 33,4 31,9 32,4 28,6 33,1 32,7 35,8 31,5 35,7 31,4 35,6 30,9 36,3 32,9 34,2 30,1 34,4 M 32,5 29 32,5 31,8 30 27 31 31,5 32,5 29 32,5 31,8 34 29,3 34 32 33 29 33 5,5 5,5 5,6 4,8 7,2 7,0 7,0 6,9 5,5 5,5 5,6 4,8 6,8 6,2 6,9 6,7 7,0 6,6 6,8 E 20-56 17,5-51,5 21-58 21-47 17-47 14,5-44 19-51 17,5-46 20-56 17,5-51,5 21-58 21-47 23-55 21-49,5 23-53,5 21-52 17-56 14,5-51,5 19-58

` re Premie semaine

Tableau 1. Variations des valeurs de lhmatocrite en pourcentage sur 6 analyseurs des gaz du sang pour 2 mesures successives (1,2) sur chacun deux. n 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 320 320 320 320 m 29,7 29,5 33,2 33,7 31,8 32,0 28,6 28,7 33,1 33,1 32,7 32,7 31,5 31,5 35,6 35,7 31,7 31,2 30,9 30,9 35,2 35,4 32,8 33,1 30,2 30,2 34,3 34,4 M 29 29 32 33 31 32 27 27 31 31 31 31 30 30 34 34 30 30 29 29 34 34 31 32 29 29 33 33 5,9 5,5 5,6 5,6 4,8 4,8 7,0 7,2 7,9 6,7 6,9 6,9 7,6 7,4 7,6 7,5 7,6 7,8 6,2 6,2 6,9 6,9 6,8 6,8 6,8 6,7 7,1 6,8 E 18-52 17-51 21-58 21-58 21-47 21-47 14-44 15-44 19-68 19-48 17-46 18-46 20-48 20-48 23-56 24-54 21-52 21-52 21-50 21-50 22-54 23-53 21-53 21-51 14-52 15-51 19-68 19-58

C (I1+I2)/2 (O1+O2)/2 (R1+R2)/2 ` me Deuxie C semaine (I1+I2)/2 (O1+O2)/2 (G1+G2)/2 ` me Troisie C semaine (I1+I2)/2 (O1+O2)/2 (IS1+IS2)/2 ` me C Quatrie semaine (I1+I2)/2 (O1+O2)/2 (AB1+AB2)/2 Ensemble C des 4 semaines (I1+I2)/2 (O1+O2)/2

` re semaine Premie

` me semaine Deuxie

` me semaine Troisie

` me semaine Quatrie

Ensemble des 4 semaines

I1 I2 O1 O2 R1 R2 I1 I2 O1 O2 G1 G2 I1 I2 O1 O2 IS1 IS2 I1 I2 O1 O2 AB1 AB2 I1 I2 O1 O2

I = i-STAT 200 ; O = OMNI S ; R = Rapid point 405 ; G = GEM Premier 3000 ; IS = i-STAT 1 ; AB = ABL 77 ; n = nombre de patients ; m = moyenne ; M = mdiane ; = cart type ; E = tendue.

I = i-STAT 200 ; O = OMNI S ; R = Rapid point 405 ; G = GEM Premier 3000 ; IS = i-STAT 1 ; AB = ABL 77 ; n = nombre de patients ; m = moyenne ; M = mdiane ; = cart type ; E = tendue.

prcdentes) et ceci aussi bien pour le coefficient de LIN que pour lICC. La concordance globale toutes semaines confondues a t analyse avec le coefficient de LIN et lICC, en regroupant les donnes de toutes les semaines. En mesures rptes, la concordance est la plus forte pour lOMNI S. Avec : LIN = 0,946 IC = [0,933 - 0,956] ICC = 0,946 IC = [0,868 - 0,987] Cependant, pour le GEM 3000, les valeurs correspondantes sont : LIN = 0,945 IC = [0,932 - 0,955] ICC = 0,945 IC = [0,908 - 0,973] En faisant le mme regroupement et en comparant avec le Gold Standard, les rsultats sont concordants avec lOMNI S : LIN = 0,917 IC = [0,897 - 0,934] ICC = 0,917 IC = [0,887 - 0,942] Pour le GEM 3000, les rsultats correspondants sont les suivants : LIN = 0,783 IC = [0,748 - 0,813] ICC = 0,765 IC = [0,716 - 0,800] 69

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Lanalyse du coefficient de Spearman entre les valeurs moyennes des mesures et le Gold Standard est prsente dans le tableau 5. Les coefficients sont tous trs levs (> 0,90) sauf celui entre Rapidpoint 405 et le Gold Standard ( = 0,768), ils sont tous statistiquement diffrents de 0. La valeur la plus leve du coefficient est obtenue avec lABL 77 : = 0,950 ; IC = [0,73 - 1], vient ensuite celle avec le GEM 3000 : = 0,925 ; IC = [0,70 - 1]. Les diagrammes de Blant et Altman sont prsents dans la figure 1, ils sont cohrents avec les concordances trouves avec les autres tests pour ceux du GEM 3000 et du Gold Standard. Dans les deux cas, ils sont cohrents avec les concordances trouves et ceux des autres appareils sont beaucoup plus disperss (diagrammes non fournis).

Discussion
Lhmatocrite est un paramtre durgence dans lvaluation des pertes sanguines ncessitant une transfusion san-

20 15 10 A1-X 5 0

20 15 10 A4-X 25 30 35 40 (A1+X)/2 45 50 5 0

-5 -10 -15

-5 -10 -15 25 30 35 40 (A4+X)/2 45 50

20 15 10 A2-X 5 0

20 15 10 I-X 5 0

-5 -10 -15 20 25 30 35 (A2+X)/2 40 45

-5 -10 -15 20 30 (I+X)/2 40 50

20 15 10 A3-X 5 0

20 15 10 R-X 25 30 35 40 (A3+X)/2 45 50 5 0

-5 -10 -15

-5 -10 -15 20 30 40 (R+X)/2 50

Figure 1. Graphes de Bland et Altman X = centrifugeuse, A1 = Rapidpoint 405, A2 = GEM 3000, A3 = i-STAT 1, A4 = ABL 77, I = i-STAT 200, R = OMNI S. En ordonne : diffrences des valeurs de lhmatocrite entre les 2 appareils tests. En abscisse : moyenne des valeurs de lhmatocrite pour les 2 appareils tests.

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Tableau 3. Coefficient de LIN et ICC avec leurs intervalles de confiance IC 95% pour les mesures dhmatocrites rptes (1,2) sur chaque analyseur. n 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 320 320 ` 95 %) Coefficient de LIN (IC a 0,8742 (0,8110 - 0,9172) 0,9735 (0,9542 - 0,9832) 0,9555 (0,9313 - 0,9713) 0,9373 (0,9040 - 0,9593) 0,8470 (0,7754 - 0,8971) 0,9741 (0,9676 - 0,9865) 0,9686 (0,9517 - 0,9797) 0,9812 (0,9709 - 0,9879) 0,9634 (0,9433 - 0,9765) 0,9715 (0,9559 - 0,9816) 0,9901 (0,9844 - 0,9937) 0,9328 (0,8971 - 0,9564) 0,9448 (0,9317 - 0,9554) 0,9458 (0,9330 - 0,9562) ` 95 %) ICC (IC a 0,8756 (0,7264 0,9737 (0,9379 0,9560 (0,9148 0,9380 (0,8640 0,8488 (0,6392 0,9793 (0,9621 0,9690 (0,9260 0,9814 (0,9599 0,9638 (0,9293 0,9719 (0,9278 0,9902 (0,9822 0,9336 (0,8520 0,9450 (0,9081 0,9459 (0,8686 -

` re semaine Premie

` me semaine Deuxie

` me semaine Troisie

` me semaine Quatrie

Ensemble des semaines

I1/I2 O1/O2 R1/R2 I1/I2 O1/O2 G1/G2 I1/I2 O1/O2 IS1/IS2 I1/I2 O1/O2 AB1/AB2 I1/I2 O1/O2

0,9730) 0,9887) 0,9820) 0,9873) 0,9898) 0,9910) 0,9935) 0,9933) 0,9841) 0,9923) 0,9952) 0,9784) 0,9727) 0,9874)

I = i-STAT 200 ; O = OMNI S ; R = Rapid point 405 ; G = GEM Premier 3000 ; IS = i-STAT 1 ; AB = ABL 77 ; n = nombre de patients.

Tableau 4. Coefficient de corrlation de concordance de LIN (IC 95%) et ICC (IC 95%) entre la moyenne des 2 mesures (1,2) et le Gold Standard (centrifugation). n 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 320 320 ` 95 %) Coefficient de LIN (IC a 0,6540 (0,5294 - 0,7510) 0,8684 (0,8020 - 0,9136) 0,7728 (0,6679 - 0,8476) 0,8410 (0,7909 - 0,8799) 0,9208 (0,8785 - 0,9488) 0,9447 (0,9154 - 0,9641) 0,8043 (0,7349 - 0,8570) 0,9034 (0,8535 - 0,9369) 0,7908 (0,7117 - 0,8501) 0,7580 (0,7044 - 0,8030) 0,9478 (0,9195 - 0,9663) 0,8837 (0,8342 - 0,9191) 0,7826 (0,7479 - 0,8130) 0,9167 (0,8973 - 0,9326) ` 95 %) ICC (IC a 0,6228 (0,3754 0,8698 (0,7092 0,7716 (0,6211 0,8306 (0,7731 0,9215 (0,8269 0,9453 (0,9093 0,7904 (0,7246 0,9046 (0,8481 0,7765 (0,7080 0,7299 (0,6113 0,9484 (0,9151 0,8797 (0,8133 0,7646 (0,7161 0,9169 (0,8870 -

` re semaine Premie

` me semaine Deuxie

` me semaine Troisie

` me semaine Quatrie

Ensemble des semaines

I/C O/C R/C I/C O/C G/C I/C O/C IS/C I/C O/C AB/C I/C O/C

0,7679) 0,9465) 0,8599) 0,8686) 0,9706) 0,9709) 0,8340) 0,9427) 0,8259) 0,8053) 0,9665) 0,9195) 0,7996) 0,9421)

I = i-STAT 200 ; O = OMNI S ; R = Rapid point 405 ; G = GEM Premier 3000 ; IS = i-STAT 1 ; AB = ABL 77 ; n = nombre de patients ; I reprsente la moyenne arithmtique de I1 et I2.

Tableau 5. Coefficient de Spearman entre la moyenne des 2 mesures (1,2) et le Gold Standard (centrifugation) et son intervalle de confiance IC 95 %. n 320 320 80 80 80 80 ` 95 %) Coefficient de Spearman (IC a 0,9120 (0,8022 - 1,0000) 0,9119 (0,8022 - 1,0000) 0,7681 (0,5476 - 0,9887) 0,9246 (0,7041 - 1,0000) 0,9032 (0,6827 - 1,0000) 0,9498 (0,7293 - 1,0000) P - valeur < 0,0001 < 0,0001 < 0,0001 < 0,0001 < 0,0001 < 0,0001

I/C O/C R/C G/C IS/C AB/C

I = i-STAT 200 ; O = OMNI S ; R = Rapid point 405 ; G = GEM Premier 3000 ; IS = i-STAT 1 ; AB = ABL 77 ; C = centrifugeuse ; n = nombre de patients ; I reprsente la moyenne arithmtique de I1 et I2.

guine immdiate, il est demand entre autres dans les phnomnes dhmodilution [3, 4] et dhmoconcentration et dans le cadre du diagnostic des polyglobulies ou des anmies [5, 6]. Il intervient dans lexploration de certaines fonctions comme le niveau nergtique et la perfusion [7]. La mesure classique consiste en une centrifugation rapide dun capillaire rempli de sang qui est une mthode de mesure directe de lhmatocrite. Depuis un certain nombre dannes, des mthodes de dtermination indirectes ont t mises en place. Il sagit essentiellement des mesures de la conductivit ou de la permittivit [8, 9] ou de la dduction dune mesure spectrophotomtrique ainsi que de la mesure optique [10]. 71

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Dans ce travail nous avons compar la mthode directe de microcentrifugation avec la mthode indirecte de conductimtrie en utilisant des tests de concordance. Dans la microcentrifugation, lexcs danticoagulant diminue lhmatocrite [11], cest pour cela quun capillaire non hparin a t utilis compte tenu du fait que lchantillon tait dj prlev sur hparine lithium. Le choix de cet anticoagulant est aussi trs important, lEDTA est proscrire [12]. Dans la conductimtrie, ce sont essentiellement les lments non conducteurs comme les protines, lipides et les leucocytes qui occupent un certain volume et modifient la valeur de lhmatocrite. Les protines totales ont une influence sur lhmatocrite selon sa valeur : si hmatocrite > 40 % : lhmatocrite augmente de 1 % si les protines augmentent de 1 g/dL, et si lhmatocrite < 40 %, lhmatocrite diminue de 1 % si les protines diminuent de 1 g/dL. Dans la circulation extracorporelle [13], pendant laquelle il est observ des diminutions de la concentration des protines de 3 4 g/dL, lhmatocrite est surestim par cette mthode, ce qui est galement le cas dans lhmodialyse [14]. Aucune des personnes incluses dans ltude nappartenait cette catgorie de patients et les valeurs obtenues par conductimtrie sont concordantes avec celles de la centrifugation. Parmi les 6 appareils tests, ceux qui donnent les hmatocrites les plus voisins de ceux de la centrifugation sont le GEM Premier 3000 et lOMNI S, les 4 autres fournissant cependant des rsultats acceptables. On peut donc considrer que pour les patients ne subissant pas de variations importantes de la protinmie, lhmatocrite dduit de la conductivit sanguine dans les analyseurs de gaz du sang est correct. diffrente de celle classique dduite de la centrifugation essentiellement pour le GEM Premier 3000 et lOMNI S.

Rfrences
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Conclusion
La mthode standard de mesure de lhmatocrite est la microcentrifugation mme si elle est sensible aux grandes variations dosmolalit. La dtermination par conductivit directe est plus rapide mais ncessite la mesure conjointe du Na+ et peut entraner une sous-estimation si la concentration en protines plasmatiques est modifie [15, 16]. Une solution est de mettre un algorithme correcteur tenant compte de la dilution et de la diminution de la pression oncotique comme cest le cas dans certains appareils utiliss au lit du malade [17]. La comparaison statistique faite dans ce travail entre ces deux mthodes montre quen dehors de ces cas de dilution sanguine, la mesure de lhmatocrite par conductivit au cours dune gazomtrie sanguine nest pas statistiquement 72

vrier 2009 Ann Biol Clin, vol. 67, no 1, janvier-fe